SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线鉴定鸟分枝杆菌方法的建立及初步应用

目的基于SYBR GreenⅠ荧光染料建立鉴定鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium,MA)的荧光PCR熔解曲线法,为临床鉴定MA提供简单、准确性高的分子生物学检测方法。方法以MA的特异性插入序列IS1311为检测靶标设计引物,在60℃的退火温度下,建立鉴定MA的SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法,并对MA等21种分枝杆菌标准株和金黄色葡萄球菌等5种常见致病菌进行检测,评价方法的特异性、检测限;以hsp65、16S rDNA普通PCR扩增产物测序分析为“金标准”,鉴定200株分枝杆菌临床分离株,评估建立方法鉴定MA的准确性。结果SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法在30个循环内能准确鉴定出21种分枝杆菌标准株和5种致病菌中的MA,检测限为5.6×10-2 ng/μL。200株分枝杆菌临床分离株中,以PCR测序鉴定出16株MA和184株其他分枝杆菌,以SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法鉴定出15株MA和185株非MA;本研究建立的方法和测序方法对MA的鉴定率差异无统计学意义(P>0.05);两法符合率为99.5%(199/200),一致性较高(Kappa值>0.75,P<0.01);建立方法的敏感性为93.8%(15/16),特异性为100.0%(184/184),阳性预测值为100.0%(15/15),阴性预测值为99.5%(184/185)。结论以MA特异性重复序列IS1311为基础建立的SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法,具有较高的灵敏度和特异性,为MA的临床检测提供新的途径。     

23S rRNA基因在常见病原菌鉴定中的应用

目的建立基于23S rRNA基因的一种常见病原菌菌种鉴定的分子生物学方法。方法使用地高辛标记的通用引物扩增常见病原菌的23S rRNA基因，并在尼龙膜上固定根据扩增产物序列设计的菌种特异性探针，根据反向杂交结果判断病原菌种类。选取临床分离获得的菌株验证该方法的有效性。结果通用引物可特异性扩增细菌23S rRNA。应用该方法可鉴定金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌、绿脓假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌和洋葱伯克霍尔德菌。检测临床标本结果显示，与常规培养方法的符合率为99％。结论该方法可用于常见病原菌的鉴定。     

悬浮芯片系统快速检测常见葡萄球菌的初步实验研究

目的建立以悬浮芯片为技术基础的临床常见葡萄球菌的快速检测方法。方法以细菌16S rRNA基因保守区序列设计1对通用引物,分别采用对称PCR和不对称PCR扩增5种葡萄球菌,经测序确定后,采用悬浮芯片系统对不同的PCR产物进行检测。结果2种PCR均扩增出5种葡萄球菌目的片段（780-820bp）,不对称PCR得到了大量单链产物,其产物在悬浮芯片系统的检测信号高于对称PCR,悬浮芯片系统对5种葡萄球菌的鉴定率为100％。结论16SrRNA可以作为细菌快速鉴定的靶序列,不对称PCR产物可以显著提高与悬浮芯片杂交检测的灵敏度,悬浮芯片系统在鉴定细菌方面具有简单快速、高通量、高检出率等特点,可以作为细菌快速鉴定的一种新方法进行深入开发利用。     

多重PCR同时检测病原菌及其耐药基因

目的建立一种多重PCR方法,在同一扩增体系内同时检测病原菌及其β-内酰胺类耐药基因,探讨采用多重PCR同时鉴定病原菌及其耐药基因的可行性。方法根据细菌基因序列和对β-内酰胺类抗生素耐药特点,设计一对细菌鉴定通用引物和三对β-内酰胺类耐药基因引物,并在同一扩增体系内行PCR扩增。结果 MRSA和大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的产酶标准菌株的bla mecA、blaTEM、blaSHV和16S-23S rRNA基因间隔区（ISR）多重扩增均为阳性,对本实验室内保存的50株多重耐药的葡萄球菌（包括40株表型筛查为MRS菌株及10株非MRS菌株）及30株ESBLs阳性的大肠埃希菌及30株肺炎克雷伯菌的多重PCR结果显示：MRS阳性菌株均同时扩增出了葡萄球菌特有的多态性及blamecA指纹图谱,而多重耐药的非MRS菌株也都扩增出了blamecA,ESBLs表型阳性的大肠埃希菌多以blaTEM为主,而肺炎克雷伯菌多以blaSHV为主。结论多重PCR与传统的培养及药敏试验相比敏感、特异、迅速,对于解决难培养或不能培养的微生物的鉴定和药敏试验,是一种很有前景的方法。     

