非病毒转基因载体的研究进展

高效的转基因载体是基因释放系统的核心。非病毒转基因载体具有低免疫原性和易制备等特性。本就近年来非病毒转基因载体的发展作一综述。     

DNA疫苗及其免疫途径的研究进展

<正>DNA疫苗(DNA vaccine)又称为核酸疫苗、基因疫苗,是指将含有编码某种抗原蛋白基因序列的质粒载体作为疫苗,采用某种方法直接导入动物细胞内,然后通过宿主细胞的转录翻译系统合成抗原蛋白,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答,从而使被接种动物获得相应的免疫保护,以达     

非病毒转基因载体的研究进展

高效的转基因载体是基因释放系统的核心。非病毒转基因载体具有低免疫原性和易制备等特性。本文就近年来非病毒转基因载体的发展作一综述     

基于非病毒载体的mRNA疫苗递送系统研究进展

mRNA疫苗是一类新型核酸疫苗。它具有通用性、开发迅速以及制造成本低等优点,目前已被广泛用于传染性疾病防治和癌症治疗的研究。但mRNA在体内的不稳定性和低表达限制其在临床的应用,因此开发出能高效转染mRNA的递送载体十分关键。目前的基因递送载体分为病毒载体和非病毒载体。本文对现有递送mRNA的非病毒载体进行综述,并对mRNA疫苗及其非病毒载体的研究前景进行展望。     

人乳头瘤病毒58型治疗性复合DNA疫苗载体的构建

目的:构建和表达人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)58型相关宫颈癌治疗用PVAX1-HPV58mE6E7Fc-hIL12复合DNA疫苗载体。方法:将HPV58mE6E7融合基因片段插入真核表达载体pCI-Fc-GPI中,构建重组真核表达质粒pCI-sig-HPV58mE6E7-Fc-GPI。再将得到的sig-HPV58mE6E7-Fc-GPI片段插入新型疫苗载体PVAX1-IRES-hIL12中,构建PVAX1-HPV58mE6E7Fc-hIL12复合DNA疫苗载体,流式细胞术、免疫荧光及ELISA分别检测该疫苗载体的表达。结果:经限制性内切酶鉴定及测序分析证实PVAX1-HPV58mE6E7Fc-hIL12复合DNA疫苗载体构建成功。流式细胞术、免疫荧光及ELISA检测表明该疫苗载体中的融合抗原sig-HPV58mE6E7-Fc-GPI及分子佐剂人白介素12(hIL12)能够同时实现真核表达。结论:PVAX1-HPV58mE6E7Fc-hIL12复合DNA疫苗载体可作为治疗HPV58相关肿瘤及其癌前病变的候选疫苗载体。     

幽门螺杆菌基因工程疫苗的研究进展

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）感染是慢性活动性胃炎和消化性溃疡的主要病因，与胃腺癌、B细胞淋巴瘤的发生亦密切相关。世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）已将Hp列为Ⅰ类致癌因子。流行病学调查显示，全世界成年人口约50％携带该菌。现有的根除却的手段主要是联合应用抑酸剂及2或3种抗生素，但却感染的普遍性、耐药菌株的不断增加、药物价格的昂贵以及患者的低依从性等限制了抗菌疗法的成功使用。     

基因治疗中的核酸药物及非病毒递送载体的研究进展

基因治疗是针对基因异常相关疾病的终极治疗技术,各种具有不同机制的核酸药物的出现为基因治疗带来了更多的可能性。但是,由于存在体内稳定性差、难以高效进入靶细胞等问题,核酸药物需要载体的帮助而进入目标细胞并到达特定的胞内位置,因此,开发安全高效的核酸递送系统是基因治疗的基石。与病毒载体相比,非病毒载体具有更高的安全性,但转染效率较低。随着纳米技术的发展,非病毒载体的效率得到了显著的提升,进入临床研究的数量逐渐增多。本文简要介绍基因治疗中的核酸药物及其递送载体,对非病毒核酸药物递送技术的瓶颈及进展做综合评述。     

DNA 改组在病毒新型疫苗研究中的应用

DNA改组是一种全新的体外人工进化模式,它改变了传统的进化途径,大大加速了蛋白质的进化进程.该技术自1994年建立以来,在医药和酶工程等领域得到了广泛的应用.本文综述DNA改组在病毒新型疫苗及其相关领域的研究进展.介绍DNA改组的原理和在体外人工进化上的优势、病毒疫苗研究、病毒载体的改造等方面的研究进展,同时对DNA改组中面临的困难也进行了剖析.     

