紫草素对人非小细胞肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

目的研究紫草素对人非小细胞肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响。方法利用四甲基偶氮唑盐(MTT比色法研究不同剂量紫草素(0μm、5μm、10μm、20μm)对肺癌A549细胞的增殖作用;通过膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)染色法进行细胞形态学分析;采用流式细胞术进行细胞凋亡分析; Western blot方法检测细胞色素C、Bcl-2/Bax、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(cleaved Caspase-9)及活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved Caspase-3)蛋白表达变化;构建人非小细胞肺癌A549细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分析不同剂量的紫草素的抑瘤作用。结果 MTT检测发现0μm、5μm、10μm、20μm紫草素处理后的A549细胞生长受到显著抑制,且表现出明显的剂量依赖性[(96. 25±3. 18)%、(87. 62±3. 21)%、(73. 57±2. 89)%和(59. 58±1. 87)%](P 0. 05);形态学染色和流式细胞术表明紫草素能够诱导肺癌A549细胞发生剂量依赖性凋亡[(1. 25±0. 78)%、(12. 37±3. 23)%、(22. 89±2. 23)%和(37. 62±5. 23)%](P 0. 05); Westernblot结果显示紫草素能够促进细胞色素C的释放,抑制Bcl-2蛋白表达,上调Bax、cleaved-caspase-9及cleaved-caspase-3蛋白表达量(P 0. 01);荷瘤鼠模型显示随着剂量的增加,移植瘤的质量明显降低(P 0. 05),抑瘤率显著增高(P 0. 05)。结论紫草素能够呈剂量依赖性促进人非小细胞肺癌A549细胞色素C的释放,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,上调Bax、cleaved-caspase-9及cleaved-caspase-3蛋白表达量,激活细胞线粒体凋亡途径,诱导细胞凋亡,抑制肺癌A549细胞增殖。     

山豆根提取物体外抗肿瘤实验研究

目的:研究山豆根提取物对人非小细胞肺癌A549细胞的体外抗肿瘤作用。方法 :采用MTT法检测山豆根提取物对A549细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞周期的变化;ELISA检测Bax、Bcl-2蛋白表达的变化。结果 :山豆根提取物可明显抑制肿瘤细胞的增殖(P0.05);山豆根提取物对A549细胞处理48 h后,细胞周期阻滞在G0/G1期。与对照组相比,山豆根组Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P0.05)。结论:山豆根提取物体外对A549细胞有抑制作用,其作用机制与诱导肿瘤细胞的凋亡和干扰细胞周期分布有关。     

Vinorelbine对肺癌细胞增殖、凋亡以及细胞周期的影响

目的探究长春瑞滨(Vinorelbine)对人肺癌A549细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响以及可能作用机制。方法采用前瞻性研究通过不同浓度长春瑞滨(5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml)作用于肺癌A549细胞。四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖抑制率,膜联蛋白V-FITC(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)双染法分析细胞的凋亡率,流式细胞术检测细胞周期变化,Caspase-3活性检测试剂盒观察含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性,蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的水平。结果与对照组相比,不同浓度长春瑞滨显著增加细胞的增殖抑制率(P0.05),且其抑制作用随着浓度的增加而增强;与对照组相比,长春瑞滨显著升高细胞的凋亡率(P0.05),上调细胞周期G2/M期和Casapse-3活性(P0.05),明显增加Bax/Bcl-2(P0.05)。结论长春瑞滨抑制肺癌细胞增殖,诱导其凋亡,阻碍细胞周期G2/M期,可能通过Caspase-3信号通路发挥作用。     

七氟醚通过调控NF-κB信号通路对顺铂诱导的肺癌细胞转移能力的研究

目的研究七氟醚对顺铂诱导的肺癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响以及作用机制。方法采用前瞻性研究,用含1.7%七氟醚、3.4%七氟醚、5.1%七氟醚混合气体处理肺癌A549细胞6 h。实验分为4组:对照组只充入95%O2、5%CO2混合气体;七氟醚组为充入含不同浓度七氟醚的混合气体处理细胞6 h;顺铂组为加入顺铂(10 mg/L)处理细胞24 h;联合组为加入顺铂(10 mg/L)处理24 h,同时6 h内充入含5.1%七氟醚混合气体处理。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,细胞划痕实验检测细胞的迁移,Transwell小室法检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法(Western blot)分析Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、核因子-κB P65(NF-κB P65)蛋白的表达。结果不同浓度七氟醚显著降低肺癌A549细胞的活力,浓度越高抑制作用越强(P0.05);联合组细胞的活力显著高于单一作用。与对照组相比,5.1%七氟醚、顺铂组均可降低细胞的迁移率和侵袭数目(P0.05);联合组细胞的迁移率和侵袭数目显著高于顺铂组和5.1%七氟醚组(P0.05)。顺铂、七氟醚可显著抑制A549细胞中P65、Bcl-2蛋白水平(P0.05),升高Bax蛋白水平(P0.05)。顺铂联合七氟醚处理A549细胞,P65、Bcl-2蛋白水平低于顺铂组、七氟醚组(P0.05),Bax蛋白水平增加(P0.05)。结论七氟醚可抑制顺铂诱导的肺癌A549细胞的侵袭、迁移能力,其作用与下调P65、Bcl-2蛋白的表达量,上调Bax蛋白水平有关。     

