不同型别重组人干扰素在细胞培养上抗SARS病毒的研究

目的　研究重组人干扰素α2b、α1b、β1b和ω1b对严重急性呼吸综合征 (SARS)病毒在细胞培养上的抑制作用。方法　采用细胞病变抑制法在人横纹肌瘤 (Rda)细胞系培养上测定干扰素的抗SARS病毒活性。结果　高度纯化的重组人干扰素α2b、α1b、β1b和ω1b在Rda细胞培养上抑制SARS病毒产生 5 0 %细胞病变 (CPE)的最小活性单位各为 (16 0 5± 12 9 5 )IU ml、(14 9 0± 71 7)IU ml、(6 9 5± 6 1 5 )IU ml、(87 3± 4 7 1)IU ml或各为 (0 6± 0 5 )ng ml、(10 6± 5 1)ng ml、(3 5± 3 1)ng ml、(0 9± 0 5 )ng ml。结论　本研究中所用的重组人干扰素在细胞培养上均具有较好的抑制SARS病毒的活性。本研究就各型干扰素抗病毒敏感性的差异及干扰素预防SARS病毒感染潜在的临床应用价值进行了讨论     

干扰素及其临床应用(续)四干扰素制剂及其应用

1 干扰素临床应用的种类和剂型 不同亚型干扰素各有其独特的性质,反映在临床应用上也有所不同.目前,临床上使用的干扰素型别主要有α2a、α2b、α1b、β1 a、β1b、γ1等及各种自然干扰素和长效干扰素,主要剂型有冻干粉针剂、水针剂、栓剂、滴眼液等.干扰素喷雾剂虽然未批准上市流通,但我国SFDA已经批准北京远策药业有限责任公司研制的重组人干扰素α2b喷雾剂及军科院研制的重组人干扰素ω喷雾剂为预防SARS的储备药物.详见表4-1及表4-2.     

单纯疱疹病毒Ⅰ型基因治疗载体的快速构建

背景：单纯疱疹病毒Ⅰ型载体因具有独特的优点目前被广泛应用,但其构建尚缺乏一种快速有效的方法。 目的：利用Cre/Loxp高效重组系统构建单纯疱疹病毒Ⅰ型载体。 方法：分离单纯疱疹病毒HSV-1,将含Cre重组酶的c66-SV40-cre质粒转染Vero细胞,构建一株带有Loxp位点的重组HSV-1框架载体HSVLoxp。构建穿梭载体pShuttle- SV40-Cre-Loxp-IRES及重组单纯疱疹病毒Ⅰ型载体HSV-GDNF,用HAT培养基筛选出阳性毒株后用GDNF引物做PCR鉴定,扩增培养后测定滴度。 结果与结论：成功构建pHV-TK-GFP质粒,并在Vero细胞内发生重组,分离出缺失了Us3基因的重组病毒HSVtk-Loxp-GFP01。成功构建HSV-1框架载体HSVLoxp及穿梭载体pShuttle- SV40-Cre-Loxp-IRES,成功获得GDNF基因,并将其转移到了HSV-1基因组上,成功构建了表达GDNF的单纯疱疹病毒HSV-1载体,测定其滴度约为2.25×10⁶ IU/mL。     

SARS冠状病毒全基因组cDNA芯片的研制以及人重组干扰素α2b抑制SARS病毒复制分子机制的初步研究

目的 在细胞水平上，利用研制的SARS病毒全基因组芯片技术探讨人重组干扰素α2b抑制SARS病毒复制的分子机制。方法 根据已经发表的SARS病毒基因组全序列和生物信息学软件分析，设计包括SABS病毒全基因组的各个可能编码区的PCR引物；将所有PCR产物用来制备SABS病毒的全基因组cDNA芯片。利用该芯片来探讨人重组干扰素α2b抑制SARS病毒复制的分子基础。结果 通过：PCR方法研制了SARS病毒全基因组的cDNA芯片，并说明cDNA芯片可以准确地检测SARS病毒各个基因的RNA水平。利用这一技术研究了于扰素抗SARS病毒的分子机制。结果表明，人重组干扰素α2b可以明显抑制SARS病毒复制过程中几乎所有病毒RNAs的转录，并呈现一定的剂量关系；并发现一个目前还没有确定功能的SARS病毒新基因，命名为U基因，转录最早，转录水平最高，对干扰素的抑制作用也很敏感；它可能在病毒的转录复制过程中发挥重要作用。结论 SARS冠状病毒cDNA芯片可以用来研究病毒复制的分子机制以及相关抗病毒药物包括干扰素的研究。本文在分子水平上研究了人于扰素α2b抑制SARS病毒复制的基因转录动态，并就干扰素α2b抑制SARS病毒的可能分子机制及其潜在的应用价值进行了讨论。     

