芹菜素的抗炎作用及其机制

目的:研究芹菜素的抗炎作用及其分子机制。方法:用LPS刺激小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7释放TNF-α、IL-6、NO等炎症介质,评价药物对巨噬细胞释放炎症介质的抑制作用。以ELISA法检测TNF-α、IL-6的含量,以Griess法检测NO的含量,同时以MTT法评价细胞毒性。Western blot法检测iNOS、COX-2及内参蛋白β-actin水平。比色法检测COX-2酶活性。结果:芹菜素在12.5～100μmol.L-1浓度范围内可明显抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7释放炎症介质TNF-α、IL-6、NO,并呈现良好的剂量依赖关系。Western blot结果表明芹菜素能够下调iNOS蛋白水平,但是对COX-2蛋白表达水平无明显抑制作用。比色法测定酶活性结果提示芹菜素对COX-2酶活性无明显抑制作用。结论:芹菜素通过下调iNOS蛋白表达水平,能明显抑制巨噬细胞释放炎症因子TNF-α、IL-6和炎症介质NO,这可以为芹菜素以及相关制剂的临床应用提供一定的理论依据。     

蛇床子素的抗炎作用及其机制

目的研究蛇床子素的抗炎作用及其分子机制。方法用LPS刺激小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7释放TNF-α、IL-6、NO等炎症介质,评价药物对巨噬细胞释放炎症介质的抑制作用。以ELISA法检测TNF-α、IL-6的含量,以Griess法检测NO的含量,同时以MTT法评价细胞毒性。Western blot法检测iNOS、COX-2及内参蛋白β-actin水平。比色法检测COX-2酶活性。结果蛇床子素在12.5～100μmol.L-1浓度范围内可明显抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7释放炎症介质TNF-α、IL-6、NO,并呈现良好的剂量依赖关系。Western blot结果表明蛇床子素能够明显下调iN-OS和COX-2蛋白表达水平。比色法测定酶活性结果提示蛇床子素对COX-2酶活性无明显抑制作用。结论蛇床子素通过下调iNOS和COX-2蛋白表达水平,能明显抑制巨噬细胞释放炎症因子TNF-α、IL-6和炎症介质NO,这可以为蛇床子素以及相关制剂的临床应用提供一定的理论依据。     

利用基因芯片分析二氢青蒿素的抗肿瘤作用机制

目的：通过基因芯片对二氢青蒿素处理的K562细胞基因表达情况的检测，探讨二氢青蒿素抑制K562增殖的作用机制。方法：配制1×10^-5，4×10^-5，16×10^-5，64×10^-5，256×10^-5 mol·L^-1二氢青蒿素处理K562细胞24 h，倒置光显微镜和荧光显微镜观察细胞变化，流式细胞仪检测细胞周期，提取总RNA，逆转录成cDNA与基因芯片杂交，扫描仪检测杂交结果。结果：倒置光显微镜下细胞出现不同程度的皱缩，核分裂相减少，细胞密度下降。荧光显微镜下染色质高度浓缩、边缘化，凝聚成明亮的团块，即凋亡小体。流式细胞仪G₂期细胞的比例增加。扫描杂交结果显示有13条基因表达有差异，其中chk1表达上调，PCNA,cyclinB1,cyclinD1,cyclinE1,cdk4,cdk2,E2F1,DNA-PK,DNA-TopoⅠ, mcl-1,jNK,VEGF表达下调。结论：二氢青蒿素可以抑制K562细胞增殖，作用机制与改变细胞周期某些调控物质的基因表达、诱导K562细胞凋亡等有关。     

