地高辛标记的寡核苷酸探针两步原位杂交检测胸液细胞hTERT mRNA

目的 建立原位杂交法检测胸液细胞中人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的实验方法，初步评价该法识别胸液中肿瘤细胞的效果。方法 取23例胸腔积液病例标本，以地高辛标记的寡核苷酸探针对胸液细胞hTERT mRNA行两步原位杂交，再通过抗原-抗体-酶-显色途径，测出hTERT mRNA信号。实验研究设严格的阴性、阳性对照，且与临床诊疗各自独立进行。结果 本法对9例恶性胸腔积液病例检测的结果均为阳性，即无论细胞形态是否异常，镜下均可见到有细胞质深染及部分细胞核少许点状着色的细胞。此9例中，7例经胸液细胞形态学检查亦示阳性者．可同时观察到形态明显异常的肿瘤细胞，其余2例经反复胸液细胞形态学检查阴性，但胸膜活检确诊为恶性胸腔积液者，虽未见到形态明显异常细胞，但镜下可发现胞质深染、部分细胞核少许着色的细胞。14例良性胸腔积液病例的检测结果均为阴性。结论 原位杂交法检测胸液细胞hTERT mRNA可望作为一种临床细胞病理学的新方法，用以鉴别胸腔积液的良、恶性，同时判定肿瘤细胞的类型。     

DNA倍体分析系统鉴别良恶性胸腔积液的价值

目的探讨DNA倍体分析系统鉴别良恶性胸腔积液的价值。方法40例胸腔积液患者分为恶性胸液组及良性胸腔积液组,抽取胸腔积液,细胞离心后涂片,瑞氏染色行常规细胞学检查,用Feulgen染色做全自动DNA图像分析。结果恶性胸液组,常规细胞学检查7例为肿瘤细胞,4例核异型细胞,细胞学检查阳性率28.0%;DNA倍体分析系统检测21例为阳性,阳性率为84.0%;良性胸液组常规细胞学均为大量炎性细胞和少许间皮细胞,DNA倍体分析系统分析15例均未见DNA倍体异常细胞。结论DNA倍体分析系统可为良恶性胸腔积液诊断提供依据,是病理学检查的有益补充。     

胸水乳酸脱氢酶在肺腺癌并发胸腔积液患者中的临床意义

目的 通过测定胸水中乳酸脱氢酶(LDH)的水平,探讨胸水LDH对肺腺癌并发胸腔积液患者的临床意义。方法 对39例肺腺癌并发胸腔积液患者,以中心静脉导管行胸腔闭式引流,排尽积液后给予顺铂胸腔灌注化疗,表皮生长因子(EGFR)突变阳性者接受络氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)治疗,无EGFR突变者行常规方案化疗。治疗前采用乳酸底物法检测患者胸腔积液LDH水平,治疗结束后对所有患者进行随访。结果 ROC曲线分析结果显示,以胸水LDH=436.7U/L作为cut-off值,对肺腺癌并发恶性胸腔积液患者预后判断的敏感性为91.7%,特异性为59.3%;低含量(≤436.7 U/L)组的中位无进展生存期(mPFS)较高含量(＞436.7 U/L)组显著延长,其差异有统计学意义(P＜0.05);常规化疗组中位无进展生存期与EGFR-TKI治疗组比较,其差异无统计学意义(P＞0.05);多因素Cox回归分析显示,胸水LDH水平是影响预后的独立危险因素。结论 检测胸水LDH对判断肺腺癌并发恶性胸腔积液患者的预后有重要作用。     