肠道病毒71型抵抗Ⅰ型干扰素诱导的抗病毒作用

目的 研究肠道病毒71型(EV71)抵抗Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)诱导的抗病毒作用.方法 将1000 U/ml的Ⅰ型干扰素(α,β)加入HeLa细胞后,去除上清中的干扰素,感染带有GFP的重组单纯疱疹病毒(HSV-1)和EV71,观察GFP的表达和PCR检测HSV-1核酸,判断Ⅰ型干扰素对HSV-1的作用.通过RT-PCR方法检测EV71 2A基因的表达从而判断EV71病毒的复制能力.结果 Ⅰ型干扰素(α,β)诱导HeLa细胞产生抗病毒蛋白而有效地抑制重组HSV-1 GFP的表达和核酸扩增.而EV71 2A的RT-PCR结果证实EV71可在Ⅰ型干扰素(α,β)作用后的HeLa细胞中有效增殖.结论 Ⅰ型干扰素(a,β)诱导产生抗病毒蛋白;EV71可在Ⅰ型干扰素(α,β)诱导产生抗病毒蛋白的HeLa细胞中有效增殖.     

重组人干扰素α2b喷雾剂在治疗小儿手足口病的护理应用及体会

目的 探讨重组人干扰素α2b喷雾剂在治疗小儿手足口病的护理应用及体会.方法 对46例手足口病患儿采用α2b喷雾剂直接喷于患处.结果 46例患儿中有效率为67.39％和显效率32.61％.结论 重组人干扰素α2b喷雾剂是治疗手足口病的有效外用药.     

捷抚对复发性口腔溃疡的治疗效果及安全性评价

目的观察重组人干扰素α-2b喷雾剂治疗复发性口腔溃疡的疗效和安全性。方法81例确诊复发性口腔溃疡患者,使用重组人干扰素α-2b喷雾剂局部喷涂治疗。确定口腔溃疡部位,用棉签擦干患处,直接用干扰素喷雾剂喷涂溃疡处,每日3次。连续用药,5～14天复诊,观察溃疡愈合及疼痛变化情况。14天为一疗程,记录用药过程中可能出现的各种不良反应。用药期间不用其它药物。结果治疗后33例(40.74%)患者溃疡愈合期缩短,48例(59.26%)患者疼痛减轻。疼痛指数下降66例,未变化15例。81例患者中仅有2例出现不良反应,停药后,症状消失;随访也再未出现上述症状。结论重组人干扰素α-2b喷雾剂对部分复发性口腔溃疡患者的溃疡愈合有促进作用,但不能有效抑制口腔溃疡的复发。重组人干扰素α-2b喷雾剂用于口腔溃疡的治疗是相对安全的。     

捷抚喷雾剂治疗生殖器疱疹的疗效观察

生殖器疱疹穴GH雪是由单纯疱疹病毒侵犯生殖器部位皮肤粘膜,引起炎症、水疱、糜烂、溃疡性病变的性传播疾病,发病率有逐年增高趋势。生殖器疱疹临床表现多样、高复发、难治愈,给患者造成极大心理负担。捷抚——华立达公司推出的重组人干扰素α-2b喷雾剂,临床使用高效、安全。现     

黄芪和干扰素合剂抗单纯疱疹病毒的作用

目的研究中药黄芪乙醇提取物与重组人α２ｂ型干扰素组成栓剂或软膏的抗单纯疱疹病毒作用。方法采用２ＢＳ细胞，在９６孔板上进行栓剂或软膏水溶物对Ｉ型单纯疱疹病毒的抑制作用试验；干扰素的效价测定采用ＷＩＳＨ／ＶＳＶ法。结果黄芪与干扰素联合应用在２ＢＳ细胞培养上抑制单纯疱疹病毒的繁殖有明显的协同作用；组成复方干扰素软膏、栓剂的辅形成分对干扰素的测定系统无明显影响。结论本结果与前文报道的黄芪与干扰素联合应用对抑制１４、３９型鼻病毒有协同作用的结果是一致的     