江苏地产自首乌C21甾苷抗炎作用及其机制研究

目的：研究自首乌C22甾苷（CSG）的抗炎作用及其机制。方法：以阿司匹林、英太青、环磷酰胺作阳性对照药，观察CSG对醋酸致小鼠毛细血管通透性增高、二甲苯诱导的小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶诱导的大鼠足爪肿胀、棉球诱导的大鼠肉芽肿和弗氏完全佐剂诱导的大鼠佐剂性关节炎模型的抗炎作用；测定AA大鼠血清IL-6、TNF-α含量，关节NO、PGE，含量，探讨CSG抗炎作用机制。结果：CSG对急慢性、免疫性炎症反应有明显抑制作用，对AA大鼠血清IL-6、TNF-α、关节组织中NO、PGE，的生成有抑制作用。结论：CSG具有较强的抗炎作用，抗炎机制与抑制细胞因子TNF-α、IL-6和炎症因子NO、PGE，的生成有关。     

二氢青蒿素对系统性红斑狼疮小鼠继发性骨损害的防治作用初探

目的:观察自发性系统性红斑狼疮(SLE)小鼠的继发性骨损害及初步探讨二氢青蒿素的干预作用。方法:15周龄B6.Mrl-Faslpr/J发病雌性小鼠随机分成红斑狼疮组、醋酸泼尼松6mg/kg组和二氢青蒿素150mg/kg组,8只C57BL/6J野生型同龄小鼠为空白对照。每日灌胃给药共90天。实验结束,胫骨显微CT扫描和不脱钙切片、染色后进行形态计量学分析,股骨力学检测,观察SLE小鼠骨代谢和骨质量变化。结果:与空白对照组相比,红斑狼疮组的骨量显著减少、连接密度和小梁密度均明显下降,小梁变薄,分离度增加,板状小梁向杆状小梁转变(SMI)增加,骨形成率下降而骨吸收明显增加,股骨弹性载荷、最大载荷和断裂载荷均下降;醋酸泼尼松组骨形成率进一步下降;二氢青蒿素150mg/kg组与红斑狼疮组相比,骨量、连接密度和小梁密度均明显增加,小梁结构改善,骨吸收显著抑制且骨形成比醋酸泼尼松组明显增加;二氢青蒿素组弹性载荷及最大载荷、断裂载荷均比红斑狼疮组和醋酸泼尼松治疗组明显增加。结论:二氢青蒿素既可显著降低SLE导致的小鼠骨吸收增加且不降低骨形成,并阻止骨量丢失,改善骨微结构和生物力学性能。     

二氢青蒿素联合放疗对肺癌GLC-82细胞凋亡的影响及机制研究

目的研究二氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）联合放疗对人肺腺癌GLC-82细胞周期和凋亡的影响及其机制。方法 MTT法检测不同浓度DHA分别在24、48、72 h对GLC-82细胞的抑制作用;克隆形成实验分析,多靶单击拟合模型方程计算放射增敏比,评价增敏效果;流式细胞术检测DHA联合放疗对GLC-82细胞周期和凋亡的影响;Western blot检测P53、P21、Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果不同浓度DHA（4、8、16、32、64、128μg/mL）作用24、48和72 h的IC50值分别为：38.25、20.58、10.36μg/mL,对GLC-82细胞的毒性有明显剂量和时间依赖性,抑制率较空白对照组明显增加（P〈0.01,P〈0.05）;DHA对GLC-82细胞具有放射增敏作用,其增敏比为1.4。DHA联合放疗可使GLC-82细胞周期的构成发生明显的变化并诱导细胞凋亡,凋亡率为21.5%,与空白对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。Western blot表明,DHA联合放疗作用GLC-82细胞后P53和P21的蛋白水平表达增加,同时下调Bcl-2蛋白表达（P〈0.01,P〈0.05）。结论 DHA对肺腺癌GLC-82细胞有较强的细胞毒性和放射增敏作用,其作用机制可能是使GLC-82细胞生长停滞在G0/G1期并诱导细胞凋亡,使S期细胞比例降低;使P53功能恢复,通过抑制Bcl-2蛋白的表达促使凋亡,从而起到杀伤肿瘤的作用。     

