甲状腺刺激性抗体作用的胞内信号传导机制

目的 探讨甲状腺刺激性抗体(TSAb)对人甲状腺细胞功能影响的信号传导机制，揭示TSAb致Graves’病(GD)的分子机制。方法 (1)以酶联免疫吸附法(ELISA)观察TSAb对原代培养人甲状腺细胞PKA和PKC活性影响。(2)应用PKA、PKC激活和抑制剂及放射免疫分析法，观察两信号传导途径在TSAb刺激T3、T4分泌中的作用。(3)应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测甲状腺组织和细胞中TTF-1和PAX-8基因表达情况，并应用PKA、PKC激活和抑制剂观察两信号传导途径在TSAb对两基因表达影响中的作用。     

正常和甲亢甲状腺细胞检测甲状腺刺激抗体的对比研究

采用细胞培养方法,对比研究正常和Graves病(GD)甲状腺细胞检测甲状腺刺激抗体(TSAb)的敏感性、特异性及重复性.结果显示:(1)正常和GD甲状腺细胞检测的TSAb活性具有显著相关性.(2)GD病人血清TSAb活性与甲状腺球蛋白抗体(TGAb)和甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)无明显相关关系.(3)正常甲状腺检测GD组及桥本氏病(HT)组的阳性率分别为0.926和0.182,而GD甲状腺测定的阳性率为0.889和0.182.提示正常和GD甲状腺检测TSAb均具有特异性强、敏感性高和重复性好的特点,GD细胞测定TSAb有更高的实用价值.     

肝病患者110例血清甲状腺相关物质的检测及临床意义

目的:探讨慢性肝炎、肝硬化、重症肝炎对甲状腺分泌相关激素水平的影响及肝病患者甲状腺自身抗体存在状况。方法:AXSYM化学发光仪分别检测慢性肝炎48例、肝硬化35例、重症肝炎27例、健康体检者30例的血清促甲状腺激素(TSH)、甲状腺素(T4)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、游离甲状腺素(FT4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、抗甲状腺过氧化物酶抗体(抗TPO)、抗甲状腺球蛋白抗体(抗TG)的含量。结果:慢性肝炎组TSH、T3、T4显著降低(P<0.05),肝硬化组TSH、T3、T4、FT3显著降低(P<0.01),重症肝炎组TSH、T3、T4、FT3、FT4显著降低(P<0.01),肝病患者血清抗TPO、抗TG含量显著升高(P<0.01)。结论:肝病患者血清相关物质的检测在一定程度上可以评估肝功能、判断病程及预后。     

Genistein对CAOV3细胞增殖的抑制作用

目的观察酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂genistein对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的人卵巢上皮性浆液性癌细胞株CAOV3细胞增殖的抑制作用,探讨其信号传导机制.方法以不同浓度的bFGF和genistein诱导CAOV3细胞,通过MTT比色法观察genistein对细胞增殖的抑制作用;利用[γ-32P]ATP掺入外源性底物的方法,液体闪烁测定TPK和蛋白激酶C(PKC)活性的变化.结果bFGF使该细胞株增殖比明显增加,细胞内TPK、PKC活性升高;genistein使细胞增殖比明显下降,抑制细胞内TPK、PKC活性,且genistein对bFGF诱导的TPK和PKC活性抑制更显著.结论bFGF可能通过TPK途径激活PKC来调控CAOV3细胞增殖,genistein可有效阻滞此传导途径,从而抑制细胞增殖.     