基于狂犬病病毒载体的基因工程疫苗研究进展

对HIV-1和HCV等重大传染性疾病传统疫苗研制的失败,让科学家们把目光转向开发新型疫苗研制策略。其中之一就是用减毒的重组病毒载体表达外源抗原来免疫,可以保护个体免受相应病原体的暴露威胁。一种新的手段就是从cDNA克隆拯救单股负链RNA病毒,这一技术为弹状病毒科成员用于疫苗载体和生物医学工具打开了一扇窗。     

EB病毒潜伏膜蛋白2 DNA疫苗的构建及其初步免疫效果观察

目的：以EB病毒潜伏膜蛋白2（latent membrane protein 2,LMP2)为靶基因,构建EBV－LMP2的侯选DNA疫苗,并初步探讨其在小鼠体内诱导特异性细胞毒方面的作用,为研制鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC)等EB病毒相关肿瘤的治疗性疫苗提供有益资料。方法：将EB病毒LMP2全cDNA片段克隆至含CMV早期启动子的真核表达载体pCDNAⅢ,构建CMV启动子EB病毒LMP2DNA疫苗,在体外将重组质粒转染COS细胞,以RT－PCR和间接免疫荧光法检测重组质粒在转染的COS细胞中的转录和表达,采用50μg,100μg,200μg3种质粒剂量进行初步的小鼠后可诱发机体产生会对LMP2蛋白的特异性体液免疫和细胞免疫,50μg,100μg,200μg 3种免疫剂量产生的抗体水平差异不大。在免疫接种6周后,重组质粒免疫的小鼠产生针对LMP2的特异性CTL均明显高于空载体免疫小鼠,3种剂量的CTL结果显示：在100μg,200μg免疫组,小鼠诱导产生的CTL水平要略高于50μg免疫组。结论：EB病毒重组质粒LMP2免疫小鼠可以诱发小鼠产生特异的体液和细胞免疫应答,这些结果为研制鼻咽癌DNA疫苗提供有益的资料。     

多肽作为非病毒转基因载体组件的研究进展

在转基因领域,非病毒转基因载体因为具有许多病毒载体无法比拟的优点而越来越受到重视。但是理想的非病毒转基因载体的构建需要一些功能多肽的参与。这些多肽作为转基因载体的组件,在骨架构建、靶向策略的实施、内体膜的破裂和载体的核转运方面发挥重要作用。就多肽在这些方面的进展作一综述。     

核酸疫苗的研究进展

核酸疫苗是由载体和编码病原体某种抗原的ｃＤＮＡｓ或ｍＲＮＡ构建而 被注入机体后不仅能表达蛋白，还能诱生应答。对其深入研究将有助于认识核酸疫苗在抗传染怀疾病方面的作用，并为其临床应用的可能性提供理论依据。     

甲病毒表达载体系统的研究进展

甲病毒载体是一种新型的载体系统。近年来 ,关于该载体系统的研究很多 ,尤其是在蛋白质的表达、结构与功能的研究以及疫苗的研制方面。本文仅就甲病毒载体的构建及其应用作一简单介绍。     

SARS病毒N蛋白的表达与DNA疫苗的构建

目的：在大肠杆菌中表达SARS冠状病毒核衣壳N蛋白，并构建其DNA疫苗。方法：构建含N基因的原核表达载体pQEN，并在大肠杆菌M15中表达N蛋白。采用NP亲和层析法纯化目的蛋白。将N基因克隆入真核表达载体pSecTagB中，构建真核重组质粒pSecN。以其免疫小鼠制备抗血清，并用ELISA法检测其与大肠杆菌中表达的重组N蛋白及天然全病毒N蛋白的反应性。结果：重组N蛋白能与DNA疫苗免疫的小鼠血清以及SARS患者血清发生特异性反应；SARS—CoV病毒颗粒也可与DNA疫苗免疫的小鼠血清发生特异性反应。结论：重组N蛋白保留了病毒的一些特异性抗原表位，可作为用ELISA法检测SARS—CoV的抗原。构建的DNA疫苗可在小鼠体内产生高效价的抗SARS病毒N蛋白的特异性抗体，从而为该疫苗的开发奠定了基础。     