IL-27与结核菌核酸检测在结核性胸膜炎诊断运用中的比较

目的 通过与胸水中结核菌核酸检测法比较,评价IL-27在检测结核性胸膜炎中的诊断价值。方法 选择2017年11月至2018年5月无锡市第五人民医院结核科收治的53例结核性胸膜炎患者和49例恶性胸腔积液患者,检测两组患者胸水及血清中IL-27水平,同时对两组患者胸水进行结核菌核酸检测,对检测结果进行统计分析。结果 结核组患者胸水IL-27浓度为（516±14） ng/L,高于恶性组（313±87） ng/L（P<0.001）,恶性组患者血清IL-27浓度虽高于结核组,但差异无统计学意义。胸水IL-27应用ROC曲线诊断结核性胸膜炎的敏感度为88.0%,特异度为78.0%。胸水IL-27检测诊断结核性胸膜炎的敏感度高于结核菌核酸检测（P<0.001）。结论 胸水IL-27检测用于诊断结核性胸膜炎具有较高的敏感度和特异度,是辅助诊断结核性胸膜炎的一种较为简便、高效的方法 。     

MN/CA9和Ep-cam基因检测在良恶性胸腔积液鉴别中的价值

目的 探讨MN/CA9和Ep-cam 基因检测对良、恶性胸腔积液鉴别诊断的价值.方法 选择35例恶性胸腔积液(MPE)和30例良性胸腔积液(BPE),采用SYBR Green I FQ RT-PCR检测胸水沉淀细胞中MN/CA9 mRNA、Ep-cam mRNA的表达,胸水找脱落细胞,免疫化学发光法检测胸水CEA水平.结果 MN/CA9和Ep-cam基因在良、恶性胸腔积液中的表达均有明显差异(均P＜0.01).对MPE的诊断,用FQ RT-PCR方法检测MN/CA9 mRNA和Ep-cam mRNA的敏感性(SN)均高于其它两项检查,差异均有统计学意义(均P＜0.05),而特异性(SP)无统计学差异(均P ＞0.05).细胞学阴性的MPE,MN/CA9诊断的SN为55.6%,SP为100%;Ep-cam诊断的SN为61.5%,SP为100%;两者联合检测的细胞学阴性MPE的SN为76.9%,SP为100%.结论 SYBR Green I FQ RT-PCR检测MN/CA9和Ep-cam 基因有助于鉴别良、恶性胸腔积液;联合检测MN/CA9和Ep-cam 基因的表达有助于提高细胞学阴性MPE诊断的敏感性.     

胸腔积液脱落细胞端粒酶逆转录酶mRNA检测及其意义

目的:通过检测良、恶性胸腔积液脱落细胞端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的表达情况,探讨其在良、恶性胸腔积液中的诊断价值。方法:采用逆转录-多聚酶链反应法检测39例恶性胸腔积液、16例良性胸腔积液中hTERT基因的表达情况。结果:恶性胸腔积液中hTERT基因的表达率明显高于良性胸腔积液(P<0.05)。检测hTERT基因表达对恶性胸腔积液的敏感性、特异性和诊断符合率分别为87.18%,81.25%和85.45%。结论:hTERT基因参与了恶性胸腔积液的发生、发展过程。采用RT-PCR法检测胸腔积液中hTERT基因表达有助于临床上良、恶性胸腔积液的鉴别诊断。     

联合检测细胞角蛋白和癌胚抗原对恶性胸腔积液的诊断价值

胸腔积液是临床常见疾病,而胸液常规、生化检查难以区分良、恶性病变,恶性胸液细胞学诊断的阳性率仅为60％左右,仅有7％～12％的胸液细胞学阴性的病例得到确诊。为了提高胸液分析的价值,国内外的研究者进行了多种肿瘤标记物的检测,2001年8月～2002年8月对40例胸腔积液患者联合检测胸液癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(CYFRA_(21-1))浓度,探讨其对良恶性胸液鉴别诊断价值。     

