丙氨瑞林对人子宫内膜癌细胞株HEC-1A作用的研究

目的 :研究丙氨瑞林对子宫内膜癌直接作用的可能性。方法 :以不同浓度丙氨瑞林 (浓度为 10 - 9～ 10 - 5 mol/ L)与人子宫内膜癌细胞株 HEC-1A(中分化子宫内膜腺癌 )一起进行培养 72 h,观察各浓度下癌细胞的抑制情况。结果 :当丙氨瑞林浓度为10 - 9mol/ L时 ,癌细胞生长即受到抑制 ,抑制率为 3 7.0± 2 6.2 %;随着丙氨瑞林浓度的增大 ,抑制率渐高。结论 :丙氨瑞林在体外对HEC-1A细胞可能有直接抑制作用 ,且呈剂量依赖关系。     

丙氨瑞林对子宫内膜癌裸鼠移植瘤的生长及FHIT表达的影响

目的观察醋酸丙氨瑞林对子宫内膜癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用及可能的作用机制。方法将HEC-1-B细胞注入裸鼠左前肢近腋窝处皮下,选24只雌性荷瘤裸鼠随机分为4组,即低剂量组（18肛g／kg）、中剂量组（36μg／kg）、高剂量组（72μg／kg）和空白对照组（0μg／kg）,采取肌肉注射方式给药4周。将瘤体完整取出,测量体积、绘制生长曲线、计算抑瘤率,并用免疫组织化学法检测瘤组织中FHIT蛋白的表达。结果①随着醋酸丙氨瑞林浓度由低到高,癌细胞受抑制渐趋明显,低、中、高剂量组抑瘤率分别为17．0％、24．1％、42．1％,且与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。②免疫组织化学结果显示,各干预组的FHIT蛋白表达水平较对照组明显升高,且组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论醋酸丙氨瑞林对子宫内膜癌皮下移植瘤生长有抑制作用,且呈剂量依赖关系．其机制可能与上调FHIT蛋白表达有关。     

血管紧张素Ⅱ调控人脐静脉内皮细胞表达血凝素样氧化低密度脂蛋白受体

目的：研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人脐静脉内皮细胞表达血凝素样氧化低密度脂蛋白受体（LOX－1）基因转录和蛋白表达的影响。方法：将不同浓AngⅡ(10^-5mol/L－10^－5mol/L）与人脐静脉内皮细胞（HUVECs）共孵育24h，将10^-6mol/LAngⅡ与HUVECs作用不同时间（0、3、6、12、24、36、48h）后，用细胞酶联免疫法和半定量RT－PCR分别检测LOX－1蛋白和mRNA表达。结果：10^-5mol/L－－10^-10mol/LAngⅡ作用24h，使内皮细胞LOX－1蛋白一达的OD值与对照组相比显著增加（P＜0．001），其中AngⅡ浓度为10^-5mol/L－10^-9mol/L时，LOX－1表达增加呈浓度依赖性。10^-10mol/LAngⅡ的作用结果与10^-9mol/LAngⅡ的作用结果差异无显著性；10^-5mol/L－10^-8mol/LAngⅡ可以使内皮细胞LOX－1mRNA的表达增加，分别为对照组的4．43、4．25、2．71和1．84倍。10^-9mol/L,10^-10mol/AngⅡ作用24h,LOX－1mRNA表达与对照组相比无显著变化（P＞0．05）。用 10^-6mol/LAngⅡ作用HUVECs不同时间，发现共孵育3h后，内皮细胞LOX－1mRNA的表达和LOX－1蛋白表达的OD值与对照组相比都有显著增加（P＜0．001），随着时间延长，LOX－1mRNA的表达至24h左右达最高峰；LOX－1蛋白表达至24－36h达到最高峰之后表达量逐渐减低，结论：AngⅡ能明显增加强HUVECs表达LOX－1，并随着AngⅡ浓度的增加和作用时间的延长，LOX－1表达增加。     

