卡氮芥联合全反式维甲酸诱导脑胶质瘤的凋亡及其分子机制

C6、U251细胞G1期比例分别由(42.18±2.52)%至(63.04±4.05)%、(57.14±2.52)%至(69.50±4.05)%,C6、U251细胞凋亡率2.46±1.02至17.43±2.03、10.36±1.76至21.32±2.03;Cyclin E、CDK2 mRNA表达下调,p27Kip1 mRNA表达上调.结论 BCNU与ATRA协同应用诱导脑胶质瘤细胞的凋亡,其诱导凋亡的分子机制可能是通过改变相关细胞周期蛋白导致细胞周期改变.     

反义miR-21抑制异种移植U251人脑胶质瘤生长的体内研究

目的 探讨敲低miR-21表达抑制裸鼠荷皮下U251人腩胶质瘤生长的疗效和机制. 方法 原位注射miR-21反义寡聚核苷酸(AS.miR-21)治疗裸鼠皮下荷U251人脑胶质瘤.定时测量肿瘤大小评估原位注射AS-miR-21治疗效果:使用Real time PCR和原位杂交方法鉴定治疗后miR-21表达水平下调;采用HE染色和免疫组织化学染色(PCNA、PTEN、MMPs、和Septins)评价治疗后肿瘤牛物学性状改变;TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡. 结果 肿瘤生长曲线显示AS-miR-21治疗组肿瘤生长速度及体积小于空白对照与无义序列治疗组(F=52.458,P=0.000);Real-time PCR法:AS-miR-21治疗组miR-21表达下调为对照组的0.018±0.009:原位杂交显示AS-miR-21治疗组miR-21表达水平较对照与无义序列治疗组下调:组织病理学检测表明AS-miR-21治疗后肿瘤恶性度降低;TUNEL法检测可见AS-miR-21治疗组细胞凋亡数显著高于对照与无义序列治疗组(F=141.021,P=0.000).结论 以miR-21作为靶点抑制异种移植U251人脑胶质瘤生长,miR-21可能通过上调抑癌基因PTEN抑制胶质瘤的生长,可以作为人脑胶质瘤基因治疗的侯选靶点.     

alphastatin抑制胃癌细胞裸鼠移植瘤血管生成的实验研究

目的探讨alphastatin对裸鼠体内新生血管形成和人胃癌细胞裸鼠移植瘤血管生成的抑制作用及机制。方法裸鼠皮下注射基质胶溶液形成基质胶体。测定alphastatin对基质胶体内新生血管的抑制作用。人胃癌BGC823细胞接种于裸鼠皮下形成移植瘤。分别于裸鼠腹腔注射磷酸盐缓冲液（PBS）和不同剂量的alphastatin（100nmol／L,0．25mg·kg^-1·d^-1;1000nmol／L,2．5mg·kg^-1·d^-1）,测定各组瘤体大小、体质量并进行病理学分析,测定微血管密度（MVD）计数。分离瘤体内血管内皮细胞．经alphastatin处理后,提取细胞内蛋白,进行细胞鞘氨醇激酶（SPK）活性测定。结果裸鼠移植瘤实验中．与PBS对照组相比,两个不同剂量alphastatin实验组裸鼠移植瘤的体积和体质量均得到了不同程度的抑制[体积：（1145．96±29．89）μm^3、（612．65±23．45）μm^3比（1771±31．05）μm^3,P〈0．05;瘤体质量：（0．31±0．03）g、（0．12±0．02）g比（0．67±0．02）g,P〈0．05]。体外实验病理学证实．alphastatin减少了瘤体内MVD的数目．降低了移植瘤体内血管内皮细胞SPK活性．上述作用均呈现一定的量-效关系。结论alphastatin具有明显抑制人胃癌细胞裸鼠移植瘤血管生成的作用．这种效应与降低血管内皮细胞SPK活性、减少1-磷酸鞘氨醇（SIP）的生成有密切关系。     