香叶木素对人肺腺癌细胞系H1299和A549增殖能力影响的研究

目的:探究香叶木素(Dios)作用前后人肺腺癌细胞系H1299和A549细胞增殖活性的改变。方法:取RPMI-1640培养基培养的人肺腺癌细系H1299及A549用于实验。采用CCK8法检测Dios作用前后人肺腺癌细胞系H1299和A549细胞增殖活性的改变。结果:不同浓度(0、5、10、20μmol/L)Dios作用H1299细胞24h后,细胞的增殖抑制率分别为(10.9±2.5)%、(32.7±1.8)%、(41.2±2.1)%、(51.7±2.8)%,而A549细胞增殖抑制率为(18.9±2.3)%、(30.8±2.6)%、(42.2±1.2)%、(50.7±2.1)%。结论:Dios对人肺腺癌细胞系H1299和A549的增殖有明显的抑制作用,提示Dios通过抑制肺腺癌细胞的增殖,进而起到良好的抗肿瘤作用。     

人接头蛋白LNK对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨人接头蛋白LNK(hLNK)对非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展的影响。方法 构建稳定过表达hLNK的人NSCLC细胞株H1299-hLNK及对照细胞株H1299-pCDH。采用Western blot验证上述稳转细胞株中hLNK的表达水平;采用平板克隆实验分析hLNK过表达对H1299细胞增殖的影响;采用划痕实验分析hLNK过表达对H1299细胞侵袭能力的影响;对细胞中上皮间质转化(EMT)的典型标志蛋白进行分析。结果 成功构建过表达hLNK的人NSCLC细胞株H1299-hLNK。与对照细胞H1299-pCDH比较,hLNK过表达抑制了H1299细胞的增殖和迁移能力,且细胞EMT水平被抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 hLNK主要通过下调NSCLC细胞H1299的EMT水平抑制癌细胞的增殖、迁移。     

姜黄素联合顺铂对肺癌治疗的体外实验研究

目的探讨姜黄素(CUR)与化疗药(DDP)联合应用治疗肺癌的效应和可能机制。方法应用MTT试验检测CUR与DDP联用对人肺癌A549细胞增殖的影响,用流式细胞术检测CUR与DDP联用对人肺癌A549细胞周期和凋亡的影响。结果在一定的浓度范围内,随着姜黄素与顺铂均可抑制细胞生长,呈量-效关系。姜黄素与顺铂联用时,可以增强对A549细胞的增殖抑制作用。姜黄素和顺铂均可诱导A549细胞的凋亡,而且两者联用可增加A549细胞的凋亡率。姜黄素将细胞聚结在G2/M期并可诱导凋亡,顺铂将细胞聚结在S期并可诱导凋亡。结论姜黄素、顺铂均可抑制人肺腺癌A-549细胞的增殖、诱导细胞的凋亡,在一定浓度范围内,呈量-效关系,而且两者联合应用具有相加或协同作用。其效应可能是通过对细胞周期的影响来实现的。     

Survivin siRNA沉默对非小细胞肺癌细胞生物学的影响

目的探讨凋亡抑制蛋白(Survivin)对非小细胞肺癌(NSCLC)H1299细胞株的生物学影响。方法通过脂质体介导将Survivin基因siRNA瞬时转染H1299细胞。采用RT-PCR及Western blot检测转染后H1299细胞内Survivin基因的表达水平。MTT比色法、流式细胞术(FCM)及Western blot观察细胞增殖、凋亡、周期及Caspase-9蛋白表达变化情况。结果 RT-PCR及Western blot证实,siRNA沉默的H1299细胞中Survivin mRNA、蛋白的表达水平较未转染组明显降低(t=10.970,P=0.000;t=9.192,P=0.003)。MTT、细胞凋亡及周期结果表明,siRNA沉默的H1299细胞其增殖能力明显减弱、细胞凋亡明显升高,G2/M期阻滞,Caspase-9蛋白表达增加(t=8.162,P=0.001;t=10.800,P=0.000;t=9.192,P=0.003)。结论 Survivin参与NSCLC细胞增殖、凋亡、周期这一生物学过程。     