维甲酸对hLECs生长特性的影响

目的探讨维甲酸对传代培养的人晶状体上皮细胞生长特性的影响。方法选取第2～5代hLECs，利用倒置显微镜观察RA对细胞形态的影响；MTT法观察RA对细胞增殖的影响，计算RA对细胞增殖的抑制率；间接免疫荧光法观察RA对整合素β1表达阳性率和波形蛋白形态的影响。结果倒置显微镜下，10^-8～10^-6mol／L组上皮细胞增多，成纤维细胞减少，10^-5mol／L组2种细胞都减少；MTT法显示，10^-7～10^-5mol／L组细胞增殖受抑制，抑制作用呈剂量、时间依赖性（F检验，P〈0．05），抑制率在10．8％～32．0％。10^-6～10^-5mol／L组整合素β1表达明显增高（Х^2检验，P〈0．05），10^-7～10^-5mol/L组波形蛋白在细胞内铺展较均匀。结论RA具有抑制传代细胞增殖的作用，但表现为抑制成纤维细胞和促进上皮细胞二者作用的总和，只是抑制作用远远大于促进作用。     

促性腺激素释放激素激动剂对大鼠睾丸间质细胞annexin5和3β-HSD的表达影响

目的：探讨阿拉瑞林（GnRHa）对大鼠睾丸间质细胞中膜联蛋白V（annexin5）和3β-羟类固醇脱氢酶（3β-HSD）的表达的影响。方法：建立体外分离、纯化和培养大鼠睾丸间质细胞原代培养技术,采用3β-HSD免疫细胞化学方法对间质细胞进行鉴定,同时用不同终浓度的GnRHa（分别为1×10^,1×10^-6,1×10^-1moL／L）作用于间质细胞24h后,通过Western Blot检测间质细胞中annexig 5和3β-HSD的表达变化情况．结果：间质细胞经GnRHa处理后,Western Blot结果显示,与对照组相比,当GnRHa终浓度为1×10^-5 moL／L时,anenxin5的表达量显著升高了69．2％（P〈0．01）,3B—HSD的表达量也升高了25．2％（P〈0．05）;当GnRHa的终浓度为1×10^-6mol／L和1×10mol／L时,anenxin5的表达量分别升高了61．5％（P〈0．05）和16．64％（P〉0．05）,3β-HSD的表达量则无显著性变化,分别升高了7．7％（P〉0．05）和2．22％（P〉0．05）．结论：GnRHa在原代培养的睾丸问质细胞中,对annexin5,3β-HSD的表达具有调节作用。     

β2-AR过表达对大鼠心肌细胞存活率的影响及机制

目的观察β2肾上腺素能受体（β2-AR）过表达对成年大鼠心肌细胞在不同浓度的异丙肾上腺素（isoproter-enol,ISO）刺激下的保护作用及机制。方法分离培养成年大鼠心肌细胞,随机分为3组：正常组、转染EGFP基因的腺病毒组和转染人β2-AR．EGFP基因的腺病毒组。心肌细胞培养48h后,用异丙肾上腺素在不同剂量（10～mol／L,10^-5mol／L,10^-4mol／L）下刺激2h,观察细胞在刺激前后的存活率的变化。采用Westernblot检测心肌细胞β2-AR的表达。结果Westernblot结果显示转染β2-AR-EGFP基因的腺病毒组β2-AR蛋白的表达量明显高于其余两组（P〈0．05）,在10^-6mol／L,10^-5mol／L浓度的ISO刺激下3组细胞的存活率校正值无显著性差异,在高浓度（10^-4mol／L）ISO刺激下β2-AR过表达组细胞存活率校正值明显高于其余两组（P〈0．05）。结论β2-AR过表达对高浓度（1014mol／L）ISO刺激的成年大鼠心肌细胞的死亡有保护作用,其可能的机制是通过β2-AR与Gi蛋白的耦联作用。     