PCR-反向线点杂交技术鉴定慢生长分枝杆菌的方法学研究

目的建立和评价以16S-23S rDNA间隔序列（ITS）为靶基因的PCR-反向线点杂交技术（RLB）快速鉴定慢生长分枝杆菌（SGM）的方法。方法PCR—RLB检测70株分枝杆菌参考菌株、4株诺卡菌参考菌株、5株红球菌参考菌株、1株棒状杆菌参考菌株，来源于中国生物制品和药品鉴定所和悉尼大学感染性疾病和微生物中心；358株分枝杆菌临床分离株来源于深圳、广州和澳大利亚。结果所有分枝杆菌参考菌株均可扩增出200～250bp DNA片段，分枝杆菌引物可扩增4种诺卡菌和5种红球菌，但不与分枝杆菌属探针和种探针杂交。21个探针可鉴定分枝杆菌、结核分枝杆菌复合群、溃疡／海分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌a／b和堪萨斯分枝杆菌c亚种及其他16种SGM。结论该方法能快速、简便和准确地鉴定SGM。     

多重PCR检测临床分离金黄色葡萄球菌lukS/F-PV和mecA基因

目的建立一种新的多重PCR方法,检测临床分离金葡菌的杀白细胞素毒力基因(lukS/F-PV)和甲氧西林耐药基因(mecA)。方法收集我院2006年1—12月从临床多种标本中分离鉴定的不重复金葡菌,应用多重PCR技术,优化反应条件,同时扩增葡萄球菌属特异性基因16S rRNA、金葡菌种特异性基因nuc、lukS/F-PV基因和mecA基因,扩增产物经凝胶成像系统分析。结果217株金葡菌经多重PCR检测,31株是16S rRNA+nuc+lukS/F-PV+mecA基因型,3株是16SrRNA+nuc+lukS/F-PV基因型,135株是16S rRNA+nuc+mecA基因型,40株是16S rRNA+nuc基因型,其中5株仅扩增出16S rRNA基因,3株仅扩增出nuc基因。lukS/F-PV基因和mecA基因测序显示与GenBank中的已有序列具有高度同源性,其阳性率分别为15.7%(34/217)和76.5%(166/217);34株lukS/F-PV基因阳性的分离株中,31株为MRSA,占91.2%(31/34)。结论本方法适用于快速检测和鉴定产杀白细胞素MRSA,lukS/F-PV基因阳性的菌株以MR...     

实时荧光定量PCR在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的应用评估

目的评价实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中的应用。方法采用头孢西丁纸片扩散法和mecA基因PCR检测法,将85株临床分离的金黄色葡萄球菌区分为MRSA和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),并采用实时荧光定量PCR对这些菌株进行检测,评价MRSA检测中实时荧光定量PCR与目前常规检测方法的一致性。结果根据头孢西丁纸片扩散法和mecA基因扩增结果进行分组,85株金黄色葡萄球菌中MRSA组菌株45株,MSSA组菌株40株;实时荧光定量PCR检测结果与上述结果完全一致,符合率为100%。结论实时荧光定量PCR检测MRSA的结果与常规方法一致性好,且具有操作简便、耗时短等特点。作为一种快速检测方法,实时荧光定量PCR能将金黄色葡萄球菌的鉴定和MRSA的筛选结合起来,对于指导临床用药及MRSA医院感染控制具有重要意义。     

实时荧光PCR熔解曲线法快速鉴定嗜肺军团菌

摘要：目的：建立特异、快速、敏感的实时荧光PCR熔解曲线基因分型方法,并探讨该法在鉴定嗜肺军团菌中的应用价值。 方法：根据嗜肺军团菌16S rRNA基因保守序列设计引物和猝灭FRET探针建立实时荧光PCR熔解曲线方法,优化引物与探针浓度,用15株嗜肺军团菌、30株非嗜肺军团菌及7株其他病原菌标准菌株验证该方法的特异性、敏感性和重复性,用该法检测117例临床痰标本并进行基因测序。 结果：15株不同血清型的嗜肺军团菌Tm值均为57 ℃;7株非嗜肺军团菌Tm值为43 ℃,1株Tm值为45 ℃;其余22株非嗜肺军团菌和7株其他病原菌均无明显Tm值。该方法最低检出限可达0.1 pg/μL。检测117例痰标本发现3株嗜肺军团菌,与PCR基因测序法检测结果一致。 结论：实时荧光PCR熔解曲线法可特异、快速和敏感地检测嗜肺军团菌,适用于临床痰标本的嗜肺军团菌检测。     