苯乙酸对胶质瘤U-251细胞中RNA编辑酶表达的影响

目的观察正常人脑胶质细胞和胶质瘤U-251细胞中RNA编辑酶RED1,RED2 mR- NA水平的表达,并观察诱导分化剂苯乙酸对U-251细胞中RED1 mRNA表达的影响。方法对原代培养的正常人脑胶质细胞和胶质瘤U-251细胞,应用RED1,RED2全长序列合成引物及合成的特异引物,分别通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测RED1,RED2 mRNA水平的表达。用RT- PCR及图像分析法,检测胶质瘤细胞U-251在不同浓度的苯乙酸处理前后,RED1 mRNA表达水平的变化。RED1基因表达水平用基因/β-肌动蛋白(β-actin)灰度比值表示。结果RED1在正常人脑胶质细胞中表达极弱,在高恶性度的胶质瘤U-251细胞中明显表达。诱导分化剂苯乙酸作用后, U-251细胞中RED1表达水平降低。RED2在正常人脑胶质细胞及苯乙酸处理前后的胶质瘤细胞中,均未见表达。结论RED1 mRNA水平高表达,可能与高恶性度胶质瘤的发生有关。诱导分化剂苯乙酸可能通过降低RED1mRNA水平的表达,作用于胶质瘤细胞的RNA编辑过程。     

血管内皮生长因子基因沉默抑制人胶质瘤裸鼠移植瘤生长及血管生成的研究

目的 观察靶向血管内皮生长因子(VEGF)的短发夹RNA(shRNA)对裸鼠人脑胶质瘤中VEGF基因表达的抑制作用.方法 体外培养人脑胶质瘤U251细胞株,建立人脑胶质瘤裸鼠皮下接种模型.将成功造模的30只裸鼠随机分为A、B、C 3组(每组10只),分别给予不同处理.观察肿瘤生长.免疫组织化学检测瘤组织中VEGF蛋白表达及组织内的微血管密度(MVD)改变.结果 治疗5周后,VEGF shRNA组(A组)的肿瘤体积为654.0 mm~3、抑瘤率达65.2%,与空质粒组(B组)1790.4 mm~3、4.7%或PBS组(C组)1880.3 mm~3、0%比较,差异有统计学意义(P<0.05).A组荷瘤组织中VEGF和MVD分别为9.52、22.02,与B组17.18、43.58或C组17.82、45.32比较,差异有统计学意义(P<0.05).VEGF蛋白表达与MVD间存在正相关性(r=0.721,P<0.01).结论 应用RNAi技术沉默VEGF基因能明显抑制人脑胶质瘤细胞株U251裸小鼠移植瘤的生长.     

肝素处理小口径脱细胞异种血管的移植研究

冠状动脉旁路移植术（CABG）中常因自体动静脉材料有限及曲张、炎症等原因,无法满足需求.我们研究探讨应用脱细胞联合肝素处理的方法在短时间内制备小口径异种移植血管的可行性.     

血管生成抑制因子Arresten基因对裸鼠移植瘤的研究

Arresten是新发现的一种强有效血管生成抑制因子，是Ⅳ型胶原α1链的羧基末端NC1结构域多肽片段；它能有效抑制新生血管形成及肿瘤的生长和转移。最近，我们采用RT-PCR方法和基因重组技术，已成功地完成了人arresten基因的分子克隆与序列测定。并已构建arresten基因的原核表达载体。且在大肠杆菌中进行了表达。在此基础上，     

白藜芦醇对U251人胶质瘤细胞抑制生长作用的研究

白藜芦醇（Res）是一种广泛存在于植物中的植物补体。而Res对胶质瘤的抑瘤作用报道甚少，近年来有关胶质瘤的大量的研究证实，表皮生长因子受体（EGFR）介导的信号转导通路在恶性胶质瘤发生、发展中发挥着关键的作用。本实验进一步就Res对U251脑胶质瘤细胞生长增殖的抑制、诱导细胞凋亡及其与胶质瘤增殖及其相关机制进行了探讨。     

arresten对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长的抑制作用的研究

目的探讨arresten抑制人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长的作用。方法构建包含arrestenc DNA的分泌型真核表达质粒pcDNA3．1（＋）-ss-arresten,并以脂质体法将重组质粒转染至SGC-7901细胞。蛋白印迹法（Western blot）检测SGC-7901是否分泌表达arresten,同时,通过生长曲线绘制及生长周期测定的方法了解上述转基因措施本身对SGC-7901细胞的体外生物学特性的影响。将转基因的SGC-7901细胞株接种至裸鼠皮下,使其在接种局部表达arresten,观察肿瘤生长情况。结果成功构建了分泌型真核表达载体pcDNA3．1（＋）-ss-arresten,并获得了可分泌表达arresten的人胃癌SGC-7901细胞株。质粒转染对SGC-7901细胞增殖特性无影响。转基因SGC-7901细胞的裸鼠移植瘤生长缓慢。结论arresten抑制人胃癌SGC-7901移植瘤的生长,其途径可能是通过抑制其滋养血管的生长而实现。     