柔红霉素诱导Jurkat细胞凋亡、抑制增殖与bcl-2、PCNA表达变化的关系

目的探讨柔红霉素（DNR）在体外诱导Jurkat细胞凋亡的情况并探讨其与细胞表达凋亡相关蛋白改变的关系。方法Annexin V／PI双标流式细胞仪（FCM）检测DNR诱导Jurkat细胞的凋亡作用,用免疫细胞化学观察相关蛋白表达水平的变化。结果当DNR为0．1～2．0μmol／L浓度范围时,作用一定时间后Jurkat细胞发生的凋亡率随药物浓度的增加与作用时间的延长而升高。但药物浓度超过2．0μmol／L,或2．0μmol／L作用48h后Jurkat细胞出现凋亡率下降,细胞大部分死亡。0．5μmol／L DNR作用于Jurkat细胞24h后,细胞中bcl-2、PCNA蛋白表达水平降低。结论一定浓度的DNR在体外可诱导Jurkat细胞凋亡,药物浓度达5．0μmol／L时细胞大部分死亡。本实验条件下DNR体外诱导Jurkat发生凋亡的机制可能是通过抑制bcl-2、PCNA蛋白的表达实现。     

大豆苷原对成骨细胞MC3T3-E1甾体激素受体辅激活因子1表达的调节作用及其机制

目的：研究大豆苷原对成骨细胞MC3T3－E1甾体激素受体辅激活因子1（steroid receptor coactivator-1,SRC-1）和核受体辅抑制因子（nuclear receptor corepressor,NcoR）表达的调节作用及其机制。方法：体外培养MC3T3-E1细胞于含29／6胎牛血清（fetal bovine serum,FBS）的α最低必须培养基（α—minimal essential medium,α—MEM）中,给予不同浓度大豆苷原或10^-6 mol／L的雌二醇作用3d后收获细胞,采用蛋白质印迹法观察SRC-1和NcoR蛋白的表达水平。分别应用雌激素受体（estrogen receptor,ER）拮抗剂ICI182780（Faslodex,ICI,10^-7 mol／L）和雌激素受体α（estrogen receptor α,ERα）特异性拮抗剂（methyl—piperidino—pyrazole,MPP,10^-6 mol／L）干预,观察大豆苷原对细胞SRC-1和NcoR蛋白表达水平的影响。结果：大豆苷原可上调MC3T3-E1细胞SRC-1的表达,10^-7mol／L和10smol／L大豆苷原组SRC-1的蛋白水平分别增加至对照组的2．5倍（P〈0．05）和2倍（P〈0．05）。各剂量组NcoR表达水平与对照组比较差异无统计学意义。雌二醇组SRC-1水平与对照组比较未见明显变化,而其NcoR表达水平较对照组下调35％（P〈0．05）。ICI182780可拮抗大豆苷原对SRC-1的上调作用。在ICI182780作用下,各剂量组SRC-1蛋白水平与对照组比较差异无统计学意义;MPP干预下,10^-7mol／L和10^-5 mol／L大豆苷原组SRC-1的蛋白水平分别为对照组的1．8倍（P〈0．05）和2．4倍（P〈0．05）。结论：大豆苷原可增加成骨细胞SRC-1的蛋白表达水平,提高细胞SRC-1／NcoR比值。ER8参与了大豆苷原对SRC-1的调节过程。成骨细胞内SRC-1蛋白的增加和SRC-1／NcoR比值的提高是大豆苷原促进成骨细胞分化的机制之一。     

P物质对培养脊髓星形胶质细胞谷氨酸代谢的影响

目的 观察P物质（SP）对脊髓星形胶质细胞兴奋性递质谷氨酸代谢的影响。方法 采用体外培养脊髓星形胶质细胞,施加SP刺激．分别采用^3H—Glutamate掺入和RT—PCR观察脊髓星形胶质细胞对谷氨酸摄取和转运体GLT-1表达的变化。结果 脊髓星形胶质细胞在SP的刺激下^,3H—Glu的摄取逐渐下降,10^-9mol／L与正常对照组差异有统计学意义（P〈0．05）．10^-8～10^-6mol／L组与正常对照组差异有统计学意义（P〈0．01）;脊髓星形胶质细胞GLT-1的表达在10^9-10^-8mol／L SP作用组和正常组差异无统计学意义（P〉0．05）,10^-2～10^-6 mol／L SP刺激组GLT-1表达值低于正常对照（P〈0．05、P〈0．01）。结论 高浓度的SP作用下脊髓星形胶质细胞GLT-1表达和谷氨酸掺入下降,表明周围慢性疼痛可能通过致病递质SP使脊髓星形胶质细胞对谷氨酸的摄入减少,神经间隙谷氨酸堆积而导致脊髓中枢继发的神经损害。     

