茶多酚对高糖所致人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成的影响

目的：探讨高糖对人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成的影响及茶多酚的干预作用。方法：应用放射免疫法检测高糖条件下体外培养的系膜细胞上清液中Ⅳ型胶原含量及茶多酚干预后其含量的改变；应用免疫细胞化学法检测高糖条件下系膜细胞内Ⅳ型胶原的表达以及茶多酚干预后的变化。结果：高糖可增加系膜细胞上清液及细胞内N型胶原的含量；茶多酚可抑制高糖条件下上清液中及细胞内Ⅳ型胶原的增加。结论：高糖可导致人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成增加，而茶多酚可有效干预此过程。     

茶多酚对高糖所致人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成的影响

目的 :探讨高糖对人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成的影响及茶多酚的干预作用。方法 :应用放射免疫法检测高糖条件下体外培养的系膜细胞上清液中Ⅳ型胶原含量及茶多酚干预后其含量的改变 ;应用免疫细胞化学法检测高糖条件下系膜细胞内Ⅳ型胶原的表达以及茶多酚干预后的变化。结果 :高糖可增加系膜细胞上清液及细胞内Ⅳ型胶原的含量 ;茶多酚可抑制高糖条件下上清液中及细胞内Ⅳ型胶原的增加。结论 :高糖可导致人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成增加 ,而茶多酚可有效干预此过程。     

茶多酚对高糖所致人肾小球系膜细胞活性氧产生的影响

目的：探讨高糖对人肾小球系膜细胞活性氧产生的影响以及茶多酚对其的干预作用。方法：应用比色法检测高糖作用后培养系膜细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—PX)的活力和丙二醛(MDA)、超氧阴离子自由基(O2^-)的水平，以及加入茶多酚后各指标的改变。结果：高糖可降低系膜细胞培养上清液中SOD和GSH-PC的活力，增加MDA和O2^-的含量；茶多酚可提高上清液中SOD和GSH—PX的活力，降低MDA和O2^-的含量。结论：高糖可导致人肾小球系膜细胞活性氧产生增多，而茶多酚可进行有效干预。     

高糖环境下肾小球系膜细胞和内皮细胞相互作用对活性氧产生的影响以及茶多酚的干预作用

目的 :探讨在高糖环境下肾小球系膜细胞与内皮细胞相互作用对活性氧产生的影响和茶多酚的干预作用。方法 :系膜细胞和内皮细胞单独分别培养和共同培养 ,分正常对照组、高糖组及茶多酚干预组 ,培养 0、12、3 6h后 ,用分光光度法检测培养液中丙二醛 (MDA)含量及超氧化物歧化酶 (SOD)活性。结果 :高糖共同培养时SOD活性比两者分别单独培养时更低(P <0 .0 1) ;共同培养时茶多酚干预组的SOD活性显著高于高糖组 (P <0 .0 1)。高糖共同培养时MDA含量较两种细胞单独培养明显增高 ,高于两种细胞单独培养的总和 (P <0 .0 1) ;共同培养时茶多酚干预组MDA含量低于高糖组 (P <0 .0 1)。结论 :( 1)高糖环境下 ,系膜细胞和内皮细胞存在相互作用 ,这种作用能促进肾细胞活性氧的产生 ;( 2 )茶多酚通过干预活性氧的产生影响细胞间相互作用     

辛伐他汀对高糖培养肾小球系膜细胞增殖和促基质蛋白分泌的影响

目的：观察他汀类药物辛伐他汀和血管紧张素转换酶抑制剂西拉普利对体外培养系膜细胞增殖和基质蛋白分泌的影响。方法：体外培养人胎肾小球系膜细胞，给予高糖，辛伐他汀，西拉普利干预，观察不同刺激时间，不同刺激浓度及单用和联合用药对系膜细胞增殖以及细胞上清液中转化生长因子－β1（TGF－β1）、纤维连接蛋白、层黏连蛋白和Ⅳ型胶原浓度的影响。结果：高糖环境能够促进体外培养系膜细胞的增殖，增加细胞上清液中TGF－β1，纤维连接蛋白，层黏连蛋白和Ⅳ型胶原含量，单用或联用辛伐他汀和西拉普利均可抑制高糖的上述作用，而且联合用药作用更强，结论：辛伐他汀和西拉普利均可抑制高糖刺激对系膜细胞促增殖和促基质蛋白分泌的作用，二者联用的作用更强。     