莪术醇对人脑胶质瘤U251细胞增生与凋亡影响的实验研究

目的 本研究观察中药活性成分莪术醇对人脑胶质瘤细胞株U251增生与凋亡的影响,检测其对胶质瘤细胞凋亡相关基因表达的影响,初步探讨其抗胶质瘤的可能机制,为脑胶质瘤的中草药治疗积累实验数据.方法 以体外培养的人脑胶质瘤细胞株U251为模型,以培养基稀释莪术醇成不同浓度,观察与检测以下内容:MTT法检测不同时间、不同浓度莪术醇对U251细胞增生的影响;显微镜观察不同浓度莪术醇对U251细胞形态学的影响;流式细胞仪检测不同浓度莪术醇对U251细胞凋亡的影响;RT-PCR法检测不同浓度莪术醇对U251细胞中凋亡相关基因bcl-2与COX-2表达水平的影响.结果 莪术醇对人脑胶质瘤U251细胞增生有抑制效应,且表现出浓度依赖性与时间依赖性(P＜0.05).结论 莪术醇对人脑胶质瘤U251细胞有明确的增生抑制作用.诱导凋亡、抑制增生可能为莪术醇抑制胶质瘤增生效应的重要机制.莪术醇下调人脑胶质瘤U251细胞中bcl-2与COX-2的基因表达水平可能为其诱导凋亡、抑制增生的重要机制之一.     

TNP-470对裸鼠体内人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究TNP-470对裸鼠体内人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 将16只人结肠癌皮下移植瘤裸鼠随机分成实验组和对照组，实验组隔日予以TNP-47030mg/kg，皮下注射，对照组予以相同体积的生理盐水，4周后处死，应用免疫组织化学法（免疫组化）和图象分析技术检测肿瘤细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，TdT介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测肿瘤细胞的凋亡，透射电镜观察凋亡细胞的超微结构。结果 TNP-470明显抑制了肿瘤的生长，抑瘤率为45.53%。实验组肿瘤中PCNA的表达显低于对照组，凋亡指数上升，电镜下可见典型的细胞凋亡形态学变化。结论 TNP-470除了通过抗血管生成作用抑制肿瘤生长外，还可通过抑制LOVO细胞本身的增殖和诱导凋亡发挥抗肿瘤作用。     

血管生成抑制剂TNP-470对ACHN肾癌的抑制作用

目的　探讨血管生成抑制剂TNP 470抑制ACHN肾癌生长和转移的作用机制。方法　采用TNP 470 (4 0mg·kg-10 .2ml-1)皮下注射治疗ACHN肾癌荷瘤裸鼠 ,观察肿瘤生长情况。 3 1d后处死裸鼠 ,测定肿瘤体积 ;采用免疫组织化学方法和原位缺口末端标记 (TUNEL) ,观察TNP 470对肺转移、肿瘤微血管密度 (MVD)、肿瘤细胞增殖指数 (PI)和凋亡指数 (AI)的影响。结果　治疗组生长明显减慢 [重量 (2 70 .0 0± 62 .3 5 )mgvs (63 0 .0 0± 12 3 .65 )mg ;体积 (12 6.5 4±45 .12 )mm3 vs (3 16.16± 60 .2 8)mm3 ,P <0 .0 1] ,MVD明显减少 (5 .65± 2 .3 1vs 12 .0 0± 3 .78,P <0 .0 1) ,AI明显增加 (5 .0 8± 1.87vs 1.75± 0 .83 ,P <0 .0 1)。MVD与AI呈负相关 ,与肿瘤体积呈正相关 ,相关系数分别为r =-0 .860 7,P <0 .0 1;r =0 .714 4,P <0 .0 1。AI与肿瘤体积呈负相关 (r =-0 .85 40 ,P <0 .0 5 )。结论　TNP 470对ACHN肾癌有显著的抗血管生成的作用 ,对肿瘤的生长和转移有明显的抑制作用 ,其机制可能为抑制肿瘤血管生成使之缺血缺氧 ,从而引起肿瘤细胞凋亡增加     