他莫西芬对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因表达的影响

目的探讨他莫西芬在体外对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因表达的影响。方法不同浓度（1×10^-9、1×10^-2。和1×10^5mol／L）的TAM在体外作用于胶质瘤C6细胞，逆转录聚合酶链式反应半定量法检测PTTGmRNA的表达，Western Blot检测其蛋白表达情况。结果RT-PCR显示PTTG mRNA在各组的表达分别为（1．872±0.135）、（1．363±0.138）、（0．973±0．121）、（0.667-4-0．080），各组间差异有统计学意义，均P〈0．01；Western Blot显示PTTG蛋白在各组的表达分别为（1．961±0．140）、（1．525±0．120）、（0．977±0．116）、（0．6874±0.117），各组差异有统计学意义，均P〈0.01。结论TAM可抑制PTTGmRNA及其蛋白的表达，且这种效应随剂量的增加而增强。     

二烯丙基二硫化物对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的研究二烯丙基二硫化物(DADS)对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测DADS对HEC-1-B细胞的增殖抑制作用,采用AnnexinV/PI双标记流式细胞术检测DADS对HEC-1-B细胞的凋亡诱导作用;Hoechst-33528染色,观察细胞凋亡形态。结果用100、200、400μmol/L DADS处理HEC-1-B细胞24、48 h,在100μmol/L剂量即可抑制细胞的增殖,随着剂量和时间的增加,DADS对细胞的抑制作用明显增强。DADS对HEC-1-B细胞的增殖抑制存在时间-剂量依赖关系。用200μmol/LDADS处理48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率达40.91%。Hoechst-33528染色可见细胞出现明显的凋亡形态学改变。结论 DADS对HEC-1-B细胞具有增殖抑制并诱导凋亡的作用,提示DADS对子宫内膜癌的治疗可能具有重要价值。     

紫杉醇诱导人子宫内膜癌细胞增殖凋亡的实验研究

目的:探讨紫杉醇对体外培养的人子宫内膜癌细胞(HEC-1-B)凋亡的诱导作用. 方法:体外培养的HEC-1-B细胞,用终浓度2, 4, 8,16,20 nmol/L的紫杉醇作用48 h后,荧光染色检测细胞凋亡的发生情况、caspase-3及其抑制剂紫杉醇在诱导细胞凋亡中的作用. 结果:共聚焦检测活细胞内钙离子的动态变化与Caspase-3半胱氨酸蛋白酶中细胞凋亡,使HEC-1-B细胞在活化过程中起了关键性的因素. 结论:HEC-1-B对紫杉醇具有药物敏感性,紫杉醇对HEC-1-B细胞的杀伤作用,是通过诱导细胞凋亡途径实现的.     

Phosphatase and tensin homolog gene inhibits the effect induced by gonadotropin-releasing hormone subtypes in human endometrial carcinoma cells

