海参糖胺聚糖对内皮细胞vWF和PAI-1表达的影响

目的探讨玉足海参糖胺聚糖（GAG）对活化人脐静脉内皮细胞（HUVECs）von Willebrand因子（vWF）和纤溶酶原激活剂抑制物-1（PAI-1）表达的影响，以进一步明确GAG抗血栓作用机制。方法不同浓度GAG与凝血酶活化HUVECs共同孵育，MTT比色法检测GAG对细胞活力的影响，分别采用ELISA法和RQ—PCR法检测GAG对活化HUVECs vWF和PAI-1抗原蛋白和基因表达的影响。结果GAG可以降低活化HUVECsvWF抗原和PAI-1抗原的表达，5mg／LGAG抑制作用最为显著（P〈0．001），且强于相同剂量的肝素。5mg／LGAG还可以抑制活化HUVECsvWFmRNA和PAI-1 mRNA转录（P〈0.01、0.05），5mg／L肝素虽然对此两种mRNA转录亦呈抑制作用，但对PAI-1mRNA转录的抑制作用无统计学意义（P〉0．05）。结论GAG可能通过降低活化HUVECsvWF和PAI-1抗原表达及其mRNA转录，从而达到抗凝血及抗血栓作用。     

尿酸对人脐静脉内皮细胞增殖及PAI-1分泌的影响

目的探讨尿酸（UA）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增殖及纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）分泌的影响,以阐明其在动脉粥样硬化发生中的作用。方法用MTT比色法观察不同浓度UA（0、2、4、8、16mg／dL）作用24h对HUVECs增殖的影响;用ELISA方法评价不同浓度UA（0、2、4、8、16mg／dL）作用HUVECs 24h及8mg／da UA作用HUVECs 1、3、6、12、24h对细胞培养液中PAI-1的影响。结果UA呈剂量依赖性抑制内皮细胞增殖,8、16mg／dL UA组与对照组（0mg／dLUA）比较均有统计学意义（P〈0．01）。UA诱导HUVECs分泌PAI-1呈浓度依赖性增加,8、16mg／dL UA组与对照组比较均有统计学意义（P〈0．01）;UA诱导HUVECs分泌PAI-1亦呈时间依赖性,与1h比较,3、6、12、24h均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论UA抑制HUVECs增殖,诱导HUVECs分泌PAI-1,这可能与高尿酸血症致动脉粥样硬化作用机制有关。     

TNF-α对人脐静脉内皮细胞t-pA、pAI-1表达的研究

目的：观察肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）组织型纤溶酶原激活物（tissue plasminogen activitor,t-PA）及其抑制剂-1（plasminogen activitor inhibitor-1,PAI-1）表达的影响。方法：原代分离HUVECs细胞并进行传代培养,分别以6个TNF-α浓度组（0、1、10、20、50、100 ng·m L-1）处理不同时间（0、1、3、6、12、24 h）,酶联免疫吸附分析（ELISA）法测定t-PA、PAI-1抗原的表达;逆转-聚合酶链反应（RTPCR）检测t-PA、PAI-1基因的表达。结果：TNF-α促进PAI-1抗原的表达,并呈剂量和时间依赖关系,在TNF-α10 ng·m L-1作用6 h时最明显（P〈0.01）;TNF-α促进PAI-1 mRNA的表达,并呈剂量和时间依赖关系,在TNF-α10 ng·m L-1作用3 h时已非常明显（P〈0.01）,6 h时达到高峰（P〈0.01）;而TNF-α对HUVECs表达t-PA抗原、mRNA无明显影响。结论：炎症因子TNF-α可能通过上调PAI-1表达而诱发血栓相关疾病。     

