肌型肌酸激酶同工酶的简易分离和纯化

肌型肌酸激酶同工酶的简易分离和纯化万士林，张在和，季秀生肌型肌酸激酶同工酶（ＣＫ－ＭＭ）的分离和纯化对ＣＫ同工酶的检测方法的建立有重要意义，但文献报道中ＣＫ－ＭＭ分离纯化所需设备条件较高或时间较长，本文在普通实验条件下建立的ＣＫ－ＭＭ分离纯化方法，分...     

一种简捷的质粒DNA提取及纯化方法

介绍一种快速获取高纯度质粒ＤＮＡ方法,在碱裂解法快速获取质粒ＤＮＡ粗制品的基础上,利用一种不溶解蛋白质而溶解ＤＮＡ的溶液ＴＥＳ纯化质粒ＤＮＡ,同时对本法所提取的质粒的ＤＮＡ的回收率、纯度及可能的用途进行验证。此法简易,所得样品纯度高,可以直接用于转化、酶切和基因克隆。     

急性脑出血管病肌酸激酶及其脑型同工酶活性变化

淫ＤＥＡＥ－ｓｅｐｈａｄｅｘＡ－５０微型柱层析结合分光光度法测５１例急性脑血管病（ＡＣＶＤ）和２０例正常人血清和脑脊液（ＣＳＦ）肌酶激酶（ＣＫ）脑袋脑型同工酶（ＣＫＢＢ）活性（统称ＣＫ活性）。结果发现：中风组ＣＫ活性显著高于正常组（Ｐ〈０．００１）。脑出血ＣＫ活性有高于脑梗塞的趋势。除血清中ＣＫ活性外，病程≤３ｄ组ＣＫ活性高于〉３ｄ组（Ｐ〈０．０１）。病情重、病灶大者，ＣＫ活性较高。中风急性期，尤     

人脑肌酸激酶单克隆抗体的制备及鉴定

用事故死亡者脑组织中提纯的人脑肌酸激酶（ＣＫ－ＢＢ）对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠进行免疫，应用杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞分别与２种骨髓瘤细胞（ＮＳ－１，６５３）融合，筛选得到８株能稳定分泌ＩｇＭ抗体的杂交瘤细胞。对分泌抗体经酶联免疫电泳转移试验（Ｗｅｓｔ－Ｂｌｏｔ）进行了鉴定，其中４种抗体能特异地与ＣＫ－ＢＢ的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳带结合。提示这些单克隆抗体有可能应用于肌酸激酶的结构功能研究和临床检查中。     

人脑型肌酸激酶（CK—BB）的分离和提纯

肌酸激酶(CK)由B及M两个亚单位组成,分子量83000～85000,包括肌酸激酶MM(CK-MM)、肌酸激酶MB(CK-MB)及肌酸激酶BB(CK-BB)三种同功酶。CK-BB的抗体能与CK-MB发生交叉反应,但不与CK-MM反应。CK-BB在血中含量甚微,难用CK-BB抗体检出。急性心肌梗塞(AMI)时血中CK-MB增多,并可用CK-BB抗体检出,有利于对AMI作出早期诊断。分离提纯CK-BB是临床应用这一技术的基础。现有的CK-BB分离提纯法,尚存在一些缺点。本文报道改良的从人脑分离提纯CK-BB的方法。     

颅脑损伤检测肌酸激酶脑型同工酶的临床意义

目的探讨颅脑损伤患者血清中肌酸激酶脑型同工酶变化的临床意义。方法采用免疫透射比浊法测定85例颅脑损伤患者血清中CK—BB水平。结果①伤后第1～3天血清CK—BB活性进行统计学比较：脑挫裂伤组、脑干损伤组与对照组差异有显著性（P〈0．01）；硬膜下血肿组、硬膜外血肿组与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。②颅脑损伤组伤后第1天与对照组相比，差异有显著性（P〈0．01），伤后第3天与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05），而伤后第7天与对照组相比，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论CK—BB活性变化也是临床判断疗效、监测迟发并发症状的良好指标。     

