下调环指蛋白2的表达促进U87脑胶质瘤细胞凋亡并增强其放射敏感性

目的在U87脑胶质瘤细胞中下调环指蛋白2(RNF2)的表达,观察对U87细胞生长及放射敏感性的影响。方法用含有针对RNF2基因小发夹RNA(shRNA)的表达载体转染U87细胞,利用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法分别在mRNA及蛋白水平验证RNF2的表达下调,用MTT法检测细胞增殖,用annexin V-FITC/PI标记结合流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期情况;经X射线照射后,用流式细胞术检测对照细胞和RNF2表达下调细胞的凋亡情况。结果 2条针对RNF2的shRNA均可有效抑制U87细胞中RNF2的表达。RNF2表达下调后,U87细胞的增殖受到显著抑制,S期细胞明显减少(shRNA-NC:27.31±1.35;shRNF2-1:16.72±2.90;shRNF2-3:10.35±1.33),G1期细胞显著增加(shRNA-NC:56.13±1.80;shRNF2-1:76.32±3.11;shRNF2-3:80.45±2.83),同时出现细胞凋亡。经X线照射后,RNF2下调的细胞凋亡率明显增加(shRNA-NC:20.88±0.64;shRNF2-1:39.69±0.57;shRNF2-3:47.82±0.45)。结论下调RNF2表达可明显抑制细胞生长,并增强U87细胞对放射的敏感性。     

早期生长反应基因-1的表达与射线诱导胶质母细胞瘤凋亡的相关研究

目的 研究Egr-1基因在胶质母细胞瘤细胞放射前后的表达变化和放射敏感性的研究.方法 培养人恶性神经胶质母细胞瘤(GBM)细胞系T98G,分别提取4Gy剂量射线照射前及照射后不同时间点细胞的总RNA,通过实时定量PCR(qRT-PCR)检测Egr-1表达水平;.收获4Gy剂量射线照射后0、4、8、12、24和36h的细胞,采用细胞增殖抑制实验,及流式细胞术进行细胞周期和细胞凋亡检测.结果 T98G细胞在照射后Egr-1表达水平与对照组比较有显著差异(P =0.017);T98G细胞在射线照射后的生长抑制率与对照组比较有显著差异(P=0.026);射线照射后0、4、8、12 h细胞S期比例逐渐减低,G0/G1期比例逐渐升高,并在照射后12 h达到峰值,G2/M期无明显变化,照射后12、24、36 h细胞S期比例逐渐升高,G0/G1期比例逐渐减低,G2/M期无明显变化,各组之间相比,差异有统计学意义(P=0.035).射线照射后0、4、8、12h细胞凋亡率逐渐升高,并在照射后12 h达到峰值,照射后12、24、36 h细胞凋亡率逐渐降低,各组之间相比,差异有统计学意义(P =0.019).结论 通过射线诱导Egr-1基因表达而引起细胞周期和细胞凋亡的变化;射线诱导的Egr-1基因表达水平与射线诱导的细胞凋亡成正相关.     

免疫凋亡素e23sFv-Fdt-RC6对HER2阳性胶质瘤细胞U251的杀伤作用

目的:探讨靶向活性caspase-6融合蛋白对HER2阳性胶质瘤细胞系U251的促凋亡作用.方法:利用白喉毒素furin酶识别序列(Fdt)连接抗HER2单链抗体基因e23sFv和重构型caspase-6(RC6)基因,连接入pCMV载体,构建重组基因的真核表达载体pCMV-e23sFv-Fdt-RC6.脂质体转染HER2阳性胶质瘤U251细胞系,Western blot检测目的蛋白的表达.流式细胞术(FCM)检测转染后U251细胞的凋亡率,MTT法检测目的基因转染后对U251细胞增殖的影响.结果:双酶切及基因测序证实,pCMV-e23sFv-Fdt-RC6载体被成功构建.Western blot检测到转染表达载体48 h后的U251细胞中有活性caspase-6的表达.FCM检测到实验组细胞凋亡率比对照组显著增高.MTT实验观察到转染载体pCMV-e23sFv-Fdt-Rc6的U251细胞的增殖被明显抑制.结论:e23sFv-Fdt-RC6融合蛋白对HER2阳性胶质瘤细胞系U251有明显的促凋亡作用.     