丙型肝炎DNA疫苗研究进展

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒感染引起的一种重要的世界性传染病，目前尚无高效的特异性治疗方法，亟需寻求一种预防HCV感染的疫苗。HCV DNA疫苗是近年发展起来的新型疫苗之一，与传统的HCV蛋白质疫苗相比，具有多种优点。近年来，国内外学者纷纷构建HCV四个不同区段(核心区、包膜区、结构区及非结构区)的DNA疫苗，免疫动物后，部分已显示出保护性反应。本文主要介绍HCV DNA疫苗构建方面的进展及其保护性反应，并展望其发展前景。     

siRNA非病毒纳米载体研究进展

当前,小分子干扰RNA的递送方式主要包括病毒载体载送、化学修饰载送、显微注射载送、非病毒纳米载体载送。非病毒纳米载体载送与其它载送方式相比具有简便、安全、易被患者接受等优点,但由于siRNA易水解以及被细胞摄取能力较差等原因,细胞呈递效率普遍较低。因此,近年来旨在优化siRNA、增加其应用范围而对其进行修饰的研究越来越多。本文就近期siRNA非病毒纳米载体研究进行综述,为其临床应用提供理论依据。     

基因治疗中的非病毒载体

添加、修复或替换基因从而达到直接排除病因是基因治疗的目的，也是用于治疗可遗传和获得性疾病的治疗方法。它包括目的基因、载体和靶细胞三个方面，其中载体在整个转染过程中起着关键的作用。非病毒载体是该研究领域的热点之一，虽然转染效率不如病毒载体，但其无毒、无免疫反应、性质可调且制备方便。本文主要就非病毒载体的转染机理及优化策略作一综述。     

塞姆利基森林病毒翻译增强序列对HIV Gag DNA疫苗抗原表达和免疫原性的调节

目的 研究塞姆利基森林病毒（Semliki forest virus，SFV）衣壳蛋白5’翻译增强区对基于该病毒复制子的HIV Gag DNA疫苗抗原表达水平和免疫原性的影响：方法将SFV衣壳蛋白（capsid，C蛋白）基因的5’端102bp翻译增强区插入到SFT复制子DNA疫苗载体pCMV-Rep的SFV亚基因启动子下游，得到DNA疫苗载体pCMV-RepC。将删除ATG的HIV-1 gag基因插入pCMV-RepC，使gag编码区与翻详增强区融合，得到DNA疫苗质粒pCMV-RepC-gag。同时，构建携带未融合翻译增强序列的DNA疫苗质粒pCMV-Rep-gag。Western blot检测翻译增强序列对Gag表达水平的影响。用上述两种DNA疫苗分别免疫BALB／c雌性小鼠，ELISA检测Gag特片的抗体反应，ELISPOT和细胞内因子染色技术检测细胞免疫应答。结果衣壳蛋白5’翻译增强区增强了Gag表达水平，对体液免疫应答没有显著影响，但显著增强了特异性细胞免疫应答水平。结论SFVC蛋白翻译增强区能显著提高SFV复制子DNA疫苗的抗原表达和抗原特异性细胞免疫反心。     

病毒核酸疫苗的研究现状

核酸疫苗是指将含编码抗原蛋白基因序更的质粒载体，经肌肉注射或微弹轰击等方法导入体内，从而通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白，诱导机体免疫应答，达到防治病毒感染的目的。核酸疫苗具有以下优点１．可在体内长期稳定地表达抗原蛋白，表达的抗原蛋白其结构与天然构更为接近，抗原性强；２．不仅能诱导体液免疫应答，并且能诱导细胞免疫应答，３．与减毒活疫苗和基因工程疫苗相比，研制工艺简单，成本低，运输贮存方便，临床应     

丙型肝炎重组病毒载体疫苗的研究进展

丙型肝炎病毒（HCV）是诱发丙肝的病原体,人类感染HCV后容易导致人类慢性肝炎、肝硬化或肝癌。HCV包膜糖蛋白的高变异性和体外细胞培养模型的缺乏制约了丙肝有效疫苗的研制。重组病毒载体疫苗是一项有前景的丙肝实验性疫苗,它可针对HCV产生有效的体液免疫与细胞免疫,现已成为丙肝疫苗研究领域的热点之一。本研究将对丙型肝炎重组病毒载体疫苗的研究进展进行综述。