肌酸激酶同工酶的提取纯化和重组

目的 对肌酸激酶（ＣＫ）同工酶进行纯化和重组。方法 酶的制备和分子重组技术。结果 纯化及重组后的ＣＫ－ＭＭ、ＣＫ－ＭＢ、ＣＲ－ＢＢ比活性分别为９３００００，６９２０００，４８１０００Ｕ．ｇ＾－１（３７℃）；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，ＣＫ－ＭＭ，ＣＫ－ＭＢ均呈现单带，而ＣＫ－ＢＢ为双带。结论 实验为进一步进行ＣＫ－ＭＢ单抗制作及建立其免疫化学检测奠定了基础     

脑疾病患者血清肌酸激酶脑型同功酶的活力

对１１４例脑组织损伤患者血清肌酸激酶脑型同功酶（ＣＫ－ＢＢ）活性进行测定，结果表明ＣＫ－ＢＢ活性的测定有助于临床医生判断是否有脑实质损伤及损伤程度。它与判断脑组织损伤的其它指标合用可进一步提高诊断的准确性与可靠性，并可判断疗效及预后。     

新生儿缺血缺氧性脑病的血清肌酸激酶脑型同工酶和甲状腺激素水平变化的临床观察

目的探讨新生儿缺血缺氧性脑病（HIE）患儿血清肌酸激酶脑型同工酶（CK-BB）和甲状腺激素水平变化及临床意义。方法63例HIE新生儿分成轻度组、中度组和重度组,58例正常新生儿作为对照组。测定HIE组和健康对照组入院24小时内与入院1周后的血清T3、T4、TSH水平与CK-BB,同时分析HIE组血清T3、T4水平与CK-BB之间的相关性。结果HIE组血清T3、T4水平显著低于健康对照组（P〈0.01）,并随着HIE的严重程度而降低（r=0.85,p〈0.01）,与CK-BB成负相关（r=-0.79,P〈0.01）。结论HIE新生儿血清中T3、T4水平与HIE程度密切相关,HIE程度越重其水平越低。血清T3、T4水平与CK-BB水平存在相关性,可作为对新生儿HIE的早期诊断、病情严重程度判定的常用指标;对临床进行干预治疗和早期估计预后具有重要的意义。     

检测肌酸激酶同工酶判断热性惊厥患儿脑损伤

目的探讨热性惊厥患儿血清脑型肌酸磷酸激酶水平变化结合脑电图检查与脑损伤的关系。方法将2005年6月-2008年6月在我院就诊58例Fc患儿作为Fc组,健康儿童30例作为正常对照组,分别进行血清CK-BB测定及EEG检查。结果FC患儿血清CK-BB水平明显高于正常对照组（P〈0.01）;单纯热惊厥（SFC）组CK-BB水平与正常对照组比较差异无显著性（P〉0.05）;复杂性热惊厥（CFC）组与正常对照组和SFC组比较差异均具有显著性（P均〈0.01）。FC患儿惊厥发作后第1天EEG异常率为88.77％,其中SFC组78.12％,CFC组85.00％,差异无显著性（P〉0.05）;第14天32.69％,SFC组仅18.75％,CFC组则55.00％,差异具有显著性（P〈0.01）。结论CK-BB水平与脑损伤的程度密切相关,CK-BB水平越高脑损伤程度越严重。热性惊厥后及时检测CK-BB并结合脑电图检查对判断脑损伤程度及预后有重要价值。     

假肥大型肌营养不良患者人肌型肌酸激酶亚型的变化

假肥大型肌营养不良患者人肌型肌酸激酶亚型的变化赵昕叶贤坤韩冰赵振军李振宇杨振华人类的肌酸激酶（ＣＫ）主要由ＣＫ－ＭＭ、ＣＫ－ＭＢ和ＣＫ－ＢＢ３种同工酶组成，只有肌型同工酶ＣＫ－ＭＭ主要存在于骨骼肌和心肌。研究发现，ＣＫ－ＭＭ可以进一步分为不同亚型，在...     

