用聚合酶链反应检测伤寒患者血液中的伤寒沙门氏菌

作者报告了用扩增伤寒患者血液中伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因检测伤寒沙门氏菌DNA的聚合酶链反应(PCR)。用三种试验进行PCR。首先,扩增从沙门氏菌和其它细菌分离的DNA,以试验PCR产物的特异性;其次,扩增从伤寒沙门氏菌ATCC19430分离的连续稀释DNA,确定PCR的最低可测水平,第三,用从12例     

巢式聚合酶链反应检测伤寒沙门氏菌

本文采用扩增伤寒沙门氏菌鞭毛抗原基因Ⅵ区一段特异性片段的两对引物，用ＰＣＲ法检测伤寒沙门氏菌与非伤寒沙门氏菌，结果表明阳性符合率达１００％，且反应体系中达１０２ｃｆｕ／ｍｌ浓度时，伤寒沙门氏菌即可检出。检查伤寒确诊患者粪便标本４份，ＰＣＲ扩增均阳性。     

鼠疫耶尔森菌的多重PCR检测方法

目的研究一种快速、特异的检测鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)的多重聚合酶链反应(PCR)方法。方法选用针对鼠疫菌F1抗原基因、pla基因、inv基因和一段鼠疫特异染色体序列设计的4对引物,以鼠疫菌及其他肠道致病菌DNA为模板并加入内部对照模板,在同一扩增体系中进行PCR扩增。结果鼠疫菌DNA模板可扩增出预期产物,而其他菌株只能扩增出内部对照模板的片段。结论多重PCR方法具有较高的特异性。可迅速、有效地将鼠疫菌与其他肠道致病菌相鉴别,也可应用于鼠疫监测。     

聚合酶链反应结合斑点杂交技术检测伤寒沙门氏菌的临床应用研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增伤寒沙门氏菌鞭毛抗原基因Ⅵ区一段特异性的ＤＮＡ片断，再用地高辛标记探针与之杂交检测，并用非伤寒沙门氏菌作对照，结果仅伤寒沙门氏菌阳性。实验表明，当标本中伤寒沙门氏菌含量达１０ｃｆｕ／ｍｌ时，即可检出。在伤寒发病早期，当机体抗体水平尚处于低水平时，应用ＰＣＲ斑点杂交检测伤寒沙门氏菌可提高伤寒的诊断率；在伤寒病程后期，应用ＰＣＲ斑点杂交检测治疗后带菌状态具有重要价值。     

建立Taqman探针实时荧光PCR检测食品中肠炎沙门氏菌的方法

目的利用Taqman探针实时荧光PCR检测食品中肠炎沙门氏菌。方法根据沙门氏菌属共有基因序列和肠炎沙门氏菌的特异序列分别设计2组引物及探针,运用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验。结果采用沙门氏菌属探针可检测到25种不同血清型沙门氏菌(共49株),而11株阴性对照菌株未得到扩增;利用肠炎沙门氏菌探针可从25种不同血清型的沙门氏菌(共49株)和11株阴性对照菌株中特异性的检测出全部15株肠炎沙门氏菌;以肠炎沙门氏菌系列稀释度菌液DNA为模板进行实时荧光PCR扩增,菌株的模板浓度与Ct值之间呈现良好线性关系,线性系数(R2)0.993,扩增效率87%,最低检测浓度260cfu/mL;分别接种肠炎沙门氏菌于四种样品进行模拟样品检测,实时荧光PCR检测结果与经典培养鉴定方法的检测结果相吻合。结论实时荧光PCR检测食品中肠炎沙门氏菌的方法特异性强、敏感度高,可应用于食品中肠炎沙门氏菌的检测。     

