细胞增殖核抗原及Bcl-6在损伤脊髓组织中的表达意义

目的 探讨高压氧(HBO)对脊髓损伤(SCI)脊髓组织中细胞增殖核抗原(PCNA)和Bcl-6表达的影响。方法 复制SCI模型，采用免疫组织化学染色，观察各组脊髓组织中PCNA和Bcl-6的表达变化。结果 正常对照组脊髓组织结构完整，神经细胞形态正常；神经元及神经纤维中PCNA和Bcl-6均阴性。损伤组组织出血、水肿、空泡变、神经纤维排列紊乱、断裂，神经元减少；PCNA和Bcl-6强阳性表达于神经元细胞中，坏死灶内弥漫性强阳性表达。0．1MPa HBO组的HE及免疫组织化学染色结果相似于损伤组；而0．25MPa HBO组则组织水肿消失，出血、空泡变性减轻，神经细胞形态恢复，结构排列相对完整；PCNA和Bcl-6阳性表达于神经元细胞中，但表达强度明显低于单纯损伤组。结论 HBO治疗后脊髓组织的细胞由趋于凋亡向修复转变。     

补阳还五汤对脊髓损伤大鼠脊髓组织病理学的影响

目的：探讨补阳还五汤对脊髓损伤（SCI）大鼠脊髓组织病理学结构的影响。方法：SPF级Wistar大鼠制作中度SCI模型,参照改良Tarlov评分标准分为模型组、补阳还五汤组、金纳多组、正常组;2周后取SCI大鼠脊髓组织HE染色制片,进行病理组织学观察。结果：模型组出现脊髓组织出血、组织疏松、水肿,细胞胞浆外渗、变性,呈空泡状,神经元细胞核游离、固缩等严重损伤现象;补阳还五汤组和金纳多组上述变化均有不同程度的恢复,其中以空泡变性减轻,神经细胞形态恢复,细胞核分布排列趋于完整尤为明显,与模型组比较改善明显;脊髓组织修复趋势补阳还五汤组＞金纳多组＞模型组。Tarlov评分比较,在0～3周内,补阳还五汤组与金纳多组评分随时间变化差异无统计学意义（P＞0.05）,与模型组及正常组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;各时间点组间比较结果：造模后3 d,模型组大鼠评分显著降低,与正常组比较差异有显著性统计学意义（P＜0.01）;补阳还五汤组大鼠后肢运动功能恢复明显,与模型组同时间点比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：补阳还五汤能有效改善SCI损伤大鼠脊髓组织的组织结构损伤,营养神经元细胞,促进神经纤维的修复。     

不同靶点注射骨髓基质干细胞对大鼠脊髓损伤修复的影响

目的研究不同靶点注射骨髓基质干细胞（BMSCs）对脊髓损伤（SCI）修复的影响,观察注射的BMSCs在SCI局部和两侧健康组织中的存活情况。方法体外分离培养BMSCs并鉴定。采用改良Allen打击法制作sD大鼠SCI（T10节段）模型,伤后9d注射细胞,将100只sD大鼠随机分为5组（每组20只）：4点法治疗组（脊髓损伤区头、尾侧）;6点法治疗组（加上脊髓损伤中心区）：8点法治疗组（加损伤区及损伤区头尾的上或下节段）;10点法治疗组（加损伤区及损伤区头尾的上和下节段）;E组为空白对照组,未注射细胞。通过改良的BBB评分,评估不同靶点注射BMSCs对SCI运动功能恢复的促进作用。通过组织切片和HE染色观察注射细胞在SCI局部和两侧健康组织中的存活情况。结果成功培养BMSCs并鉴定。改良的BBB评分显示,局部注射BMSCs能明显的促进SCI动物的运动功能的恢复（P〈0．01）。6、8、10点法注射明显优于4点法（P〈0．01）。6、8、10点法之间差异无统计学意义（P〉0．05）。组织切片观察显示,6点法注射的BMSCs在SCI局部和两侧健康组织中的存活比例明显优于4点法（P〈0．01）,6、8、10点法之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论6点法注射能有效的促进SCI动物的运动功能的恢复,同时能减少过多次数的注射对健康脊髓的损伤。注射的BMSCs在SCI局部和两侧健康组织中的存活较好。     

