核糖体蛋白L26基因的克隆及其在肝癌中的表达

目的 克隆和分析与肝细胞癌发生发展相关的基因。方法 应用差异显示技术获得24例肝癌及其癌旁组织表达差异的目标基因片段,对其进行克隆、测序,并在基因数据库中检索进行同源性比较,应用印迹法（Northern)杂交技术研究其正常组织分布和肝癌中表达的变化。结果 肝癌中获得一目标基因片段经测序证明其来源于一已知基因核糖体蛋白L26（RPL26）,Northern杂交分析表明该基因在各种组织中广泛表达,83.3%原发性肝癌患者癌组织中RPL26表达显著高于癌旁组织。结论 RLP26可能是肝癌进展的有用的生物学标志。     

一个新的人类肝癌相关基因的克隆和表达

目的研究和克隆新的肝癌相关基因,探索肝癌发生的分子机制。方法采用mRNA差异显示技术,分析原发性肝癌和癌旁肝组织基因差异表达情况,获得差异表达基因片断;通过筛选胎盘cDNA文库和基因组拼接,获得新基因全长cDNA;通过Northern杂交的方法,分析所获得的新基因在42对肝癌和对应癌旁肝组织中的差异表达,和在正常组织中的分布情况。结果克隆和鉴定了一个新的全长1706个核苷酸的肝癌相关基因STW-2,定位在染色体18p11.2区带上;该基因在42对肝癌组织中高表达的阳性率是78.6%(33/42),其阳性表达与肿瘤包膜的完整性、有无癌旁卫星灶相关（P＜0.05）;该基因具有较为广泛的基因表达谱。结论克隆和鉴定了一个肝癌高表达新基因全长cDNA,其高表达与肝癌细胞的浸润和转移能力有关。     

一个富含脯氨酸肝癌新基因的克隆和抗体制备

目的 克隆新的肝癌相关基因,探索肝癌发生的分子机制。方法 采用DDPCR技术,分析原发性肝癌和癌旁肝组织间基因表达差异情况,获得差异表达基因片段,Northern杂交证实核基因片段能与原标本印迹重现;用此基因片段作为探针,通过筛选胎盘cDNA文库而获得新基因全长;利用GST融合蛋白制备新基因C端多克隆抗体,Western杂交验证抗体的特异性和目的基因的表达。结果 成功克隆了一个富含脯氨酸的肝癌新基因cDNA全长,并制备出新基因多克隆抗体。结论 我们克隆的这一新的肝癌差异表达基因和制备的该基因C端多克隆抗体为肝癌的基因治疗打下了基础。     

7种microRNAs在原发性肝癌组织和癌旁组织间的差异表达及与血清肿瘤标志物水平的相关性研究

目的 分析小RNA(microRNAs)在原发性肝细胞癌组织和癌旁组织中的表达差异及与血清肿瘤标志物水平的相关性,探索肝癌诊断和预后可能的新标志.方法 使用实时定量PCR技术检测7种MicroRNAs在原发性肝细胞癌组织和癌旁组织中的表达差异.结果 7种microRNAs在原发性肝细胞癌组织和癌旁组织中的表达差异均有统计学意义(P<0.05).与癌旁组织相比,miR-34c、miR-21、miR-16及miR-10b在肝癌组织中表达上调,miR-200a、miR-148b及miR-Let-7i在肝癌组织中表达下调,其中miR-200a 和 miR-148b下调明显.miR-200a在肝癌和癌旁组织中的表达差异与患者血清AFP水平呈正相关(r=0.848 9,P<0.01),而其余microRNAs的表达差异与患者血清各肿瘤标志物水平均无相关关系(P>0.05).结论 原发性肝细胞癌和癌旁组织中存在microRNAs的表达差异,miR-200a可能成为新的肝癌早期诊断标志.     

