血清学指定HLA-B座位纯合型误差分析及HLA-B座位表达变异检测的意义

目的 :用DNA分型法对HLA B座位抗原纯合型进行分型 ,探明是否存在HLA B基因发生变异引起结果差异。方法 :经血清学鉴定HLA B座位纯合型样本 75例 ,用PCR SSP法进行DNA分型和表达变异筛查。结果 :75例血清学鉴定为纯合型后经DNA分型证实有 12例存在第二基因 ,经PCR SSP法进行变异筛查发现有 1例存在第四外显子额外胞嘧啶插入 ,经DNA分型发现的第二基因实为沉默基因。结论 :用PCR SSP法进行HLA B基因分型可弥补血清学方法的不足 ,同时筛查表达变异使分型结果更加准确 ,能有效地指导临床应用。     

用PCR-RFLP方法探测MEG白血病细胞HLA-Ⅱ基因型

研究MEG白血病细胞系表达HLA Ⅱ类抗原类型 ,提高对该细胞的HLA Ⅱ基因型的认识。旨在从分子遗传学水平上研究HLA Ⅱ类抗原与急性巨核细胞白血病发病机理的关系。采用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)技术分析MEG白血病细胞系HLA Ⅱ类抗原类型。结果是MEG白血病细胞系的HLA Ⅱ类抗原的等位基因型分别是 :DRB1 14 0 6 0 4 10 ,DQB1 0 4 10 0 4 0 1,DPB1 0 5 0 1 0 5 0 1。该项研究提高了对巨核细胞白血病细胞系HLA Ⅱ基因型的认识 ,并为临床上进一步探讨HLA Ⅱ基因型与急性巨核细胞白血病致病基因之间…     

血小板特异性抗体及HLA抗体引起血小板输注无效的研究

目的分析血小板输注无效（PTR）患者血小板同种抗体,并对其HPA及HLA-Ⅰ类抗原进行基因分型,探讨血小板输注无效与血小板同种抗原／HLA—Ⅰ类抗原相关性。方法应用ELISA方法对17例血小板输注无效患者血清中的血小板抗体进行检测;运用PCR—SSP方法,采用HPA分型试剂盒检测血小板同种抗原7个抗原系统HPA-1、2、3、4、5、6、15,以及HLA分型试剂盒对HLA—A／B抗原进行基因分型。结果6名患者单独表达HLA抗体,4名患者表达血小板特异性糖蛋白抗体,3例HLA抗体和血小板特异性糖蛋白抗体共同表达．其中以GPⅡb／Ⅲa为主。对17例患者HPA系统和HLA-Ⅰ类抗原基因分型,发现HPA-3系统中a的基因频率高达0．676,b为0．324;HLA—A＊02、HLA—A＊24、HLA—A＊11和HLA—B＊60、HLA—B＊13、HLA—B＊46多见。结论HLA抗体和血小板特异性糖蛋白抗体表达引起血小板输注无效,了解胛R与HPA／HLA—Ⅰ类抗原的相关性对指导临床血小板配合性输注具有重要意义。     

1984年HLA系统抗原的命名

第九届国际组织相容性会议之后,HLA命名委员会在WHO赞助下举行会议,遵循历次报告中相继确定的原则,考虑了由血清学分型和细胞学分型所鉴定的抗原的命名。不考虑由HLA区域基因控制的补体成分变异体的命名,因为我们认为这是那些对补体有特别兴趣的人的责任。根据我们对于现在可以叫做HLA-D区的那些产物(有时叫第Ⅱ类产物)的生物化学和遗传学了解的最近进展,这里特别注意建立一个这些产物的修订的命名系统。     

HLA-Ⅱ类基因与人类疾病相关性研究进展

通过DNA分型技术 ,已经明确了多种疾病的发生和发展与HLA Ⅱ类基因相关联。可通过计算相对危险因子 (RR)来判断HLA等位基因的频率。HLA Ⅱ类基因多态性可以改变HLA分子、抗原、T细胞之间相互作用的特性 ,并因此控制对外来抗原 (有时自身抗原 )的免疫应答。HLA Ⅱ类基因的编码的某一氨基酸序列控制着对疾病的易感性和临床性状。构成HLA基因群的各个基因是高度连锁的 ,因而与某一特定疾病关联的易感基因有可能不是单一的 ,而是一些连锁基因的组合。     