重组人干扰素α-2b治疗疱疹性咽峡炎的疗效观察

目的探讨重组人干扰素α-2b喷雾剂局部外用与重组人干扰素α-2b注射液雾化吸入两种方法在治疗疱疹性咽峡炎患儿中的不良反应及临床疗效,为疱疹性咽峡炎患儿提供更好的治疗方案。方法选择2015年8月至2016年8月在邯郸市第一医院就诊的120例疱疹性咽峡炎患儿,按照数字表随机法将患儿分为2组,观察组60例(男性32例,女性28例;平均年龄4.12岁;平均病程3.09 d),对照组60例(男性30例,女性30例;平均年龄3.83岁;平均病程3.51 d)。对照组在常规治疗基础上给予重组人干扰素α-2b喷雾剂局部外用(10 mL∶1×10~6 IU,120喷/瓶);观察组在常规治疗基础上给予重组人干扰素α-2b注射液雾化吸入(体质量10 kg患儿予以每次10~6 IU,10 kg患儿予以每次2×10~6 IU)。治疗3~5 d后比较两组患儿临床症状消失时间、治疗的总有效率及不良反应。结果观察组显效33例,有效率95.0%;对照组显效27例,有效率91.7%。观察组与对照组比较,差异无统计学意义(χ~2=1.408,P0.05)。观察组体温恢复正常的时间和疱疹消退时间较对照组明显缩短[(1.4±0.9)d vs(2.4±1.0)d,(2.3±1.3)d vs(3.4±1.8)d];两组比较,差异有统计学意义(P0.05)。两组不良反应发生率为2.50%,3例中观察组2例,对照组1例。结论重组人干扰素α-2b注射液雾化吸入可在短时间内缓解临床症状,适宜应用于临床症状较重患儿;重组人干扰素α-2b喷雾剂局部外用简单、易操作,在症状较轻患儿依从性好,值得临床推广应用。     

微波联合外用重组人干扰素α-2b喷雾剂治疗尖锐湿疣疗效观察

目的探讨微波联合重组人干扰素α-2b喷雾剂局部外用与单用微波治疗、微波联合重组人干扰素α-2b注射液肌内注射3种方法治疗尖锐湿疣的不良反应、复发情况及临床疗效。方法选择2015年1月至9月邯郸市第一医院就治的150例尖锐湿疣患者,其中男性78例,女性72例;年龄13~56岁,平均年龄27.12岁。随机分为A、B、C组,每组各50例。A组单用微波治疗;B组在A组治疗基础上,用重组人干扰素α-2b注射液300 IU肌内注射,隔日1次,治疗7次为一个疗程,共2个疗程;C组在A组治疗基础上,外用重组人干扰素α-2b喷雾剂均匀喷涂于创面,每处1~2喷,每天4次,连续4周。3组患者均在治疗结束后每个月复诊,连续随访6个月,分别记录治疗后1、2、3、6个月不良反应、复发情况并判断临床疗效。结果 A组有效率40%,B组72%,C组70%;A组与B组比较,差异有统计学意义(χ~2=10.390,P0.05);A组与C组比较,差异有统计学意义(χ~2=9.091,P0.05);B组与C组比较,差异无统计学意义(χ~2=0.049,P0.05)。治疗后3组患者复发情况比较:A组42例,B组31例,C组33例;治疗后第1个月B组与C组差异无统计学意义(χ~2=0.038,P0.05),C组与A组比较,结果显示C组复发率较A组明显下降,差异显著,有统计学意义(χ~2=14.440,P0.05);随访6个月,总复发率,B、C两组情况相当,差异无统计学意义(χ~2=0.045,P0.05),C组与A组差异有统计学意义(χ~2=7.013,P0.05)。结论微波治疗联合外用重组人干扰素α-2b喷雾剂治疗尖锐湿疣临床效果高,复发率低,值得临床推广应用。     

