人心肌肌球蛋白轻链的提取、纯化和电泳分析

用一种简便有效的方法，从１３０ｇ成人心室肌中先提职心肌肌球蛋白纯品３１８ｍｇ，再从中进一步分离和纯化得到肌球蛋白轻链１８ｍｇ。纯化肌球蛋白轻链的核酸含量＜０．０１％，基本不含有肌动蛋白、原肌球蛋白、肌钙蛋白及其它蛋白。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示，人肌球蛋白轻链１和轻链２的分子量为２４ｋＤ和２０ｋＤ。纯化猪心肌球蛋白的Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性为０．４６μｍｏｌＰｉ／ｍｇ／ｍｉｎ，其分离后的轻链亚基则无此活性。本文对人和猪的心室肌肌球蛋白轻链的电泳行为进行了分析。     

抗肌球蛋白重链和轻链抗体在扩张型心肌病与冠心病鉴别诊断中的价值

目的：旨在探讨抗肌球蛋白重链和轻链抗体，在扩张型心肌病（ＤＣＭ）和冠心病中鉴别诊断的价值。方法；对２１例ＤＣＭ患者，１４例冠心病患者及正常健康组１８例，进行临床免疫学检测，应用ＥＬＩＳＡ法、免疫转印法对检测数值进行分析。结果显示：ＥＬＩＳＡ法ＤＣＭ患者阳性率４３．９％，冠心病组２８．６％，正常对照组均为阴性。免疫转印法２１例的ＤＣＭ患者阳性率４３．９％，冠心组２８．６％，正常对照组均为阴性。免疫转印法２１例的ＤＣＭ患者抗肌球蛋白重链抗体（２００ＫＤ）１０例阳性，阳性率４７．６％，冠心组抗肌球蛋白轻链抗体（２７．５ＫＤ）阳性４例，阳性率２８．６％，ＰＢＳ替代试验均为阴性。结论：抗心肌肌球蛋白重链和轻链的抗体检测有助于ＤＣＭ和冠心病的鉴别诊断     

抗人载脂蛋白E多抗的制备与纯化

利用纯化的人载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）作为抗原，常规免疫纯系大耳白家兔，获得高效价、高特异性的抗血清，抗体滴度经ＥＬＩＳＡ法检测达１：１２８００倍稀释度，抗体特异性检验证明抗体只与ａｐｏＥ反应。抗血清经ＰｒｏｔｅｉｎＡ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ亲和层析纯化，分离为碱性洗脱峰Ⅰ和酸性洗脱峰Ⅱ，峰Ⅱ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测在分子量为２７ｋｄ和５４ｋｄ处呈现两条带，分别相当于抗体的重链和轻链的分子量，证明峰Ⅱ为纯化的抗体，这就为建立测定人血清ａｐｏＥ浓度的免疫学方法奠定了基础。     

心肌肌球蛋白及其重链的提纯与鉴定

心肌肌球蛋白及其重链的提纯与鉴定邹立华，陈灏珠，杨一峰，顾宇参，钱忠豪，许峥，龚祖埙（上海医科大学中山医院２０００３２；中国科学院上海生物化学研究所２０００３２）关键词心肌肌球蛋白；提纯；鉴定心肌肌球蛋白是心肌细胞的主要结构蛋白，由两条重链及两对轻链...     

兔骨骼肌肌球蛋白轻链的分离纯化

目的 从兔骨骼肌中提取肌球蛋白轻链,为下一步研究肌肉收缩原理提供可磷酸化的底物。方法 用离心、透析、柱层析、ＳＤＳ聚丙烯配角安凝胶电流（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和电泳轩移等方法纯化兔骨骼肌肌球蛋白轻链。结果 提取纯化得到较纯的肌球蛋白,进一眇是到轻 混合液和各种轻链纯品,经紫外吸收检测及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证实其分子量分别为２５０００（ＭＬＣ１）、１９０００（ＭＬＣ２）和１６５００（ＭＬＣ３）,均与文献报道     

链霉亲和素的鉴定

作者在前阶段链霉菌的培养及其链霉亲和素分离纯化的基础上，对ＳＡ的生物学特性和性质作了测定。测得ＳＡ的分子量为７２ ８８１，等电点为６．０；经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳出现２条带结合生物带的活性为１８μｇ／ｍｇ。从１升链霉菌培养液中可提取纯ＳＡ２３．２ｍｇ。     