Genistein对CAOV3细胞增殖的抑制作用

目的 观察酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂genistein对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的人卵巢上皮性浆液性癌细胞株CAOV3细胞增殖的抑制作用，探讨其信号传导机制。方法 以不同浓度的bFGF和genistein诱导CAOV3细胞，通过MTT比色法观察genistein对细胞增殖的抑制作用；利用[γ-^32P]ATP掺入外源性底物的方法，液体闪烁测定TPK和蛋白激酶C(PKC)活性的变化。结果 bFGF使该细胞株增殖比明显增加，细胞内TPK、PKC活性升高；genistein使细胞增殖比明显下降，抑制细胞内TPK、PKC活性，且genistein对bFGF诱导的TPK和PKC活性抑制更显著。结论 bFGF可能通过TPK途径激活PKC来调控CAOV3细胞增殖，genistein可有效阻滞此传导途径，从而抑制细胞增殖。     

甲巯咪唑对体外培养人甲状腺细胞功能影响的实验研究

目的研究甲巯咪唑(MMI）对体外培养人甲状腺细胞功能的影响，以探讨MMI的药理作用，为指导临床用药提供一个实验依据，方法人甲状腺细胞培养2d，之后分别培养在5H和6H液中，不同浓度MMI(1、10、100μmol／L)状态下孵育2d。用改良的愈创木酚法测定TPO活性。用放免法测定T3、T4。以竞争性蛋白结合法测定cAMP。结果在1～10μmol／L MMI浓度下甲状腺细胞内的TPO活性有较明显的增高，而100μmol／L MXII则抑制TPO活性。甲状腺细胞分泌的T3、T4与TPO活性的变化保持一致。MMI在较大范围(1～100μmol／L)内不影响细胞内的第二信使cAMP的含量。结论MMI对体外培养人甲状腺细胞的功能有影响。     

激活蛋白激酶A信号通路对甲状腺鳞癌SW579细胞株的生长抑制作用

目的探讨蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)信号通路对甲状腺鳞癌SW579细胞株的生长抑制作用及机制。方法利用PKA特异性激活剂双丁酰环化腺苷酸(dbcAMP)0.5、1.0和2.0 mmol/L作用于甲状腺鳞癌SW579细胞24、48和72 h后用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测SW579细胞的生长活性;酶联免疫吸附法(ELISA法)检测经dbcAMP 1.0 mmol/L作用48 h后PKA、成熟促进因子(message processing fac-tor,MPF)的活性;免疫印迹法(Western blotting法)检测经dbcAMP 1.0 mmol/L作用48 h CDC25B-pS323(celldivision cycle 25B-pS323)磷酸化水平。结果 MTT法结果显示,在dbcAMP作用下,SW579细胞活力呈逐渐下降趋势,随dbcAMP剂量的增加和作用时间的延长,其作用越明显。ELISA法显示,dbcAMP使PKA活性升高而使MPF活性下降。未加dbcAMP组PKA、MPF活性分别为(32.5±2.49)nmol/L和(115.5±7.53)ng/L;dbcAMP组PKA、MPF活性分别为(436.33±12.85)nmol/L和(22.87±2.57)ng/L,两组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。Western blotting显示,dbcAMP能够使CDC25B-pS323磷酸化水平上调。未加dbcAMP组和dbcAMP组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论利用dbcAMP激活PKA信号通路,可以抑制甲状腺鳞癌SW579细胞生长增殖,其抑制作用可能与PKA/CDC25B/MPF信号通路的调控有关。     

TSH和TSAb刺激正常人甲状腺细胞cAMP生成的研究

以改良Hank's液溶解的bTSH和TSAb刺激体外培养的正常人甲状腺细胞。结果,甲状腺细胞释放cAMP 的量随细胞含量(5～20×10~4/孔)、bTSH 浓度(0～10~4mu/L)或病人血清用量(0～350μl/孔)的增加而增加,并且,当细胞培养时间(0～96h)或刺激时间(0～6h)延长时,cAMP 的生成量亦升高。提示体外培养的甲状腺细胞完整而具活力。本研究为临床检测TSAb 奠定了实验基础。     