人脑肌酸激酶BB同工酶的提纯、鉴定及其抗血清制备

采用比较简便的提纯方法,从300g人脑中得到凝胶电泳纯的肌酸激酶BB同工酶(Creatine kinase BB isoenzyme,CK-BB)24mg,比活力高达1104u/mg蛋白,酶活力回收66％。同时,制备兔抗人CK-BB抗血清。经~(125)I联结标记法标记CK-BB,比放射性8288kBq/μg,50％结合率的CK-BB抗血清稀释度1:25000,亲和常数(K值)3.0×10~9mol/L,并具有理想的抗体特异性,可适用于CK-BB的放射免疫分析(RIA)。此外,还测定了CK-BB的部分物化性质和免疫学性质。     

缺氧缺血性脑病新生儿血清心肌肌钙蛋白I及脑型肌酸激酶同工酶的变化及临床意义

目的探讨新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)早期血清脑型肌酸激酶同工酶(CK-BB)及心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平的变化及临床意义。方法 106例HIE新生儿(HIE组)于出生后24 h测定血清CK-BB及cTnI水平,并与同期36例健康新生儿(对照组)进行比较。结果中、重度HIE患儿出生后24 h血清CK-BB及cTnI水平高于对照组(P<0.01);轻度HIE患儿血清CK-BB水平高于对照组(P<0.05),但cTnI水平比较差异无统计学意义(P>0.05);轻、中、重度HIE患儿之间CK-BB及cTnI水平比较差异均有统计学意义(P<0.01)。出生7、14 d时,新生儿行为神经(NBNA)评分<35的HIE新生儿血清CK-BB、cTnI水平均高于NBNA评分≥35者(P<0.01)。结论 HIE新生儿出生后24 h检测CK-BB及cTnI水平有助于评估HIE严重程度及患儿预后。     

血管内皮生长因子、脑型肌酸激酶同工酶的动态检测在新生儿缺氧缺血性脑病中的意义

目的:探讨血管内皮生长因子（VEGF）、脑型肌酸激酶同工酶（CK-BB）动态检测在新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）中的临床价值。方法:选取HIE患儿（轻度33例、中度27例、重度24例） 84例（HIE组）,均常规胞二磷胆碱及1,6-二磷酸果糖静脉滴注治疗,另选取同期正常足月新生儿52名（对照组）,分别于出生后24 h、72 h和7 d动态检测2组VEGF、CK-BB水平。结果:出生后24 h和72 h,HIE不同程度组患儿VEGF水平均为重度组 > 中度组 > 轻度组,且均明显高于对照组（P < 0.01）;出生后7 d,HIE各组与对照组VEGF水平差异均无统计学意义（P > 0.05）。出生后24 h、72 h和7 d,HIE不同程度组患儿CK-BB水平均为重度组 > 中度组 > 轻度组;出生后24 h和72 h,HIE各组CK-BB水平均明显高于对照组（P < 0.01）;出生后7 d,重度、中度HIE组CK-BB水平均明显高于对照组（P < 0.01）,HIE轻度组与对照组差异无统计学意义（P > 0.05）。结论:HIE患儿VEGF、CK-BB表达水平明显升高,动态检测有助于判断HIE患儿脑损伤程度,对于HIE的诊断、治疗及预后有积极意义。     

颅脑损伤后血清肌酸激酶心肌型同功酶变化及意义

严重颅脑损伤后出现心肌损害已被尸检所证实 ,但对存活的颅脑外伤病人目前尚无直接的病理资料。国外学者曾通过对血清酶学的检测来了解严重脑外伤患者心肌损害程度 [1 ]。笔者自 1997年 8月～ 1999年 5月对 10 4例急性颅脑损伤患者 ,2 2例健康人血浆中的肌酸激酶心肌型同功酶(CK- MB)进行检测和分析 ,报告如下。1　临床资料1.1　一般资料　本组 10 4例 ,男性 6 8例 ,女性 36例 ,年龄36 .8± 15 .4岁 (10～ 72岁 )。所有病例均符合以下条件 :(1)伤后 4h内入院 ;(2 )入院后均行头颅 CT检查 ;(3)无合并其他脏器损伤 ;(4 )伤前无高血压或心脏…     

人脑钠素基因工程菌的发酵条件及产生物纯化研究

为进一步提高工程菌的下游纯化效率，本文利用高效表达质粒载本将多拷贝脑钠素基因转入宿主菌Ｅ．ｃｏｌｉＭ５２１９，摸索最佳发酵条件，热诱导获较高表达；通过超声裂解收获目的蛋白包涵体，采用制备性电泳成功获得纯度大于９５％的５ＢＮＰ融合蛋白；经ＢＮＰ／ＳＫＡＴＯＬＥ裂解成单后测得有舒张血管活性。该纯化路线为后续工作提供了线索。