脊髓损伤后大鼠后肢运动功能恢复的评分标准比较

目的：比较脊髓损伤（SCI）后大鼠后肢运动功能恢复的不同评分标准的优劣。方法：40只SD成熟雌性大鼠随机分为：正常组（Normal组）、急性脊髓中度损伤组（SCI组）及对照组（CON组），其中SCI组采用改良的Allen打击法，CON组仅行T10椎板切除术。术后1、2、3、4、6周观察大鼠后肢神经功能恢复的情况，并记录结果。评价标准分别为：斜板试验评分、改良Tarlov评分及BBB评分。结果：SCI组与CON组比较，斜板试验临界角度在1-6周时，均有所减小（P〈0．05），尤以第1周时减少更甚（P〈0．01）；改良Tarlov评分第1、2、3、4周时，分值间的差别非常明显（P〈0．01）第6周时，未见变化（P〉0．05）：而BBB评分各时间点的区分程度非常明显（P〈0．01）。结论：BBB评分对SCI模型运动功能评价具有明显优势，可作为今后研究的标准评分法。     

甲基强的松龙对脊髓损伤后伤段脊髓线粒体功能的影响

目的：探讨脊髓损伤后伤段脊髓线粒体呼吸功能和线粒体内游离钙的变化和早期使用甲基强的松龙（MP）对其的影响。方法：54只SD大鼠，随机分组为假手术组（对照组）、脊髓损伤组（SCI组，采用Allen’s打击法造成大鼠脊髓损伤模型）和脊髓损伤后应用MP治疗组（MP组），每组又分为处理后6h、12h、24h三个时间相，每个时间相6只。在各时间相处死动物后提取伤段脊髓线粒体，测定线粒体呼吸Ⅲ态（R3）、呼吸Ⅳ态（R4）、呼吸控制率（RCR）、磷氧比（P／0）和线粒体内游离Ca^2＋浓度。结果：SCI组在伤后6h、12h和24hR3、RCR和P／0显著低于对照组，R4和线粒体内游离Ca^2＋浓度显著高于对照组。差异有显著性（P〈0．01）；伤后6h和12h MP组R3、RCR和P／0高于SCI组，R4和线粒体内游离Ca^2＋浓度低于SCI组，差异有显著性（P〈0．01）；MP组R3、R4和RCR在6h和12h时与对照组之间无显著性差异，24h时R3、RCR和P／0低于正常对照组，有显著性差异（P〈0．05）。结论：脊髓损伤后伤段脊髓线粒体呼吸功能和线粒体内游离Ca^2＋浓度明显受到影响，线粒体内膜通透性增加，线粒体氧化磷酸化的偶联程度明显受到抑制。早期使用甲基强的松龙可明显改善线粒体的呼吸功能，抑制Ca^2＋内流，保护伤段脊髓线粒体的稳定性。     

鹿茸多肽对脊髓损伤保护作用的实验研究

目的：观察鹿茸多肽应用于脊髓损伤大鼠的治疗效果。方法：75只雄性Wister大鼠随机分为正常对照组、空白手术组、15、10、5mg治疗组,每组15只。通过脊髓损伤动物模型,各治疗组分别注射15、10、5mg鹿茸多肽,正常对照组皮下注射生理盐水,空白手术组造模后不予处理,给药7d。观察其对脊髓损伤动物的动能测定及脊髓病理变化的影响。结果：15、10、5mg不同剂量鹿茸多肽给药7d后,大鼠运动功能有所恢复,明显高于手术组,差异有统计学意义（P〈0.001）,并且治疗剂量增加,疗效增强。病理组织切片观察显示不同剂量的鹿茸多肽治疗后,组织水肿减轻,炎性细胞浸润减轻;尤以15mg治疗组恢复最明显。结论：鹿茸多肽具有促进脊髓损伤大鼠运动功能恢复的作用,且呈剂量依赖性。     

大鼠脊髓损伤中的细胞凋亡及甲基强的松龙的干预作用

目的：探讨脊髓损伤（SCI）继发损伤机制,研究损伤脊髓细胞的凋亡及其意义,观察甲基强的松龙（MP）对细胞凋亡的影响。方法：使用改良Allen法制作大鼠急性SCI模型,实验分3组,假损伤（脊髓未受打击）,损伤组及MP治疗组,采用HE,荧光Hoechst 33342,TUNEL(末端脱氧核苷转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸生物素缺口末端标记技术）等技术观察SCI后4h,8h,3d,7d,14d,21d及28d时损伤中心及邻近节段脊髓细胞的凋亡,治疗组损伤后30min给予大剂量MP,比较MP治疗组与损伤组脊髓细胞凋亡的变化,同时平行观察大鼠神经学和组织学恢复情况及两组神经丝蛋白（NF）含量的变化。结果：假损伤组各检测方法未见脊髓细胞凋亡,损伤组大鼠急性SCI后1d开始出现脊髓细胞凋亡,3d达高峰,自损伤中心向头尾端递减分布,持续21d,MP治疗组在伤后3d及7d凋亡脊髓细胞较损伤组显著减少,神经学恢复及组织学评分较损伤组有显著性提高,结论：凋亡是SCI后脊髓神经元死亡的一种重要方式,在继发性损伤中起极为重要的作用。MP的治疗作用可能与其干预SCI后细胞凋亡有关。     