诱生的NO对原代培养人甲状腺细胞的影响

目的 研究原代培养人甲状腺细胞在IL-1α刺激下NO生成情况及NO对甲状腺细胞毒作用和对甲状腺功能影响。方法 IL-1α和L—NAME刺激甲状腺细胞48h，测定培养液中NO含量和LDH活力以及细胞中TPO活性；用SNP刺激甲状腺细胞4h，测定甲状腺细胞碘有机化。结果 IL-1α剂量依赖性诱导甲状腺细胞产生NO；IL-1α能提高甲状腺细胞LDH释放，降低TPO活性，L-NAME可抑制上述作用；SNP剂量依赖性抑制甲状腺细胞碘有机化。结论 IL-1α能诱导甲状腺细胞产生大量NO；NO对甲状腺细胞有部分细胞毒作用．可抑制TPO活性和甲状腺细胞碘有机化．     

甲状腺球蛋白和甲状腺球蛋白抗体检测在甲状腺疾病中的临床应用

甲状腺球蛋白(TG)是甲状腺滤泡上皮细胞分泌的660 ku糖蛋白,由四个肽链组成,酪氨酸的碘化和碘化酪氨酸的耦联作用都是在甲状腺球蛋白的结构上进行的,溶酶体水解TG表面T4、T3并使之释放入血,同时少量的TG也释放入血,部分TG经甲状腺淋巴管分泌入血,血循环中的TG被肝脏的巨噬细胞清除.血清中TG水平与下列因素密切相关:(1)甲状腺组织或分化好的甲状腺癌组织的大小;(2)甲状腺腺体的物理损伤(如手术、活检、外伤、出血、放射线损伤)或炎症损害程度;(3)激素影响,如TSH、人绒毛膜促性腺激素及TSH受体抗体(TRAb).     

Graves病患者血中甲状腺刺激抗体的测定及其临床意义

为了探讨甲状腺刺激抗体(TSAb)的测定对Graves病患者的诊治意义,根据TSAb能刺激甲状腺上皮细胞膜匀浆中腺苷酸环化酶活性的原理测定了正常人及Graves病患者血中TSAb活性。结果显示TSAb活性(单位:pmol/mg膜蛋白)80例正常人为14.97±3.36(阳性率1.25％),70例未治Graves病患者为30.69±9.59(阳性率78.6％),显著高于正常人(t=2.687,P<0.01);41例经抗甲状腺药物治疗后的Graves病患者为21.72±9.80(阳性率39.0％),显著低于未治Graves病患者(t=2.806,P<0.01);10例Graves病复发患者为38.32±12.21(阳性率100％),显著高于经治疗患者(t=2.713,P<0.01)。因此测定TSAb可作为Graves病观察病情、指导治疗及预测复发的一个指标。     

促甲状腺素受体抗体在甲状腺疾病中的应用

促甲状腺素受体抗体(TRAb)是在T淋巴细胞和一些细胞因子辅助下,由B淋巴细胞产生的具有异质性的特异免疫球蛋白。TRAb不是均一性抗体,其中包括刺激型抗体和阻断型抗体两种类型,分别以甲状腺刺激抗体(TSAb)和甲状腺阻断型抗体(TSBAb)为代表。甲状腺刺激抗体与受体N端结合后,模仿TSH作用,激活cAMP,使T_3、T_4合成、分泌增加,是导致Graves病发生、发展的主要原因。甲状腺阻断型抗体的抗原决定簇大部分在TSH受体细胞外功能区C端,与之结     

甲状腺疾病患者血清甲状腺刺激抗体的研究

以PEG提取的血清IgG刺激正常人甲状腺细胞cAMP的生成测定TSAb。GD未治组和复发组TSAb活性与阳性率均显著高于GD 缓解组、单纯甲状腺肿组、对照组;GD 缓解组TSAb 活性与阳性率明显降低,但仍高于单纯甲状腺肿组和对照组;后两组TSAb 活性相似,且TSAb 均为阴性。提示TSAb 与GD 的发生和转归密切相关;本法检测TSAb 具有较高的敏感性和特异性。     