链霉亲和素的鉴定

作者在前阶段链霉菌的培养及其链霉亲和素（ＳＡ）分离纯化的基础上，对ＳＡ的生物学特性和理化性质作了测症。测得ＳＡ的分子量为７２８８１，等电点为６．０；经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳出现２条带，结合生物素的活性为１８μｇ／ｍｇ。从１升链霉菌培养液中可提取纯ＳＡ２３．２ｍｇ。     

急性心肌损害对心肌肌球蛋白磷酸化系统的影响

为探讨急性心肌损害对心肌肌球蛋白磷酸化系统的影响，选择对于心肌有特异性损害作用的异丙基肾上腺素（ＩＳＰ），造成大鼠实验性心肌损害的动物模型，动态观察心肌损害时肌球蛋白磷酸化系统的变化规律。研究结果表明，低剂量ＩＳＰ导致心肌匀浆中肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）和肌动球蛋白ＡＴＰ酶的活性下降，但心肌组织病理切片基本正常；高剂量注射ＩＳＰ，ＭＬＣＫ和ＡＴＰ酶活性显著下降，与正常对照组和低剂量组相比，差异十分显著（Ｐ＜０．０１）。在病理形态学上大鼠心肌组织有多处较大的坏死灶。提示，在未发生明显的病理性变化前，心肌细胞内就已发生了一系列的代谢紊乱，如酶活性下降，心肌细胞的收缩功能发生改变；当心肌组织出现病理形态学改变时，细胞内酶活性显著下降，表明已由可逆性损害发展到不可逆的心肌坏死。     

人大颗粒淋巴细胞抗生素肽的部分纯化

为探讨人大颗粒淋巴细胞抗菌分子的抗菌活性，采用制备性酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳对人大颗粒淋巴细胞胞浆颗粒酸溶性提取物的抗菌组分ＨＬＰ１、ＨＬＰ２、ＨＬＰ３进行分离纯化。结果：ＴｒｉｃｉｎｅＳＤＳＰＡＧＥ分析显示，ＨＬＰ１、ＨＬＰ２均为多肽混合物，其分子量范围分别是５６～１３ｋｄ和５６～８８ｋｄ；ＨＬＰ３为一７ｋｄ的单一多肽。琼脂糖弥散法和电泳凝胶琼脂糖弥散法抗菌试验显示，ＨＬＰ１、ＨＬＰ２、ＨＬＰ３对致病性大肠杆菌ＭＬ３５Ｐ氨苄青霉素耐药株、金葡球菌ＡＴＣＣ２５９２３株、绿脓杆菌ＡＴＣＣ２７８５３株均有很强的杀菌作用。提示人大颗粒淋巴细胞存在的小分子抗菌多肽可能在人天然免疫的抗感染防御机制中发挥了重要作用     

溶栓药APSAC的制备和鉴定

重组链激酶（ｒ－ＳＫ）由工程菌提取液经ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００柱纯化，比活性达１０５ＩＵ／ｍｇ，十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）显示分子量为７８．０２４７×１０－２４ｋｇ的一条带。人新鲜血浆经Ｌｙｓｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５凝胶过滤制备纤溶酶原（ｐｌｇ），比活性达２３．７ＩＵ／ｍｇ，活性回收率为１３．６％，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示分子量为１４７．７４８９×１０－２４ｋｇ的一条带。对－茴香酸－对－脒基ｒ－ＳＫ和ｐｌｇ的混合物经苯酯盐酸盐（ＡＰＡＮ）修饰后制备茴香酰纤溶酶原链激酶激活剂复合物（ＡＰＳＡＣ），产物经Ｌ－ｌｙｓｉｎｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示分子量为７８．０２４７×１０－２４ｋｇ和１４７．７４８９×１０－２４ｋｇ两条带，其拟一级水解速率常数为１．２６×１０－４ｓｅｃ－１。体外溶栓实验证明其有溶栓活性。     

人心肌肌凝蛋白轻链的提纯及其抗体的制备

从人心肌中提纯的肌凝蛋白轻链(myosin-light chain,M-LC),SDS聚丙烯酰胺凝胶电脉呈三条蛋白带。经DEAE-纤维素柱层析出现三个峰。免疫白兔产生的抗血清,琼脂双扩散鉴定有一条沉淀线;亲和层析,用盐酸胍解离下一个抗体蛋白峰。     

