影响TUNEL法阳性结果的因素探讨

ＴＵＮＥＬ法以其敏感性强、方法简便、直观的特点被广泛应用于细胞凋亡的研究。我们在采用ＴＵＮＥＬ法原位检测细胞凋亡的过程中,发现不恰当固定可以影响检测结果;也有人曾提出,不同浓度蛋白酶Ｋ消化液可以影响检测结果。为了探讨这些基本环节对检测结果可能产生的影响,我们进行了相应实验。一、材料和方法1.材料:(1)正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠4只;(2)选择经ＴＵＮＥＬ染色证实为凋亡细胞阳性的肝硬化组织及假阳性的慢性肝炎肝穿组织各4例作为对照;(3)试剂:ＴＵＮＥＬ检测试剂盒碱性磷酸酶标记,(ＢｏｅｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ公司产品,…     

TUNEL复合染色显示肝内细胞凋亡

已知肝内除肝细胞可以发生凋亡外 ,增生的小胆管上皮细胞、肝非实质细胞如星状细胞、枯否细胞等均可发生细胞凋亡。它们对维持肝内细胞间的平衡 ,胶原纤维的沉积与降解均发挥着重要的作用[1] 。为了研究肝病组织中各种细胞凋亡的发生发展及形态学改变 ,我们应用较为灵敏的ＴＵＮＥＬ法在石蜡切片中原位检测细胞凋亡。由于肝窦中细胞成分较多 ,为了同时鉴别发生凋亡细胞的类别 ,在ＴＵＮＥＬ法基础上附加显示相应细胞的特异免疫组织化学或辅以特殊染色 ,并以 2种ＴＵＮＥＬ试剂盒与免疫组织化学做对应的染色 ,选择具最佳显示效果的方法。一、…     

TUNEL法检测体外培养细胞凋亡的体会

ＴＵＮＥＬ(ＴｄＴ ｍｅｄｉａｔｅｄｄＵＴＰｎｉｃｋｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇ ,ＴｄＴ介导的脱氧尿嘧啶缺口末端标记 )是用于原位检测细胞凋亡情况的一种基本方法。作者在绿茶儿茶素 (ＧＴＣ)诱导ＢＥＬ 740 2人肝癌细胞凋亡的研究中 ,对培养于盖玻片的ＢＥＬ 740 2细胞 (盖片培养细胞 )和ＢＥＬ 740 2细胞涂片 (培养细胞涂片 )进行了ＴＵＮＥＬ染色效果的比较。1　材料和方法1.1　材料　原位细胞死亡检测试剂盒 ,ＰＯＤ为ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ公司产品。ＧＴＣ :日本产品 ,由中国医学科学院肿瘤研究所程书钧院士惠赠 ,实…     

激光损伤视网膜后神经元凋亡及GFAP表达的研究

目的 观察兔视网膜激光损伤后神经元细胞有无凋亡改变及视网膜Ｍｕｌｌｅｒ细胞胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）的表达变化。方法 应用末脱氧核苷酸转移酶介导的ｄＵＴＰ－Ｘ切口末标记法（ＴＵＮＥＬ法）标记凋亡细胞。应用免疫组化染色显示视网膜Ｍｕｌｌｅｒ细胞ＧＦＡＰ表示。结果伤后６ｈ、１、３、７ｄ视网膜各层可见散在分布的ＴＵＮＥＬ阳性凋亡细胞,尤以外核层多见,伤后３ｄ,视网膜可见Ｍｕｌｌｅｒ细胞ＧＦＡＰ表达;伤     

检测结核性胸膜炎患者sIL-2R和T淋巴细胞亚群的临床意义

血清ｓＩＬ2Ｒ和Ｔ淋巴细胞变化在浸润型肺结核发生发展中的作用已有报道[1],本文就其与肺结核分类中的特殊类型—结核性胸膜炎患者发病之间的关系作一探讨。1　对象和方法11　受检对象　根据临床、Ｘ线胸片和实验室检查确诊为结核性胸膜炎患者共58例。其中17例胸片显示胸腔积液合并肺结核。另选择性别、年龄比例与受检者近似的健康体检均正常者作为对照组以资对比。12　检测方法　血清ｓＩＬ2Ｒ测定采用ＥＬＩＳＡ法,试剂盒为比利时ＩＭＮＯＧＥＮＥＴＩＣＳ生产,Ｔ细胞亚群检测试剂采用ＩＭＭＵＮＯＴＥＣＨ公司生产,经ＣＯＵＬＴＥＲＥＰ…     