骨髓间充质干细胞-胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶自杀基因治疗系统的构建及效应

背景:体内研究已经证实骨髓间充质干细胞能够像神经干细胞一样在脑内迁移和整合,如果骨髓间充质干细胞用于系统途径移植成为可能,将会显著简化移植的步骤。目的:构建含胞嘧啶脱氨酶(CD)基因的重组表达质粒pEGFP-N3-CD,用脂质体Lipofectamine2000转染大鼠骨髓间充质干细胞,体外观察CD基因的表达及BMSCs-CD/5-氟胞嘧啶自杀基因治疗系统对C6胶质瘤细胞的杀伤作用。方法:构建pEGFP-N3-CD质粒,酶切、DNA测序鉴定。全骨髓贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞,脂质体Lipofectamine2000介导重组表达质粒pEGFP-N3-CD转染大鼠骨髓间充质干细胞。G418筛选培养获取阳性克隆(BMSCs-CD细胞),免疫细胞化学染色检测BMSCs-CD细胞的CD基因蛋白表达。Transwell小室共培养BMSCs-CD细胞和C6胶质瘤细胞,24h后加入前体药物5-氟胞嘧啶,72h后TUNEL、MTT、流式细胞术检测C6胶质瘤细胞的凋亡情况。结果与结论:构建的重组表达质粒pEGFP-N3-CD含完整的CD基因序列,CD基因转染至骨髓间充质干细胞并在基因及蛋白水平有完整表达。BMSCs-CD和C6胶质瘤细胞体外共培养条件下,C6胶质瘤的凋亡率呈剂量依赖性,与对照组相比差异有显著性意义(P0.01)。结果提示体外共培养条件下,BMSCs-CD/5-氟胞嘧啶自杀基因治疗系统对C6胶质瘤细胞生长有显著的抑制作用。     

二十二碳六烯酸对体外大鼠C6胶质瘤细胞的促凋亡作用

目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)对大鼠C6胶质瘤细胞的促凋亡作用。方法 10、25、50、75和100μmol/L DHA处理C6细胞24、48和72 h后检测细胞活力;100μmol/L DHA处理C6细胞24 h后,应用TUNEL方法检测凋亡细胞,流式细胞术检测凋亡细胞的比例;应用免疫荧光和Western blotting方法检测剪切后含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved Caspase-3)在凋亡细胞中的表达情况。结果 25、50、75和100μmol/L DHA处理C6细胞24、48和72 h后,抑制细胞活力;100μmol/L DHA处理细胞24 h后,能够检测到TUNEL阳性的凋亡细胞;流式细胞术检测后发现,DHA能够明显上调凋亡细胞的比例;此外,细胞经100μmol/L DHA处理后,免疫荧光能够检测到cleaved Caspase-3阳性细胞,Western blotting能够检测到cleaved Caspase-3阳性蛋白条带。结论 DHA具有促进大鼠C6胶质瘤细胞凋亡的作用。     

胰岛素样生长因子-1拮抗c17.2神经干细胞的放射损伤

目的：评价IGF-1（胰岛素样生长因子-1）对放射引起的c17.2神经干细胞凋亡或坏死所产生的拮抗作用。方法:c17.2神经干细胞培养，免疫组化检测神经干细胞特异性抗原nestin（巢蛋白）及X-gal（吡喃半乳糖苷衍生物）染色检测 lac-z基因的表达。将IGF-1重组腺病毒转染c17.2神经干细胞，免疫组化法鉴定IGF-1蛋白的表达。建立放射引起体外培养的c17.2神经干细胞损伤的模型,流式细胞术及TUNEL法（原位末端标记）评判细胞的凋亡或坏死。观察胰岛素样生长因子-1重组腺病毒转染对细胞凋亡或坏死程度的影响。结果:绝大部分细胞nestin抗原染色阳性，X-gal染色阳性。免疫组化检测结果表明转染病毒的c17.2神经干细胞有IGF-1蛋白的表达，相同照射剂量下转染重组腺病毒的细胞凋亡率及坏死率较未转染细胞低 。结论：重组腺病毒介导的IGF-1转染可减少放射引起的c17.2神经干细胞的坏死和凋亡。IGF-1基因对神经干细胞有保护作用。     