瘦素对人脐静脉内皮细胞的ICAM-1、LOX-1及MCP-1表达的影响

目的：探讨瘦素对血管内皮细胞ICAM—1、LOX—1、MCP—1表达的影响，以揭示瘦素致动脉粥样硬化的可能机制。方法：运用逆转录聚合酶链反应测定在不同浓度瘦素作用下，内皮细胞ICAM—1、LOX—1及MCP-1 mRNA的表达。结果：空白对照组无瘦素刺激时，ICAM—1、LOX—1及MCP—1的mRNA表达低于瘦素刺激组，加入低剂量瘦素对于ICAM—1、LOX—1及MCP—1的mRNA表达影响不大（P〉0．03），而随着瘦素剂量的升高，ICAM-1、LOX—1及MCP—1的mRNA表达明显增加，与对照组相比有明显统计学差异（P〈0．05），且呈剂量依赖性。结论：中等浓度以上的瘦素（〉12mg／L）可以促进血管内皮细胞ICAM—1、LOX—1及MCP—1的mRNA表达     

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞表达ICAM-2及与树突状细胞粘附的影响

目的 探讨同型半胱氨酸（Hcy）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分泌和表达细胞间粘附分子-2（1-CAM-2）以及内皮细胞与树突状细胞（DC）粘附的影响。方法 在人脐静脉内皮细胞培养基中加入浓度为0．5mmol／L的Hey作用不同时间，以及加入不同浓度的Hey作用24h。用ELISA法检测内皮细胞培养基中HU-VECs分泌ICAM-2的蛋白含量，用Western blot法检测HUVECs表达ICAM-2的蛋白含量，用分子探针标记的DC与HUVECs共孵育，共聚焦显微镜下计数粘附于HUVECs的DC数量，以检测Hey对HUVECs与DC粘附的影响。结果用0．5mmol／L Hey干预后，HUVECs分泌ICAM-2蛋白在12h开始高于空白组（P〈0．05），24h和48h均增加显著（均P〈0．01）；而ICAM-2蛋白的表达在6h开始高于空白组（P〈0．05），24h达峰值（P〈0．01），48h下降显著，且与空白组相比无统计学差异。用不同浓度的Hey干预24h后，ICAM-2蛋白的分泌和表达及HUVECs与Dc粘附均呈剂量依赖性增加，当Hey浓度高于0．5mmol／L时增加更显著。结论 Hey能刺激HUVECs分泌和表达ICAM-2蛋白，从而促进HUVECs与DC的粘附，这可能是其诱导动脉粥样硬化早期形成的重要机制之一。     

肿瘤坏死因子-α对人脐静脉内皮细胞中组织蛋白酶K表达的影响

目的：观察不同浓度肿瘤坏死因子-α（ TNF-α）和不同TNF-α作用时间对人脐静脉内皮细胞（ HUVEC ）中组织蛋白酶K（Cat K）表达的影响。方法取对数生长期HUVEC进行实验。将HUVEC分为正常对照组、0．1 ng／ml TNF-α组、1 ng／ml TNF-α组、10 ng／ml TNF-α组、100 ng／ml TNF-α组,分别采用DMEM培养基、0．1 ng／ml TNF-α、1 ng／ml TNF-α、10 ng／ml TNF-α、100 ng／ml TNF-α作用24 h。另取HUVEC分为对照组、TNF-α6 h组、TNF-α12 h组、TNF-α24 h组、TNF-α48 h组,对照组DMEM培养基作用24 h,其他组采用10 ng／ml TNF-α作用相应时间。检测各组HUVEC 中的Cat K mRNA和蛋白的表达情况。结果与正常对照组比较,不同TNF-α浓度组的Cat K mRNA和Cat K蛋白表达水平均升高（P＜0．05）。0．1 ng／ml TNF-α组、1 ng／ml TNF-α组、10 ng／ml TNF-α组 Cat K mRNA 和 Cat K 蛋白的表达水平依次增高（P＜0．05）,100 ng／ml TNF-α组Cat K mRNA和Cat K蛋白表达水平较10 ng／ml TNF-α组下降（P＜0．05）。与对照组比较,TNF-α各作用时间组Cat K mRNA和Cat K蛋白的表达水平增高（P＜0．05）;TNF-α6 h组、TNF-α12 h组、TNF-α24 h组Cat K mRNA和Cat K蛋白的表达水平依次增高（P＜0．05）;TNF-α48 h组Cat K mRNA和Cat K蛋白的表达水平较TNF-α24 h组明显下降（P＜0．05）。结论在一定作用浓度及作用时间内,TNF-α可以呈剂量和时间依赖性刺激HUVEC中Cat K表达。 TNF-α可能通过促进Cat K的表达促进动脉硬化的发生。     