HLAⅠ、Ⅱ类抗原的组织配型基因芯片的建立及应用

目的应用基因芯片技术进行北方汉族人群HLAⅠ、Ⅱ类抗原中分辨度分型研究,建立稳定的HLA检测芯片。方法采用寡核苷酸芯片分型方法,选择了中国人群基因频率较高的等位基因,同时考虑遗传的连锁不平衡,根据HLA-A、HLA-B、HLA-DR、HLA-DQB、HLA-DQA不同基因亚型的独特序列,完成了探针的设计与筛选,共设计了213条探针(HLA-A 56条,HLA-B 66条,HLA-DQA 22条,HLA-DQB 38条,HLA-DR 31条)制成基因分型芯片。采用带荧光标记的引物,用合适的PCR方法扩增HLAⅠ、Ⅱ类抗原上的多态性区域,产物与芯片上探针杂交。杂交结果经荧光扫描并用特定软件分析判断,以此确定样品基因型。结果所有样本的HLAⅠ、Ⅱ类抗原基因分型均获成功。此中分辨度探针可分出598个Ⅰ类抗原等位基因,511个Ⅰ类抗原等位基因,可检出Ⅰ类抗原特异性57个,Ⅱ类抗原特异性30个。结论基因芯片用于HLAⅠ、Ⅱ类抗原分型可行。其分辨率高、特异性强,可用于HLA基因分型、骨髓移植、器官移植的HLA配型、与HLA有密切关系的遗传性疾病的人群筛查。     

中国彝族人群HLA-Cw位点基因多态性研究

目的　应用DNA分型技术 ,分析中国彝族人群在HLA Cw位点的等位基因分布频率 ,为进一步研究HLA Cw与HIV感染及其发病进程的关联提供背景资料。方法　设计合成 2 6条特异性分型引物和 1对内对照引物 ,组成 2 4个PCR反应 ,建立PCR SSP分型方法 ,对 10 2例随机选取的无亲缘关系的中国彝族健康人作HLA Cw基因分型。结果　在彝族健康人群中共检测到HLA Cw位点的12种等位基因 ,其中HLA Cw 0 1、Cw 0 7和Cw 0 8为主要分布型别 ,基因频率分别为 0 .3 3 3 3、0 .2 5 0 0和 0 .1765 ,检出了HLA Cw 12、Cw 13 0 1、Cw 14和Cw 15等血清学方法不能鉴定的HLA Cw基因 ;统计分析表明HLA Cw位点的基因型分布符合Hardy Weinburg平衡 (χ2 =65 .983 1,df=66,P >0 .0 5 )。结论　证实了PCR SSP法用于HLA Cw基因分型的可靠性和适用性 ,在DNA水平上提供了中国彝族群体的HLA Cw基因分布频率资料     

HLAⅠ、Ⅱ类基因与肾综合征出血热重型与轻型的相关性研究

目的 探讨HLAⅠ、Ⅱ类基因多态性与肾综合征出血热（hemorrhagic fever with renal syndmme，HFRS）患者临床特征的相关性。方法 应用PCR-SSO（polymerase chain reaction using sequencespecific oligonucleotides）基因分型技术对中国北方地区56例汉族HFRS患者HLAⅠ、Ⅱ类基因频率分布进行了检测。结果 HFRS重型组HLA-B35携带率为20％，HLA-B62及HLA-DR11携带率皆为15％．与轻型组比较差异皆具有统计学意义（P〈0．05）。结论 HLAⅠ类基因中HLA-B35、HL4-B62及HLAⅡ类基因中HLA-DR11与中国北方地区汉族人群HFRS患者病情严重性密切相关。     

HIV高度暴露血清学指标持续阴性者的流行病学调查和HLA分型研究

目的 了解中国有偿献血人群中的HIV高度暴露血清学指标持续阴性者（highlyexposed but persistently seronegative,HEPS）流行病学和HLA分型情况.方法 采用队列研究方法对有偿献血人群进行流行病学追踪、血清流行病学调查研究.利用序列特异性引物PCR（PCR with sequencespecific primer,PCR-SSP）进行HLA分型.结果 流行病学研究发现8例HIV高度暴露血清学指标持续阴性者,HLA分型HEPS人群与HIV抗体阳性配偶比较,HLA-A24、HLA-40基因型占优势.结论 在中国有偿献血人群中存在HIV高度暴露血清学指标持续阴性者,初步分析中国HEPS人群HLA分型,结 HLA-A24、HLA-B40基因型占优势.     