二十二碳六烯酸对体外大鼠C6胶质瘤细胞促凋亡作用

目的 探讨二十二碳六烯酸（DHA）对大鼠C6胶质瘤细胞的促凋亡作用。方法 10、25、50、75和100 μmol/L DHA处理C6细胞24、48和72 h后检测细胞活力;100 μmol/L DHA处理C6细胞24 h后,应用TUNEL方法检测凋亡细胞,流式细胞术检测凋细胞的比例;应用免疫荧光和Western blotting方法检测剪切后含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved Caspase-3）在凋亡细胞中的表达情况。结果 25、50、75和100 μmol/L DHA处理C6细胞24、48和72 h后,抑制细胞活力;100 μmol/L DHA处理细胞24 h后,能够检测到TUNEL阳性的凋亡细胞; 流式细胞术检测后发现,DHA能够明显上调凋亡细胞的比例;此外,细胞经100 μmol/L DHA处理后,免疫荧光能够检测到cleaved Caspase 3阳性细胞,Western blotting能够检测到cleaved Caspase-3阳性蛋白条带。结论 DHA具有促进大鼠C6胶质瘤细胞凋亡的作用。     

白藜芦醇联合顺铂对神经胶质瘤细胞的作用

目的： 探讨白藜芦醇联合顺铂对神经胶质瘤细胞C6 的作用。方法：不同浓度的白藜芦醇与顺铂单独联合 作用于神经胶质瘤细胞C6,24、48 h 和72 h 后,CCK8法检测增殖,并选出合适浓度进行后续试验;不同浓度的 药物作用于细胞24 h 后,吖啶橙法观察细胞形态变化、流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期和免疫印迹检测蛋白 Bax、Bcl-2 和p-Erk1/2 变化。结果：白藜芦醇与顺铂能协同抑制神经胶质瘤细胞C6 的增殖。联合用药后细胞周 期抑制在S 期。免疫印迹结果显示凋亡蛋白Bax 的表达量增加,而凋亡抑制蛋白Bcl-2 的表达量减少,细胞外调 节蛋白激酶p-Erk1/2 的表达量减少。结论：白藜芦醇与顺铂联合对神经胶质瘤细胞具有相互增敏作用,能够协同 抑制细胞增殖,并通过Ras-Raf-MEK-Erk 信号通路促进其凋亡。     

紫甘蓝提取物提高人非小细胞肺癌细胞系放射敏感性的研究

目的:探讨紫甘蓝提取物(PCE)对人非小细胞肺癌A549细胞放射敏感性的影响及机制。方法:用CCK-8试验检测不同浓度PCE对细胞活力的影响,确定最佳剂量浓度。将对数生长期的A549细胞在6孔板中(每孔1×10~5个/ml)接种并分为6组∶对照组(CON,A组),10μmol/L PCE组(PCE-10μmol/L,B组)、50μmol/L PCE组(PCE-50μmol/L,C组)、照射组(IR,D组)、照射加10μmol/L PCE组(IR+PCE-10μmol/L,E组)、照射加50μmol/L PCE组(IR+PCE-50μmo/L,F组)。照射后,检测PCE对A549细胞增殖的影响。流式细胞术检测PCE对照射后A549细胞凋亡的影响。Western blot检测照射后PCE对A549细胞凋亡途径中关键蛋白表达的影响。用qRT-PCR检测不同浓度PCE照射前后miRNA326的表达。结果:CCK-8结果显示,PCE能明显抑制A549细胞的增殖,且随着药物浓度的增加,其增殖抑制率增加。流式细胞术结果显示,D组细胞凋亡率为7.63%±0.27%,E组为9.62%±0.42%,F组为17.50%±0.37%,相对于D组,PCE显著提高了E组和F组照射后A549细胞的凋亡率(P0.01)。qRT-PCR结果显示,E组、F组miRNA326的表达显著上调(P0.01),PCE能显著上调照射后A549细胞miRNA326的表达,且药物浓度越高,上调越明显。Western blot结果显示,PCE能显著降低Bcl-2的表达,增强Caspase-3和Caspase-9的活化,提高细胞凋亡水平。结论:PCE可通过上调miRNA326的表达和促进细胞凋亡来增强人非小细胞肺癌A549细胞的放射敏感性,且随着药物剂量的增加,其放射敏感性效应增强。     