Ox-LDL诱导血管内皮细胞表达LOX-1

【目的】探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）作为氧化低密度脂蛋白（OX—LDL）的特异性受体在摄取ox-LDL后对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）表达LOX-1的影响以及LOX-1在ox-LDL诱导其自身表达中所起的作用。【方法】用天然低密度脂蛋白（n—LDL）、LOX-1的受体阻断剂聚肌苷酸[poly（I）250μg／mL和爱兰苔胶carrageenan）以及不同质量浓度的ox—LDL（0，10，20，50，100μg／mL）与HUVECs作用于不同的时间（0，6，12，24，36h），用Realtime RT—PCR测定LOX-1 mRNA的表达水平，用Western blot测定LOX-1蛋白表达水平，并比较加入LOX-1阻断剂前后LOX-1表达的变化。【结果】在HUVECs中加入不同质量浓度的ox—LDL（0，10，20，50，100μg／mL），各组剂量的ox—LDL都可以增加LOX-1 mRNA和蛋白的表达（P〈0．01），在10—50μg/mL的剂量范围内有明显的剂量-效应关系。但n—LDL对LOX-1的表达无影响。随着ox—LDL与HUVECs作用时间的延长，LOX-1 mRNA和蛋白的表达显著升高（P〈0．01），在6～24h内呈明显的时间-效应关系（P〈0．01）。HUVECs预先与250μg/mL的poly（I）或carrageenan作用2h，然后再加入50μg／mL的ox—LDL作用24h。poly（I）和carrageenan都可以显著抑制ox—LDL诱导的LOX-1 mRNA和蛋白的表达（P〈0．01）。【结论】Ox—LDL可以诱导HUVECs LOX-1的表达，该诱导作用可被LOX-1的阻断剂部分拮抗。表明LOX-1不仅特异性地结合ox—LDL，而且介导ox—LDL对LOX-1表达的上调作用。     

雌二醇对牛视网膜毛细血管内皮细胞VEGF、HIF-1α的调控

目的观察在不同氧环境下，雌二醇（17β-estradiol，E2）对培养的牛视网膜毛细血管内皮细胞（bovine retinal vascular endothelial cells，BRECs）血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）mRNA、低氧诱导因子-1（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）mRNA的影响。方珐以培养的BRECs为模型，在正常氧及低氧（1％O2）条件下，给予不同生理浓度的E2及雌激素受体拮抗剂他莫昔芬，作用不同时间（8、24h），RT-PCR检测VEGF、HIF-1α mRNA的表达。结果①低氧条件下，BRECs的HIF-1α、VEGFmRNA表达较正常氧条件下明显增多（P〈0．05），且VEGF、HIF-1α mRNA两者之间有明显的正相关性（r=0．82，P〈0．05）；②正常氧条件下，给予E2（10^-12,10^-10，10^-18mol/L）作用24h，E2呈浓度依赖性促进BRECs的VEGFmRNA表达（P〈0．05）。10^18 mol／L E2作用8、24h，VEGFmRNA表达量呈时间依赖性增多（P〈0．05）；而E2不影响HIF-1α mRNA的含量（P〉0．05）；③低氧条件下，给予E2（10^-12，10^-10，10^-8mol／L）作用24h，E2呈浓度依赖性抑制BREcs的HIF-1α、VEGFmRNA表达（P〈0．05）。10^-8mol／L E2作用8、24h，HIF-1α、VEGFmRNA表达量呈时间依赖性降低（P〈0．05）；④他莫昔芬可逆转E2的作用。结论生理浓度的E2对VEGFmRNA具有双重调控作用：正常氧条件下促进BRECsVEGF表达；低氧条件下通过HIF-1α降低VEGF表达。并呈剂量、时间依赖性。     

内毒素损伤的肺动脉内皮细胞对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响及骨形态发生蛋白-2的干扰作用