洛伐他汀对人肾小球系膜细胞胰岛素样生长因子-1表达的影响

目的：观察HMG-CoA还原酶抑制剂洛伐他汀对人肾小球系膜细胞胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达及纤维连接蛋白、层连蛋白和Ⅳ型胶原分泌的影响。方法：分别于体外低糖(5．6mmol／L)和高糖(30mmol／L)环境中培养人胎肾小球系膜细胞．用RT-PCR法检测系膜细胞IGF-1 mRNA表达水平,用酶免和放免法测定细胞上清液中纤维连接蛋白、层黏连蛋白和Ⅳ型胶原含量。分别在培养液中加入洛伐他汀或／和西拉普利,观察不同刺激时间和药物浓度对上述基质蛋白指标的影响。选择刺激时间48h和刺激浓度10μmol／L,观察单用或联用洛伐他汀和西拉普利对系膜细胞IGF-1 mRNA表达的影响。结果：高糖环境下肾小球系膜细胞过度增殖,细胞上清液中纤维连接蛋白、层黏连蛋白和Ⅳ型胶原含量增加,IGF-1 mRNA表达明显增加。洛伐他汀和西拉普利均可明显抑制系膜细胞增殖,降低细胞上清液中基质蛋白浓度,IGF-1 mRNA表达亦显著下降。洛伐他汀对IGF-1 mRNA表达的抑制作用略强于西拉普利,但两者联用未显示更强的抑制效果。结论：高糖可刺激人肾小球系膜细胞IGF-1高表达,并增加基质蛋白的分泌,洛伐他汀与西拉普利类似,均可一定程度逆转上述现象,提示他汀类药物可能有益于早期糖尿病肾病的防治。     

L158,809和西拉普利对系膜细胞基质蛋白分泌的影响

目的：观察并比较新型血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)-L158，809和血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)～西拉普利对体外培养人肾小球系膜细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤维连接蛋白、层黏连蛋白和Ⅳ型胶原分泌的影响。方法：体外培养人胎肾小球系膜细胞，首先观察不同葡萄糖浓度(5．6mmol和30mmol)和药物浓度(1μmol、10μmol、100μmol和500μmol)以及不同刺激时间(24h、48h和72h)对系膜细胞增殖的影响；然后将系膜细胞分为低糖(葡萄糖5．6mmol)对照组、高糖(葡萄糖30mmol)对照组、L158,809组(葡萄糖30mmol L158，809 10μmol)和西拉普利组(葡萄糖30mmol 西拉普利10μmol)，48h后测定系膜细胞上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白、层黏连蛋白和Ⅳ型胶原含量(酶免法和放免法)。结果：与低糖对照组相比，高糖对照组系膜细胞增殖过度，细胞上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白、层黏连蛋白和Ⅳ型胶原含量明显升高；而西拉普利组和L158，809组系膜细胞增殖和细胞上清液中TGF-β1、基质蛋白含量均明显低于高糖对照组。结论：高糖可刺激体外培养系膜细胞过度增殖，促进其对TGF-β1和多种基质蛋白的分泌，L158，809和西拉普利均可明显抑制高糖这种促增殖和促基质蛋白分泌的作用。     

缓激肽对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响

目的观察缓激肽(BK)对高糖浓度下肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响。方法采用体外培养的大鼠肾小球系膜细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测系膜细胞增殖,酶联免疫(ELISA)法测细胞外基质分泌。结果高糖(30.0 mmol/L)环境可促进肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的分泌(P<0.05)。BK、ACEI(贝那普利)均抑制高糖环境下肾小球系膜细胞的增殖和Ⅳ型胶原的分泌(P<0.05)。结论高糖可促使肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的分泌。ACEI抑制肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的作用机制可能与减少BK的降解有关。     