16S rRNA 测序鉴定1株条件致病性人苍白杆菌

目的：探索一种基于16S rRNA 基因的细菌快速鉴定方法,为临床未知病原菌的诊断及治疗提供科学依据。方法对临床患者的痰标本分离培养纯菌落,直接以菌液为模板,以通用引物 PCR 扩增未知菌的16S rRNA 基因片段,产物直接测序。将测序结果进行 BLAST 比对,根据序列同源性鉴定病原细菌。结果未知病原菌经本实验鉴定为人苍白杆菌,经 ABI 细菌快速鉴定板条检测,确认结果一致。结论该研究简化了临床标本未知病原菌分离培养鉴定的步骤,建立了一种利用16S rRNA 基因扩增快速鉴定病原菌的简便方法。     

高分辨率熔解曲线分析法检测大肠埃希菌gyrA基因突变

目的探讨高分辨率溶解曲线(HRM)分析法在检测大肠埃希菌gyr A基因突变中的可行性。方法收集临床非重复分离的大肠埃希菌70株,常规聚合酶链反应(PCR)扩增大肠埃希菌的gyr A基因,采用序列分析法检测gyr A基因的变异情况。设计特异性引物,采用荧光定量PCR扩增这70株大肠埃希菌株的gyr A基因,通过对扩增产物进行HRM分析和熔解温度(Tm)值测定确定gyr A基因变异情况。将检测结果与序列分析法检测结果进行比较。结果基因测序显示70株大肠埃希菌中有43株gyr A基因发生了突变,突变类型分为5型。HRM分析法可以准确区分野生株和突变株,准确率达98.6%(69/70),正确检测出了43株突变菌株中的42株,且对不同的突变类型准确分型。Tm分析显示野生株和突变株之间以及各种突变型之间有明显差异。结论HRM技术具有准确性高、简单、快速、成本低廉、高通量等优点,可以作为检测大肠埃希氏菌gyr A基因突变耐药机制的新选择。     

TT病毒DNA PCR-ELISA检测方法的建立

目的:建立检测TT病毒(TTV)DNA快速、敏感、特异的PCR-ELISA方法。方法:将生物素标记的PCR产物与地高辛标记的特异性探针杂交。通过酶免疫显色反应测出A值,判断TTV感染情况。优化反应条件,与PCR电泳结果比较,测定方法的敏感性,并检测325份正常人群、甲～庚型肝炎、非甲～庚型肝炎血清标本,确定该方法的特异性。结果:本实验的最佳杂交时间为45min,最佳探针浓度为4pmol/mL。该方法的检测阈值为50fg/μL TTV DNA,其灵敏度是PCR电泳法的10倍,检测TTV在正常人群、甲～庚型肝炎、非甲～庚型肝炎血清标本中的阳性率分别为2.4%、29.3%、25.0%,与PCR电泳检出结果差异无显著性(P>0.05)。结论:PCR-ELISA是一种快速、敏感、特异的检测方法,可用于临床TTV感染的诊断。     

荧光定量PCR技术检测结核分支杆菌DNA的应用价值

目的评价荧光定量PCR技术检测临床标本中结核分支杆菌的应用价值。方法应用荧光定量PCR法及抗酸染色、结核杆菌培养法,对179例活动性肺结核患者晨痰、123例活动性肺结核患者外周血、34例结核性胸膜炎患者胸水、20例非结核性呼吸系统疾病患者的晨痰标本进行检测。结果179例活动性肺结核患者晨痰、123例活动性肺结核患者外周血、34例结核性胸膜炎患者胸水,涂片抗酸染色阳性率分别为20．67％（37／179）、0．00％、0．00％;细菌培养阳性率分别为41．34％（74／179）、0．00％、2．94％（1／34）;荧光定量PCR技术阳性率分别为64．25％（115／179）、38．21％（47／123）、44．12％（15／34）。3种标本荧光定量PCR技术阳性率高于抗酸染色和结核杆菌培养,经统计学处理发现,差异有统计学意义。用荧光定量PCR技术检测临床标本特异性为95．00％。结论荧光定量PCR技术将PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化,在单一管内完成,具有简便、快速、防污染、敏感性及特异性高等优点,是结核病诊断的有效方法之一。     