肺腺癌所致恶性胸腔积液中Survivin蛋白的表达及临床意义

目的 探讨Survivin蛋白在肺腺癌所致恶性胸腔积液中的表达及其临床意义.方法 采用免疫细胞化学和蛋白印迹技术检测49例恶性胸腔积液和25例良性胸腔积液中Survivin蛋白的表达,同时送检胸液脱落细胞学作为对照,分析Survivin与肺腺癌所致恶性胸腔积液的临床特征和疗效之间的关系.结果 Survivin在恶性胸腔积液中的阳性表达率为81.6%(40/49),明显高于胸液细胞学检查的阳性率57.1%(28/49),二者比较差异有显著性(P＜0.05),联合检测阳性率达87.7%;同时也显著高于良性组8.00%(2/25)(P＜0.05).Survivin的表达在患者性别、年龄、吸烟、有无淋巴结转移和远处转移中差异无显著性;在恶性组中,胸水Survivin蛋白表达阳性患者治疗有效率为52.5%(21/40),明显低于阴性患者的88.8%(8/9)(P＜0.05);但细胞质和细胞核之间差异无显著性(P＞0.05).结论 肺腺癌所致恶性胸腔积液中Survivin蛋白的表达明显增高,检测胸水Survivin的表达可作为恶性胸腔积液早期诊断的一个新的生物标记物,对鉴别良恶性胸腔积液和预测恶性胸腔积液疗效有一定的参考价值.     

CA125联合ADA检测对炎性/结核性/癌性胸腔积液的鉴别

目的探讨CA125联合ADA检测对炎性/结核性/癌性胸腔积液的诊断意义.方法病例共分3组,结核性胸液组31例;癌性胸液组20例;炎性胸腔积液组(渗出液)25例.结果 ADA在结核性胸腔积液和炎症性胸胸腔积液的均值显著高于恶性胸腔积液.CAl25在结核性胸腔积液和恶性胸腔积液中均明显增高,而在恶性胸腔积液和结核性胸腔积液的均值差异无统计学意义.结论 ADA 和CA125在鉴别诊断良、恶性胸腔积液中有一定的意义,且ADA和CA125的联合检测可以帮助诊断,而且胸腔积液的检查简单,创伤小,费用低廉,便于重复,有利于临床上开展.ADA和CA125的联合检测可以提高胸腔积液性质诊断的特异性,为临床早期诊断治疗提供一定的帮助.     

人端粒酶反转录酶启动子的克隆与肿瘤靶向治疗的研究

目的 克隆hTERT启动子,并观察hTERT启动子调控下tk/GCV系统对人肺癌细胞系A549的特异性杀伤效果。方法 设计特异性引物,以HepG2基因组DNA为模板,用PCR方法扩增hTERT启动子;分别构建hTERT启动子和hCMV启动子调控的LacZ、tk基因真核表达载体;将上述质粒用脂质体转染A549细胞和人胚肺成纤维细胞系MRC5后,通过RT-PCR和β-Gal染色观察hTERT启动子工作情况;用MTT法检测不同浓度的GCV对A549和MRC5细胞的细胞毒作用。结果 成功克隆hTERT上游-280bp~+40bp的核心启动子。RT-PCR和β-Gal染色显示hTERT启动子能有效地调控其下游tk基因、LacZ基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞中特异性转录和表达;hTERT启动子调控的tk/GCV系统对端粒酶阳性的肿瘤细胞系A549有明显的特异性杀伤效应。结论 hTERT启动子可特异性地调控目的基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞中表达而不影响正常的细胞,表明端粒酶启动子调控自杀基因的表达是一种很有希望的肿瘤靶向基因治疗策略。     

浆膜腔积液细胞病理学诊断阳性病例分析

目的探讨恶性浆膜腔积液细胞学分型诊断与病理学分型诊断偏差的原因。方法235例恶性浆膜腔积液标本,行HE染色后显微镜观察,细胞学分型诊断并对积液里常见的转移癌(肺腺癌、肺鳞癌、肺小细胞未分化癌、卵巢腺癌、胃癌、乳腺癌)进行癌细胞总量等14项细胞形态学指标观察。结果①细胞学分型与病理学分型不符情况:5例中、低分化鳞癌和1例大细胞未分化癌细胞学误诊为腺癌,5例可疑癌胸水及4例可疑癌腹水由于涂片中恶性细胞数量少或癌细胞不典型而未能分型诊断。②不同原发部位及不同病理类型来源的癌细胞在积液涂片各有一些特点:卵巢癌细胞数量较多且以大细胞群存在(占86.11%),肺腺癌、肺小细胞未分化癌及乳腺癌以中、小细胞群为多见;胃癌有表现为单个散在细胞(44.83%),部分病例有成群或成团(55.17%);肺鳞癌多以单个散在为主。结论浆膜腔积液细胞学诊断及观察指标能较好地鉴别各种肿瘤细胞的形态特征,为临床确诊原发恶性肿瘤提供有价值的诊断依据。     