上海人群抗原处理相关基因的分布及其与原发性IgA肾炎关联研究

采用PCR SSO和PCR RFLP技术对 6 0例经临床及肾穿刺证实的IgA肾炎 (IgAN )患者和 80例正常人的TAP、LMP2和DM等位基因频率进行了检测。结果显示在患者和正常人中各等位基因频率均无显著性差异 ,表明IgAN与抗原处理相关基因无关联。同时分析了经典Ⅱ类基因 (DR/DQ/DP )和抗原处理相关基因 (TAP/LMP2 /DM )之间可能存在的连锁不平衡 ,获得了扩展的HLAⅡ类单倍型 ,为HLAⅡ类基因与某些自身免疫病的关联性研究提供了有价值的数据     

中国南方汉族人群HLA-Cw座位基因多态性分析

目的 分析中国南方汉族人群HLA－Cw座位基因多态性。方法 采用ARMS／PCR技术对60名随机选择的南方汉族健康个体作HLA－Cw基因分型。结果 共检出12种HLA－Cw等位基因或等位基因组（allele group)，其中HLA－Cw*07、＊01、＊03为该人群最常见HLA－Cw基因，频率之和为0．6932；证实该群体中HLA－Cw＊08频率为0．1056，检出率明显高于血清学分型；检出HLA－Cw*1202、＊1203、＊14、＊15等4种经典血清学分型不能鉴定的HLA－Cw基因，频率之和为0．0673。结论 提供了中国南方汉族人群HLA－Cw座位基因频率正常值，证实ARMS／PCR作HLA－Cw分型具有准确、快捷的优点。     

HLAⅠ类抗原的基因芯片分型技术研究

目的：采用DNA芯片技术进行汉族人群HLAⅠ类抗原A、B位点的DNA分型研究，并实现将A、B位点的DNA分型集中于一张芯片上，同时完成。方法：根据HLAⅠ类抗原A、B位点不同基因亚型的独特序列设计探针，制成分型芯片；待检测样品经PER反应标记上荧光之后，与探针在芯片上进行杂交，通过对杂交产生的荧光信号值进行分析，确定样品的HLA-A、B基因亚型。将这一方法应用于220份样本的HLAⅠ类DNA分型并将部分样品进行基因测序。结果：所有样本的HLAⅠ类基因芯片分型均获得成功，无假阳性和假阴性出现，80份样本的重复率为100％，总耗时2．5h。分型结果经双盲验证完全符合。可准确分辨出A位点等位基因20个，B位点等位基因41个，实际检出汉族人群A抗原特异性13个、B抗原特异性32个。结论：基因芯片用于HLAⅠ类A、B分型技术可行，其分辨率高、特异性强、重复性好、操作简便快速、结果直观，可以在一张芯片上同时检测HLA-A、B位点，并实现一张芯片多人份，适合于临床应用。     

HLA-B40组等位基因多态性和血清学分型不明确标本分析

目的：利用DNA分型技术调查上海汉族人群HLA－B40组等位基因多态性并比较配型标本中HLA－B40抗原血清学和DNA分型的结果：方法：采用反向PCR－SSOP技术进行DNA分型，可检出HLA－B＊4001－4011等11个等位基因，结果：所有标本DNA分型均获成功，无假阳性和假阴性结果出现，质控DNA分型结果与UCLA结果相符，上海地区汉族人群共检出B＊4001－4003，4005－4007，4011等等位基因，未检出B＊4004，4008－4010等等位基因，296名无关个体中HLA－B40＊组等位基因频率为0．1402，血清学方法检测HLA－B40组抗原错误率为12．82％（10／78），结论：该技术用于HLA－B40分型分辨率高，分型结果较血清学方法更加精确，可确保HLA分型的准确。     

HLA-D抗原的本质和HLA-D分型现状

HLA-D抗原是用细胞学方法检出的HLAⅡ类抗原,以前认为D抗原是HLA-D位点基因的产物。现已证明,独立的D 位点是不存在的,HLA 基因图谱上只有DR、DQ 和DP 组成的D 区。D 抗原可能代表DR 和DQ 分子上的某些决定簇,这些决定簇只被T 细胞所识别。传统的HLA-D 分型采用初次混合淋巴细胞培养(MLC)方法,现证明,用T 克隆方法也能检出HLA-D 抗原,因此D 抗原概念和D 分型方法都在原有基础上有新的发展,本文介绍D 抗原本质和HLA-D 分型研究的新进展。     