胸腺肿瘤组织中EB病毒、细胞增殖和凋亡的检测

目的 研究胸腺肿瘤在广州５所医院的发病情况,与ＥＢ病毒（ＥＢＶ）感染是否相关以及肿瘤细胞增殖和凋亡的等级,方法 以４３例胸腺肿瘤和７例胸腺增生组织主研究对象,采用原位分子杂交检测ＥＢ病毒编码的ＥＢＥＲｓ,免疫组化ＬＳＡＢ法检测ＥＢＮＡ－１,ＬＭＰ－１,ＰＣＮＡ,ｂｃｌ－２和ｐ５３原位细胞凋亡（ＴＵＮＥＬ）方法检测细胞凋亡,结果 （１）胸腺疾病在广州５所医院活检中仅占有０．０５７％,其中肿瘤占７４．     

TUNEL技术改良

细胞凋亡的研究已成为当今国内外形态学和分子生物学研究的新热点[1] 。检测细胞凋亡的主要方法有形态学和基因组ＤＮＡ的分析。原位检测法由于可在组织原位同时显示凋亡细胞的形态和分布而被广泛采用[2 ] 。原位检测法主要包括 :①末端脱氧核苷酸转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记 (ＴＵＮＥＬ) ;②ＤＮＡ聚合酶Ｉ或Ｋｌｅｎｏｗ大片段介导的原位缺口平移(ＩＮＳＴ)。我们采用Ｉｎｔｅｒｇｅｎ公司生产的原位末端标记试剂盒 ,对福尔马林固定、石蜡包埋的脑组织进行ＴＵＮＥＬ染色 ,在操作手册和已有文献的基础上进行方法改进 ,旨在比较酶消…     

鼻咽癌患者T细胞对EB病毒肽段特异性反应的酶联免疫斑点法检测

ＥＢ病毒感染是鼻咽癌的主要致病因素之一。由于Ｔ细胞可识别由ＭＨＣ分子提呈的多肽 ,在控制病毒感染中扮演着重要的角色[1 ] ,因此 ,鼻咽癌患者的Ｔ细胞对ＥＢ病毒 ,尤其是该病毒肽段的特异性反应能力是近年探讨的热点。我们采用酶联免疫斑点法 (Ｅｌｉｓｐｏｔ) ,检测了鼻咽癌患者外周血Ｔ细胞对ＥＢ病毒抗原ＬＭＰ1、ＬＭＰ2和ＥＢＮＡ3中部分表位的特异性反应能力。1　材料和方法1.1　材料　研究对象 11例 ,6例为鼻咽癌患者 ( 4例来自广西医科大学 ,2例来自英国伦敦ＲｏｙａｌＦｒｅｅ医院 ) ,均经病理学确诊。 5例正常人为健康自愿者…     

滋养层细胞FasL的表达在胎盘免疫耐受中的作用

目的 研究显示胎盘组织中淋巴细胞凋亡明显增加，被认为与胎盘的免疫耐受机制有关。本文拟观察胎盘组织中ＦａｓＬ的表达是否与淋巴细胞的凋亡有关。方法 取４０例正常产妇的胎盘组织和４０例宫内膜组织石蜡标本，以免疫组化方法检测ＦａｓＬ的表达，采用ＴＵＮＥＬ方法测定淋巴细胞凋亡。结果 ４０例胎盘组织中滋养叶细胞均有不同程度的ＦａｓＬ表达，宫内膜组织的腺体及间质细胞等均未见明显ＦａｓＬ表达，胎盘组织中淋巴细胞的     