非诺贝特对高糖培养肾小球系膜细胞胞外基质产生及降解影响

目的：探讨非诺贝特对糖尿病肾病的保护机制。方法：大鼠肾小球系膜细胞分别培养在正常糖浓度（5.5 mmol.L-1,对照组）、高糖浓度（25 mmol.L-1,高糖组）及25 mmol.L-1葡萄糖＋非诺贝特100μmol.L-1（非诺贝特组）。CCK-8测定系膜细胞增殖;ELISA法检测培养上清液Ⅳ型胶原（Col-Ⅳ）、纤维连接蛋白（FN）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）;明胶酶谱法检测培养上清基质金属蛋白酶-2,9（MMP-2,9）的活性。结果：高糖组系膜细胞较对照组出现增殖增加,合成基质蛋白Col-Ⅳ,FN增多,MMP-2及MMP-9活性下降,TIMP-1含量增加,TGF-β1分泌增加。与高糖组比较非诺贝特干预后能完全或部分逆转上述变化。结论：非诺贝特能抑制高糖培养的系膜细胞增殖,减少胞外基质合成,增加胞外基质的降解。     

普伐他汀对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖和氧化应激的影响

目的:探讨普伐他汀对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖和氧化应激的影响.方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞株,分对照组、高糖组和普伐他汀组,采用CCK-8细胞计数法测定系膜细胞增殖,比色法检测细胞培养液中的超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量的变化.结果:与对照组比较,高糖组出现系膜细胞增殖增加,上清液中SOD活性、GSH含量下降,MDA含量增加;与高糖组相比,普伐他汀组系膜细胞增殖减少,GSH含量、SOD活性上调,MDA含量下降.结论:普伐他汀能抑制高糖环境下的系膜细胞增殖,并显著减少高糖诱导的氧化应激水平.     

高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞中NO的变化及其对细胞外基质的影响

目的 探讨高糖培养的肾小球系膜细胞中一氧化氮（NO）合成的变化,以及上述变化对细胞外基质的影响.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,按干预方法分为正常组（NG组,5.56 mmol·L-1 DMEM）,高糖组（HG组,25 mmol·L-1 DMEM）、一氧化氮供体组（SNP组,5.56 mmol·L-1 DMEM＋100 μmol·L-1 SNP）、NO清除剂组（C-PTIO 组,25 mmol·L-1 DMEM＋200 μmol·L-1 C-PTIO）,以Griess比色法测定培养上清中NO水平;用ELISA法测定培养上清中Ⅳ型胶原、层黏蛋白含量.结果 高糖培养条件下上清中NO增多（P〈0.05）,Ⅳ型胶原、层黏蛋白含量增加（P〈0.01）,应用C-PTIO可显著降低上清中NO的含量,Ⅳ型胶原、层黏蛋白的含量也降低.结论 高糖可诱导大鼠肾小球系膜细胞产生NO,异常增多的NO又可导致系膜细胞中Ⅳ型胶原、层黏蛋白的积聚.     

胰高血糖素样肽-1对高糖培养肾小球系膜细胞氧化应激的影响

目的探讨胰高血糖素样肽-1(glucagon like peptide-1,GLP-1)对高糖所致大鼠肾小球系膜细胞氧化应激的影响。方法肾小球系膜细胞按下列分组培养:正常对照组(5.5mmol/L),高糖组(25mmol/L),高糖+GLP-1(3nmol/L)组,高糖+GLP-1(10nmol/L)组,高糖+GLP-1(30nmol/L)组,高糖+GLP-1(100nmol/L)组,分别培养24h后,采用CCK8试剂盒检测细胞增殖率,流式细胞仪法检测细胞活性氧(ROS),酶标仪法检测细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量及还原型谷胱甘肽(GSH)含量。结果高糖培养组肾小球系膜细胞增殖,ROS生成增多,SOD及GSH活性下降,MDA含量升高,GLP-1(3nmol/L)干预对上述改变无影响,10、30、100nmol/L GLP-1干预均可拮抗高糖培养时系膜细胞的上述改变,其中100nmol/L GLP-1干预效果最为显著。结论 GLP-1对高糖所致肾小球系膜细胞的氧化应激反应呈现浓度依赖性的抑制作用。     