NF-κB在肝细胞癌组织中的表达及意义

目的：探讨NF-κB基因在肝细胞癌组织中的表达及生物学意义。方法：采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western-blot免疫组织化学技术检测32例肝癌组织及癌旁肝组织中的NF-κB基因的mRNA和蛋白表达水平及蛋白定位。结果：NF-κB基因在肝癌组织中的表达较癌旁肝组织显著性增高(P<0.05)。免疫组化结果显示，NF-κB蛋白在肝癌细胞胞浆和胞核中均有表达，而在癌旁肝细胞中仅在胞浆中有表达。结论：NF-κB基因在肝癌组织中呈显著高表达，提示其可能参与了肝癌的发生发展。NF-κB表达定位在癌细胞和癌旁肝细胞中的差异，提示NF-κB活化后，进入胞核，通过调节下游基因的转录，促进肝癌的发生。     

逆转录聚合酶链反应技术检测人肝癌nm23-H1基因mRNA表达

为探讨人肝癌中肿瘤转移抑制基因ｎｍ２３－Ｈ１的ｍＲＮＡ表达状况,设计特异性引物,应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测分析了２０例人肝癌组织及相应癌旁肝组织中ｎｍ２３－Ｈ１基因的ｍＲＮＡ表达。结果 特异性引物能成功扩增ｎｍ２３－Ｈ１基因的几乎整个编码序列：２０例肝癌及癌旁肝组织的ＲＴ－ＰＣＲ结果均为阳性,ｎｍ２３－Ｈ１基因ｍＲＮＡ未发生表达缺失或较大变异现象,由此表明,本实验建立的ＲＴ－Ｐ     

CD15抗原和bcl-2基因蛋白在甲状腺癌中的表达及相关性研究

目的 研究甲状腺癌组织中ＣＤ１５抗原和ｂｃｌ－２基因蛋白的表达与肿瘤发生和转移的关系,并探讨ＣＤ１５与ｂｃｌ－２基因蛋白表达的关系。方法 应用微波－ＬＳＡＢ免疫组织化学法检测５０例甲状腺癌、４５例甲状腺腺瘤和２０例癌旁正常甲状腺组织中ＣＤ１５和ｂｃｌ－２基因蛋白表达。结果 在甲状腺癌组织中ＣＤ１５和ｂｃｌ－２基因蛋白表达阳性率分别为６８．０％和４６．０％,均显著高于甲状腺腺瘤和癌旁正常甲状腺组织（     

人肝癌和癌旁肝组织中肝细胞生长因子及其受体基因表达的研究

人肝癌和癌旁肝组织中肝细胞生长因子及其受体基因表达的研究罗运权，吴孟超，丛文铭，陈汉作者采用肝细胞生长因子（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｇｒｏｗｔｈｆａｃ－ｔｏｒ，ＨＧＦ）及其受体基因的ＮＤＡ探针，对人原发性肝癌及癌旁肝组织进行自身对照研究，从转录水平观察基...     

Cyr61、CTGF和Nov基因在肝细胞癌中的表达及与临床病理特征的关系

目的 探讨CCN家族成员Cyr61、CTGF和Nov基因在肝细胞癌中的表达及其与肝癌的病理特征和侵袭转移的关系。方法 采用半定量的RTPCR方法分析31例肝癌组织和癌旁肝组织中Cyr61、CTGF和Nov基因的表达，并分析其表达与肝细胞癌的临床病理特征的关系。结果 31例肝癌组织中Cyr61和CTGF基因表达量均较癌旁组织高（P〈0．01）。镜下存在静脉浸润的HCC组织中Cyr61基因和CTGF基因表达量明显高于镜下无静脉浸润的HCC组织，Edmondson分级Ⅲ～Ⅳ的HCC组织中CTGF基因表达量明显高于Edmondson分级Ⅰ～Ⅱ的HCC组织的表达量（P〈0.05）。结论 Cyr61、CTGF基因可能在肝癌的发生过程中起重要作用，在肝细胞癌部分病理特征方面存在表达上的差异，提示其可能与肝细胞癌的侵袭转移相关。     

