茶多酚对高糖所致人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成的影响

目的：探讨高糖对人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成的影响及茶多酚的干预作用。方法：应用放射免疫法检测高糖条件下体外培养的系膜细胞上清液中Ⅳ型胶原含量及茶多酚干预后其含量的改变；应用免疫细胞化学法检测高糖条件下系膜细胞内Ⅳ型胶原的表达以及茶多酚干预后的变化。结果：高糖可增加系膜细胞上清液及细胞内N型胶原的含量；茶多酚可抑制高糖条件下上清液中及细胞内Ⅳ型胶原的增加。结论：高糖可导致人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成增加，而茶多酚可有效干预此过程。     

茶多酚对高糖所致人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成的影响

目的 :探讨高糖对人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成的影响及茶多酚的干预作用。方法 :应用放射免疫法检测高糖条件下体外培养的系膜细胞上清液中Ⅳ型胶原含量及茶多酚干预后其含量的改变 ;应用免疫细胞化学法检测高糖条件下系膜细胞内Ⅳ型胶原的表达以及茶多酚干预后的变化。结果 :高糖可增加系膜细胞上清液及细胞内Ⅳ型胶原的含量 ;茶多酚可抑制高糖条件下上清液中及细胞内Ⅳ型胶原的增加。结论 :高糖可导致人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成增加 ,而茶多酚可有效干预此过程。     

茶多酚对高糖所致人肾小球系膜细胞活性氧产生的影响

目的：探讨高糖对人肾小球系膜细胞活性氧产生的影响以及茶多酚对其的干预作用。方法：应用比色法检测高糖作用后培养系膜细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—PX)的活力和丙二醛(MDA)、超氧阴离子自由基(O2^-)的水平，以及加入茶多酚后各指标的改变。结果：高糖可降低系膜细胞培养上清液中SOD和GSH-PC的活力，增加MDA和O2^-的含量；茶多酚可提高上清液中SOD和GSH—PX的活力，降低MDA和O2^-的含量。结论：高糖可导致人肾小球系膜细胞活性氧产生增多，而茶多酚可进行有效干预。     

高糖环境下肾小球系膜细胞和内皮细胞相互作用对活性氧产生的影响以及茶多酚的干预作用

目的 :探讨在高糖环境下肾小球系膜细胞与内皮细胞相互作用对活性氧产生的影响和茶多酚的干预作用。方法 :系膜细胞和内皮细胞单独分别培养和共同培养 ,分正常对照组、高糖组及茶多酚干预组 ,培养 0、12、3 6h后 ,用分光光度法检测培养液中丙二醛 (MDA)含量及超氧化物歧化酶 (SOD)活性。结果 :高糖共同培养时SOD活性比两者分别单独培养时更低(P <0 .0 1) ;共同培养时茶多酚干预组的SOD活性显著高于高糖组 (P <0 .0 1)。高糖共同培养时MDA含量较两种细胞单独培养明显增高 ,高于两种细胞单独培养的总和 (P <0 .0 1) ;共同培养时茶多酚干预组MDA含量低于高糖组 (P <0 .0 1)。结论 :( 1)高糖环境下 ,系膜细胞和内皮细胞存在相互作用 ,这种作用能促进肾细胞活性氧的产生 ;( 2 )茶多酚通过干预活性氧的产生影响细胞间相互作用     

高糖对人肾小球系膜细胞MAPK活性的影响

目的研究高糖对人肾小球系膜细胞丝裂原蛋白激酶(MAPK)活性的影响,探讨其在糖尿病肾病发病中的作用.方法采用人肾小球系膜细胞进行体外培养,按培养液中葡萄糖浓度分为对照组(含11mmol*L-1葡萄糖)、高糖组(含30mmol*L-1葡萄糖)、MAPK抑制剂组(含25μmol*L-1PD98059加30mmol*L-1葡萄糖)及甘露醇组(含20mmol*L-1甘露醇),以32P标记的髓磷脂碱性蛋白为底物,用同位素示踪技术测定培养细胞的MAPK活性.结果高糖组MAPK活性明显高于其它各组;加入MAPK抑制剂后,其活性明显降低,同时细胞的增殖受到抑制.结论高糖可增加人肾小球系膜细胞MAPK活性,且可能与渗透压引起的应激刺激相关.     