脊髓前动脉损伤后运动诱发电位变化与病理学对照研究

目的：观察脊髓前动脉损伤后运动诱发电位（MEP）变化规律，以及相应的病理演变。方法：以浓犬为实验动物，采用颈前路手术入路，损伤脊髓前动脉。肉眼、镜下观察脊髓病理演变过程，测定脊髓前动脉损伤前、后MEP潜伏期，同时按Tarlov法测定肌力。结果：脊髓前动脉损伤后出现轴索断裂，髓鞘呈气球样空泡，脊髓水肿、出血，运动神经元变性坏死等病理性变化，脊髓前动脉损伤后立即出现不完全性肢体瘫痪，MEP潜伏期明显延长，3d后MEP的潜伏期有所恢复。结论：MEP对脊髓缺血性损伤后病理变化较敏感，MEP能准确地反遇脊髓缺血性损伤后运动功能的变化。     

小鼠脊髓损伤标准化重物打击模型的制备及评价

目的以小鼠作为实验动物，采用改良垂直打击脊髓（weight dropping，WD）建立脊髓损伤（spinal cord iniury，SCI）动物模型，为进一步研究SCI机制奠定基础。方法将健康雌性昆明种小鼠180只随机分为4组，每组45只，采用改良WD法应用Impactor model-Ⅱ脊髓致伤仪分别以2．0×2．5g·cm（A组）、2．5×3．0g·cm（B组）、3．0×5．0g·cm（C组）致伤力致伤脊髓；对照组（D组）仅打开椎板，暴露脊髓，不造成SCI。于打击后即刻，6、12h，1、3d，1、2、4、8周对各组小鼠行运动诱发电位（motor evoked potentials，MEP）检测，并行后肢运动功能（Basso mousescale，BMS）评分，HE染色和甲苯胺蓝染色组织学观察。结果神经电生理检查示B组于伤后6h，C组于伤后12h出现N1潜伏期延长，随着时间延长，A、B、C3组潜伏期开始缩短，A组4周趋于正常为（2．40±0．12）ms，与D组比较差异无统计学意义（P〉0．05）；B组8周逐渐趋于正常为（2．96±0．15）ms，与D组比较差异无统计学意义（P〉0．05），而C组8周仍维持在较高水平（3．76±0．13）ms，与D组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。SCI伤后即刻小鼠均呈现双后肢瘫痪，BMS主评分为0分；伤后前3dBMS主评分接近0分；随后各组BMS评分逐渐上升，A组伤后1周BMS主评分（5．45±0．12）分，B组伤后2周BMS主评分为（5．45±0．15）分，与D组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；伤后8周A组主评分（8．004±0．13）分，B组达（7．50±0.31）分；1周后各实验组组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05），其中C组低于其余各组（P〈0．01）。伤后2周A组BMS副评分为（10．12±0．76）分，伤后8周B组BMS副评分为（9．85±0．55）分，与同时间点D组比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。组织学检查可见C组伤后12h，损伤节段灰质内大片出血灶，炎性细胞浸润，神经元细胞肿胀明显，并出现中央性尼氏小体溶解；随时间推移，神经元细胞数量减少，胶质细胞增生，尼氏小体消失；伤后2周，可见大量胶质细胞增生及空洞形成。B组神经元细胞减少程度及空洞形成均轻于C组，A组最轻，D组除早期可见轻度细胞水肿外，整个观察期内细胞数量无明显改变。结论该模型准确地反映了小鼠脊髓不同程度损伤后的病理生理特点及变化规律，重复性好；可采用重物打击法制作标准小鼠SCI动物模型。     