目的探讨内毒素休克损伤的肺动脉内皮细胞对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响及骨形态发生蛋白-2（BMP-2）的干扰作用。方法（1）内皮细胞条件培养液（EC—CM）制作：EC—CM1：用不含血清的DMEM培养基孵育融合成单层的肺动脉内皮细胞（PAEC）24h,收集上清培养液制成;EC—CM2：以终浓度为1μg／ml的内毒素孵育融合成单层的PAEC1h后用不含血清的DMEM培养基孵育24h收集上清培养液制成。（2）分组及指标观测：将贴块法培养的肺动脉平滑肌细胞（PASMC）分成5组,分别用EC-CM1、EC—CM2、EC—CM2＋BMP-2 1ng／ml、EC—CM2＋BMP—2 10ng／ml和EC-CM2＋BMP-2 100ng／ml孵育PASMC。使用BrdU法测定PASMC增殖率;流式细胞仪分析PASMC细胞周期的变化;3^H—TdR掺入实验检测DNA合成情况;RT—PCR检测细胞周期素D1（cyclinD1）mRNA的表达量;免疫印迹检测pSmad蛋白量及细胞周期素（CyclinD1）蛋白表达。结果与Ⅰ组比较,Ⅱ组引起PASMC增殖率升高,S期细胞百分比增加,DNA合成增加（P〈0．01）,同时,cyclinD1mRNA及蛋白表达增加（P〈0．01）,pSmad蛋白量两组差异无统计学意义（P〉0．05）;与Ⅱ组比较,Ⅲ组中上述各指标无明显变化（P〉0．05）,而Ⅳ组、Ⅴ组中PASMC增殖率显著下降,S期细胞百分比下降,DNA合成减少（P〈0．01）,同时cyclinD1mRNA及蛋白表达显著下降（P〈0．01）,pSmad蛋白量显著增加（P〈0．01）。结论EC—CM2诱导PASMC cyclinD1的高表达,促进PASMC增殖;BMP-2可以通过激活Smad1信号转导途径抑制EC—CM2培养的PASMC表达cyclinD1,进而抑制EC—CM2刺激引起的PASMC增殖．BMP2作用在1～100ng／ml浓度范围内呈剂量依赖性。     

磷脂酰肌醇3(PI3K)激酶信号途径对血小板源生长因子促肝星状细胞增殖与Ⅰ型胶原表达的影响

目的 观察磷脂酰肌醇3激酶特异性抑制剂（LY294002），对血小板源生长因子（PDGF-BB）促大鼠肝星状细胞（HSC）增殖与Ⅰ型胶原表达的影响，并探讨其作用机制。方法用不同浓度的PDGF-BB和LY294002对大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）进行处理，MTT法检测细胞的增殖，逆转录聚合酶链反应方法（RT-PCR）检测HSC-T6内Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果PDGF-BB在浓度1～10ng／ml时呈剂量依赖性地促进HSC细胞增殖（P〈0．05），当浓度大于10ng／ml时处理组间无显著差异（P〉0．05），其促增殖作用达到饱和。5μmol／L、10μmol／L、25μmol／L的LY294002均能显著且剂量依赖性地抑制PDGF-BB刺激的HSC-T6增殖（P〈0．001）。PDGF-BB能促进HSCI型胶原mRNA表达，24h、48h时相对于对照组的表达量为112．2％。182．5％。LY294002能显著抑制PDGF-BB促Ⅰ型胶原表达，24h、48h时相对表达量为76．4％，52．6％。结论磷脂酰肌醇3激酶信号途径是调节血小板源生长因子促肝星状细胞增殖与分泌胶原的重要通道，抑制该通路可以抑制肝星状细胞增殖和胶原表达，具有抗肝纤维化的作用，对防治肝纤维化有一定的意义。     