川芎嗪对转化生长因子β1诱导的人肾小球系膜细胞增殖及Ⅳ型胶原分泌的影响

目的观察川芎嗪对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肾小球系膜细胞增殖及Ⅳ型胶原分泌的影响。方法采用TGF-β1诱导肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原表达以模拟肾脏疾病中的细胞纤维化,实验分为5组:空白组,对照组,川芎嗪高、中、低剂量(终浓度分别为100、30、10μg/ml)组。MTT法检测肾小球系膜细胞的增殖抑制率,ELISA法检测肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原的表达。结果川芎嗪高剂量(100μg/ml)能够抑制TGF-β1诱导的肾小球系膜细胞增殖(P<0.01);川芎嗪可抑制TGF-β1诱导的肾小球系膜细胞中Ⅳ型胶原的表达,以高剂量组(100μg/ml)效果最为显著(P<0.01)。结论川芎嗪可抑制TGF-β1诱导的肾小球系膜细胞增殖及Ⅳ型胶原分泌。     

尿Ⅳ型胶原检测在系膜增殖性肾小球疾病中的应用

目的评价双抗体夹心ELISA法检测尿Ⅳ型胶原(Ⅳ-c)对肾脏疾病患者系膜细胞增殖、细胞外基质分泌和肾小球硬化的意义.方法比较分析该方法测定15名正常人和51名肾病患者的尿Ⅳ-c.结果双抗体夹心ELISA法的灵敏度为1.2ng/ml;检测范围3.2~200ng/ml.原发性系膜增殖性肾小球肾炎(MsPGN)组和非MsPGN组尿Ⅳ-c、尿白蛋白(Alb)显著高于正常对照组(P<0.01),MsPGN组尿Ⅳ-c显著高于非MsPGN组(P<0.01).MsPGN、糖尿病肾病和IgA肾病患者的尿Ⅳ-c明显高于正常对照和其它肾病患者(P<0.05,P<0.01).结论双抗体夹心ELISA法检测尿Ⅳ-c简便、灵敏.     

IFN-γ对大鼠肾小球系膜细胞Smad7及Ⅳ型胶原表达的影响

目的为阐明IFN-γ抗纤维化机制及治疗器官纤维化提供理论和实验依据。方法终浓度为10ng/mL的IFN-γ作用MsC不同时间,又分别采用RT-PCR与Western blot法检测各时间点MsCSmad7与Ⅳ型胶原mRNA及蛋白表达情况。结果IFN-γ可显著增加MsC Smad7 mRNA及其蛋白的表达,而明显下调MsC ColⅣmRNA及其蛋白的表达。经Spearman等级相关检验显示Smad7蛋白与ColⅣ蛋白间的变化存在高度负相关性。结论IFN-γ可能通过上调Smad7而减少MsC ColⅣ的生成,从而抑制肾小球硬化进展。     

肌肽对高糖作用下肾小球系膜细胞的影响

目的探讨肌肽对体外高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞MCs生长的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cells,MCs）,分为正常对照组（NG）、高糖组（HG）、高渗甘露醇组（HM）、正常糖加20 mmol/L肌肽组（NG＋C20）和高糖加20 mmol/L肌肽组（HG＋C20）5组。采用MTT法测定肾小球系膜细胞24 h、48 h的增殖情况。结果在24 h、48 h时间段,在与正常对照组相比高糖组出现明显的增殖现象（P〈0.01或P〈0.05）;高糖加20 mmol/L肌肽组与高糖组相比,具有显著的抑制作用（P〈0.01）。结论肌肽通过抑制高糖条件下肾小球系膜细胞的增殖来对糖尿病肾病起到保护作用,为糖尿病肾病的防治提供新途径。     

氟伐他汀对系膜细胞增殖及Ⅳ型胶原表达的影响

目的:观察氟伐他汀(Flu)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导下的大鼠肾小球系膜细胞(MCs)增殖和Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)表达的影响,探讨其肾脏保护作用的可能机制.方法:选择处于对数生长期的MCs,分成对照组,TGF-β1组,TGF-β1加不同浓度Flu诱导组,采用MTT法检测MCs增殖,ELISA法检测Col Ⅳ表达.结果:在TGF-β1诱导下,MCs的增殖随着Flu浓度的增加而逐渐下降,1 μmol/LFlu即可明显抑制MCs增殖,P<0.01.TGF-β1诱导下的MCs Col Ⅳ的表达随着Flu浓度的增加而逐渐下降,0.1 μmol/L Flu即能明显抑制Col Ⅳ蛋白的表达,P<0.01.结论:氟伐他汀可呈剂量依赖性地抑制TGF-β1诱导下MCs的增殖及MCs Col Ⅳ蛋内的表达,从而发挥其肾脏保护作用.     