Background Type I gonadotropin-releasing hormone （GnRH-l） agonists have been applied for the treatment of steroid-dependent tumors such as breast carcinoma, ovarian cancer and prostatic carcinoma. But the mechanism has not been clarified yet. There are few reports about the treatment of endometrial carcinoma using GnRH-l agonists. Type II GnRH （GnRH-ll） is a new subtype of GnRH. Our aim was to investigate the effects of GnRH-l agonists and GnRH-ll on estrogen receptor-negative human endometrial carcinoma cells and the effect from phosphatase and tensin homolog gene （PTEN） to them.Methods A lentiviral vector-mediated RNAi method was used to establish a PTEN-negative HEC-1A cell clone （HEC-1A-ND）. MTT and flow cytometry were used to detect the cell proliferation, cell cycle and apoptosis of HEC-1A, HEC-1A-NC and HEC-1A-ND cells after treatment with GnRH-l agonist Triptorelin （10-11 mol/L to 10-5 mol/L） or GnRH-ll （10-11 mol/L to 10-5 mol/L）. Western blotting was used to detect AKT and ERK1/2 activation after treatment with different concentrations of Triptorelin or GnRH-ll for 30 minutes in the above mentioned three kinds of cells. Results Triptorelin and GnRH-ll induced apoptosis and inhibited proliferation of HEC-1 A, HEC-1A-ND and HEC-1A-NC in a dose-dependent manner. This effect was augmented in HEC-1 A-ND cells in which PTEN gene was knocked-down. Furthermore, Triptorelin and GnRH-ll inhibited the AKT and ERK activity in HEC-1 A-ND cells.Conclusions Triptorelin and GnRH-ll can promote apoptosis rate and inhibit cell proliferation of estrogen receptor-negative endometrial carcinoma cells in a dose-dependent manner. PTEN gene can inhibit the effects of Triptorelin or GnRH-ll on human endometrial carcinoma cells.     

miR-34c对II型子宫内膜癌HEC-1-B细胞生长和凋亡的影响

目的 ：研究miR-34c对Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞的生长及凋亡的影响。方法：用hsa-miR-34c mimics转染HEC-1-B细胞。流式细胞技术测定细胞转染率,实时荧光定量PCR验证转染后miR-34c的表达。CCK-8检测细胞增殖能力的改变。细胞克隆形成实验观察miR-34c对细胞生长的长期抑制。流式细胞技术测细胞凋亡。结果：细胞转染率为81.16%。相对于对照组,转染后实验组miR-34c表达明显增加,细胞增殖、克隆形成能力减弱,凋亡增加（P＜0.05）。结论：miR-34c能明显抑制Ⅱ型子宫内膜癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,是Ⅱ型子宫内膜癌的潜在抑癌基因。     

miR-34c对Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞生长和凋亡的影响

目的：研究miR-34c对Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞的生长及凋亡的影响。方法：用hsa-miR-34cmimics转染HEC-1-B细胞。流式细胞技术测定细胞转染率,实时荧光定量PCR验证转染后miR-34c的表达。CCK-8检测细胞增殖能力的改变。细胞克隆形成实验观察miR-34c对细胞生长的长期抑制。流式细胞技术测细胞凋亡。结果：细胞转染率为81．16％。相对于对照组,转染后实验组miR-34c表达明显增加,细胞增殖、克隆形成能力减弱,凋亡增加（P〈0．05）。结论：miR-34c能明显抑制Ⅱ型子宫内膜癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,是Ⅱ型子宫内膜癌的潜在抑癌基因。     

小檗碱体外抗子宫内膜癌HEC-1A细胞的作用研究

目的研究小檗碱体外对非激素依赖型人子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖、迁移、周期、凋亡的影响。方法 MTT法检测小檗碱对人子宫内膜癌HEC-1A[中分化腺癌,雌激素受体(ER)弱阳性,孕激素受体(PR)阴性]细胞株的抑制作用;倒置显微镜观察细胞形态变化;将实验组分成50、25、12.5 mg/L高、中、低剂量组。Transwell法测定细胞体外迁移能力,流式细胞仪观察细胞周期分布,Annexin V-FITC/PI双染检测HEC-1A细胞凋亡。结果小檗碱可显著抑制HEC-1A细胞生长,在100、50、25、12.5、6.25 mg/L浓度范围内呈剂量依赖性(P0.05)。小檗碱能明显改变细胞形态,小檗碱作用于子宫内膜癌HEC-1A细胞后,倒置显微镜下可见部分细胞体积改变,细胞内出现空泡,结构破坏,裂解成碎片,贴壁细胞减少,并散在排列。抑制子宫内膜癌HEC-1A细胞体外迁移的能力,高剂量组效果更佳,迁移细胞数明显减少。小檗碱低剂量组可以将HEC-1A细胞阻滞于G0/G1期。小檗碱作用24 h能提高HEC-1A细胞总凋亡率、早期凋亡率及晚期凋亡率,早期凋亡率更明显。结论小檗碱能够抑制非激素依赖型子宫内膜癌HEC-1A细胞株的增殖、迁移,并且促进HEC-1A细胞凋亡,低剂量小檗碱能将细胞阻滞在G0/G1期。     