Mechanism of ligustrazini against thrombosis

Objective To investigate the mechanism of Chinese medicine ligustrazini against thrombosis, and the effects of ligustrazini on plasminogen activator inhibitor (PAI-1) expression in normal endothelial cells and lipopolysaccharide (LPS) stimulated endothelial cells. Methods Human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were cultured by trypsin digestion method. PAI-1 protein in HUVEC conditioned medium was measured by Sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and PAI-1 mRNA expression was determined by Northern blot analysis. Using electrophoretic mobility shift assay (EMSA), we observed HUVEC nuclear factor-kappa B (NF-κB) nuclear translocation. Results LPS treatment of cultured HUVECs resulted in a significant increase in PAI-1 protein and mRNA expression by these cells. However, when HUVECs were incubated with LPS plus ligustrazini, the upregulation of PAI-1 by LPS was abated. Moreover, ligustrazini could decrease the basal level of PAI-1 protein and mRNA in HUVECs as compared with control. Nuclear extracts prepared from HUVECs stimulated by LPS demonstrated that binding to the NF-kB oligo nucleotide increased as compared with the unstimulated cells, but ligustrazini did not change those binding in the absence or presence of LPS. Conclusions Ligustrazini inhibited both basal and LPS-induced PAI-1 protein and mRNA expression in endothelial cells, and the modulation of PAI-1 in HUVECs by ligustrazini might have other mechanisms rather than NF-kB     

TNF—α或mmLDL对人脐静脉内皮细胞PAI—1的细胞及其机制

目的：探讨肿瘤坏死因子α（TNF－α）或弱氧化修饰低密度脂蛋白（mmLDL)对人脐静脉内皮细胞（HUVECs)PAI－1活性和mRNA表达的影响及其分子机制。方法：用发色底物法测定HUVECs培养液中PAI－1的活性,用Northern印迹分析法检测PAI－1基因mRNA的表达情况,并分别用蛋白激酶C（PKC）或促分裂原活化蛋白激酶激酶（MAPKK）抑制剂干预上述诱导实验。结果：TNF－α或mmLDL作用HUVEC后,PAI－1活性和mRNA基因表达均明显增加,促分裂原活化蛋白激酶－激酶（MAPKK）的抑制剂PD98059（60μmol/L)能明显阻断TNF－α（100U／ml)或mmLDL(50μg/ml)对PAI－1活性和mRNA的诱导,但PKC的抑制剂Staurosporine(10nmoo/L)和H7（15μmol/L)无显著阻断作用。结论：（1）TNFα或mmLDL能增强血管内皮细胞PAI－1尖性与mRNA表达;（2）PAI－1活性提高与其mRNA表达增加有关。（3）MAPK途径可能在TNF-α或mmLDL诱导血管内皮细胞PAI－1表达中起重要作用。     

Rhein inhibits transforming growth factor β1 induced plasminogen activator inhibitor-1 in endothelial cells

Objectives To investigate the effect of rhein on endothelial plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) mRNA expression and protein production induced by transforming growth factor β1 (TGFβ1), and to explore the mechanism of the protective action of rhein on endothelial cells. Methods A human umbilical endothelium derived cell line (ECV-304) from ATCC was used in this study. The PAI-1 mRNA expression and protein synthesis in the endothelial cells were detected by Northern blot and flow cytometry analysis, respectively. The activity of phospho-p44/p42 MAP kinase induced by TGFβ1 was determined by immunoprecipitation analysis and western blot. Results TGFβ1 rapidly increased PAI-1 mRNA expression in the endothelial cells, and this effect lasted at least 24 hours. The upregulation of PAI-1 mRNA expression induced by TGFβ1 in endothelial cells was inhibited by rhein in a dose-dependent manner. In addition, rhein inhibited endothelial PAI-1 protein production. Further study revealed that rhein had a significant inhibitory effect on the activity of phospho-p44/p42 MAP kinase induced by TGFβ1 in human endothelial cells. Conclusions Our results showed that rhein may have a protective effect on the endothelial dysfunction by inhibiting overexpression of PAI-1, indicating a way for the treatment of vascular diseases.     