乳汁与血清甲状腺抗体水平的比较

目的 探讨甲状腺疾病母亲母乳中抗甲状腺过氧化物酶抗体(anti-TPO)和抗甲状腺球蛋白抗体(anti-TG)含量,及其与血清甲状腺抗体的关系.方法 留取56例探究对象的69份母乳样本及其血清测定甲状腺抗体.以血清甲状腺抗体为自变量,母乳中甲状腺抗体为因变量进行直线回归分析.结果 母乳中抗TPO抗体为39.02±29.46U/ml,抗TG抗体为46.33±33.23 U/ml.血清和母乳中抗TPO抗体和抗TG抗体无显著相关性.抗TPO抗体和抗TG抗体的透过率分别为37％和47％.结论 母乳中存在甲状腺抗体.     

自身免疫性甲状腺疾病与甲亢相关性探讨

目的 探讨自身免疫性甲状腺疾病与甲亢的相关性。方法 用放射免疫分析法检测甲亢、甲低患和对照组TG(甲状腺球蛋白)和TM(甲状腺微粒体)抗体，并与对照组进行比较。结果 51．8％的甲亢患和49．3％的甲低患都存在不同程度的自身免疫性甲状腺疾病。血清中T3、T4值越高，TG、TM抗体的结合率越高。抗甲状腺药物对甲状腺激素的合成有阻断作用，并对机体的免疫功能有抑制作用。结论 部分甲亢患存在自身免疫性甲状腺疾病。自身免疫性甲状腺疾病存在免疫功能紊乱—细胞免疫功能低下，体液免疫功能亢进。自身免疫性甲状腺疾病与甲亢有一定的相关性。     

bFGF对NIH3T3细胞TPK,PKC,ERK活性的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对NIH3T3细胞酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)及胞外调节蛋白激酶(ERK)活性的影响,探讨其信号转导机制.方法:分别加入bFGF及PKC抑制剂H-7、MEK1抑制剂PD98059孵育细胞,利用[γ-32P]ATP掺入外源性底物的方法测定活性.结果:bFGF可使细胞膜TPK、细胞质PKC及ERK活性明显升高.H-7 bFGF、PD98059 bFGF组与只加bFGF组比较TPK活性保持不变,而PKC及ERK活性均下降.结论:TPK、PKC、ERK介导bFGF的信号转导.ERK与PKC是TPK受体下游的两个分支,PKC与ERK可以互相激活.     

慢性碘过量对大鼠甲状腺功能及甲状腺过氧化物酶活性和钠碘同向转运体表达的影响

目的研究慢性碘超足量和碘过量对甲状腺功能、甲状腺过氧化物酶(TPO)活性、甲状腺摄碘率和钠碘同向转运体(NIS)表达的影响。方法将大鼠分入4组:对照组、加碘1组、加碘2组和加碘3组,每日给碘量分别为4、6、12和24μg,于实验1至8个月内分批处死动物。采用砷铈催化分光光度法测定尿碘和甲状腺组织碘含量,碘化钾氧化法和愈创木酚法测定大鼠甲状腺TPO活性,应用流式细胞术和免疫组织化学方法检测甲状腺细胞的NIS阳性率和表达强度。结果大鼠尿碘与给碘剂量呈显著正相关。甲状腺组织TT4、TT3和碘含量随给碘剂量增高而显著增加。给碘8个月时,碘过量大鼠的甲状腺TPO活性(A)值:(1·29±0·39)明显低于对照组(2·72±1·11),随碘摄入量增加,各加碘组大鼠甲状腺摄碘率分别降至对照组的56%、49%和39%。3倍和6倍碘过量组大鼠8个月时甲状腺上皮细胞膜的NIS蛋白表达明显减弱。甲状腺碘含量与TPO活性、摄碘率及NIS表达呈显著负相关(r=-0·62~-0·88)。结论慢性碘过量持续抑制甲状腺碘摄取和有机化活性,造成甲状腺激素合成和释放功能障碍。     