微量DNA体外扩增及顺序特异的寡聚核苷酸探针作HLA-DQA基因分型

本文用人的微量DNA作PCR体外扩增,将PCR产物用5种特异的寡聚核苷酸探针进行分子杂交及HLA-DQA基因分型。实验结果与血清学检测的DR抗原结果完全一致,从而表明HLA-DQ基因与DR基因之间存在着较强的相关性。该方法具有敏感度高、技术稳定和样品微量等特点,是目前用于分子水平检测HLA基因的一项先进技术。     

HLA-DR位点的基因芯片分型与临床应用

目的：建立一种新型的HLA－DR位点的基因分型方法，为HLA－DR的基因分型提供一个较新的思路。方法：利用基因芯片技术HLA不同基因亚型的独特序列设计探讨，制成分型芯片；待检测样品经PCR反应标记上荧光之后，与芯片进行杂交，根据杂交产生的荧光信号值分析确定样品DR位点的基因亚型，将这一方法应用于70份标准DNA和200份医院移植供受者的HLA－DR基因分型并将部分样品进行基因测序。结果：检测结果表明HLA－DR基因分型芯片可准确分辨出DR位点等位基因30大类，耗时3h 。结论：基因芯片用HLA－DR的基因分型，分辨率高，特异性强，重复性好，操作简便，对比常规的PCR－SSP和PCR－SSO方法，HLA－DR基因芯片方法更为直观，并具有集成化优势。可以在一张芯片上同时检测HLAⅠ类的A、B位点，并实现一张芯片多人份，适合于临床应用和骨髓库，脐血库的建立。     

HLA-DRB1基因多态性与急性髓性白血病的相关性研究

急性髓性白血病( acute myelogenous leukemia,AML)是临床常见的一种造血系统恶性肿瘤.关于HLA与AML的相关性研究,由于环境不同、人种不同,各地的报道结果存在一定差异.本文对732例AML患者及2264例正常对照进行了Ⅱ类基因HLA-DRB1的PCR-SSP基因分型研究,探寻与AML相关的HLA基因. 病例组为经临床及实验检查确认的732例急性髓性白血病患者(男性460例,女性272例);对照组来自脐血库的2264份无血液病及遗传病家族史的正常新生儿脐血.采用离心柱法提取DNA,按照说明书进行操作.用核酸蛋白测定仪测定DNA浓度和纯度,保证A260/280值在1.6～1.8,调整浓度至80～100 ng/μl.     

1987年HLA系统因子的命名——白细胞抗原命名委员会1987年11月21～23日纽约会议的决议

HLA命名委员会于第十届国际组织相容性试验专题讨论会之后举行了会议,考虑修订和增补血清学和细胞学分型鉴定的特异性的命名,并遵循历届报告确定的原则命名由分子技术鉴定的基因。会议只考虑HLA“Ⅰ类”和“Ⅱ类”产物的命名,特别注意HLA-D基因和等位基因的命名。分子生物学资料现已鉴定HLA区域基因中多个基因和它们的排列。因此会议决定,这些基因中的若干基因,尤其是包括为已知HLA-D区表达的新产物编码的那些基因,可以遵循上次报告述及的一般原则给予正式命名。所有HLA-D区基因: 1.都放个前缀字母D; 2.后接一个字母P等表示亚区(由一个亚区内基因的位置和相似性确定); 3.再接字母A或B表示α链或β链(或在假基因则表示有关的顺序);     

HLA分型方法进展

HLA分型技术从传统方法发展到基因水平是近年来的一次突破。以限制性片段长度多态性(RFLP)原理探索HLA多态性开始,接着多聚酶链反应(PCR)技术和顺序特异性寡核苷酸(SSO)探针的应用使基因分型方法迅速发展,主要有两方面:PCR结合SSO探针和PCR结合RFLP,两者都在改进中。将PCR与单股构象多态性(SSCP)等结合的方法也在探索中。     

中国彝族人群HLA-A基因的DNA分型

HLA具有高度多态性 ,不同民族和地区的人群在HLA基因型别和频率分布上存在很大差异。我国是一个多民族国家 ,分析不同民族人群HLA基因的多态性可为疾病相关联研究、移植免疫及群体遗传学提供有价值的参考数据。作者利用近几年发展起来的PCR SSPDNA分型方法对中国彝族人群HLA A基因的多态性进行了分析 ,以便为以后的免疫学研究提供背景资料。1　材料与方法1.1　研究对象　样本来自四川凉山彝族自治州 ,随机选取三代均为彝族且无亲缘关系的健康个体 10 2例。1.2　模板DNA的制备　取研究对象静脉血 2 0 0 μL用QIAampDNABloodMin…