三种检测方法在胃液隐血试验中的临床应用评价

目的探讨并评价转铁蛋白法、血红蛋白胶体金法、化学法测定胃内容物隐血的临床应用价值。方法随机对103例患者胃液同步使用检测转铁蛋白(TF)法、血红蛋白胶体金法和化学法进行检测。以内窥镜检测为金标准,探讨三种方法的灵敏度及特异度。结果化学法灵敏度(阳性率)为35.9%,特异度为36.0%;血红蛋白胶体金法灵敏度(阳性率)为41.0%,特异度为72.0%;转铁蛋白法灵敏度(阳性率)为52.7%,特异度为76.0%,转铁蛋白法优于化学法和血红蛋白胶体金法,差异有统计学意义(χ2=19.466,P<0.05;χ2=9.346,P<0.05)。转铁蛋白法和血红蛋白胶体金法联合应用灵敏度(阳性率)为62.8%,特异度为84.0%。结论检测胃液隐血时转铁蛋白法优于化学法和血红蛋白胶体金法,联合应用转铁蛋白法和血红蛋白胶体金法检测更符合临床诊断,是筛检胃内容物隐血更理想的新方法,值得推广。     

平果县免疫接种率监测与评价

目的了解平果县免疫接种率现状。方法对近年计划免疫相关资料和麻疹发病情况进行综合分析。结果平果县1995～2003年四种疫苗[卡介苗(BCG)、口服脊髓灰质炎疫苗(OPV)、百白破联合疫苗(DPT)、麻疹疫苗(MV)]常规免疫估算接种率为55.44%～84.51%;1993～2003年OPV强化免疫估算接种率为66.90%～90.25%;1995～2003年麻疹年平均发病率为24.01/10万,<3岁发病占30.13%,61.12%的麻疹病例无免疫史。结论平果县常规免疫和OPV强化免疫都存在免疫空白。免疫空白主要在<1岁儿童,提示要采取行之有效的查漏补种,才能消除免疫空白和提高免疫接种率水平。     

2004年温州市碘缺乏病调查分析

目的在实现消除碘缺乏病的阶段性目标后,了解和掌握温州市碘缺乏病流行情况,进一步巩固防治成果,为完善持续消除碘缺乏病工作机制提供科学依据。方法在全市范围内抽取7个县(市、区),每个县抽取东西南北中5个乡(镇),每个乡(镇)中心小学抽取8～10岁3个班学生,每班抽取12份尿样,男女各半;各县至少抽取9个乡36个村288户居民食用盐。结果温州市8～10岁儿童甲状腺肿大率为4.95%,尿碘中位数为206.17滋g/L,≥100滋g/L的占86.76%,碘盐覆盖率为84.76%,合格碘盐食用率为80.34%。结论温州市碘缺乏病儿童甲状腺肿大率已符合消除标准,但碘盐指标偏低,仍应加大碘缺乏病危害宣传力度,提高合格碘盐的覆盖率。坚持长期食用合格碘盐是持续消除碘缺乏病危害的根本途径。     

奥美拉唑、左氧氟沙星、阿莫西林三联疗法治疗幽门螺杆菌感染

[摘要]目的：探讨奥美拉唑、左氧氟沙星、阿莫西林三联一周疗法治疗幽门螺杆菌(Hp)感染的疗效及安全性。方法：选择90例Hp阳性慢性胃炎和消化性溃疡患者，随机分为两组。治疗观察组采用奥美拉唑(20 mg，2次／天)，左氧氟沙星(200mg，2次／天)，阿莫西林(1000 mg，2 次／天)，治疗7天。对照组采用奥美拉唑(20mg，2次／天)和克拉霉素(250 mg，2次／天)，阿莫西林(1000 mg，2次／天)，治疗7天；溃疡患者继用奥美拉唑20 mg，1 次／天，3周。疗程结束4周后复查Hp，观察症状缓解率、Hp根除率、溃疡治愈率、不良反应发生率等。结果：治疗组和对照组的症状缓解率、Hp根除率、溃疡治愈率、不良反应发生率分别为92.6％、90.2％ 、90.2％ 、4.8％ 和88．1％ 、85.7％ 、92.9％ 、4.8％ 。两组差异无显著性(P>0．05)。结论：奥美拉唑、左氧氟沙星、阿莫西林三联一周疗法是根除Hp的理想方案，可被作为根除Hp一线治疗方案。     