板蓝根提取物对RAW 264.7细胞生成NO及表达iNOS的影响

目的:研究板蓝根的抗炎作用及分子机制。方法:以LPS刺激RAW 264.7细胞,用板蓝根提取物进行干预,测定NO和TNF-α含量,Western blot法检测iNOS和COX-2蛋白表达水平。结果:板蓝根在12.5～100μg.mL-1浓度范围内可明显抑制RAW 264.7细胞释放TNF-α及NO,并可显著抑制iNOS蛋白表达。结论:板蓝根通过下调iNOS蛋白表达,抑制炎症介质TNF-α及NO而发挥抗炎作用。     

连翘提取物对RAW264.7细胞生成NO及表达iNOS的影响

目的:研究连翘的抗炎作用及分子机制。方法:以LPS刺激RAW 264.7细胞,用连翘提取物进行干预,测定NO和TNF-α含量,Western blot法检测iNOS和COX-2蛋白表达水平。结果:连翘在12.5～100μg·mL-1浓度范围内可明显抑制RAW 264.7细胞释放TNF-α及NO,并可显著抑制iNOS蛋白表达。结论:连翘通过下调iNOS蛋白表达,抑制炎症介质TNF-α及NO而发挥抗炎作用。     

苦苣菜水提物对小鼠的镇咳、祛痰和抗炎作用观察

目的:探析苦苣菜水提物对小鼠的镇咳、祛痰和抗炎作用。方法:制备急性炎性反应小鼠模型,二甲苯致耳廓肿胀模型及角叉菜胶致足跖肿胀小鼠模型,根据随机对照法分为正常空白对照组、模型组、苦苣菜水提物剂量Ⅰ组、苦苣菜水提物剂量Ⅱ组、苦苣菜水提物剂量Ⅲ组,每组均为10只,截取耳廓和足跖,测算肿胀度;制备及提取血清样本、组织液,应用ELISA法检测炎性因子的变化;比较5组小鼠的镇咳作用(咳嗽次数、潜伏期);比较5组小鼠气管的酚红排泌量、苦苣菜水提物抗二甲苯致小鼠耳肿胀程度;比较不同剂量苦苣菜水提物环加氧酶2 (COX-2)、P38活化蛋白酶丝裂原(p38MARK)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)含量的变化。结果:苦苣菜水提物Ⅰ组、苦苣菜水提物Ⅱ组、苦苣菜水提物Ⅲ组、模型组与空白对照组比较其潜伏期、咳嗽次数均有降低,但苦苣菜水提物Ⅲ组的咳嗽潜伏期、咳嗽次数显与空白对照组比较,差异有统计学意义(P 0. 05);苦苣菜水提物Ⅰ组、苦苣菜水提物Ⅱ组、苦苣菜水提物Ⅲ组、模型组与空白对照组比较,其酚红排泌量均高于空白对照组,但苦苣菜水提物Ⅲ组的酚红排泌量与空白对照组比较更显著,差异有统计学意义(P 0. 05);苦苣菜水提物Ⅰ组、苦苣菜水提物Ⅱ组、苦苣菜水提物Ⅲ组与空白对照组比较,其抗二甲苯致小鼠耳肿胀均有降低,但苦苣菜水提物Ⅲ组更显著,差异有统计学意义(P 0. 05);不同剂量的苦苣菜水提物与空白对照组比较COX-2、P38MAPK、TNF-α、IL-6指标均有降低,但苦苣菜水提物Ⅲ组的临床指标显著低于空白组,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论:苦苣菜水提物可不同程度的抑制炎性肿胀,其对急性炎性反应的保护作用可能与下调机体的COX-2、P38MAPK、IL-6、TNF-α等细胞因子和炎性反应介质的释放,以及调节机体有关炎性反应发生通路有关。     