三氧化二砷联合顺铂抑制C6胶质瘤细胞增殖的实验研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)联合顺铂(CDDP)抑制C6神经胶质瘤细胞增殖情况及其分子机制。方法体外实验采用MTT法检测对C6神经胶质瘤细胞的抑制率,流式细胞法检测C6胶质瘤细胞的凋亡及周期,Western blot检测caspase-3、PTEN、PI3K、Akt蛋白表达水平;体内实验采用免疫组化法检测caspase-3、IκB-α调控因子的表达,并观察大鼠的生存情况。结果 As2O3、CDDP及联合应用分别作用于C6神经胶质瘤细胞24 h后的细胞增殖最大抑制率分别为34.37%、31.73%和76.40%,其相应药物浓度分别为12.5、10.0、(12.5+10.0)μmol/L;两者联用后对C6胶质瘤细胞作用24 h后的凋亡率分别为从单独用药时的(4.60±1.12)%、(14.59±0.79)%提高到(36.13±1.55)%;采用PI单染检测的细胞周期也进一步证明了联合用药增加了C6细胞的周期抑制作用。Caspase-3、PTEN蛋白在联合组C6胶质瘤细胞中表达显著上调,而PI3K、Akt蛋白在联合组C6胶质瘤细胞中表达下调;免疫组化法检测结果显示,caspase-3调控因子在联合组用药的C6胶质瘤细胞中的表达上调,而IκB-α调控因子表达下调;但体内实验表明,在18 d观察期内各组大鼠的生存期无明显差异(P=0.2531)。结论 As2O3联合CDDP通过上调caspase-3和PTEN,下调PI3K、Akt及IκB-α抑制胶质瘤细胞体内外的生长。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

局部注射辛伐他汀对骨质疏松大鼠股骨髁骨小梁的改建效应

背景：局部注射具有成骨作用的辛伐他汀,可显著增加骨质疏松大鼠股骨颈及股骨髁部的骨密度及力学强度,分析局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。 目的：进一步研究骨质疏松大鼠股骨内局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。为将辛伐他汀应用于临床骨质疏松局部治疗提供实验基础。 方法：18只雌性SD大鼠双侧卵巢切除后3个月,制备大鼠骨质疏松模型。实验大鼠随机数字表法均分为3组,分别在实验大鼠的右侧股骨髓腔内单次注射辛伐他汀溶液5 mg、10 mg,对照组单纯注射空白载体。分别在注射后1个月处死大鼠并取材。Micro-CT扫描并定量分析骨组织形态变化。 结果与结论：给药后1个月,Micro-CT扫描结果显示,辛伐他汀治疗组的骨微结构参数如骨皮质厚度、骨小梁密度及连接率明显优于对照组。说明疏松骨骼单次注射小剂量辛伐他汀可显著促进股骨髁部骨小梁改建,改善骨骼微结构,可为强化局部、防治骨质疏松骨折的新选择进一步提供实验基础。     

石斛属民族药用植物的分类及生药学研究

中药石斛早在《神农本草经》中就被列为上品,其应用历史悠久,具有养阴生津、补肾益气、润喉护嗓、活血明目、抗癌防老等功效。本文对国内外石斛属民族药用植物的分类及生药学研究进行了综述。     

