韩国发现间日疟原虫环子孢子蛋白的两种新基因型

环子孢子蛋白(CSP)是由疟原虫子孢子表达的一种期特异性表面抗原。已发现能通过环子孢子蛋白基因序列的重复结构进行疟原虫分类,并能了解其地理起源。 作者介绍了间日疟原虫韩国地理株的环子孢子蛋白基因序列资料,并与已发表的其他疟原虫地理株的环子孢子蛋白基因序列资料进行比较,以寻找其地理起源。     

湖北省间日疟原虫分离株环子孢子蛋白部分序列分析

目的 :为了确定湖北省间日疟原虫虫株环子孢子蛋白 ( CSP)的分型和探讨 CSP多态性的生物学特征。方法 :采用常规的克隆和 Sanger链终止法 ,首次对湖北省间日疟原虫的环子孢子蛋白 ( CSP)基因测序。结果 :HB2株 CSP基因的 N- C-端非重复区包括重复区后可变区核苷酸序列与北朝鲜 ( NK)株和中国株 ( CH2 - CH7)相同 ,而中央前后重复区则有较大变异。在 HB2 CSP中央前后重复区 ,有 8种变异型。与其它已发表的间日疟原虫 CSP核苷酸序列相比 ,重复体 GNGAG-GQP/AA和重复后可变区有明显的地理学特征。此外同一份 HB2 CSP基因 PCR产物克隆后获得含两个大小不等插入片段的阳性克隆 ,分别为 0 .75kb和 1.1kb。两者非重复区的核苷酸序列相同 ,在中央前后重复区除了重复数次不同外 ,仅有 3处隐性核苷酸变异和 1处显性核苷酸变异。结论 :CSP基因变异 ,尤其是重复区的变异不仅与 DNA聚合酶的自身作用有关 ,而且还可能牵涉到间日疟原虫潜伏期的改变。     

全球性发现间日疟原虫样的人疟原虫

作者报告在1990—1991年间分别从巴布亚新几内亚(14例)、巴西(24例)、印度尼西亚(9例)和马达加斯加(3例)收集到的镜检确诊为间日疟的50例病人的分离株中发现一种间日疟原虫样原虫(P.vivax-like)的人疟原虫。其环子孢子蛋白(CSP)基因序列     

用合成的DNA探针检测人血中的间日疟原虫

以恶性疟的重复DNA顺序片断为探针检测恶性疟原虫已有文献报道,但尚无间日疟DNA探针的报告。最近Arnot等报告了间日疟原虫环子孢子蛋白(CSP)的编码为19个碱基对的9肽重复片段。本文报告在此基础上合成寡核苷酸序列作为间日疟DNA探针,检测病人血中间日疟原虫的效果。为了比较此探针的特异性和交叉反应性,还合     

间日疟原虫环子孢子蛋白Ⅱ区抗体的精细表位特异性与结合重组蛋白和子孢子的能力有关

子孢子表面蛋白(环子孢子蛋白CSP)是疟原虫疫苗的主要候选蛋白,大量研究表明无论是针对CSP重复区表位或非重复区表位的抗体应答都具有重要性。 本文作者检测了自然暴露于间日疟原虫的人群血清对一些CSP重叠肽的抗体特异性,包括对重复区和重复区以外区,特别是Ⅱ~+区的抗体的特异性,此外还研究了间日疟原虫CSPⅡ~+区合成肽在小鼠体内的免疫原性和Ⅱ区特异性抗体识别间日疟原虫子孢     

人血清与一种间日疟原虫环子孢子蛋白变异重复肽的广泛反应性

最近从泰国分离获得一株含环子孢子(CS)蛋白变异重复肽的间日疟原虫(Thai VK 247),它和所有已知的间日疟原虫CS蛋白均不同。本文报告了以合成的Thai VK 247CS蛋白对1987年从巴西亚马逊丛林地区2个部     

辽宁省间日疟原虫环子孢子蛋白基因型分析

目的探讨辽宁省间日疟原虫环子孢子蛋白(CSP)的基因型与地理分布。方法采集镜检确诊的间日疟患者血样15份,Chelex-100离子交换法提取DNA,进行单管-套式PCR扩增,根据琼脂糖凝胶电泳结果判定环子孢子蛋白(CSP)基因型别。结果 12份本地感染间日疟血液标本中6份鉴定为PV-Ⅰ型温带族虫株(占50.00%),6份鉴定为PV-Ⅰ型温带族和PV-Ⅱ型混合虫株(占50.00%);3例输入性间日疟病例中PV-Ⅰ型热带族和温带族各1例,PV-Ⅰ型温带族和PV-Ⅱ型虫株混合感染1例。结论目前辽宁省间日疟原虫存在2种CSP基因型,即PV-Ⅰ型温带族虫株和温带族、PV-Ⅱ型混合感染虫株,无热带族虫株。     