高糖浓度对人肾小球系膜细胞的作用

目的 模拟相血糖控制不佳出现的糖浓度波动,研究波动性细胞外高糖浓度（ＦＥＨＧ）对肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）增殖及其纤维连接蛋白合成的影响。方法 利用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）比色法和竞争抑制ＥＬＩＳＡ法动态观察不同葡萄糖浓度及波动性高糖浓度对ＭｓＣ增殖和ＦＮ合成的作用。结果 高糖浓度抑制ＭｓＣ增殖,此抑制作用和糖浓度成正相关,同时刺激ＭｓＣ的ＦＮ合成增加;     

咪唑立宾对急性肾炎大鼠肾小球系膜区Ⅳ型胶原的影响

目的探讨咪唑立宾对急性Thy1肾炎大鼠肾小球系膜区Ⅳ型胶原(COL4)的影响。方法将81只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和咪唑立宾组,每组27只。第5天,比较3组大鼠24 h尿蛋白定量,采用PAS染色评估3组大鼠肾小球系膜区细胞外基质(ECM)增殖情况,采用PCR检测3组大鼠肾小球系膜区COL4 mRNA表达水平,采用Western blot检测3组大鼠肾小球系膜区COL4蛋白表达水平。结果对照组大鼠平均24 h尿蛋白定量、肾小球系膜区基质与肾小球面积比值(ECM/GA)、系膜区COL4 mRNA表达水平、系膜区COL4蛋白表达水平均低于模型组和咪唑立宾组,咪唑立宾组以上各指标均低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论咪唑立宾抑制系膜增生的机制可能是下调COL4 mRNA及蛋白的表达。     

环孢素A联合雷公藤单体T4对人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合？…

目的 探讨环孢素Ａ（ＣｓＡ）、雷公藤单体Ｔ４单独鄞艇对肾小球系膜基质合成的影响及可能机制。方法用ＥＬＩＳＡ法测定人系膜细胞培养上清Ⅳ型胶原含量用ＲＴ－ＰＣＲ法测定人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原α１ｍＲＮＡ、转化生长因子β１ＴＧＦβ１）ｍＲＮＡ的表达。结果 ＣｓＡ可双向扁队系膜细胞Ⅳ型胶原的合成,ＣｓＡ１．０μｇ／ｍＬ为促进作用,ＣｓＡ０．０１￣０．１μｇ／ｍｌ为抑制效应。Ｔ４剂量依赖性促进Ⅳ型胶原产生。     

Resveratrol对高糖所致大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1表达的影响

目的:探讨高糖对大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1表达的影响及Resveratrol的干预作用.方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞.①分为正常对照组(NC组,匍萄糖浓度5.6 mmol/L)、高糖组(HG组,葡萄糖浓度30 mmol/L),分别观察24、48、72 h;②分为NC组、HC组、Resveratrol组(Res组,葡萄糖浓度5.6 mmol/L+Resvemtrol 20 μmol/L)和高糖+Rcsvcratrol组(HG+Res 组,葡萄糖浓度30 mmol/L+Resveratrol浓度分别为5、10、15、20 μmol/L),各组细胞分別培养48 h.用半定量RT-PCR和Western blotting法检测细胞内TGF-β1 mRNA和蛋白表达变化.结果:①与NC组相比,HG刺激后大鼠系膜细胞TGF-β1 mRNA和蛋白表达明显增加,差异均有显著性,P值均<0.01;②与HC组相比,HG+Resveratrol干预后,大鼠系膜细胞TGF-β1 mRNA和蛋白表达呈浓度依赖性减少,差异均有显著性(P值分别为<0.05,<0.01).Res组和NC组之间TGF-β1 mRNA和蛋白表达的差异无显著性(P>0.05).结论:高糖能上调大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1 mRNA和蛋白表达,Resveratrol可能通过抑制高糖引起的系膜细胞TGF-β1高表达而在糖尿病肾病中起治疗作用.     