浅谈高糖高脂环境下肾小球内皮细胞与系膜细胞间相互作用对细胞外基质产生的影响

目的:探讨高糖高脂条件下肾小球内皮细胞与系膜细胞间相互作用对细胞外基质(ECM)产生的影响。方法:建立内皮细胞与系膜细胞共培养模型,实验分为正常对照组、甘露醇组、高糖组、高脂组、高糖高脂组及阻断剂干预组,分别培养12,24,48h后,ELISA法测定细胞上清液Ⅳ型胶原(ColⅣ)、纤维连接蛋白(Fn)含量。结果:(1)高糖高脂培养条件下,共培养组细胞上清液ColⅣ、Fn的含量较单培养组明显增高(P<0.05);(2)氯沙坦可抑制高糖高脂引起的Fn和ColⅣ升高(P<0.05);结论:(1)高糖高脂环境下,内皮细胞和系膜细胞间存在相互作用,这种作用能促进ECM-ColⅣ、Fn的产生;(2)氯沙坦能通过抑制ECM的产生影响细胞间的相互作用。     

高糖环境及雷帕霉素干预对肾小球足细胞Ⅳ型胶原和MMP-9表达的影响

目的探讨高糖培养环境及雷帕霉素干预对肾小球足细胞Ⅳ型胶原和基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的影响。方法体外培养的小鼠肾小球足细胞分为空白对照组、高渗对照组、高糖组和高糖＋雷帕霉素干预组。Real-time PCR和Western blotting检测各组肾小球足细胞Ⅳ型胶原α3链（COL4A3）、α5链（COL4A5）mRNA及MMP-9mRNA和蛋白的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中Ⅳ型胶原的含量。结果与对照组比较,高糖组足细胞COL4A3、COL4A5mRNA表达及培养上清液中Ⅳ型胶原含量均升高（P〈0.05）,而足细胞MMP-9mRNA和蛋白表达均降低（P〈0.05）。与高糖组比较,雷帕霉素干预组足细胞COL4A3、COL4A5mRNA表达及培养上清液中Ⅳ型胶原含量均降低（P〈0.05）,足细胞MMP-9mRNA和蛋白表达均升高（P〈0.05）。结论雷帕霉素对高糖环境中足细胞Ⅳ型胶原和MMP-9表达异常具有逆转作用。     

高糖环境及雷帕霉素干预对肾小球足细胞Ⅳ型胶原和MMP-9表达的影响

目的 探讨高糖培养环境及雷帕霉素干预对肾小球足细胞Ⅳ型胶原和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响.方法 体外培养的小鼠肾小球足细胞分为空白对照组、高渗对照组、高糖组和高糖+雷帕霉素干预组.Real-time PCR和Western blotting检测各组肾小球足细胞Ⅳ型胶原α3链(COL4A3)、α5链(COL4A5)mRNA及MMP-9 mRNA和蛋白的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中Ⅳ型胶原的含量.结果 与对照组比较,高糖组足细胞COL4A3、COL4A5 mRNA表达及培养上清液中Ⅳ型胶原含量均升高(P<0.05),而足细胞MMP-9 mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05).与高糖组比较,雷帕霉素干预组足细胞COL4A3、COL4A5 mRNA表达及培养上清液中Ⅳ型胶原含量均降低(P<0.05),足细胞MMP-9 mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05).结论 雷帕霉素对高糖环境中足细胞Ⅳ型胶原和MMP-9表达异常具有逆转作用.     

氯沙坦对高糖培养的人系膜细胞血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的:探讨氯沙坦对高糖培养的系膜细胞产生活性氧和血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA表达的影响。方法:体外培养人系膜细胞,用高糖、氯沙坦干预不同时间后,应用比色法检测培养细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活力,丙二醛(MDA)的水平。用RT鄄PCR法测定血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA表达的影响。结果:与正常对照组相比,高糖组SOD、CAT的活力明显降低,而MDA含量明显升高,VEGFmRNA表达升高。与高糖组相比,高糖加氯沙坦组的SOD、CAT的活力升高,MDA水平下降,VEGFmRNA表达上调。结论:氯沙坦能抑制高糖所致细胞活性氧的产生和VEGF的表达,从而抑制细胞通透性升高,降低蛋白尿,发挥其肾保护作用。     