SARS患者康复期淋巴细胞功能状态及T细胞受体Vβ24个亚家族表达的格局

背景:严重急性呼吸道综合征(severe acuterespi ratory syndrome,SARS)是由SARS相关冠状病毒感染引起的急性传染性疾病。但目前其康复期患者细胞免疫状态仍有待进一步研究。目的:观察SARS患者康复期淋巴细胞功能状态和T细胞受体(TCR)Vβ24个亚家族表达的格局。设计:前后对照观察。单位:广东省中医院中心实验室。对象:选择2003-01/04在广州中医药大学第二附属医院收治的76例治愈的SARS患者,全部病例均符合"非典型肺炎的临床诊断标准"、"非典型肺炎重症病例诊断标准、出院标准"及《中医临床诊疗术语证候部分》的诊断标准,男30例,女46例,平均(32±11)岁。选择10名同期健康到院体检者,女5名,男5名,平均(32±7)岁,所有受试对象对检测项目知情同意。方法:①TCRVβ24个亚家族的表达检测:取受试对象全血2mL,用EDTA-K2抗凝管抗凝。在流式细胞术检测专用管中,分别加入各种荧光素标记的mAb:抗CD3、抗CD4、抗CD8、抗CD25、抗CD28、抗HLA-DR、PC5-抗CD3mAb、TCRVβ1(PE FITC)、Vβ2(PE FITC)、Vβ3(FITC)、Vβ4(PE FITC)、Vβ5.1(PE FITC)、Vβ5.2(PE)、Vβ5.3(PE)、Vβ7.1(PE FITC)、Vβ7.2(FITC)、Vβ8(FITC)、Vβ9(PE)、Vβ11(PE)、Vβ12(FITC)、Vβ13.1(PE)、Vβ13.2(PE)、Vβ13.6(PE FITC)、Vβ14(FITC)、Vβ16(FITC)、Vβ17(PE FITC)、Vβ18(PE)、Vβ20(FITC)、Vβ21.3(FITC)、Vβ22(PE FITC)和Vβ23(PE)10μL,然后加入抗凝血50μL。混匀后,于室温避光孵育15min,再加入溶血素溶血、洗涤。最后将沉淀溶在300μLPBS中,用CoulterESP流式细胞仪进行检测。②T细胞亚群,T、B细胞的活化状态及Ts细胞和Tc细胞百分率的检测:每次收集5000个细胞,用仪器所带软件分别计算T细胞亚群(CD3、CD4和CD8)、活化的T、B细胞(CD3 /CD25 、CD3 /HLA-DR 、和CD3-/HLA-DR )、Ts细胞和Tc细胞(CD8 /CD28 、CD8 /CD28-)的百分率。主要观察指标:①T细胞亚群(CD3、CD4和CD8)的表达。②活化的T、B细胞(CD3 /CD25 、CD3 /HLA-DR 、和CD3-/HLA-DR )的表达。③Ts细胞和Tc细胞(CD8 /CD28 、CD8 /CD28-)的百分率。④TCRVβ24个亚家族的表达。结果:所有受试对象均进入TCRVβ24个亚家族检测结果分析,74例SARS患者及健康对照者10名均进入其余检测结果分析。①T细胞亚群的检测结果:CD4 细胞的百分率均数低于参考值[(33.33±6.64)%,(43±9)%,P<0.01],CD8 细胞的百分率高于参考值[(34.07±6.40)%,(30±9)%,P<0.01]。②活化的T、B细胞表达检测:表达HLA-DR的T、B细胞增加,而表达CD25的T细胞减少。有53例CD25 细胞的百分率低于正常参考值,有64例CD3 /CD25 T细胞的百分率低于正常参考值。只有CD3 /HLA-DR 和CD3-/HLA-DR 细胞的百分率高于正常参考值,其中表达CD3 /HLA-DR 的T细胞增加36例,表达CD3-/HLA-DR 的T细胞增加30例。③Ts细胞和Tc细胞的百分率:Ts细胞(CD8 /CD28-)的百分率较参考值增高[(28.75±7.31)%,(15.99±5.1)%,P<0.01];Tc细胞(CD8 /CD28 )的百分率则低于参考值[(5.99±3.60)%,(13.2±4.1)%,P<0.01]。其中有39例Tc细胞的百分率降低,有48例Ts细胞的百分率升高,CD4 与CD8 T细胞的比值均在正常参考值范围内。④TCRVβ24个亚家族表达:康复期SARS患者TCRVβ24个亚家族表达中,TCRVβ14的表达最高,TCRVβ5.3、和23表达次之,出现TCRVβ24个亚家族表达的不同。正常对照组中只有TCRVβ14表达最高,与SARS患者的结果相一致,但TCRVβ24个亚家族的分布格局不同。两组进行比较,Vβ1、Vβ5.2、Vβ5.3、Vβ7.2、Vβ9、Vβ11、Vβ13.1、Vβ13.2、Vβ17、Vβ18、Vβ22和Vβ23的表达差异显著,康复期SARS患者组均高于正常对照组(P<0.05-0.01)。结论:康复期SARS患者CD8 CD28-T细胞数的升高可导致CD8 T细胞数升高;而Ts细胞数的增加,因其分泌的抑制因子增多,从而造成CD3 和CD4 T细胞数降低。SARS患者康复期TCRVβ24个亚家族在T细胞上的表达不同。CD3 /HLA-DR 和CD3-/HLA-DR T细胞数的升高,可能与T、B细胞的活化较晚有关。     