高糖对肾小球系膜细胞p38MAPK表达的影响

糖尿病肾病（DN）是糖尿病患者的主要死因之一。肾小球系膜细胞（GMC）是肾脏合成分泌细胞外基质蛋白如纤连蛋白、胶原等的主要细胞，也是免疫性和非免疫性病因（包括糖尿病）损伤的靶目标。丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路是细胞内重要的信号级联反应系统，细胞运用这一系统将细胞外的刺激反应到胞核，介导细胞的反应，参与多种细胞生理功能的调节。在糖尿病患者的体内存在的多种代谢紊乱可活化p38MAPK信号通路，从而导致了DN的发生和发展。[第一段]     

波动性高糖对大鼠肾小球系膜细胞氧化应激的影响

目的：对比研究波动性与稳定性高糖对肾小球系膜细胞（GMC）氧化应激的影响。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞株，分正常糖对照组（5．5mmol／L，NG）、稳定高糖组（25mmol／L。HG）、波动性高糖组（5．5mmol／L或25mmol／L，每24h交替，IHG），培养GMC6d，分别以二氢二氯荧光素（DCFH—DA）标记细胞，通过流式细胞仪检测细胞内二氯荧光黄（DCF）的荧光强度而测得细胞内ROS水平，比色法检测细胞上清液中的总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性和谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量的变化。结果：与NG组相比，HG组与IHG组细胞内DCF平均荧光强度均显著升高（均P〈0．01），总SOD活力均下降（均P〈0．01），GSH含量均下降（P〈0．05，P〈0．01），MDA均升高（P〈0．05，P〈0．01）。与HG组相比，IHG组细胞内DCF平均荧光强度显著升高（P〈0．01），总SOD活力下降（P〈0．01），GSH含量下降（P〈0．01），MDA升高（P〈0．05）。结论：波动性高糖较稳定性高糖可能对GMC有更强的氧化损伤效应。     

水蛭及水蛭素对大鼠系膜细胞外纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原影响的比较研究

目的 探讨水蛭、水蛭素对大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)外纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原含量的影响.方法 应用ELESA法测定培养细胞上清液纤维连接蛋白(FN)和Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)的含量.结果 水蛭和水蛭素均可降低FN和Col-Ⅳ的含量,但水蛭的作用弱于水蛭素(P<0.01).结论 水蛭素在抑制体外培养的大鼠GMCs产生FN和Col-Ⅳ的作用方面强于水蛭.     

高糖对大鼠肾系膜细胞IкB-α表达影响的泛素化研究

目的 探讨高糖对大鼠肾小球系膜细胞IkB-α表达的影响及其可能的作用途径.方法 将大鼠HBZY-1肾小球系膜细胞进行体外培养,设立正常对照组(5.6 mmol/L葡萄糖)、高糖组(包括10、20和30mmol/L葡萄糖)、甘露醇组、30 mmol/L高糖加特异性泛素蛋白酶体阻断剂MG132组及5.6 mmol/L葡萄糖加MG132组,作用48h,用Western Blotting法检测各组IkB-α蛋白的表达,实时定量PCR法检测各高糖组IkB-α及泛素mRNA的表达.结果 各高糖组IkB-α蛋白的表达下降(P＜0.05),具有浓度依赖效应;各高糖组IkB-α mKNA的表达差异无统计学意义(P＞0.05);各高糖组泛素mRNA的表达增加(P＜0.05);30mmol/L高糖加MG132组较30mmol/L高糖组IkB-α蛋白的表达下降被明显逆转(P＜0.0).结论 高糖可增加大鼠肾系膜细胞泛素表达,上调泛素蛋白酶体系统活性,增加IkB-α蛋白泛素化降解.     

高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞中NO的变化及其对细胞外基质的影响

目的 探讨高糖培养的肾小球系膜细胞中一氧化氮（NO）合成的变化,以及上述变化对细胞外基质的影响.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,按干预方法分为正常组（NG组,5.56 mmol·L-1 DMEM）,高糖组（HG组,25 mmol·L-1 DMEM）、一氧化氮供体组（SNP组,5.56 mmol·L-1 DMEM＋100 μmol·L-1 SNP）、NO清除剂组（C-PTIO 组,25 mmol·L-1 DMEM＋200 μmol·L-1 C-PTIO）,以Griess比色法测定培养上清中NO水平;用ELISA法测定培养上清中Ⅳ型胶原、层黏蛋白含量.结果 高糖培养条件下上清中NO增多（P〈0.05）,Ⅳ型胶原、层黏蛋白含量增加（P〈0.01）,应用C-PTIO可显著降低上清中NO的含量,Ⅳ型胶原、层黏蛋白的含量也降低.结论 高糖可诱导大鼠肾小球系膜细胞产生NO,异常增多的NO又可导致系膜细胞中Ⅳ型胶原、层黏蛋白的积聚.