miR-449b通过E2F3-p53途径抑制子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B的生长

目的 探讨miR-449b对子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B增殖和凋亡的影响及其作用的分子途径。 方法 脂质体lipofectamine 2000包被miR-449b并转染入HEC-1-B细胞,实时荧光定量PCR检测转染前后细胞内miR-449b的表达水平,CCK-8试验检测转染前后细胞活性,流式细胞仪来检测转染前后细胞凋亡情况。细胞克隆形成实验观察转染前后细胞克隆形成能力。Western blot方法检查转染前后细胞内E2F3蛋白和p53的表达情况。 结果 转染后实验组miR-449b表达量较NC组增加,细胞增殖能力和克隆能力减弱,而细胞凋亡增加(P<0.05)。miR-449b使E2F3表达下调,p53表达上调(P<0.05)。 结论 miR-449b通过E2F3-p53途径抑制HEC-1-B细胞增殖并促进凋亡,可能作为治疗子宫内膜腺癌的新分子靶标。     

塞来昔布对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B生长及其VEGF表达的影响

目的 研究塞来昔布对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B的生长及其血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 应用不同浓度的塞来昔布作用于HEC-1-B细胞,MTF法检测塞来昔布作用于HEC-1-B细胞24、48、72h后,对HEC-1-B细胞增殖的影响.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析其对HEC-1-B细胞VEGF mRNA表达的影响,同时用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测HEC-1-B细胞上清中VEGF蛋白表达量.结果 塞来昔布对HEC-1-B细胞的生长有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;与对照组相比,塞来昔布能降低HEC-1-B细胞VEGF mRNA及蛋白的表达.结论 塞来昔布能抑制HEC-1-B细胞的生长及VEGF的分泌.     

太白楤木皂苷下调sirtuin 1表达对HEC-1B细胞侵袭和迁移的影响

目的 太白楤木皂苷(SAT)具有明显的抗肿瘤功能,本研究通过探究SAT对子宫内膜癌细胞HEC-1B增殖、迁移、侵袭的影响,以期为子宫内膜癌的治疗提供理论依据。 方法 实验分为对照组(未加药物)、阳性对照组(30μmol/L环磷酰胺)、SAT 10μmol/L组、SAT 20μmol/L组、SAT 30μmol/L组。以不同浓度SAT及环磷酰胺处理HEC-1B细胞后,采用CCK8法检测HEC-1B细胞增殖情况,平板细胞克隆形成实验检测菌落形成;Transwell小室试验检测SAT对HEC-1B细胞迁移、侵袭能力的影响,实时荧光定量(qRT-PCR)法检测去沉默调控蛋白-1(sirtuin 1) mRNA相对表达量,蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测sirtuin 1蛋白、金属基质蛋白酶-2(MMP-2)、金属基质蛋白酶-9(MMP-9)表达。 结果 与对照组相比,阳性对照组、SAT处理组细胞增殖、侵袭、迁移数量显著降低(均P<0.05),且呈剂量依赖;与阳性对照组相比,SAT 20μmol/L组、30μmol/L组细胞增殖、侵袭、迁移数量显著降低(均P<0.05);与对照组相比,阳性对照组、SAT处理组MMP-2、MMP-9、sirtuin 1 mRNA、sirtuin 1蛋白水平显著降低(均P<0.05),且随SAT浓度升高而下降;与阳性对照组相比,SAT 20μmol/L组、SAT 30μmol/L组MMP-2、MMP-9、sirtuin 1 mRNA、sirtuin 1蛋白水平显著降低(均P<0.05)。 结论 太白楤木皂苷可抑制子宫内膜癌细胞HEC-1B细胞迁移、侵袭,可能与下调sirtuin 1表达有关,能为子宫内膜癌的治疗提供新可能。