鼻咽癌组织中潜伏膜蛋白1的表达对癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨治疗前鼻咽癌组织中潜伏膜蛋白１（ＬＭＰ－１）的表达对癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 收集未经治疗的鼻咽癌活检组织标本５５例,采用原位分子杂交和免疫组化检测ＥＢＵ病毒编码的小ＲＮＡｓ和ＬＭＰ－１以及癌细胞增殖细胞核抗原指数和癌组织中凋亡要关基因产物ｂｃｌ－２的表达,以末端标记原位细胞死亡指数（ＴＵＮＥＬ ｉｎｄｅｘ ＴＩ）表示癌细胞的凋亡程度。结果（１）５５例末治疗鼻咽癌组织中２７例呈ＬＭＰ     

流式细胞术定量检测细胞凋亡3种方法的比较研究

目的：探讨流式细胞术定量检测细胞凋亡３种方法的价值。方法：同时使用ＰＩ染色，ＴＵＮＥＬ及Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／ＰＩ３壹量检测地塞米松处理小鼠的胸腺细胞凋亡发生率。结果：ＰＩ染色，Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／ＰＩ，ＴＵＮＥＬ３种方法凋亡检出率分别为２７．１９％，３２．２８％，５０．１７％，两者之间均有显著差异。     

慢性压力负荷性心衰大鼠心肌细胞凋亡的研究

目的探讨慢性心衰时是否有心肌细胞凋亡。方法利用末端转移酶介导的切口末端标记法（ＴＵＮＥＬ）及ＴＥＭ法,检测慢性压力负荷性心衰大鼠左、右心室心肌的凋亡细胞。结果在心衰大鼠的左、右心室心肌组织中存在有凋亡的心肌细胞,而在对照组大鼠心肌组织中未见到心肌细胞调亡。结论慢性心衰与心肌凋亡之间有紧密联系。     

Annexin V联合PI染色法定量检测凋亡细胞

为评价ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ双参数法在凋亡检测中的价值,用ＰＩ染色法、ＴＵＮＥＬ法及双参数ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ法定量检测地塞米松处理小鼠胸腺细胞凋亡发生率。结果发现其凋亡检出率分别为ＰＩ法２７１９％,ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ法３２２８％,ＴＵＮＥＬ法５０１７％。三者之间均有显著差异（Ｐ＜００１）。但ＴＵＮＥＬ法不能将死亡细胞、凋亡细胞区分开来。ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ法可将正常细胞（ＡｎｎｅｘｉｎＶ ＰＩ ）、凋亡细胞（ＡｎｎｅｘｉｎＶ＋ＰＩ ）、死亡细胞（ＡｎｎｅｘｉｎＶ＋ＰＩ＋）分开来。ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ法能检出早期凋亡细胞且更为简单、灵敏、特异,是较为理想的凋亡定量检测方法。     

阿尔及利亚求购制药原料

阿尔及利亚求购制药原料阿尔及利亚一公司求购制药原料（ＰＲＯＤＵＩＴＳＰＡＲＡＰＨＡＲＭＡＴＩＱＵＥＳ）。公司名称：ＣＯＮＤＩＰＨＡＲＭ联系人：ＭＲ．Ｙ．ＫＥＴＦＩ地址：１２９，ＲＵＥＤＩＤＯＵＣＨＥＭＯＵＲＡＤ，１６０００ＡＬＧＥＲＡＬＧＥＲＩＥ电话...     

多发性硬化患者血清sCD62E的检测及意义

多发性硬化(ｍｕｌｔｉｐｌｅｓｃｌｅｒｏｓｉｓ,ＭＳ)的病因及发病机制至今未明。目前认为 ,主要是由其Ｔ细胞介导而致中枢神经系统炎性脱髓鞘的自身免疫性疾病[1] 。由于可溶性Ｅ选择素 (又称ｓＣＤ6 2Ｅ)可介导白细胞 (中性粒、单核细胞及ＣＤ4 + 记忆性Ｔ细胞)在内皮细胞表面最初的滞留和滚动 ,以及随后迁移到炎症组织 ,推测其可能与Ｔ细胞介导的中枢神经损伤有关。为此 ,我们检测了ＭＳ患者ｓＣＤ6 2Ｅ ,以探讨其在ＭＳ发病中的作用。1　对象和方法1.1　对象　ＭＳ患者 4 5例 ,包括活动期 (ＡＭＳ) 2 5例 ,稳定期(ＳＭＳ) 2 0例。男性…     