人心肌肌凝蛋白轻链的分离提纯与鉴定研究

参考采用Schoβler方法并加以改进,分别应用等电点沉淀法、快速蛋白质液相层析(FPLC)及SDS聚丙烯酰胺凝胶制备电泳三种方法分离提纯肌凝蛋白轻链(CMLC),其各具有不同的优缺点,并对CMLC做了鉴定。同时证明在-20℃条件下,冻存时间较长或蛋白浓度较低的CMLC容易降解。     

18例子宫内膜间质肉瘤的组织学和兔疫组织化学研究

子官内膜间质肉瘤(endometrial stromal sarcoma ESS)是发生于女性生殖系统的一种罕见的恶性肿瘤。本文用免疫组织化学方法在石蜡切片上检测了18例ESS瘤细胞vim-entin(波形蛋白)、myosin(肌球蛋白)和EMA(上皮膜抗原)。发现瘤细胞内vimentin阳性,myosin和EMA阴性。这一结果支持了ESS起源于宫内膜间质细胞的观点。对ESS的诊断和鉴别诊断亦进行了讨论     

大鼠脑损伤后星形胶质细胞结蛋白和肌球蛋白表达的研究

对大鼠脑基底节穿刺损伤后星形胶质细胞结蛋白和肌球蛋白的表达进行了动态观察。结果显示结蛋白的表达显著增强，７ｄ时达高峰并维持这一高水平至损伤后３０ｄ，损伤后早期（２～４ｄ）其反应限于伤口周围，随后波及整个同侧半球，但强度随与伤口距离增加而逐渐减弱。肌球蛋白的阳性细胞主要见于伤口周围，部分出现在皮质分子层。结果表明结蛋白表达增强与反应性胶质化密切相关，而肌球蛋白的表达可能与增生星形胶质细胞的迁移、收缩有关。文中还对脑损伤后星形胶质细胞骨架蛋白表达改变的意义进行了讨论。     

分泌抗心脏肌凝蛋白及其轻链单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及初步鉴定

心脏肌凝蛋白(Cardiac myosin,CM)及其轻链(CM—LC)是心肌特有的收缩蛋白质,其化学结构和免疫学性质均与其它组织来源者不同。当急性心肌梗塞(AMI)造成心肌细胞缺血坏死时,血清CM—LC水平升高。故可用于临床诊断AMI。这一诊断指标的特异性、敏感性、与梗塞灶大小     

抗人心肌肌凝蛋白轻链Ⅰ单克隆抗体的制备和鉴定

以人心肌肌凝蛋白轻链I免疫Balb/c小鼠,取其脾淋巴细胞与NS-1细胞融合,经过筛选、克隆化和再克隆已获得3-D_3、2-D_9、1-E_(10)和2-E_(10)等4个分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经免疫酶标和放免方法测定抗体工作滴度为1:1万。流动式荧光密度计检测NS-1、小鼠脾和杂交瘤细胞DNA的含量,结果表明杂交瘤细胞的DNA含量相当于NS-1和小鼠脾细胞DNA含量之和。杂文瘤细胞传代半年以上稳定地分泌特异性的单克隆抗体。用两个单抗进行了抗原双决定簇的放免測定,并制备了高效价的小鼠腹水。     

心肌急性损伤肌球蛋白轻链激酶酶促反应动力学研究

以内毒素休克狗作为急性心肌损害的动物模型，从心肌中提纯肌球蛋白轻链（ＭＬＣ）和肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ），根据酶动力学分析法研究急性损害对ＭＬＣＫ活性的影响。结果发现在此种状态下狗心肌ＭＬＣＫ活性显著降低，推测ＭＬＣＫ活性降低导致可磷酸化轻链（ＰＬＣ）磷酸化的磷酸酶相对占优势，磷酸化型Ｐ－ＬＣ向去磷酸化型转变。     