两种具长效性重组人血清白蛋白／干扰素α融合蛋白表达工程菌的构建及融合蛋白的理化特性研究

目的对两种长效干扰素α融合蛋白原料药的理化特性多项指标开展分析和进行比较。方法利用基因工程技术分别构建了可高效表达重组人血清白蛋白／干扰素α2a融合蛋白（rHSA／IFNα2a）或重组人血清白蛋白,干扰素α2b融合蛋白（rHSA／IFNα2b）的毕赤酵母工程菌。融合蛋白直接分泌到组分简单的无机盐培养基中,并经特别建立的高效分离纯化工艺进行纯化,随后对两个融合蛋白进行详尽的理化特性分析。结果获得的融合蛋白纯度在98％以上;N端前15个氨基酸序列与理论序列相同;质谱分子量分别为85640．8D和85781．5D;圆二色光谱分析比对蛋白空间构象未变;等电点DI约在5．1左右;为非糖基化蛋白;紫外光谱呈典型蛋白质光谱;自由巯基含量测定值为1．4;肽图批次问一致;肽质量指纹图谱可匹配分别达83％和82％;对制备的2个融合蛋白原料药中的细菌内毒素、宿主蛋白质、外源性DNA、甲醇和甘油的残留量检测符合标准要求;融合蛋白的免疫学鉴别为阳性;体外细胞生物比活性约为2．5×10^5IU／mg,并且2个融合蛋白生物比活性测定值无不同,由此,获得了符合临床用药标准的原料药。结论研究所获得的结果可以作为指导《注射用重组人血清白蛋白／干扰素α2a融合蛋白》和《注射用重组人血清白蛋白／干扰素α2b融合蛋白》2个新药的原料药生产质量标准的建立和检定方法的确定。     

重组人α2b干扰素胶囊抗小鼠阴道HSV-2感染的研究

目的 研究新剂型重组人干扰素(interferon,IFN)α2b胶囊抗小鼠疱疹病毒性阴道炎的效果.方法 人工建造阴道感染HSV-2的小鼠模型,以不同剂量的IFNα2b对小鼠阴道局部用药,以阿昔洛韦(acyclovir,ACV)为阳性对照.观察药物干扰对模型小鼠发病率、死亡率及病程进展的影响.结果 试验药物能减少小鼠的病死数、发病数,减慢小鼠的病程进展,其中16000IU/天高剂量组效果最好,类似于ACV组的用药效果,4000IU/天的低剂量用药组效果最弱,8000IU/天中剂量组效果居中.结论 受试药物在小鼠体内具有良好的抗HSV-2感染所致阴道炎的作用.     

干扰素研究的意义

本刊干扰素专栏刊登了有关干扰素研究的八篇文章,反映了我国当前干扰素研究的动向,包括重组干扰素α2b防治SARS冠状病毒感染及其他呼吸道病毒感染人群和猴体的试验,三种新型干扰素生物学性质的研究及采用微阵列生物芯片来研究干扰素的生物学活性等。干扰素是我国第一个投放市场     

重组人干扰素α-2b喷雾剂联合卡介菌多糖核酸穴位内注射治疗颜面部多发性扁平疣疗效观察

目的评价重组人干扰素α-2b喷雾剂外用联合卡介菌多糖核酸注射液穴位内注射治疗颜面部多发性扁平疣的临床疗效及安全性。方法120例颜面部多发性扁平疣患者,其中男性42例,女性78例;年龄12～48岁,平均年龄24.5岁。根据随机化原则分为A、B、C 3组各40例,A组为穴位内注射卡介菌多糖核酸注射液组,B组为外用重组人干扰素α-2b喷雾剂组,C组为卡介菌多糖核酸注射液穴位内注射联合外用重组人干扰素α-2b喷雾剂组。6周、3个月后分别进行对比疗效观察及复发率观察。结果3组总有效率分别是57.5%、52.5%、95.0%;复发率分别是33.33%、50.00%、3.85%,C组疗效最高、复发率最低,优于A、B组（P〈0.05）;观察期间未见严重的不良反应。结论重组人干扰素α-2b喷雾剂外用联合卡介菌多糖核酸注射液穴位内注射治疗颜面部多发性扁平疣疗效显著,复发率低,不良反应少,值得临床推广使用。     

重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂预防治疗恒河猴感染SARS-CoV的试验研究

目的评价重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂对恒河猴感染SARS-CoV的预防治疗作用。方法采用鼻腔喷雾法(剂量为60万单位/鼻孔)研究了重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂对感染SARS-CoV的恒河猴预防治疗效果。结果试验组(5只)和对照组(5只)相同时间检测的咽拭子等标本中,Real-time PCR检测和病毒分离均未检出病毒。攻毒后病毒导致机体产生的中和抗体和IgG抗体的反应也较对照组弱。血液学指标检测结果表明试验组动物攻毒后各项指标较试验前比较没有显著性改变;病理结果显示试验组2只恒河猴肺组织形态基本正常,其余3只猴有肺间质性炎,表现肺间隔增厚、单核样细胞为主的炎细胞浸润,其中1只增厚的肺间隔有局灶相互融合,这3只猴肺部病变与对照组的病变表现相似,且病变累及范围较对照组小;其他各受检脏器均未见明显异常。结论重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂可以有效阻断或减弱SARS-CoV对恒河猴的感染。     