人肝细胞癌中CD44表达的研究

目的 探讨ＣＤ４４在人肝细胞癌中的行为及价值。方法 应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ及ＲＴ－ＰＣＲ方法对３０例人肝细胞中ＣＤ４４表达进行研究。结果 Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ结果表明，３０例癌组织中有１１例阳性，３０列癌旁肝组织有５例阳性，ＣＤ４４在肝细胞癌组织中的表达与癌周肝组织中的表达无显著差异（Ｐ〉０．０５）。ＲＰ－ＰＣＲ研究表明，３０例癌组织中有１６例阳性，３０例癌旁肝组织中有１０例阳性，ＣＤ４     

RASSF1A mRNA在原发性肝癌中的表达及其临床意义

目的 应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法分析RASSF1 A在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义.方法 提取65例外科手术切除的肝细胞癌组织(其中右肝癌41例,左肝癌的24例)及其相对应的癌旁正常组织和6株肝癌细胞株及1株正常肝细胞株的总RNA,逆转录成cDNA,应用实时荧光定量RT-PCR方法检测RASSF1 A mRNA的表达水平.结果 癌旁正常组织RASSF1A mRNA表达量为癌组织的3.32倍,两者差异有统计学意义(癌旁正常组织△CT=4.64±2-44,癌组织中△CT=6.30±1.92,P<0.01),其中38例(58.5%)肝癌组织中的RASSF1A mRNA表达水平比癌旁正常组织显著下调:下调8倍以上的有17例,下调4倍以上的有8例,下调2倍以上的有13例,另外有5例(7.7%)在肝癌组织中的RASSF1A表达水平比癌旁正常组织较高,其余22例(33.8%)则差异无统计学意义(P>0.05);3株(QGY-7701、PLC、Hep3B,50.0%)肝癌细胞株中的RASSF1A mRNA表达水平比正常肝脏细胞株(HL-7702)显著下调;在肝癌组织中RASSF1A的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小等无明显相关(P>0,05),但和门脉癌栓与否(P<0.05)、临床分期(P<0.05)及血清HbsAg明显相关(P<0.01).结论 RASSF1A基因的缺失或低表达可能在肝细胞癌发生、发展过程中起一定作用.     

12 C57BL/6J小鼠肝癌动物模型的建立

目的:建立C57BL/6J小鼠肝癌动物模型，为深入开展肝细胞癌的实验研究打下基础。方法:取90只C57BL/6J小鼠，联合采用二甲基亚硝胺（DEN）/四氯化碳（CCl4）/乙醇诱导20周，观察其肝癌的发生情况。另取10只同种小鼠作为正常对照组。RT-PCR法检测病变肝组织中AFP基因表达。结果:实验组90只小鼠共死亡8只；病理学检查发现，存活的82只小鼠中有71只发生肝癌，诱癌成功率为78.9%（71/90），肝癌小鼠的肝癌组织学类型以中、高分化为主；另11只有不同程度的药物中毒性肝炎或肝硬化（12.2%）；对照组小鼠肝脏均未发现明显异常。成癌组中的肝癌组织RT-PCR检测可见AFP基因表达，非肝癌组织及对照组于组织中无AFP表达。结论:采用DEN/CCl4/乙醇联合能诱导出C57BL/6J甲胎蛋白分泌型小鼠肝癌，诱导时间相对较短，癌变率高，部分病变肝组织中伴有肝炎、肝硬化病理学改变，是较理想的研究肝癌的实验动物模型。     