TNP-470 combined with nicardipine suppresses in vivo growth of PC-3, a human prostate cancer cell line

We examined effects of TNP-470 with or without nicardipine on in vivo or in vitro growth of a hormone-independent human prostate carcinoma cell line, PC-3. TNP-470 (30 mg/kg, daily) or nicardipine (25 μg/kg, daily) alone had little effects on in vivo growth of PC-3 cells in nude mice, whereas simultaneous administration of both agents significantly inhibited the growth of the xenografts. In vitro proliferarion of PC-3 was not affected by TNP-470 and/or nicardipin. Combination of TNP-470 and nicardipine seems beneficial in the treatment of hormone-refractory prostate cancer.     

Angiogenesis inhibitor TNP-470 reduces human pancreatic cancer growth

In this study we investigated the effects of the angiogenesis inhibitor TNP-470 on human pancreatic cancer cells in vitro and in vivo. The action of TNP-470 on vascular endothelial growth factor (VEGF) was also assessed. In vitro human pancreatic cancer cells (MIAPaCa-2, AsPC-1, and Capan-1), and human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) were exposed to increasing concentrations (1 pg/ml to 100 (μg/ml) of TNP-470. Cell proliferation was assessed after 3 days by cell count and MTT assay. In vivo, 5 Χ 10⁶ pancreatic cancer cells were injected subcutaneously into nude mice. Four weeks later, 1 mm³ fragments of the resulting tumors were implanted into the pancreas of other mice. Animals received either TNP-470 (30 mg/kg every other day) or vehicle subcutaneously for 14 weeks. The volume of the primary tumor and metastatic spread were determined at autopsy. Concentrations of VEGF were determined in serum (VEGF_S) and ascites (VEGF_A) by enzyme-linked immunosorbent assay. Microvessel density was analyzed by immunohistochemistry in CD31 -stained tumor sections. In vitro, proliferation and viability of the human pancreatic cancer cell lines were significantly inhibited at high concentrations of TNP-470 (>1 μg/ml). In contrast, TNP-470 effectively decreased the growth of HUVEC at 100 pg/ml. In vivo, tumor volume and dissemination scores were significantly lower in all three pancreatic cancer cell lines. VEGF_S and VEGF_A were not different between treated groups. Treatment with TNP-470 significantly reduced neoangiogenesis in tumors of all three human pancreatic cancer cell lines: MIAPaCa-2 = 74.8 ±7.8/0.74 mm² vs. 24.8 ±3.7/0.74 mm²; AsPC-1 = 65.3 ±5.0/0.74 mm² vs. 26.0 ±3.4/0.74 mm²; and Capan-1 = 82.2 ±5.8/0.74 mm² vs. 26.9 ±2.5/0.74 mm² (P <0.001). However, survival was not statistically different between groups. TNP-470 reduced tumor growth and metastatic spread of pancreatic cancer in vivo. This was probably due to the antiproliferative effect of the agent on endothelial cells rather than to the direct inhibition of pancreatic cancer cell growth. TNP-470 activity was not associated with alteration of VEGF secretion. Supported by the R.S. Hirshberg Foundation and the Deutsche Forschungsgemeinschaft (grant HO 1843-1). Presented at the Forty-First Annual Meeting of The Society for Surgery of the Alimentary Tract, San Diego, Calif., May 21–24, 2000.     