间接免疫荧光试验检测登革IgG的应用

1995年广东省番禺等市发生登革热流行，应用间接免疫荧光试验检测58份待测登革IgG的标本,38份阳性，阳性率65.52％(38/58)；检测疑似登革热患者早期血标本51份，用C6/36细胞分离出28株登革I型病毒，阳性率54.90％(28/51)，证实本次流行是登革I型病毒所引起，二者检出率差异无显著性(Xsup2/sup=1.28，P0.05)。IgG最早检出于发病后第三天，一周后达高峰，患者血清中各型登革lgG呈高度交叉反应，不能分型，其平均几何滴度在1:100以上。此外，1FA检测确诊登革病人血清9份．Iga阳性率为100％，滴度范围为1:160～1:1280；检测非登革血清336份，滴度1:40有15份，1:80有1份，阳性率为4.76％。此法检测登革IgG,方法简单、敏感、快速、经济。结果表明:病后一周取检，IgG抗体滴度达1:80以上，对诊断为登革热感染有参考意义。     

γ干扰素释放试验在结核病诊断中的应用价值

目的分析γ干扰素释放试验(IGRA)在结核病诊断中的应用价值。方法收集2017年11月-2019年1月广州南方医院796例进行IGRA检测的住院患者资料,分析IGRA对结核病的诊断价值,并将其与痰涂片抗酸染色镜检、结核抗体胶体金法、结核分枝杆菌DNA荧光定量PCR法、结核菌素皮肤试验(TST)、结核分枝杆菌感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)进行比较。结果 IGRA对肺结核和肺外结核检出阳性率分别为80.2%和84.1%,差异无统计学意义(P>0.05);肺结核组与非结核组阳性率差异有显著统计学意义(P<0.01)。IGRA对结核诊断的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为 81.9%、81.3%、60.1%和92.9%。痰涂片抗酸染色镜检、结核抗体胶体金法、结核分枝杆菌DNA荧光定量PCR法、TST、T-SPOT.TB的灵敏度分别为3.4%、21.1%、15.2%、66.7%、82.9%。结论 IGRA灵敏度和阴性预测值较好,对结核辅助诊断具有较高临床应用价值。     

FQ-PCR检测肠黏膜结核杆菌DNA对肠结核的诊断价值

目的建立一种实时定量检测结核分枝杆菌（MTB）插入序列IS6110 DNA的方法,探讨其在肠结核（ITB）诊断中的价值。方法采用FQ-PCR技术对36例内镜活检ITB标本（30例石蜡、6例新鲜组织）、36例Crohn’s disease标本（16例石蜡手术标本,15例石蜡内镜活检标本,5例新鲜内镜活检组织）及34例阴性对照标本进行IS6110 DNA的实时定量检测,并比较上述标本抗酸染色结果。结果13例ITB抗酸染色阳性,CD无1例阳性,抗酸染色对ITB诊断的敏感性36.11%。MTBIS6110DNA检测结果：23例ITB（63.89%）阳性,6例CD（16.67%）阳性,另有1例阳性为升结肠腺癌癌旁正常组织。MTBIS6110 DNA在ITB与CD中的阳性率差异有统计学意义（P〈0.05）。FQ-PCR对ITB诊断的敏感性为63.89%,特异性83.33%。FQ-PCR敏感性显著高于抗酸染色（P〈0.05）。MTBIS6110 DNA阳性的ITB标本其定量结果范围为2.44×10^-4-2.26×10^1拷贝/细胞。结论FQ-PCR检测MTBIS6110 DNA是一种快速有效的ITB诊断方法,其定量范围广,检测灵敏度高。对活检组织少、病理改变不典型、抗酸染色阴性组织的诊断和鉴别诊断尤有意义。