缬沙坦对高糖培养人系膜细胞的调节作用

目的:探讨缬沙坦在糖尿病肾病中的保护作用及其机制。方法:检测缬沙坦对细胞增殖的影响,并用RT-PCR方法测定药物剌激对体外培养人系膜细胞肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)、转化生长因子β-1(TGF-β1)mRNA表达的影响,同时检测细胞上清液AM、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、TGF-β1、层粘连蛋白(LN)和Ⅳ型胶原含量。结果:沙坦对高糖培养的人肾小球系膜细胞中TGF-β1,AngⅡ,AM、LN和Ⅳ型胶原合成分泌增多的变化具有明显的抑制作用,同时对于系膜细胞增殖过度亦有抑制作用,各组值与高糖对照组比较均差异有显著性(P<0.01)。结论:缬沙坦可通过抑制AngⅡ、TGF-β1的表达、分泌,继而抑制肾小球系膜细胞的增殖过度,并降低基质蛋白的生成和沉积,发挥其肾脏保护作用的。在TGF-β1的表达和分泌下降后,AM的表达和分泌也随之下降。     

川芎嗪对高糖环境大鼠肾小球系膜细胞增殖及其细胞外基质含量的影响

目的：探讨川芎嗪对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞（MCs）增殖及其细胞外基质含量的影响。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞株,分对照组、高糖组、TMP组,分别培养12h、24h、48h,CASY细胞计数仪计数细胞存活率;以CCK-8法检测细胞增殖;以ELISA法检测细胞上清液细胞外基质ColⅣ及FN的含量。结果：各TMP浓度组之间存活率无统计学差异（P〉0.05）;与对照组比较,高糖下培养24h、48hMCs增殖显著增快（P〈0.01）,分泌的ColⅣ及FN含量增多（P〈0.05）;与高糖组比较,TMP各组MCs增殖显著减慢（P〈0.01）,分泌ColⅣ及FN减少（P〈0.01或P〈0.05）。结论：川芎嗪可以有效抑制高糖的促增殖作用并能减少系膜细胞外基质的增加。     

霉酚酸酯对高糖所致大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的：观察霉酚酸酯(mycophenolate mofetil MMF)对高糖环境大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cells MCs)增殖及Ⅳ型胶原的影响。方法：以30?mmol/L葡萄糖刺激体外培养的大鼠MCs增殖,加入不同浓度的MMF,采用MTT比色法观察6、12、24、48?h系膜细胞的增殖情况;放射免疫法测定细胞上清液中Ⅳ型胶原的含量。结果：葡萄糖对系膜细胞的增殖效应呈浓度和时间依赖性,反应最佳浓度为30?mmol/L,最佳时点为24?h。MMF有抑制高糖所致MCs增殖、减少细胞外基质的作用,并呈剂量时间依赖性。结论：高糖在一定浓度和一定时段内有刺激大鼠系膜细胞增殖的效应,MMF对高糖所致MCs增殖具有抑制作用,且随MMF剂量增大,作用时间的延长,抑制作用增强。     

L158,809和西拉普利对体外培养系膜细胞TGF-β1表达和细胞外基质蛋白分泌的影响

目的：观察血管紧张素受体拮抗剂(ARBs)L158，809和血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂西拉普利对体外培养人肾小球系膜细胞转化生成因子(TGF—β1)表达和纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ型胶原分泌的影响。方法：分别在不同葡萄糖浓度(5.6mmol／L和30mmol／L)和药物浓度(1、10、100和500μmol／L)下体外培养人肾小球系膜细胞，分别于24、48和72h后测定细胞增殖。然后将系膜细胞分为低糖(5．6mmol／L)对照组(LG)、高糖(30mmol／L)对照组(HG)、L158，809(10μmol／L)组和西拉普利(10μmmol／L)组，48h后，分别用RT-PCR法测定TGF-β1表达，ELISA和放射免疫法测定细胞上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ胶原浓度。结果：与低糖对照组相比，高糖对照组系膜细胞过度增殖，细胞上清液中TGF-βl、纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ胶原浓度明显升高，TGF-βlmRNA表达也显升高；而L158，809组和西拉普利组TGF-β1和细胞外基质(ECM)蛋白水平明显低于高糖对照组，且TGF-β1mRNA水平亦表达明显降低。结论：高糖可刺激体外培养系膜细胞过度增殖，TGF-β1表达增高，ECM蛋白分泌明显增加，而L158，809和西拉普利均可抑制高糖环境下上述现象。