青蒿素对小鼠Lewis肺癌的抑制及TNF-α和IFN-γ的影响

目的：探讨青蒿素对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑瘤效应及对细胞因子的影响.方法：取C57BL/6J小鼠60只,常规接种Lewis肺癌,随机分为6组,分别为模型对照组、阳性对照组（CTX）、联合用药组（CTX联合ART）,青蒿素的高、中、低剂量组（200、100、50mg/kg）,检查各组小鼠的体重变化和抑瘤率,应用ELISA双抗体夹心法,分析青蒿素对小鼠血清TNF-α和IFN-γ含量的影响,并初步分析其作用机理.结果：青蒿素能显著抑制小鼠肺癌,青蒿素200mg/kg和100mg/kg剂量组的抑瘤率分别为36.06％、23.84％,青蒿素联合CTX药物组的抑瘤率为61.49％;而且能影响荷瘤小鼠外周血清TNF-α及IFN-γ细胞因子水平,随着剂量的增加,血清中TNF-α和IFN-γ的水平明显提高.结论：青蒿素对Lewis肺癌有明显的抑瘤作用,并能上调荷瘤小鼠血清的TNF-α和IFN-γ含量,从而提高荷瘤小鼠的免疫功能.     

虫草素抗炎作用及机制研究

[目的]研究虫草素抗炎作用及机制。[方法]通过二甲苯致小鼠耳肿胀实验研究虫草素不同剂量(50、100、200 mg/kg)对耳肿胀的抑制作用,在细胞水平研究虫草素(12.5、25、50μmol/L)对诱导型一氧化氮合酶(i NOS)和环氧酶-2(COX-2)表达和一氧化氮(NO)和前列腺素E_2(PGE_2)产生的影响。[结果]虫草素(200 mg/kg)能够抑制二甲苯致小鼠耳肿胀(P0.05)和耳片中一氧化氮(NO)和前列腺素E_2(PGE_2)的产生(P0.05)。在细胞水平虫草素(25、50μmol/L)能够抑制诱导型一氧化氮合酶(i NOS)和环氧酶-2(COX-2)表达(P0.05),一氧化氮(NO)和前列腺素E2(PGE2)的产生(P0.05)。[结论]虫草素具有抗炎作用。     

美乐涂膜剂抗炎及皮肤刺激性试验研究

目的研究美乐涂膜剂的抗炎作用及单次给药对皮肤的刺激性。方法采用铁器烫伤制作深Ⅱ度皮肤烫伤模型,测定血清IL-1,IL-6,TNF-α含量;采用完整皮肤、破损皮肤单次给药,观察其刺激性。结果高、中剂量组能够明显降低大鼠烫伤6 h、24 h后血清中IL-1,IL-6,TNF-α含量,与赋形剂组比较膜剂具有抗炎作用及单次用药的安全性。     

不同化学型樟对大鼠佐剂性关节炎模型的影响

目的:比较不同化学型的樟树叶挥发油和天然冰片对佐剂性关节炎大鼠的抗炎作用.方法:将大鼠足跖皮内注射弗氏完全佐剂造成关节炎模型,随机分为模型组、正常组、阳性对照药雷公藤多苷组(8.1 mg·kg~(-1))、龙脑樟挥发油组(80mg·kg~(-1))、脑樟挥发油组(80 mg·kg~(-1))、异樟挥发油组(80 mg·kg~(-1))、天然冰片组(80 mg·kg~(-1)),灌胃给予相应药物,连续给药35 d,观察动物的一般情况,每周称量动物体重,每4 d测量1次关节肿胀度,结束时测定大鼠的胸腺指数、脾指数,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清中炎性细胞因子肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)的含量.结果:模型组大鼠关节肿胀度、细胞因子TNF-α,IL-2,IL-6的含量均显著高于正常组,各给药组大鼠的上述指标明显低于模型对照组,足肿胀抑制率从高到低依次为异樟挥发油组、脑樟挥发油组、龙脑樟挥发油组、天然冰片组,对细胞因子IL-2,IL-6的含量降低尤为明显,抑制率均在38%以上,对细胞因子TNF-α和IL-2的含量影响组间比较没有显著性差异,对细胞因子IL-6的生成抑制脑樟挥发油组显著优于龙脑樟挥发油、天然冰片,后两者显著优于异樟挥发油,各给药组的动物体重、胸腺指数、脾指数与模型组比较无明显差异.结论:樟的不同化学型对佐剂性关节炎大鼠炎症均有抑制作用,但药理活性强弱和作用机制存在一定差异,提示药用植物的不同化学型值得深入研究,临床应用中应考虑药用植物化学型的差异.     