膝关节骨性关节炎的关节镜治疗体会

目的我科自2001～2005年4月对59例67膝的骨性关节炎（0A），进行关节镜检查及镜下清理术。方法镜检：膝关节骨性关节炎伴不同程度滑膜炎，滑膜皱壁粘连纤维片，关节软骨不同程度破坏。镜下清除增生滑膜，松解粘连，去除剥脱软骨、修复关节面。结果随访2月～4年，平均1.5年，术后综合评估2月～1年，优良率94％；1～2年，优良率79.2％；2年以上优良率54.8％。结论关节镜对膝关节骨性关节炎诊断能提供了比较全面的资料，并对骨性关节炎早期有良好疗效，具有创伤小、恢复快、并发症少和重复治疗等优点。     

Assessment of the efficacy of treatment of hemangiomas

Assessment of the aftereffects of cryoexposure and ultrahigh-frequency cryoexposure on hemangioma tissue of various types, cavernous and squamous, showed a higher cryogenic effect in hemangiomatous tissue preexposed to ultrahigh-frequency waves. A quantitative criterion is proposed for assessing the efficacy of the studied methods of exposure. Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 119, N ^o 6, pp. 669–672, June, 1995     

Anatomical study of distribution of valves of the cutaneous veins of adult''s limbs

Since the cutaneous veins of the four limbs have been used as autogenous grafts in the treatment of cardiovascular disorders, knowledge of distribution of the valves is increasingly required depending upon the use. In the gross anatomical study of distribution of valves of the trunci venae, there has been argument about locational relationships between the venous roots and the valves in the vicinity of the roots and the inter-valvular distance. However, there have been only few reports discussing detailed information about valves of the cutaneous veins of the four limbs. The authors observed patterns of distribution of the cutaneous venous valves of the four limbs of cadavers prepared for practice in anatomy. The following parts were excised from each cadaver: the cephalic, basilic, and the great saphenous veins, which originate from the acral venous network and flow into the proximal deep veins, and the venous roots communicating with these veins. An incision was made on each excised vein in the direction of the long axis under observation with a stereoscopic microscope, and the inter-valvular distance and the distance between the valve and the orifice of venous root in the vicinity of the valve were measured. The inter-valvular distance varied with type of the truncus venae, and it varied according to area even in the same truncus venae.     

Pathways of the realization of immunomodulating effects of neurotransmitters

Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 115, N ^o 4, pp. 401–404, April, 1993     

Characterization of sterols of three digenetic trematodes of buffalo

Sterols of three digenetic trematodes were isolated and characterized by infrared and 1H nuclear magnetic resonance spectroscopies, and gas-liquid chromatography and gas chromatography-mass spectrometry. Sterols identified were cholesterol, cholestanol, 24-methylcholesterol, 24-methylcholestanol, 24-ethyl-22-dehydrocholesterol, 24-ethyl-22-dehydrocholestanol, 24-ethylcholesterol and 24-ethylcholestanol.     

Mechanisms of generation of slow components of bioelectric activity in diagnostics of functional state of the gastrointestinal tract

New electrophysiologic devices were used for the diagnostics of the state of excitable structures in the gastrointestinal tract and correction of their motor functions. Bioelectrical and biomechanical activities form the basis of functioning of internal organs. The mechanisms of generation of slow bioelectrical activity that are important for clinical and physiological studies are described. One of these mechanisms is a capacitance parametric transducer converting the energy of contractions into specific electric signals reflecting muscle functions. Another mechanism results from slow oscillations of resting potentials of interrelated excitable cells in large neuromuscular structures of internal organs. The elaborated procedure is efficient for preventing early postoperative paresis of the gastrointestinal tract. Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 128, No. 10, pp. 448–452, October, 1999     

胃小弯侧血管弓的MDCT解剖

目的：研究正常胃小弯侧血管弓及其属支血管的多排螺旋CT表现。方法：回顾性分析51例正常成人的上腹部CT资料,观察胃小弯侧血管弓及其属支血管的显示情况、血管弓形态及其与胃壁的关系。结果：51例均显示胃小弯侧血管弓,血管弓贲门部属支、胃体部属支和幽门部属支分别显示46例、15例和10例;血管弓与胃壁紧邻41例。结论：MDCT检查可良好显示正常胃小弯侧血管弓及其属支血管。