大蒜素对小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移能力及凋亡的影响

目的探讨大蒜素对肺癌A549细胞增殖、迁移能力及凋亡的影响,为大蒜素治疗肺癌补充理论依据。方法实验分为对照组(正常培养A549细胞)、低剂量组(A549细胞+10μmol/L大蒜素)、中剂量组(A549细胞+30μmol/L大蒜素)和高剂量组(A549细胞+50μmol/L大蒜素)。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞24 h、48 h和72 h细胞增殖情况;采用荧光TUNEL法检测各组细胞凋亡;采用Transwell检测各组细胞迁移能力,采用Western blot技术检测各组细胞Caspase-3、p53和CHOP表达。结果不通浓度大蒜素可有效降低肺癌细胞的增殖、迁移能力,且与剂量呈负相关(P0.05);增加肺癌细胞凋亡率及细胞中Caspase-3、p53和CHOP的表达,且表达水平与剂量呈正相关(P0.05)。结论大蒜素通过提高肺癌A549细胞Caspase-3、p53和CHOP等凋亡因子的表达诱导细胞凋亡,抑制肺癌A549细胞增殖和迁移能力,从而发挥其抗肿瘤的作用。     

奥沙利铂诱导的细胞外基质重构介导的非小细胞肺癌H1299细胞系凋亡机制研究

目的探讨奥沙利铂诱导的细胞外基质重构介导的非小细胞肺癌H1299细胞系凋亡的机制。方法非小细胞肺癌H1299细胞系随机分为4组:对照组、奥沙利铂低剂量、中剂量和高剂量组。DAPI染色法和检测各组细胞的凋亡情况,PCR或免疫印迹法检测各组细胞的细胞凋亡蛋白Bax/Bcl2及Caspase9的表达,明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶MMP2/9蛋白的活性。结果奥沙利铂引起细胞凋亡蛋白Bax和Caspase9蛋白表达增加和Bcl2表达的下调,细胞内凋亡小体的出现以及MMP2和MMP9活性增加,且奥沙利铂的作用效果具有剂量依从性。结论奥沙利铂诱导的MMP2和MMP9蛋白表达上调介导的细胞外基质重构参与了非小细胞肺癌H1299细胞系凋亡过程。     

Tumor-suppressive effects by adenovirus-mediated mda-7 gene transfer in non-small cell lung cancer cell in vitro

The melanoma differentiation-associated gene-7 (mda-7), cloned from a human melanoma cell line H0-1, is known to induce tumor cell-selective growth inhibition in breast cancer cells in vitro and loss of tumorigenicity ex vivo. Yet, the mechanisms underlying these effects are still unknown. Therefore, we investigated these mechanisms on the molecular level in human non-small cell lung carcinoma (NSCLC) cells in vitro. Overexpression of mda-7 protein by Ad-mda-7 significantly suppressed proliferation and induced G2/M cell cycle arrest in wild-type p53 (A549, H460), and p53-null (H1299) non-small cell lung cancer cell lines, but not in normal human lung fibroblast (NHLF) cells. p53, Bax, and Bak protein expression was up-regulated in wild-type p53 tumor cell lines, but not in p53-null cells, suggesting that an intact p53 pathway was required for Bax and Bak induction. However, in all three cancer cell lines tested, activation of the caspase cascade and cleavage of poly(ADP-ribose) polymerase (PARP) appeared to be independent of the p53 mutational status. Together, these results suggest that apoptosis may be induced via multiple pathways by Ad-mda-7 in lung cancer cells and that Ad-mda-7 has the potential to become a novel therapeutic for clinical cancer gene therapy. Gene Therapy (2000) 7, 2051-2057.     

黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45诱导凋亡和细胞周期的影响

目的观察不同浓度不同时间的黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45的影响。方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验流式细胞仪细胞免疫组化等方法对人胃癌细胞MKN45进行检测。结果 MTT实验显示黄芪多糖可抑制MKN45细胞增殖;细胞周期分析提示黄芪多糖可将细胞MKN45阻滞于G0/G1期,均与浓度和时间呈正相关;免疫组化法显示凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调。结论黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45有直接杀伤作用,同时诱导肿瘤细胞凋亡,可将细胞周期阻滞于G0/G1期,其作用机制可能通过上调促凋亡蛋白和下调抑制凋亡蛋白实现。     

组蛋白去乙酰化抑制剂Depsipeptide对人肺腺癌细胞株H1299的生长抑制作用及机制

【目的】评价组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂Depsipeptide对肺腺癌细胞株H1299的生长抑制作用及机制。【方法】分别以体外药物敏感试验观察Depsipeptide处理肺癌细胞株H1299后其生长抑制情况,Westernblot检测survivin及细胞外信号调节激酶（ERK）蛋白表达水平的变化。【结果]Depsipeptide作用48h及96h后对H1299细胞具有明显的生长抑制作用,其细胞毒性呈时间依赖性和浓度依赖性;同时Depsipeptide作用后survivin蛋白表达明显下降,磷酸化ERK（pERK）蛋白表达明显下降。【结果]Depsipep-tide对肺腺癌细胞株H1299具有生长抑制作用,其机制可能是下调具有抗细胞凋亡作用的survivin蛋白的表达,并阻断ERK信号通路的活化,从而抑制肺腺癌细胞株H1299的生长。     

活性氧在荆花牡荆素诱导人肺癌A549细胞凋亡中的作用

目的 探讨紫花牡荆素(CAS)诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及其机制.方法 体外培养A549细胞.MTT法测定CAS对A549细胞增殖的抑制;Annexin V/PI双染色分析细胞凋亡率;H2DCFH-DA探针流式细胞术分析活性氧(ROS)生成.结果 CAS能抑制人肺癌A549细胞增殖,呈浓度依赖性.Annexin V/PI法检测结果显示10 μmol/L的CAS作用A549细胞12 h、24 h、48 h后,其凋亡率分别为22.39%、38.66%、64.82%.H2DCFH-DA探针流式细胞术分析表明,完全培养基组、溶媒(0.1% DMSO)组对A459细胞作用0 h;CAS(10 μmol/L)对A549细胞作用3 h、6 h、12 h;N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC,10 mmol/L)+CAS(10 μmol/L)组对A549细胞作用6 h的ROS生成水平分别为8.47、15.26、66.2、74.1、82.2、67.3,随着CAS作用时间延长,细胞内ROS水平增加.NAC对细胞凋亡有抑制作用.结论 CAS可诱导A549细胞凋亡,其作用机制可能与提高细胞内ROS产生增加有关.     

Chemotherapy and chemosensitization of non-small cell lung cancer with a novel immunomodulatory oligonucleotide targeting Toll-like receptor 9

Lung cancer is a leading cause of death world-wide and the long-term survival rate for lung cancer patients is one of the lowest for any cancer. New therapies are urgently needed. The present study was designed to evaluate an immunomodulatory oligonucleotide as a novel type of therapy for lung cancer. The in vivo effects of the immunomodulatory oligonucleotides were determined in four tumor models derived from human non-small cell lung cancer (NSCLC) cell lines (A549, H1299, H358, and H520), administered alone or in combination with conventional chemotherapeutic agents used to treat lung cancer. The in vitro effects of the immunomodulatory oligonucleotide on the growth, apoptosis, and proliferation of NSCLC cells were also determined. We also examined NSCLC cells for expression of Toll-like receptor 9 (TLR9), the receptor for the immunomodulatory oligonucleotide. We showed several important findings: (a) treatment with the immunomodulatory oligonucleotide led to potent antitumor effects, inhibiting tumor growth by at least 60% in all four in vivo models; (b) combination with the immunomodulatory oligonucleotide led to enhanced effects following treatment with gemcitabine or Alimta; (c) the immunomodulatory oligonucleotide increased apoptosis, decreased proliferation, and decreased survival in A549 cells in vitro; and (d) both TLR9 mRNA and protein were expressed in NSCLC cells. The immunomodulatory oligonucleotide has potent antitumor effects as monotherapy and in combination with conventional chemotherapeutic agents, and may act directly on NSCLC cells via TLR9. The present study provides a rationale for developing the immunomodulatory oligonucleotide for lung cancer therapy.     