肺腺癌细胞Tiam1，E-cadherin和Vimentin的表达及与上皮间质转化的关系

目的：探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（Tiaml）及E—cadherin,Vimentin蛋白与上皮间质转化（epithelialandmesenchymaltransition,EMT）在肺腺癌细胞中的表达关系的临床意义。方法：从112例恶性胸水中提取肺腺癌细胞为研究对象,以39例良性胸水中增生上皮细胞为对照,常规液基细胞薄层（TCT）技术、H＆E染色、免疫细胞化学染色检测胸水中的肺腺癌细胞。采用免疫细胞化学方法检测细胞中Tiaml、E钙粘素蛋白、Vimentin的表达。结果：112例恶性胸水标本中,75例Tiaml在肺腺癌细胞中表达阳性,阳性率为67．0％。E-cadherin及Vimentin蛋白在肺腺癌细胞中的表达率分别为81／112（72．3％）和94／112（83．9％）。结果显示,Tiaml在肺腺癌细胞中的表达的增强伴随E—cadhenn表达的下降及Vimentin的表达增强。Tiaml和E-cadhefin在增生上皮细胞中阴性表达。结论：Tiaml在肺腺癌细胞中阳性表达,其影响肿瘤发展的机制可能与上皮间质转化发生有关。     

浆膜腔积液常规检查采用染色分类法进行细胞分类的临床重要性

目的评价浆膜腔积液常规检查中离心涂片染色法细胞分类的临床应用价值。方法回顾性分析我院自2008年8月至2009年7月与2009年8月至2010年7月两个时间段分别采用直接分类法和染色分类法进行浆膜腔积液常规白细胞分类,比较、评价两种方法在临床应用中的价值。结果 2008年8月至2009年7月,采用直接分类法检测49例胸腹水标本,其中胸水28例,腹水21例。未检出肿瘤细胞。2009年8月至2010年7月,采用染色分类法检测199例胸腹水标本,其中胸水107例,腹水92例。27例检出肿瘤细胞,有8例为未确诊病例。结论浆膜腔积液常规检查采用离心涂片染色细胞分类法,临床应用价值高,可鉴别良、恶性,并能明确恶性肿瘤的诊断,应重视该方法在常规工作中的应用。     

胸腹心包腔积液恶性细胞分析

目的:收集2002年1月至2003年12月2240例胸腹心包腔积液中查见470例恶性细胞分析,探讨积液常规检查的细胞形态学诊断价值。方法:浆膜腔积液常规检查的制片采用推片法,涂片染色采用瑞吉复合染色法,通过有经验的细胞学学者鉴定细胞性质。结果:在2240例胸腹心包腔积液常规检查细胞形态学分析中检出恶性细胞342例,与临床最终诊断恶性肿瘤的符合率为98.8%;检出44例可疑恶性细胞中与临床最终诊断恶性肿瘤的符合率为88.6%;122例核异质细胞中确诊为恶性肿瘤71例,与临床确诊符合率为58.2%;检出恶性淋巴瘤细胞14例、白血病细胞5例、骨髓瘤细胞1例、恶性间皮瘤2例,与临床终诊符合率为100%;并对448例胸腹心包腔积液恶性细胞分型:其中腺癌398例、鳞癌33例、未分化癌17例。结论:在浆膜腔积液常规检查中,开展细胞形态学检查十分重要,特别要重视积液涂片的细胞形态学观察,在积液常规检查中提高恶性细胞(包括肿瘤细胞、白血病细胞、淋巴瘤细胞、骨髓瘤细胞等)的检出率,对于临床诊断及治疗有重要意义。     