大鼠甲状腺过氧化物酶活性的季节变化

我们测定了春季和夏季大鼠甲状腺重量、甲状腺含碘量和TPO活性。结果表明,春季大鼠甲状腺相对重量和TPO活性明显高于夏季大鼠,但二组甲状腺含碘量无明显差异。甲状腺相对重量和TPO活性呈正相关(r=0.58,P<0.01)     

甲胎蛋白新功能:调节HeLa细胞生长的信号转导机制

目的:观察甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)调节HeLa细胞生长的细胞内信号转导机制。方法:用从人脐带血中提取的AFP作用于体外培养的HeLa细胞,通过MTT计数、3H-TdR参入法、流式细胞仪等研究细胞增殖;放射免疫结合法检测在AFP作用下,HeLa细胞第二信使物质环磷酸腺苷(cAMP)和蛋白激酶A(PKA)活性的改变;用共聚焦显微镜观测细胞内Ca2+浓度的变化;用Westernblotting分析法分析P21ras表达。结果:①表明AFP(浓度大于10mg/L)对HeLa细胞增殖有明显的促进作用。②在AFP(20mg/L)作用下,PKA活性升高达122.6%,而Ca2+浓度升高达125.71%;P21ras蛋白表达在作用24h时增高112.6%。③抗甲胎蛋白单克隆抗体能有效地阻断AFP对HeLa细胞信号转导的影响。结论:①AFP能促HeLa细胞生长;②AFP可能通过cAMP-PKA和Ca2+途径调节HeLa细胞生长。     

甲状腺功能异常者摄碘率与血液中NIS-Ag甲状腺过氧化物酶的相关性研究*

目的 探讨甲状腺功能减退（甲减）和甲状腺功能亢进（甲亢）患者治疗前后摄碘率（RAIU）与甲状腺钠/碘同向转运体抗原（NIS-Ag）、甲状腺过氧化物酶（TPO）含量变化的相关性。方法 选取2015年2月— 2016年8月濮阳市安阳地区医院36例健康体检人员和108例甲状腺疾病就诊患者做为研究对象。电化学发光法检测血清中游离三碘甲状腺素原氨酸（FT3）、游离甲状腺素原氨酸（FT4）和促甲状腺激素（TSH）含量。用甲状腺摄碘功能仪分别检测各组的3?h RAIU、24?h RAIU,用酶联免疫吸附试验测定血浆中NIS-Ag、TPO含量,比较各组别RAIU、NIS-Ag、TPO含量,并分析患者药物治疗前后RAIU与NIS-Ag、TPO相关性。结果 FT3、FT4、TSH含量,除甲减摄碘率增高组和减低组之间比较无差异外,其余各组含量比较,差异有统计学意义（均P?<0.05）。甲减摄碘率增高组和减低组FT3、FT4含量最低,TSH最高;甲亢组FT3、FT4含量最高,TSH 最低。各组治疗前3?h RAIU、24?h RAIU、NIS-Ag及TPO含量比较,差异有统计学意义（P?<0.05）。24?h RAIU、 3?h RAIU、NIS-Ag及TPO在甲减甲状腺摄碘率减低组中最低,而在甲亢组中最高。各患病组3?h RAIU、24?h RAIU与NIS-Ag、TPO均呈正相关,差异有统计学意义（P?<0.05）,但在正常组该指标间无相关性（P?>0.05）。各组治疗后24?h RAIU、3?h RAIU、NIS-Ag及TPO值均较治疗前降低,差异有统计学意义（P?<0.05）。各患病组治疗后3?h RAIU、24?h RAIU与NIS-Ag、TPO均呈正相关,差异有统计学意义（P?<0.05）。结论 甲减患者和甲亢患者RAIU与NIS-Ag、TPO存在正相关性;药物治疗能降低RAIU、NIS-Ag及TPO。