家兔半膜肌各亚部肌球蛋白重链表达差异的实验研究

目的利用家兔半膜肌各亚部肌纤维类型的分布特征,观察骨骼肌两型肌纤维肌球蛋白重链（MHC）的构成特点,为进一步探讨两型肌纤维的区别以及两型肌纤维转化机制奠定基础。方法取成年家兔半膜肌,通过改良肌球蛋白ATP酶染色法观察半膜肌四个亚部肌纤维类型的构成,应用RT-PCR方法检测各亚部4种MHC亚型mRNA的表达情况。结果固有半膜肌只含有慢肌（Ⅰ型）肌纤维,表达MHCⅠ型和少量MHCⅡa型基因。副半膜肌腹侧亚部除含有少量Ⅰ型肌纤维外,主要含有快肌（Ⅱ型）肌纤维,表达少量MHCⅠ型基因以及MHCⅡa、MHCⅡb和MHCⅡx型基因等四种类型;而副半膜肌背侧和外侧亚部只含有Ⅱ型肌纤维,仅表达MHCⅡa、MHCⅡb和MHCⅡx型基因。结论家兔半膜肌各亚部肌纤维类型几乎均呈单一类型分布。固有半膜肌亚部主要表达MHCⅠ型基因;副半膜肌各亚部主要表达MHCⅡa、MHCⅡb和MHCⅡx型基因,以MHCⅡx型基因为主,各亚部之间存在细微差别。     

慢性电刺激对成肌分化的C2C12细胞肌型转换的影响

目的研究钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)在低频复合生理频率慢性电刺激(chronic electrical stimula-tion with lower physiological frequency,CESLPF)对骨骼肌细胞肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)亚型表达的影响。方法以体外2%马血清诱导小鼠成肌母细胞C2C12成肌分化为模型。实验分3组:对照组、CsA组和KN93组。对照组为正常分化的细胞;CsA组和KN93组在细胞诱导分化3 d后,分别用CaN抑制剂环孢菌素A(CsA,8μmol)、Ca2+/钙调蛋白依赖的蛋白激酶(CaMK)抑制剂KN93(6μmol)单一或联合CESLPF(10+40 Hz,1.5 h/d,共2 d)处理。通过RT-PCR、Western blot检测观察成肌分化过程中肌球蛋白重链亚型的表达水平及其转换情况,采用比色法检测CaN的活性。结果在成功构建的体外成肌分化模型上发现,CsA和KN93能够抑制C2C12细胞MHCⅠ的mRNA及蛋白的表达。与分化对照组MHCⅠmRNA相对表达量(0.79±0.04)相比,CsA组(0.62±0.03)和KN93组(0.69±0.05)能够抑制C2C12细胞MHC I型纤维的表达(与对照组比P<0.05);对照组、CsA和KN93处理组MHC I蛋白相对水平分别是(0.91±0.05)、(0.36±0.01)和(0.66±0.02)。对照组MHCⅡb相对表达量为(0.53±0.01),CsA(0.63±0.02)和KN93(0.75±0.03)促进MHCⅡb型纤维的表达(与对照组比较,P<0.05);CESLPF能够逆转上述改变(与对照组比较,P>0.05)。CsA能够抑制CaN的活性表达;CESLPF能够显著提高CaN活性(P<0.05),但仍显著低于正常水平(P<0.05)。结论 CaN和CaMK是骨骼肌细胞MHCⅡ型向MHCⅠ型转变的重要调控酶,CESLPF可能是经CaN通路和非CaN通路联合作用促进肌型转换,该结果为临床应用CESLPF治疗OSAS提供了实验依据。     

心肌肌球蛋白轻链的双相非竞争性ELISA吸附分析及其临床初步应用

应用特异抗体建立了人心肌肌球蛋白轻链的双相非竞争性酶联免疫吸附分析。该法灵敏度为0.lng/孔,批内及批间变异系数分别为2.7％～9.2％和3.7％～19.1％,回收率近100％(高剂量组10ng/孔),工作范围0.1～10ng/孔。用该法检测了11例急性心肌梗塞病人入院后2周的血清样品,并调查了20例正常健康人血清样品,结果所有急性心梗病人血清样品在一定时间内心肌肌球蛋白轻链水平增高。大多数病人(9例)初次升高后1～2d达正常水平,以后又升高5～9d。轻链高峰在入院后第2.2±1,2d(第一峰)和7.1±1.9d(第二峰)出现,峰值分别是45.7±33.5ng/ml和62.2±32.9ng/ml,高水平肌球蛋白轻链在病人血中保持11±3.4d。然而,在健康人血清中未见有可测量的轻链存在。