联合检测血清和胸水中多项肿瘤标志物对良恶性胸腔积液的鉴别诊断价值

目的探讨联合检测血清和胸水中癌胚抗原（CEA）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、细胞角质蛋白19片断（CYFRA21-1）对良恶性胸腔积液的鉴别诊断价值。方法 96例临床已确诊的胸腔积液患者（恶性组50例,良性组46例）采用全自动免疫分析系统进行CEA、NSE、CYFRA21-1含量测定。结果恶性胸腔积液患者的3种肿瘤标志物水平均明显高于良性疾病组,差异有统计学意义（P〈0.05）。联合检测血清及胸腔积液3项指标,恶性胸腔积液诊断的敏感性为98%,特异性为80%,准确性为89%,较检测单一指标提高了诊断的敏感度、准确度。结论联合检测胸腔积液中CEA、NSE、CYFRA21-1对良恶性胸腔积液的鉴别诊断有重要价值,能提高诊断准确率。     

胸水细胞端粒酶活性检测对良恶性胸腔积液的鉴别诊断价值

目的：探讨胸水细胞端粒酶活性对良、恶性胸腔积液的鉴别诊断价值。方法：用改良的PCR-ELISA法检测37例恶性、32例良性胸水细胞端粒酶活性,并与胸水细胞学、癌胚抗原（CEA）诊断结果进行比较。结果：37例恶性胸腔积液中有26例端粒酶活性阳性（26/37）,阳性率为70.27%,高于良性胸腔积液中端粒酶海性表达（2/32,P＜0.01);端粒酶活性检测诊断恶性胸水敏感性为70.27%,特异性为93.75%,与胸水细胞学诊断符合率为54.05%;其敏感性高于胸水CEA诊断结果（敏感性为51.35%)。结论：胸水细胞端粒酶活性检测作为细胞学检查的辅助手段能提高恶性胸水的诊断率,有助于良、恶性胸腔积液的鉴别诊断。     

DNA倍体分析联合AgNOR检查对恶性胸腔积液的诊断价值

目的探讨脱落细胞DNA倍体分析联合核仁组成区嗜银蛋白（AgNOR）染色检查对恶性胸腔积液的诊断价值。方法应用流式细胞术（FCM）和AgNOR染色技术和对72例胸腔积液患者（良性积液30例,恶性积液42例）胸液中的脱落细胞进行DNA倍体分析和AgNOR染色检查,比较两组的检测结果。结果恶性组中DNA异倍体阳性率为78.6%,良性组的阳性率为6.7%。恶性组癌细胞内AgNOR颗粒数为（5.36±0.75）,良性组为（1.42±0.41）,以细胞内AgNOR颗粒数〉3.86为阳性,恶性组AgNOR阳性率为85.7%,良性组阳性率为13%。两项指标良恶性组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。两者联合（并联）检测,敏感度高于单一指标检测敏感度。结论脱落细胞DNA倍体联合AgNOR倍体检查可提高恶性胸腔积液诊断的敏感度。     

胸水肿瘤标志物CYFRA21-1与C-erbB-2检测对肺癌的诊断价值

[摘要] 目的 通过检测胸水中细胞角蛋白片段抗原（CYFRA21-1）和C-erbB-2基因，探索鉴别诊断良、恶性胸腔积液的新方法。方法 收集35例恶性胸水和35例良性胸水，分别进行CYFRA21-1和C-erbB-2检测，CYFRA21-1采用固相夹心免疫放射量度法（RIA）、C-erbB-2含量采用酶联免疫吸附法（ELISA）。结果 CYFRA21-1在恶性胸水组中含量[(98.54±23.32)ng/ml]明显高于良性胸水组[(16.18±5.77)ng/ml]；C-erbB-2在恶性胸水组中含量为(5.12±1.56)ng/ml明显高于良性胸水组为(1.76±0.31)ng/ml。结论 胸水CYFRA21-1和C-erbB-2联合检测可极大提高良、恶性胸腔积液鉴别诊断的灵敏度。