Activation of peroxisome proliferator-activated receptor α in human endothelial cells increases plasminogen activator inhibitor type-1 expression

Objective To investigate the effect of peroxisome proliferator-activated receptors(PPARs) activators on plasminogen activator inhibitor 1(PAI-1) expression in human umbilical vein endothelial cells and elucidate a possible mechanism.Methods Human umbilical vein endothelial cells(HUVECs) were obtained from normal fetus,and cultured conventionally.Then the HUVEC were exposed to fatty acids and prostaglandin J2 in varying concentrations with fresh media.RT-PCR and ELISA were used to determine the expression of PPAR and PAI-1 in HUVECs.Transient co-transfection of PAI-1 promoter and PPARα gene or PPARγ gene to ECV304 was performed.Results PPARα,PPARγ and PPARγ mNRA in HUVECs were detected by RT-PCR.Treatment of HUVECs with PPARα and PPARγ activators-linolenic acid,linoleic acid,oleic acid and prostaglandin J2,but not with stearic acid could augment PAI-1 mRNA expression and protein secretion in a concentrationdependent manner.Proportional induction of PAI-1 promoter activity was observed through increasing amounts of PPARαDNA in HUVECs throgh a transient gene transfection assay,although the mRNA expression of the 3 subtypes of PPAR with their activators were not changes compared with controls.Conclusions HUVECs express PPARs,PPARs activators may increase PAI-1 expression in endothelial cells(EC).Although PPARs expresslon was not enhanced after being stimulated by their activators in EC,the functionally active PPARαis probably involved in regulating PAI-1 expression in EC.     

顺铂对人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的:为细胞间黏附分子(ICAMs)是否参与顺铂引起的血管损伤病理反应寻找证据。方法:将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)以不同浓度顺铂(Cisplatin)或同一浓度顺铂处理不同时间后,蛋白印迹分析法和RT-PCR检测内皮细胞CAMs的表达情况,并通过凝胶阻滞分析(EMSA)和特异性抑制剂来探讨NF-κB在其中的作用。结果:顺铂能够在mRNA和蛋白水平明显上调内皮细胞中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达,而对P-选择素、E-选择素和VCAM-1的表达无明显影响。其表达是通过核因子κB(NF-κB)依赖途径实现。结论:ICAM-1参与了顺铂的血管毒性病理过程,具有靶向治疗前景。     

THE INCREASE IN PLASMINOGEN ACTIVATOR INHIBITOR TYPE—1 EXPRESSION BY STIMULATION OF ACTIVATORS FOR PEROXISOME PROLIFERATOR—ACTIVATED RECEPTORS IN HUMAN ENDOTHELIAL CELLS

INTRODUCTIONPlasminogenactivatorinhibitortype－１（PAI－１），themajorphysiologicalinhibitoroftissueplasminogenacti－vatorandurokinase，limitsfibrinolysis．ConsiderableevidencelinksPAI－１tomyocardialinfarctionanddeepvenousthrombosis（１）．Circulatinglip     

Effects of simvastatin on cigarette smoke extract induced tissue-type plasminogen activator and plasminogen activator inhibitor-1 expression in human umbilical vein endothelial cells