中缅边境间日疟原虫环子孢子蛋白基因分型

根据间日疟原虫环子孢子蛋白(CSP)基因设计特异分型引物,利用巢式PCR技术(Nested-PCR)对采自中缅边境的间日疟患者血样作分型鉴定。检出的174份血样中,PV-I型热带族占54.6%(95/174)、温带族占35.6%(62/174)、PV-II型占2.9%(5/174)、混和感染占6.9%(12/174)。表明中缅边境的间日疟原虫存在4种基因型,以热带族为优势虫株,缅甸拉咱与云南腾冲间日疟原虫CSP基因型构成无差异(χ2=3.381,P0.05)。     

间日疟原虫环子孢子蛋白的多态性

环子孢子蛋白(CSP)是疟疾疫苗研制中的一个候选抗原,而抗原中自然存在的多态性则可能影响疫苗的效果。为了确定CSP中B和T抗原决定簇多态性的程度及探讨抗原变异的机制,本文运用序列分析的手段,对地理间隔遥远的巴布亚新几内亚(PNG)和巴西两地的间日疟原虫人体分离物的CSP的基因序列及相对应的氨基酸序列进行了分析比较。结果显示:在一个分离株的不同克隆间,CSP的多态性是普遍存在的。CSP中重复区域的氨基酸序列可分为两种类型:Ⅰ型是GDRA(D/A)GQPA,Ⅱ型是ANGA(G/D)     

间日疟原虫环子孢子蛋白T细胞决定簇的鉴定

运用C3Hf(H-2~(km2))株小鼠模型首次鉴定了间日疟原虫环子孢子(CS)蛋白上的一种T细胞决定簇。根据间日疟原虫CS蛋白Ⅱ区(含T细胞决定簇的区域)附近的序列,人工合成一系列含15～20个氨基酸的重复序列多肽:PV-20(aa293～312),PNAKSVKEYLDKI-     

应用合成肽研究针对间日疟原虫子孢子的抗体反应

在哺乳动物宿主体内,疟原虫子孢子能诱导一种具有种和期特异性的主要针对环子孢子蛋白重复序列的抗体反应。间日疟原虫环子孢子蛋白的重复区域包括9种氨基酸的大约20次重复,它们是天冬氨酸-精氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-甘氨酸-谷氨酸-脯氨酸-丙氨酸-甘氨酸(DRADGQPAG,称为变异体D)或天冬氨酸-精氨酸-丙氨酸-丙氨酸-甘氨酸-谷氨酸-脯氨酸-丙氨酸-甘氨酸(DRAAGQPAG,称为变异体A)。迄今为止,已进行的序列分析表明不同地理株虫体环子孢子蛋白内的D和A变异体的排列各异。为了产生D和A变异体对的可能结合,即DD,     

疟原虫环子孢子蛋白的研究进展

环子孢子蛋白(circumsporzoite protein,CSP)是疟原虫成熟子孢子表面的锚定蛋白,约含400个氨基酸,由N端保守I区、种属特异性的中央重复区和C端保守Ⅱ区构成。CSP在疟原虫的迁移、靶细胞入侵和增殖过程中发挥重要作用。近年研究显示,CSP在疟疾疫苗和靶向给药系统中具有良好的应用前景。本文对疟原虫CSP的结构特征、功能及其应用前景作一综述。     

应用CSP基因型简捷PCR鉴定法对间日疟原虫分型的初步评价

目的初步评价CSP基因型简捷PCR鉴定法在对间日疟原虫进行分型时的实用性.方法利用套式等位特异PCR,检测间日疟原虫环子孢子蛋白(CSP)基因结构多态,以产生的多样性DNA片段作为对间日疟原虫分型的依据.结果经检测42份被镜检确诊为间日疟滤纸血样,被分型33份,分型率为78.57%,温带型占30.30%(10/33),热带型占69.70%(23/33),未检到PV-Ⅱ型间日疟原虫.当第二次对33份血样检测时93.94%(31/33)被分型,其分型符合率为77.42%(24/31).结论该方法简便、快速,且分型不受采血时机限制,但作为云南间日疟的分型方法时,其稳定性仍需提高.     

应用CSP基因型简捷PCR鉴定法对间日疟原虫分型的初步评价

目的 初步评价CSP基因型简捷PCR鉴定法在对间日疟的虫进行分型时的实用性。方法 利用套式等位特异PCR,检测间日疟原虫环子孢子蛋白（CSP）基因结构多态,以产生的多样性DNA片段作为对间日疟原虫分型的依据。结果 经检测42份被镜检确诊为间日疟滤纸血样,被分型33份,分型率为78.57%,温带型占30.30%(10/33),热带型占69.70%(23/33),未检到PV-Ⅱ型间日疟原虫,当第二次33份血样检测时93.94%(31/33)被分型,其分型符合率为77.42%(24/31)。结论 该方法简便,快速,且分型不受采血时机限制,但作为云南间日疟的分型方法时,其稳定性仍需提高。     