TNP-470对胃癌细胞株SGC-7901体外血管生成拟态的抑制作用

目的：研究TNP-470对胃癌细胞株SGC-7901体外血管生成拟态的影响。方法：将培养的SGC-7901细胞分为TNP-470组及对照组，应用克隆形成试验检测细胞增殖活性的变化。Transwell小室检测癌细胞体外侵袭力的变化，体外管状形成试验检测管道形成能力的变化。结果：TNP-470对SGC-7901细胞增殖没有明显抑制作用，可以显著降低SGC-7901细胞的体外侵袭能力，抑制体外管道形成。结论：TNP-470能够抑制SGC-7901细胞的体外血管生成拟态形成。     

人类多形性胶质母细胞瘤中变异型IκBα基因抑制血管新生的研究

目的研究变异型IκBα（IκBαM）基因在人类多形性胶质母细胞瘤（GBM）中对血管新生的抑制作用。方法选用IκBαM基因转染的胶质瘤细胞株，通过制备血管新生及异位肿瘤生成两组动物模型，检测新生血管的数量及肿瘤中血管生长因子VEGF及IL-8的表达，分析IκBαM对肿瘤中血管新生的作用。结果IκBαM基因转染的人类GBM细胞中。新生血管数量显著减少，诱导形成的异位胶质瘤中的VEGF及IL-8的表达量也显著降低。结论IκBαM基因可有效抑制胶质瘤中的血管新生从而抑制肿瘤的生长，这可作为人类多形性胶质母细胞瘤抗血管治疗的理论基础。     

共轭三烯酸对人胶质瘤U251细胞的增殖抑制作用

目的 探讨共轭三烯酸(TCLA)对人胶质瘤细胞的增殖抑制作用及作用机制。方法 用噻唑蓝(MTT)比色法、克隆形成试验、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺人试验研究TCLA对人脑胶质瘤细胞的增殖抑制作用;Hoechst 33342/PI双染法、流式细胞术检测细胞凋亡指数和周期分布;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测凋亡相关基因腺苷二磷酸核糖转移酶1(ADPRTL1)、细胞色素P4501A1( CYP1A1),过氧化物酶增殖体激活受体-γ(PPAR-γ)的表达。结果 共轭三烯酸对人胶质细胞瘤(U251)有明显抑制作用,呈剂量-时间-效应关系(P＜0.05)。克隆形成下降,40 μmol/LTCLA可完全抑制克隆形成。BrdU标记从(91.6±3.6)％下降到(14.4±4.4)％(P＜0.05),Hoechst 33342/PI双染试验,凋亡细胞增加(P＜0.05)。流式细胞仪检测显示,细胞凋亡指数从(7.3±1.2)％升高到(34.2±2.4)％(P＜0.05),Go/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少(P＜0.05);RT-PCR结果显示,凋亡相关基因ADPRTL1、CYP1 A1、PPAR-γ mRNA表达增强(P＜0.05)。结论 TCIA对人脑胶质瘤细胞具有增殖抑制和凋亡诱导作用,其作用机制可能与抑制肿瘤细胞DNA合成、细胞周期阻滞、上调凋亡相关基因(ADPRTL1、CYP1A1、PPAR-γ)表达有关。     

靶向表皮生长因子受体和血管内皮生长因子受体-2治疗多形性胶质母细胞瘤

目的 观察靶向表皮生长因子受体(EGFR)的单克隆抗体C225和靶向血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)的单克隆抗体DC101单独或联合应用后对人脑多形性胶质母细胞瘤(GBM)裸小鼠脑内移植瘤的疗效.方法 将40只荷瘤鼠随机分为磷酸盐缓冲液(PBS,0.1 ml/20 g·次)、C225(50 mg/kg·次)、DC101(40 mg/kg·次)及C225+DC1O1(50+40 ms/ks·次)等4组,10只/每组,2d1次腹腔用药或PBS,共4次.治疗后观察移植瘤微血管密度(MVD)、体积、形态、增殖和凋亡变化.结果 与对照组比较,DCl01组移植瘤MVD减少了64.O%.体积下降了59.7%,增殖指数下降了53.2%,凋亡指数增加了66.7%(P＜0.05),但肿瘤侵袭性增强;C225组肿瘤侵袭性降低,但对移植瘤MVD、体积、增殖和凋亡无影响(P＞0.05);C225+DC101组移植瘤MVD减少了68.0%,体积下降了62.9%,增殖指数下降了56.4%,凋亡指数增加了75.0%(P＜0.05),肿瘤侵袭性明显下降.结论 DC101抑制血管生成同时增加了肿瘤的侵袭性,而C225能降低肿瘤侵袭性.联合用药不仅抑制GBM移植瘤生长还降低肿瘤侵袭能力.