青蒿素及其衍生物在肾病领域中作用机制的研究进展

青蒿治疗疟疾已有1600多年的历史,青蒿素是从黄花蒿Artemisia annua茎叶中提取的含过氧基团的倍半萜内酯,已成为一个全新的天然抗疟药。青蒿素及其衍生物(双氢青蒿素、青蒿琥酯、蒿甲醚)因其确切的抗疟效果走向世界,随之越来越多的潜在药理活性被发掘,如抗菌、杀虫、抗炎、抗癌、免疫调节等活性。近年来随着对青蒿素及其衍生物的研究和探索,发现其能通过调节多种信号通路、抗氧化应激以及调节激素受体和CD4~+T细胞亚群分化等途径治疗狼疮性肾炎、免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)肾病、糖尿病肾病、膜性肾病、肾纤维化及急性肾损伤,使其成为慢性肾脏病领域极具开发潜力的药物。     

双氢青蒿素诱导肿瘤细胞铁死亡及其机制研究

目的阐明双氢青蒿素(DHA)诱导肿瘤细胞铁死亡的作用及其机制。方法利用3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)检测DHA与FeSO_4体外芬顿样(Fenton)反应生成氧自由基(·OH)的能力;MTT法检测DHA对人肝癌HepG2细胞的毒性(包括FeSO_4与去铁胺预处理组)。MTT法考察谷胱甘肽(GSH)与铁死亡抑制剂(Fer-1)对DHA细胞毒性的影响;采用DCFH-DA染料考察DHA(包括FeSO_4预处理组)诱导的细胞内活性氧的生成能力;采用C11-BODIPY581/591与DiO分别考察DHA(包括FeSO_4预处理组)对细胞内脂质过氧化物生成能力以及细胞膜结构的影响;利用谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX-4)试剂盒测定DHA(包括FeSO_4预处理组)对HepG2细胞内GPX-4活性的影响。结果 Fe~(2+)能够催化DHA发生芬顿样反应并生成·OH;DHA的半数抑制浓度(IC_(50))为(39.96±8.78)μmol/L,FeSO_4与去铁胺分别能够增加或者降低DHA的细胞毒性;DHA处理后细胞内活性氧含量与脂质过氧化物含量升高,细胞形态变大,细胞膜呈散点状分布并呈现解离状态。FeSO_4预处理组与DHA组相比较进一步增加细胞内活性氧含量与脂质过氧化物含量,并且细胞膜形态完全破坏。FeSO_4能够增强DHA对GPX-4活性的抑制作用。结论 DHA通过芬顿样反应升高细胞内活性氧而最终诱导肿瘤细胞铁死亡。另外,外源性铁可以加速DHA发生芬顿样反应进而加速肿瘤细胞铁死亡的发生与发展。     

Anti-inflammatory and antinociceptive activities of Campomanesia adamantium

Ethnopharmacological relevance

Campomanesia species are used in folk medicine as anti-inflammatory, anti-rheumatic, anti-diarrheal and hypocholesterolemic.

Aim of the study

The present study investigated the in vivo anti-inflammatory and antinociceptive properties of ethyl acetate (AE) and aqueous (Aq) extracts from leaves of Campomanesia adamantium and in vitro anti-inflammatory activity of AE and its isolated flavonols, myricitrin and myricetin.