我国南方五省间日疟原虫环子孢子蛋白基因型与疟疾防治效果关系的探讨

目的 探讨我国南方间日疟原虫环子孢子蛋白（CSP）基因型种群结构、疟区分类及其防治意义。 方法 应用单管-套式/多重PCR对采自海南、云南、广西、广东、贵州等5省（自治区）共346份间日疟原虫阳性患者滤纸血样作环子孢子蛋白（CSP）基因型鉴定， 结合5省（自治区）疟疾历史资料和近年流行状况进行分析。 结果 广东、广西和贵州等3省（自治区）疟原虫PV-1型温带族虫株均占90% 以上，热带族仅有个别发现，未见PV-2型；云南省疟原虫PV-1温带族占71.4%、 热带族占28.6%，PV-2型仅个别发现；而海南省PV-1型温带族、热带族和PV-2型等3大基因型类群分别约占1/3。 结论 广东、广西和贵州等3省（自治区）间日疟原虫PV-1型温带族占绝对优势, 疟疾控制效果好, 而海南、云南两省间日疟原虫基因型类群较复杂，疟疾控制难度大，说明间日疟原虫种群基因型结构复杂性和多重感染程度是影响当地间日疟流行势态及其防治效果的重要因素，是防治与监测中重要的流行病学指征之一。     

抗疟药对体外猴疟原虫和诺氏疟原虫红外期的作用

疟原虫进入肝实质内是其生活史中一个不可缺少的阶段。鉴于间日疟和卵形疟可于初次感染后数月复发,因此,研究抗疟药对肝期疟原虫的作用有重要意义。子孢子由吸血感染猴疟原虫或诺氏疟原虫的恒河猴的蚊内取得。猴疟原虫巴氏亚种和猴疟原虫柬埔寨株的子孢子源于斯氏和德氏按蚊。诺氏疟原虫H株的子孢子从德氏按蚊内分离。按蚊血餐12～22天后,无菌解剖     

猴和人疟原虫子孢子的抗体反应:子孢子的发育期、种的特异性和株的交叉反应性

本文报告了猴疟原虫子孢子抗原的成熟性、猴疟原虫子孢子抗体的种特异性、人疟原虫子孢子种的特异性和株的交叉反应性的研究结果,为制备子孢子免疫虫苗提供参考。通过对猴间日疟(B株)原虫孢子增殖的不同时期对宿主的免疫诱发力和感染力的观     

四膜虫细胞表达恶性疟原虫环子孢子蛋白并定位于细胞表面

异种表达是鉴定蛋白功能、研究其结构和抗原产生的重要工具。疟原虫环子孢子蛋白(circumsporozoite protein，CSP)是子孢子表达的一个糖基磷酯酰肌醇(glycosyl-phosphatidyl-inositol，GPI)锚定的表面蛋白，在蚊和脊椎动物宿主体内都发挥了重要作用，也是疟疾疫苗的一个重要候选分子。由于疟原虫基因组中含有极其丰富的AT含量，对有效表达是个障碍，Peterson利用基因组中同样富含AT的营自生生活四膜虫作为编码恶性疟原虫CSP的表达细胞。     

间日疟原虫环子孢子蛋白基因片段的体外扩增、鉴定与克隆

目的：体外扩增、鉴定并克隆间日疟原虫环子孢子蛋白（CSP）基因约772hP的基因片段,包容CSP基因的Ⅰ区、中央9肽重复区、重复后可变区及Ⅱ区。方法：采用PCR法扩增出CSP目的基因片段,以低熔点琼脂糖回收纯化,并以限制性内切酶BstNI酶切鉴定后,采用T载体连接方案,插入中间载体PUC19的多克隆位点,构建重组体PUC19／CSP,并转化大肠杆菌JM107,蓝白菌斑初筛阳性重组子,并以PCR法与限制性酶切分析对阳性克隆进一步鉴定。结果：从间日疟患者血样核酸提取物中扩增出约772hPDNA条带,而正常人血与空白对照无特异性扩增条带,经酶切鉴定证实为CSP基因片段;所构建的PUC／CSP重组体阳性克隆经双酶切与PCR鉴定与预期结果一致。结论：体外成功扩增并克隆间日疟原虫CSP基因片段,为下一步的基因序列分析及CS诊断抗原的制备打下基础。     

PCR扩增环子孢子蛋白基因3' 端片段用于检测恶性疟原虫的初步研究

目的 :建立 PCR检测恶性疟原虫的新方法。方法 :作者采用自行设计并合成的一对恶性疟原虫特异引物 ,经 PCR扩增环子孢子蛋白 ( CSP)基因 3 端保守区序列 2 4 5bp片段 ,观察了它的特异性、敏感性和稳定性。结果 :1从 4株培养的恶性疟原虫和 2例恶性疟患者血样中均扩增出约 2 4 5bp的 DNA目的片段 ,用业已鉴定的 CSP基因序列作模板再行扩增证实其为恶性疟原虫CSP基因片段 ;2对间日疟原虫、利什曼原虫、弓形虫和健康人血样进行 PCR反应 ,均未见扩增条带 ;3本检测系统可检出恶性疟原虫感染血样中 0 .18个原虫所含的 DNA模板 ;4采用不同方法制备模板及不同反应方式均能获得满意结果 ;结论 :PCR扩增恶性疟原虫 CSP基因 3 端片段用于恶性疟原虫检测具有灵敏、高度特异且稳定性好等优点。