端粒酶抑制剂对葡萄膜黑色素瘤细胞生长的抑制作用

目的 研究两种端粒酶抑制剂干扰素α 2b(IFN-α 2b)和顺铂(CDDP)对人葡萄膜黑色素瘤细胞生长抑制作用,为临床化疗人葡萄膜黑色素瘤提供更多依据.方法 用不同浓度及不同作用时间的IFN-α2b和CDDP作用于体外培养的人葡萄膜黑色素瘤细胞.倒置显微镜、电子显微镜观察其形态学变化,并用MTT法检测干扰剂对细胞生长的抑制作用.结果 随着IFN-α 2b和CDDP浓度的增加及作用时间的延长,细胞出现生长抑制的形态学变化,电子显微镜显示细胞出现凋亡;作用72 h,IFN-α 2b和CDDP浓度分别大于500IU/ml及1.00mg/L时细胞出现抑制状态,并在浓度分别达到5000IU/ml及10.00 mg/L时其细胞抑制率(66.1±4.7)%及(74.0±3.3)%开始与对照组出现差异有统计学意义(P<0.001);IFN-α 2b(5000 IU/ml)和CDDP(10.00 mg/L)浓度同定,作用时间达到48 h后细胞出现抑制状态,72 h后抑制率(67.9±8.1)%及(76.5±1.6)%开始与对照组出现差异有统计学意义(P<0.001);即随着两者浓度升高及作用时间增长,葡萄膜黑色素瘤细胞受到的抑制作用逐渐增强(P<0.01).结论 端粒酶抑制剂IFN-α2b和CDDP可有效抑制体外培养的人葡萄膜黑色素瘤细胞的生长,且随着两者浓度升高及作用时间延长抑制作用加强,可造成细胞凋亡.     

5-氨基酮戊酸光动力学疗法抗单纯疱疹病毒的实验研究

目的研究5-氨基酮戊酸光动力学疗法(ALA-PDT)在体内外抗单纯疱疹病毒(HSV)的作用。方法以HSV-Ⅰ感染豚鼠皮肤的动物模型以及HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ感染的Vero细胞为实验系统,观察ALA-PDT抗单纯疱疹病毒的疗效。结果ALA-PDT在体外具有抑制HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ的作用,与阳性药物无环鸟苷作用基本一致。体内实验中,外用ALA对HSV-Ⅰ型豚鼠皮肤感染仅进行一次PDT治疗,对皮肤病变就产生了剂量依赖性的治疗效果,中、高剂量组疗效显著。结论ALA-PDT能够有效地灭活单纯疱疹病毒,治疗该病毒引发的皮肤病变。为该疗法用于病毒性疾病的治疗提供了依据。     

实时PCR检测HSV-2的方法学建立

目的建立一种快速、特异、准确定量的单纯疱疹病毒2型(HSV-2)检测方法。方法构建重组质粒pMD18-T-gG作为标准品。以HSV-2的gG基因区为靶基因区,设计合成引物和探针,采用TaqMan MGB技术对HSV-2进行实时定量PCR检测,优化反应体系,并进行方法学评价。结果成功构建重组质粒pMD18-T-gG。建立利用TaqMan MGB技术的,real-time PCR方法,其重复性较好[批内 CV(变异系数)值为2．29％,批间CV值为4．76％]、特异性较好(对HSV-1、Vero细胞、巨细胞病毒、弓形虫等无特异性扩增)、线性范围好(4．75×10~1-4．75×10~6 copies／μ1,r=0．998),灵敏度达到47．5 cop- ies／μl;与ELISA法进行比较,认为前者的灵敏度更高、检测时间更短。结论建立的TaqMan MGB PCR 方法能够快速准确、特异、灵敏地对HSV-2进行定量分析,可为临床诊断提供帮助。     

表达hIFNα-2b基因重组乳杆菌治疗HSV-2感染的研究

目的 探讨表达人干扰素α-2b的重组乳杆菌应用于阴道HSV-2感染的治疗作用。方法 建立阴道感染HSV-2的小鼠模型，使用重组菌菌液于感染前24h进行预防，或感染后48h进行治疗，记录病损程度并检测小鼠阴道分泌物中HSV-2滴度。结果使用重组菌预防或治疗的小鼠症状轻且病程缩短，病灶中病毒滴度下降很快。结论表达IFNα-2b的重组乳杆菌具有较强的局部抗病毒作用，可用于预防及治疗由HSV-2感染引起的生殖器疱疹。