NGF、BDNF基因修饰嗅鞘细胞脊髓内移植对损伤脊髓细胞的保护作用

目的：观察神经生长因子(nerve growth factor，NGF)和脑源性神经营养因子(brain-derived neurotmphic fac-tor，BDNF)基因修饰的嗅神经鞘细胞(Olfactory ensheathing cells，OECs)移植对损伤脊髓组织的保护作用。方法：将脊髓半横断伤SD大鼠模型，随机分为：NGF、BDNF基因修饰的OECs移植组(A组)、OECs移植组(B组)、损伤对照组(C组)和正常对照组(D组)。24h后每组8只动物取伤段标本，测水离子含量。其余动物第6周和12周每组8只动物爬坡试验，评价下肢运动功能及运动诱发电位(MEP)检测。结果：脊髓损伤(SCI)后组织水肿，Na^ 、Ca^2 离子浓度升高，K^ 、Mg^2 离子浓度降低。NGF、BDNF、基因修饰的OECs脊髓内移植后显著改善这些变化，且使SCI后神经功能有显著恢复。结论：NGF、BDNF基因修饰的OECs脊髓内移植对SCI有保护作用。其机制可能与减少神经细胞离子失衡，改善细胞内环境有关。     

脊髓损伤后自由基变化及丹参对自由基影响的实验研究

目的　了解实验性脊髓损伤后血液和脊髓组织中自由基的变化及丹参对自由基的清除作用。方法　选用家兔 3 5只 ,分为正常组、损伤组、生理盐水对照组、丹参治疗组 A和 B等 5组 ,后 4组按 Allen氏法致伤造成脊髓损伤模型 ,后 3组术后分别立即静脉注射生理盐水 ,不同浓度丹参注射液。 2小时后取血液和脊髓组织测丙二醛 ( MDA)和超氧化物歧化酶 ( SOD) ,并观察脊髓病理变化。结果　脊髓损伤后血液和脊髓组织中 MDA升高 ,SOD下降 ,使用丹参后可使 MDA降低 ,SOD升高。结论　脊髓损伤后血液和脊髓组织中自由基含量升高 ,丹参能够有效清除自由基 ,两个丹参治疗组之间的抗自由基作用无显著性差异。     

Reevaluation of Gray and White Matter Injury after Spinal Cord Ischemia in Rabbits

Background: Although gray matter injury has been well characterized, the available data on white matter injury after spinal cord ischemia (SCI) in rabbits are limited. The current study was conducted to investigate the evolution of ischemia induced injury to gray and white matter and to correlate this damage to hind-limb motor function in rabbits subjected to SCI.

Methods: Thirty-eight rabbits were randomly assigned to 24-h, 4-day, or 14-day reperfusion groups or a sham group (n = 9 or 10 per group). SCI was induced by occlusion of the infrarenal aorta for 16 min. Hind-limb motor function was assessed using the Tarlov scale (0 = paraplegia, 4 = normal). The gray matter damage was assessed on the basis of the number of normal neurons in the anterior spinal cord. White matter damage was assessed on the basis of the extent of vacuolation and accumulation of amyloid precursor protein immunoreactivity.

Results: Tarlov scores gradually decreased and reached a nadir 14 days after reperfusion. There were no significant differences in the number of normal neurons among the 24-h, 4-day, and 14-day groups. The extent of vacuolation, expressed as a percent of total white matter area, was significantly greater in the 4-day and 14-day groups in comparison with the sham group. By contrast, there was no difference in vacuolation between the sham and 24-h groups. Amyloid precursor protein immunoreactivity was greater in the 4-day and 14-day groups.     

应用中医传感针观察伤段脊髓氧分压的变化

目的：探讨应用中医传感针观察脊髓损伤（SCI）后伤段脊髓氧分压的变化及其与病理变化、神经功能损害的关系。方法：改变Allen法致伤大鼠脊髓，于伤前和伤后1／2、1、3、6、24、72、168h，用中医传感针技术测量脊髓氧分压，应用光、电镜观察脊髓病理变化，应用斜板试验评价大鼠运动功能。结果：SCI后伤段脊髓氧分压明显下降（P＜0．01），与病理变化及神经功能损害的发生发展一致。结论：中医传感针可应用于测量SCI后脊髓氧分压；脊髓氧分压是脊髓损伤研究中的重要观察指标。     

脊髓损伤基因治疗的研究进展

目的：探讨脊髓损伤基因治疗的最新研究进展。方法;综述了脊髓损伤基因治疗相关的神经营养素家庭的应用,移植细胞的选择,研究现状,存在的问题等。结果：ＮＧＦｓ在干预脊髓损伤后的病理反应和促进工矿企业 能恢复有潜在的治疗作用。雪旺细胞不仅可作为ＳＣＩ基因治疗的移植载体,其本身也可促进中枢神经的再生,髓鞘的重建和部分神经功能的恢复。     