腹腔镜辅助下原发性肝癌和肝转移癌的射频消融术治疗

目的 :探讨腹腔镜辅助下肝癌射频消融术治疗的优势。方法 :全麻下联合腹腔镜技术对原发性肝癌和多发的肝转移癌灶行射频消融术治疗。结果 :1 0例患者 32个瘤体 ,其中直径 5cm的 2 0个瘤体均一次手术热凝损毁 ,CT和MRI提示肿瘤坏死 ,其中 ,1 5个瘤体完全缓解 (CR)占 75 % ,5个瘤体部分缓解 (PR)占2 5 % ,近期疗效CR +PR为 1 0 0 %。随访 2～ 1 4个月无复发。直径 >5cm的 1 2个瘤体亦予以一次性热凝损毁 ,术后 1～ 8周内AFP、CEA、CA1 9 9肿瘤指标均转阴或下降 ,CT或MRI提示肿瘤热凝损毁 ,近期疗效CR +PR为 83 3%。患者均能耐受射频消融治疗 ,无并发症发生。 1例原发性肝癌术后 1 3个月死于肿瘤扩散。结论 :腹腔镜辅助下肝癌射频消融术治疗直径 5cm的瘤体效果显著 ,对直径 >5cm的瘤体部分有效。此法为腹腔镜辅助下结直肠癌手术中多发肝转移癌灶的处理提供了一种创伤小、时间短、见效快、安全方便的治疗方法。     

Protective effect of adenosine A2A receptor activation in small-for-size liver transplantation

The aim of the present study was to investigate the potential role of adenosine A(2A) receptor (A(2A)R) activation in small-for-size liver transplantation. A rat orthotopic liver transplantation model was performed by using 40% (range: 36-46%) liver grafts. Recipients were given either saline (control group) or CGS 21680 (2-p-(2-Carboxyethyl)phenethylamino-5'-N-ethylcarboxamidoadenosine hydrochloride, a selective A(2A)R agonist), or CGS 21680+ ZM 241385 (a selective A(2A)R antagonist) immediately after reperfusion for 3 h. Compared with control group, CGS 21680 used at both low dose (0.05 microg/kg/min) and high dose (0.5 microg/kg/min) increased the survival rate from 16.7% (2/12) to 83.3% (10/12) and 66.7% (8/12), respectively. These effects correlated with improved liver function and preserved hepatic architecture. CGS 21680 effectively decreased neutrophil infiltration, suppressed pro-inflammatory (TNF-alpha, IL-1beta and IL-6) expression, promoted expression of antiapoptotic molecules, and inhibited apoptosis. The effects of CGS 21680 were prevented when ZM 241385 was co-administrated. In conclusion, the present study showed that A(2A)R activation alleviated portal hypertension, suppressed inflammatory response, reduced apoptosis, and potentiated the survival of small-for-size liver grafts. Our findings provide the rationale for a novel therapeutic approach using A(2A)R activation to maximize the availability of small-for-size liver grafts.     

乙型肝炎病毒相关肝细胞癌中的肝癌相关mRNA的筛选和分析

目的 观察乙型肝炎病毒(HBV)相关肝细胞癌的mRNA表达谱的变化,并进行生物信息学分析.方法 用长链RNA芯片检测肝癌组织和正常肝组织mRNA的表达谱,并进行GO分析将差异表达的基因进行功能和细胞定位.结果　肝癌mRNA表达量与正常对照组比较,2倍以上变化,差异有统计学意义(P＜0.05)的mRNA认为是差异表达的mRNA,共991条,占所有基因总数的5.7%.其中2倍以上升高的共733条;2倍以上降低的共258条;5倍以上升高的共94条;5倍以上降低的共39条;10倍以上升高的共18条;10倍以上降低的共11条.GO分析表明差异性表达的mRNA参与了重要生物学调节功能,其中一些基因可能是HBV相关肝癌所特有的.结论　HBV相关肝癌的mRNA表达谱发生显著变化,差异基因参与了细胞的重要生物调节过程,可能参与肝癌的重要调节过程;HBV相关肝癌的表达谱与其他病因相关的肝癌有共性,也有一定的特性.