Materials and methods

The antinociceptive activity of AE and Aq was evaluated using acetic acid-induced writhing and formalin methods. The in vivo anti-inflammatory effect of AE and Aq was evaluated using carrageenan-induced paw oedema in mice. AE, myricitrin and myricetin were evaluated for their abilities to modulate the production of NO, TNF-α and IL-10 in LPS/IFN-γ stimulated J774.A1 macrophages.

Results

It was found that orally administrated AE and Aq (125 and 250 mg/kg) inhibited carrageenan-induced paw oedema in mice. AE (125 and 250 mg/kg) and Aq (125 mg/kg) reduced the time to licking at the second phase of the formalin method in vivo in mice. AE (250 mg/kg) and Aq (125 mg/kg) also reduced the number of writhes. AE, myricitrin and myricetin inhibited NO (320 μg/mL and 6.25–100 μM, respectively) and TNF-α production by macrophages (320 μg/mL for AE, 100 μM for myricitrin and 25–100 μM for myricetin). AE (160 and 320 μg/mL), myricitrin (50 and 100 μM) and myricetin (25–100 μM) increased IL-10 production by macrophages.

Conclusions

The ethyl acetate and aqueous extracts from Campomanesia adamantium showed antinociceptive and anti-inflammatory effects supporting the use of the plant in folk medicine. The results suggest that anti-oedematogenic effect promoted by aqueous extract involves several anti-inflammatory mechanisms of action. The antinociceptive effect shown by aqueous extract can be due to the modulation of release of inflammatory mediators involved in nociception. The anti-inflammatory effects of AE and of its isolated flavonols may be attributed to inhibition of pro-inflammatory cytokines production, TNF-α and NO and to the increased of IL-10 production.     

江苏地产白首乌C21甾苷抗炎作用及其机制研究*

目的:研究白首乌C21甾苷(CSG)的抗炎作用及其机制.方法:以阿司匹林、英太青、环磷酰胺作阳性对照药,观察CSG对醋酸致小鼠毛细血管通透性增高、二甲苯诱导的小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶诱导的大鼠足爪肿胀、棉球诱导的大鼠肉芽肿和弗氏完全佐剂诱导的大鼠佐剂性关节炎模型的抗炎作用;测定AA大鼠血清IL-6、TNF-α含量,关节NO、PGE2含量,探讨CSG抗炎作用机制.结果:CSG对急慢性、免疫性炎症反应有明显抑制作用,对AA大鼠血清IL-6、TNF-α、关节组织中NO、PGE2的生成有抑制作用.结论:CSG具有较强的抗炎作用,抗炎机制与抑制细胞因子TNF-α、IL-6和炎症因子NO、PGE2的生成有关.     

炎康颗粒的抗炎作用及机制研究

目的研究炎康颗粒的抗炎作用,并探讨其作用机制。方法采用巴豆油致小鼠耳肿胀实验模型、角叉菜胶致雄性大鼠足跖肿胀实验模型,观察炎康颗粒对急性炎症的作用;采用大鼠棉球肉芽肿实验模型,观察炎康颗粒对慢性炎症的作用;采用摘除双侧肾上腺的大鼠进行角叉菜胶致足跖肿胀实验及棉球肉芽肿实验,以观察炎康颗粒抗炎作用与下丘脑-垂体-肾上腺轴（HPAA）的关系。结果炎康颗粒8、16g（生药）／kg连续给药1周,明显抑制小鼠耳肿胀;1.8g（生药）／kg明显抑制由角叉菜胶诱导的大鼠足趾肿胀;明显抑制大鼠棉球肉芽的增生。摘除肾上腺后,炎康颗粒连续给药1周,无明显抗炎作用。结论炎康颗粒对急性炎症和慢性炎症均有明显的防治作用,其抗炎作用依赖于HPAA系统,并与减少白细胞介素有关。