EB病毒LMP1促鼻咽癌细胞生长与CD23、bcl-2表达和凋亡的关系

目的 :探讨ＥＢ病毒ＬＭＰ1表达的促鼻咽癌细胞生长作用与ＣＤ2 3、ｂｃｌ- 2表达和细胞凋亡的关系。方法 :用免疫组化ＬＳＡＢ法检测ＬＭＰ1、ＣＤ2 3和ｂｃｌ- 2蛋白的表达 ;用ＭＴＴ法测定鼻咽癌细胞的生长能力 ;用ＤＮＡ电泳法、流式细胞仪测定法和末端脱氧核苷酸转移酶介导核苷酸缺口标志 (ＴＵＮＥＬ)法检测癌细胞凋亡 ;用ＭＴＴ法观察ＣＤ2 3单克隆抗体对鼻咽癌细胞生长能力的影响。结果 :用含ＬＭＰ1基因质粒转染并表达ＬＭＰ1的鼻咽癌细胞 (Ｌ -ＣＮＥ1 )在 1 5%血清和无血清培养液培养下的生长能力均明显增强 ,并表达ＣＤ2 3蛋白 …     

多视场多参数形态定量分析模块在神经研究领域中的应用

缺血性神经元损伤的性质是神经研究关注的热点。但目前用于区分凋亡与坏死细胞的ＴＵＮＥＬ技术,较易受主观因素的影响。本实验和图像分析技术对缺血动物脑的ＴＵＮＥＬ染色切片进行多场多参数形态定量分析,即细胞形态这亘参数（核面积、周长、直径、形状因子）和含 密度（平均光密度、积分光密度）。本实验结果显示图像分析能提高ＴＵＮＥＬ鉴别凋亡与坏死的灵敏度和精确性,并提供了一种简便快捷的形态定量方法,是在神经研究中     

内源性一氧化氮对致敏大鼠淋巴细胞凋亡的影响

观察致敏大鼠支气管肺组织Ｆａｓ抗原表达、支气管肺泡灌洗液中淋巴细胞及脾Ｔ淋巴细胞凋亡的情况及左旋精氨酸 (Ｌ ａｒｇ)、硝基左旋精氨酸甲酯 (Ｌ ＮＡＭＥ)对其影响。探讨哮喘炎症发生不易被消除的原因与淋巴细胞凋亡情况及与内源性ＮＯ的关系。材料与方法仪器与试剂 :流式细胞仪为美国ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ产品 ,免疫组化ｓＡＢＣ法检测支气管肺组织Ｆａｓ抗原试剂盒购于武汉博士德生物工程公司。体内实验 :雄性ＳＤ大鼠 2 4只 ,体重 2 0 0± 50ｇ ,由同济医科大学实验动物中心提供 ,随机分为 4组 ,每组 6只 ,Ａ组为正常对…     

人胎视网膜神经元凋亡的研究—TUNEL法

人胎视网膜神经元凋亡的研究—ＴＵＮＥＬ法李爱冬羊惠君韦纯义＊（华西医科大学解剖教研室＊附一院眼科）为研究人胎视网膜神经元的凋亡与增殖、分化的关系，调节凋亡和增殖的因素，验证ＴＵＮＥＬ法的敏感性和可靠性，本文收集了８—３８周胎儿视网膜２７例、成人视网膜...     

PTEN/MMAC1/TEP1在肺癌中的丢失和失活

目的 了解抑制癌基因ＰＴＥＮ／ＭＭＡＣ１／ＴＥＰ１（以下简称ＰＴＥＮ）在肺癌中的缺失和失活。方法 选用２４例具有正常对照的肺癌新鲜标本,１８例小细胞肺癌石蜡切片,用聚合酶链反应及杂合性丢失分析法检测ＰＴＥＮ的杂合笥丢失;并采用原位杂交法、免疫组化化学染色法、Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ法观察肺癌标本中ＰＴＥＮ ｍＲＮＡ和蛋白水平的表达。对１株肺腺癌和３株小细胞肺癌系进行ＰＴＥＮ的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ、Ｎｏｒ