Abstract：

Objective To explore mRNA expression profile variation of hepatitis B virus ( HBV)related hepatocellular carcinoma and analyze bioinformazics. Methods Long-chain RNA chip was used to inspect mRNA expression profile in HBV-related hepatocellular carcinoma and normal hepatic tissue and make GO analysis for function and cellular localization of genes with differential expression. Results By comparing mRNA expression level of liver cancer with normal control group, 991 mRNA which had more than 2 times variation and significant difference (P＜0.05 ) by statistical analysis were regarded as differential expression mRNA, accounting for 5.7% of all genes. 733 mRNA were increased by more than 2times and 258 decreased by more than 2 times; 94 increased by more than 5 times, 39 decreased by more than 5 times; 18 increased by more than 10 times, 11 decreased by more than 10 times. GO analysis revealed that differential expression mRNA involved in significant biological regulatory function, and some genes may be particular to HBV-related liver cancer. Conclusion The mRNA expression profile in HBVrelated liver cancer changes significantly, and the different genes participate in significant biological regulation process of cells and maybe participate in significant regulation process of liver cancer; HBV-related liver cancer' s expression profile has certain characteristics and something in common with liver cancers relating to other pathogenesis.     

肝癌患者血清中聚糖蛋白3检测的临床意义

目的 探讨血清聚糖蛋白3(GPC3)在肝癌研究中的临床应用价值.方法 应用生物素-链霉亲和素系统亲和力高的特点建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测681份不同人群血清中的GPC3.结果 (1)肝硬化组(42.9%)、肝癌组(41.4%)、肝癌复发组(61.1%)患者血清GPC3阳性率与正常人组(4.1%)及乙肝组(8.6%)差异有统计学意义(P<0.01);肝细胞型肝癌组(HCC)血清GPC3阳性率(45.9%)高于胆管细胞型肝癌组(ICC)(20.9%)(P<0.05);HCC组中直径≤3 cm的小肝癌及AFP≤20μg/L的肝癌血清中GPC3阳性率分别为36.0%、41.9%;AFP≤<20μgs/L且直径≤3 cm的小肝癌患者血清GPC3阳性率为44.4%(4/9).(2)联合血清AFP及GPC3,可将单独应用AFP时提示肝癌复发从77.7%提高到88.9%.(3)结肠癌肝转移病例血清中GPC3的阳性率为28.6%.(4)手术切除术前及术后2～16 d内HCC患者血清中GPC3的变化多样.(5)24例HCC组织GPC3阳性20例,其中血清GPC3阳性率为50%.结论 血清中GPC3的测定作为一种新的肿瘤标志物在肝癌的诊断特别是早期诊断、提示复发、转移及评价手术治疗效果中可能均有一定的意义.     

APOBEC3G在慢性乙型肝炎、肝癌组织中的表达及其意义

目的 探讨APOBEC3G在慢性乙型肝炎和肝癌组织中的表达,及与慢性乙型肝炎和肝癌的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测45例肝组织(正常肝组织8例,慢性乙型肝炎肝组织6例,肝癌组织21例,癌旁组织10例)中APOBEC3G的表达,采用半定量积分法判断表达的强度.结果 APOBEC3G在正常肝组织中无表达或仅见少量表达(表达阳性率12.5%),而在慢性乙型肝炎肝组织中、肝癌组织中和癌旁组织中均有较强表达(表达阳性率分别为83.3%、66.7%、50.O%),其差异有统计学意义(P<0.01).APOBEC3G在肝组织中的表达强度与同组中HBsAg、HBcAg的表达强度无明显相关(P>0.05).结论 慢性HBV感染能促使肝细胞内APOBEC3G表达增高,但APOBEC3G高水平的表达与HBsAg、HBcAg的表达强度无明显相关.     

比较基因组杂交研究瘢痕疙瘩遗传变异

目的 了解瘢痕疙瘩遗传学改变的特征。方法 应用比较基因组杂交技术研究6例瘢痕疙瘩基因组的不平衡即遗传物质的丢失或扩增情况。结果 瘢痕疙瘩出现高频率的DNA拷贝数缺失的染色体是1p(66．7％)、16号染色体(83．3％)、20号染色体(83．3％)、22号染色体(83．3％)，其最小重叠区分别为1pter-32．2、16p13．2-p11．1、20q11．1-q13．2、16p13．2-p11．1，未发现特异区域的DNA拷贝数的高频率扩增。结论 1p、16号染色体、20号染色体、22号染色体极可能存在相关的瘢痕疙瘩抑制基因，这些基因的丢失可能参与了瘢痕疙瘩的发生、发展。