巢式聚合酶链反应检测伤寒沙门氏菌H及Vi抗原基因的应用研究

应用巢式聚合酶链反应技术，通过两种引物（共四对）分别对伤寒沙门氏菌鞭毛Ｈ和Ｖｉ抗原基因扩增，并用非伤寒沙门氏菌作对照。实验表明，两种基因的扩增产物均是特异的，Ｈ抗原基因引物仅对伤寒沙门氏菌鞭毛抗原基因扩增，Ｖｉ抗原基因引物对伤寒沙门氏菌和丙型副伤寒沙门氏菌Ｖｉ抗原基因扩增，余均为阴性。扩增Ｖｉ抗原基因比扩增Ｈ抗原基因敏感，当反应体系中达０．５个菌细胞时，Ｖｉ抗原基因就可检出，而鞭毛抗原基因则需５个菌细胞。检测９２例伤寒患者血液标本，血培养阳性２８例（３０．４３％），巢式ＰＣＲ检测Ｖｉ抗原基因阳性３３例（３５．８６％），Ｈ抗原基因阳性３１例（３３．７０％）。伤寒发病早期，当机体伤寒特异性抗体尚处于低水平时，应用巢式ＰＣＲ检测Ｖｉ抗原基因，可提高伤寒的诊断率，使该病得到早期治疗     

PCR在血液病原菌16S rRNA基因检测的诊断价值

目的 为早期诊断败血症,探索一种能快速检测病原菌感染的新方法.方法 用PCR技术扩增实验室保留株10株的16S rRNA基因,以人类基因组DNA、HBV-DNA和白色假丝酵母菌为对照,检测该方法的特异性;采用10倍比稀释法进行该方法的灵敏度检测.结果 对所测病原菌株均获得371 bp扩增产物,而与人基因组DNA、HBV-DNA和白色假丝酵母菌无交叉反应;PCR最低能检测1.5×104/L大肠埃希菌.结论 16S rRNA基因PCR检测方法具有快速,特异性和敏感性高等特点.     

兰州市首起甲型H1N1流感暴发的核酸检测

目的:鉴别一起不明原因导致的突发性发热事件病原体。方法:提取样本中的RNA后,使用针对于甲型H1N1流感病毒相关的不同浓度引物、探针和DNA聚合酶缓冲液等作为反应成份,按照不同的扩增程序,利用逆转录PCR(RT-PCR)和实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法分别进行特异性DNA片段的扩增,对扩增产物的电泳图片和扩增图谱进行分析。结果:经RT-PCR方法检测后,分别扩增出235、527、153和80 bp的特异性片段,实时荧光PCR扩增曲线中,出现了与阳性对照一致的扩增图谱。结论:此次事件的病原体为甲型H1N1流感病毒,定性本次事件为甲型H1N1流感暴发事件。     

多重PCR检测副溶血弧菌和伤寒沙门氏菌

目的 快速准确地检测副溶血性弧菌(VP)和伤寒沙门氏菌(ST).方法:根据VP的tdh基因和ST的H1-d基因顺序设计二对引物,通过聚合酶链反应检测食品或其它待检样品中的VP和ST,将扩增产物电泳.结果 :分别出现与已知阳性对照细菌条带大小一致的202和458bp的tdh和H1-d基因片断的条带,判定该样品中相应细菌为阳性.结论 :本法特异性强、灵敏度高,能在24小时内出结果,可适用于食品或其它样品中VP和ST的快速检验.     

3种食源性致病菌的多重PCR检测方法研究

目的建立一种快速、经济、实用的多重PCR方法,期望能同时检测3种常见致病菌。方法根据沙门氏菌的侵袭蛋白A（invasion protein A,invA）、志贺氏菌的侵袭性质粒抗原H基因（invasion plasmid antigen,ipaH）、副溶血性弧菌的不耐热肠毒素基因（thermolabile hemolysin,tlh）分别设计了3对引物,预计PCR扩增的目的片段依次为284、450、606bp。对单个基因PCR和单管多重PCR扩增进行特异性、敏感性试验以及优化反应体系,建立快速检测沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌的单管多重PCR方法。结果含沙门氏菌：42cfu/g,志贺氏菌：36cfu/g,副溶血性弧菌：116cfu/g的肉陷样品经过增菌、DNA提取、扩增、电泳,在16～18h内应用多重PCR体系能够检出。通过对10株目的菌和15株非目的菌检测,提示该体系特异性高。结论初步建立能快速,灵敏,特异地检测沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌的多重PCR体系,可以作为食物中毒病原菌检测的有效方法。