MiR-551b-3p靶向USP9X对人肺癌A549细胞凋亡和放射敏感性的影响

目的:探讨miR-551b-3p对肺癌A549细胞凋亡和放射敏感性的影响及分子机制。方法:将miRNC,miR-551b-3p,anti-miR-NC,anti-miR-551b-3p,si-NC,si-USP9X分别转染至A549中,记为miR-NC组、miR-551b-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-551b-3p组、si-NC组、si-USP9X组;将miR-551b-3p分别与pc DNA和pc DNA-USP9X共转染至A549中,记为miR-551b-3p+pc DNA组、miR-551b-3p+pc DNA-USP9X组。采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测miR-551b-3p和USP9X的表达水平;蛋白质印迹法检测X染色体连锁的泛素特定蛋白水解酶9(ubiquitin-specific peptidase 9 X-linked,USP9X)、 B细胞淋巴瘤/白血病-2 (B-cell lymphoma/leukemia-2, Bcl-2)、 Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 related X protein,Bax)的表达;荧光素酶报告实验检测miR-551b-3p和USP9X的靶向关系;流式细胞术检测细胞凋亡;细胞克隆集落形成实验检测放射敏感性。结果:肺癌组织和肺癌细胞A549中miR-551b-3p表达水平显著降低,USP9X mRNA和蛋白质表达水平显著升高(均P<0.001)。miR-551b-3p靶向调控USP9X,过表达miR-551b-3p和抑制USP9X表达,细胞凋亡率显著升高,Bcl-2表达水平显著降低,Bax表达水平显著升高,细胞的存活曲线明显下移(均P<0.001)。USP9X过表达逆转了miR-551b-3p过表达对肺癌A549细胞凋亡和放射敏感性的作用。结论:过表达miR-551b-3p促进肺癌A549细胞凋亡,增强肺癌细胞放射敏感性,其机制可能与USP9X有关。     

IRE1α-TRAF2-ASK1 pathway is involved in CSTMP-induced apoptosis and ER stress in human non-small cell lung cancer A549 cells

BackgroundCSTMP, a Tetramethylpyrazine (TMP) analogue, is designed and synthesized based on the pharmacophores of TMP and resveratrol. Recent studies showed that CSTMP had strong protective effects in endothelial cells apoptosis by its anti-oxidant activity. However, the pharmacological function of CSTMP in cancer have not been elucidated to date. The objective of this study was to investigate the anti-cancer effect of CSTMP against human non-small cell lung cancer (NSCLC) A549 cells and the underlying mechanisms.MethodsThe cell proliferation and apoptosis were detected by MTT assay and flow cytometry. Caspases activity was determined spectrophotometricaly at 405 nm using a microtiter plate reader. Western blot and real-time PCR was used to assess the protein and mRNA expression. Immunoprecipitation was used to examine the protein–protein interactions.ResultsCSTMP inhibited the proliferation and induced cell cycle arrest and apoptosis of A549 cells. Caspase3, 8, 9 and PARP-1 activation, and Bax/Bcl-2 ratio analyses demonstrated that the anti-cancer effect of CSTMP in A549 cells was mediated by promoting caspase- and mitochondria-dependent apoptosis. Furthermore, CSTMP induced ER stress in A549 cells as evidenced by elevated levels of GRP78, GRP94, CHOP, IRE1α, TRAF2, p-ASK1 and p-JNK, activation of caspase12 and 4, and enhanced formation of an IRE1α-TRAF2-ASK1 complex. Knockdown of IRE1α by siRNA suppressed activation of IRE1α, TRAF2, p-ASK1 and p-JNK in CSTMP treated A549 cells. In addition, the effects of CSTMP on the formation of an IRE1α-TRAF2-ASK1 complex, caspase- and mitochondria-dependent apoptosis were also reversed by IRE1α siRNA in A549 cells.ConclusionsCollectively, we showed that CSTMP induced apoptosis of A549 cells were through IRE1α-TRAF2-ASK1 complex-mediated ER stress, JNK activation, and mitochondrial dysfunction. These insights on this novel compound CSTMP may provide a novel anti-cancer candidate for the treatment of NSCLC.     

黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45诱导凋亡和细胞周期的影响

目的 观察不同浓度﹑不同时间的黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45的影响.方法 应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验﹑流式细胞仪﹑细胞免疫组化等方法对人胃癌细胞MKN45进行检测.结果 MTT实验显示黄芪多糖可抑制MKN45细胞增殖;细胞周期分析提示黄芪多糖可将细胞MKN45阻滞于G0/G1期,均与浓度和时间呈正相关;免疫组化法显示凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达下调, Bax蛋白表达上调.结论 黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45有直接杀伤作用,同时诱导肿瘤细胞凋亡,可将细胞周期阻滞于G0/G1期,其作用机制可能通过上调促凋亡蛋白和下调抑制凋亡蛋白实现.