Background Cigarette smoking has an influence on both arterial-type and venous-type thrombosis. However, little is known about the direct effect of cigarette smoke extract （CSE） on fibrinolytic activity of human umbilical vein endothelial cells （HUVECs）. Most recently, simvastatin has been marked in its effect on endothelial cells protection and anticoagulation. In this study, the effect of CSE on the expression of tissue-type plasminogen activator （t-PA） and plasminogen activator inhibitor-l（PAl-1） in HUVECs was addressed. The role of simvastatin in CSE-induced fibrinolytic activity changes was investigated as well. Methods The fourth to fifth generation of HUVECs were incubated respectively with 0, 5%, 10% and 20% CSE for 6 hours or exposed to 5% CSE for 0, 4, 6, 8, 12, 24 hours to determine the expression changes of t-PA and PAl-1 protein. Meanwhile, cells were also accordingly exposed either to 5% CSE alone or simvastatin pre-treated and 5% CSE for 24 hours to assess the role of simvastatin in CSE-induced t-PA and PAl-1 protein and mRNA expression in HUVECs. RT-PCR and ELISA techniques were used for detecting the t-PA or PAl-1 mRNA and protein. Results After 6-hour exposure to CSE, the expression levels of t-PA protein in 10% and 20% CSE-treated groups reduced significantly （（0.0365±0.0083） ng/ml, （0.0255±0.0087） ng/ml） when compared with that of control group （（0.0660±0.0120） ng/ml） （P 〈0.05）. In contrast, the levels of PAl-1 protein in 5%, 10% and 20% CSE-treated groups increased remarkably （（13.3225±0.5680） ng/ml, （14.2675±1.5380） ng/ml, （14.4292±1.6230） ng/ml） when compared with that of control group （（8.5193_±0.7537）ng/ml） （P〈0.05）. After stimulation with 5% CSE for 0, 4, 6, 8, 12, 24 hours, the levels of PAl-1 protein increased over time and reached the peak at 24 hours （（14.6400±1.0651） ng/ml）, which was significantly higher than that of control group （（12.0656±0.6148） ng/ml） （P 〈0.05）. Additionally, CSE could up-regulate PAl-1 expression at both the mRNA and the protein levels. The levels of PAl-1 mRNA and protein increased significantly in 5% CSE-treated group （（8.8030±0.4745） ng/ml, （1.8155±0.0412） ng/ml） compared with those of control groups （（5.0588±0.2315） ng/ml, （1.3030±0.0647） ng/ml） （P 〈0.01）, and decreased after 2-hour simvastatin pre-treatment （（5.4875±0.3166） ng/ml, （1.3975-±0.0297） ng/ml） （P 〈0.01）. No significant difference was found at the levels of t-PA protein and mRNA （P 〉0.05）. Conclusions CSE inhibits the fibrinolytic activity of HUVECs in vitro. Simvastatin plays a protective role in CSE-induced fibrinolytic malfunction.     

多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖聚合酶-1介导高糖致大鼠肾脏系膜细胞tPA/PAI-1的紊乱

目的 探讨多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖聚合酶-1(PARP-1)在高糖(25 mmol/L)作用下大鼠肾脏系膜细胞tPA/PAI-1纤溶系统紊乱中的作用.方法 (1)体外培养大鼠肾脏系膜细胞株(MCs 1097),使用高糖(25 mmol/L)处理大鼠肾脏系膜细胞,部分实验组中应用PARP-1特异性抑制剂PJ34(3×10-6 mol/L)进行干预处理.(2) RT-PCR及Western blot检测PARP-1的mRNA及蛋白表达.(3)高通量比色测定法检测PARP-1的活性.(4) ELISA法测定细胞上清液tPA、PAI-1的分泌蛋白.结果 (1)高糖显著诱导大鼠肾脏系膜细胞PARP-1mRNA和蛋白的表达,PJ-34可明显抑制高糖诱导的PARP-1 mRNA和蛋白的过度表达.同时,高糖显著诱导大鼠肾脏系膜细胞PARP-1激活,PJ-34可显著抑制高糖诱导的PARP激活.(2)高糖轻度减少大鼠肾脏系膜细胞分泌型tPA的蛋白表达,显著增加大鼠肾脏系膜细胞分泌型PAI-1的蛋白表达,导致tPA/PAI-1比值降低,PJ-34显著预防高糖诱导的上述改变.结论 高糖可以诱导培养的大鼠肾脏系膜细胞内PARP激活,PARP1表达增加,PJ-34预处理可以明显降低高糖诱导的大鼠肾脏系膜细胞内PARP的激活以及下游tPA/PAI-1纤溶系统紊乱,提示高糖可能通过过度激活PARP来诱导tPA/PAI-1功能紊乱.     

Inhibitory Effects of Fenofibrate on Plasminogen Activator Inhibitor-1 Expression in Human Endothelial Cells

Endothelial cells ( ECs) are an i mportantsource of plasminogen activator inhibitor type-1(PAI-1) . PAI-1 is the major physiological inhibi-tor of fibrinolysis and has been considered as inde-pendent risk factor of coronary artery disease(CAD)[1].The higher content and activity of PAI-1 may reduce fibrinolysis ,then induce the i mbal-ance between coagulation and fibrinolysis . Fibrindepositing on vascular endothelial cells can not bedissolved easily , which promote thrombosis . Per-oxiso…