高压氧与带血供周围神经移植对成鼠损伤脊髓诱发电位的影响

目的：研究高压氧对带血供周围神经移植修复成鼠损伤脊髓功能恢复的作用。方法：将40只成年Wistar大鼠作成脊髓半切损伤模型,随机分为A、B两组,A组单纯带血供周围神经移植修复脊髓损伤,B组为带血供周围神经移植后给予高压氧治疗。手术后1、2、4、8、10周进行感觉诱发电位（SEP）和运动诱发电位（MEP）检查。结果：SEP和MEP潜峰时的恢复B组优于A组。结论：高压氧与带血供周围神经移植对成鼠损伤脊髓功能恢复有较好的促进作用。     

大剂量甲基强地松龙对大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡的影响

目的：探讨大鼠脊髓损伤后应用大剂量甲基强地松龙(MP)对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及细胞凋亡的影响。方法：成年大鼠随机分为脊髓损伤后应用大剂量甲基强的松龙治疗组(A组)和应用生理盐水对照组(B组)，损伤后不同时间点(4h、8h、1d、3d、7d、14d、21d)按Tarlov标准评价大鼠双后肢神经功能恢复情况，然后处死。用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化，用免疫组化染色检测iNOS阳性细胞，原位末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞。结果：HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组。A、B两组均发现凋亡细胞及iNOS表达，神经细胞凋亡指数及iNOS表达均为B组＞A组(P＜0．01)。结论：大剂量甲基强的松龙能抑制大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡。     

体外转基因成肌细胞移植对大鼠损伤脊髓细胞凋亡的影响

目的：探讨大鼠脊髓损伤后胚胎脊髓和腺病毒介导的脑源性神经生长因子（AxCA-BDNF)体外转基因成肌细胞移植对大鼠脊髓细胞凋亡的影响。方法：将动物分为：大鼠脊髓半切洞损伤明胶海绵填充组（A组）,大鼠脊髓半切洞损伤应用胚胎脊髓移植组（B组）,脊髓半切洞损伤损伤AxCA-BDNF基因转染的成肌细胞移植组（C组）大鼠脊髓半切洞损伤后应用胚胎脊髓和AxCA-BDNF基因转染的成肌细胞移植组（D组）。手术后1、3、7、14、28d应用行为学和电生理检查观察大鼠功能恢复情况,对脊髓损伤区进行细胞凋亡的检测（TUNEL）以及Bcl-2蛋白表达的测定（免疫组化法）。采用计算机图像分析技术,进行定量分析。结果：A、B、C、D四组中均发现凋亡细胞及Bcl-2蛋白阳性表达细胞,图像分析发现,各组凋亡细胞核为A＞B＞C＞D;Bcl-2免疫反应阳性细胞表达顺序为D＞C＞B＞A,Bcl-2免疫反应阳性细胞的表达与大鼠后肢功能恢复有同样的变化趋势。结论：大鼠胚胎脊髓和体外转基因成肌细胞移植能抑制脊髓损伤后的细胞凋亡。     

Preconditioning with Hyperbaric Oxygen and Hyperoxia Induces Tolerance against Spinal Cord Ischemia in Rabbits

Background: The aim of this study was to determine if the ischemic tolerance could be induced in the spinal cord by pretreatment with hyperbaric oxygen (HBO) and what components of HBO (hyperoxia, hyperbaricity, and combination of these two) were critical in the induction of tolerance against ischemic injury.

Methods: In experiment 1, 21 rabbits were randomly assigned to one of three groups (n = 7 each): animals in the control group received no HBO before spinal cord ischemia; animals in the HBO-1 and HBO-2 groups received HBO (2.5 atmosphere absolute [ATA], 100% O2) pretreatment 1 h/day for 3 and 5 days before ischemia, respectively. In experiment 2, 48 rabbits were randomly assigned to one of four groups (n = 12 each): the control group received no HBO (21% O2, 1 ATA, 1 h/day, 5 days) before spinal cord ischemia; the HB group received 1-h treatment in 21% O2 at 2.5 ATA each day for 5 days; the HO group received 1-h treatment in 100% oxygen at 1 ATA each day for 5 days; and the HBO group received HBO (2.5 ATA, 100% O2) treatment 1 h/day for 5 days. Twenty-four hours after the last treatment, spinal cord ischemia was induced by an infrarenal aorta clamping for 20 min. Forty-eight hours after reperfusion, hind-limb motor function and histopathology of the spinal cord were examined in a blinded fashion.

Results: In experiment 1, the neurologic outcome in the HBO-2 group was better than that of the control group (P = 0.004). The number of normal neurons in the anterior spinal cord in the HBO-2 group was more than that of the control group (P = 0.021). In experiment 2, the neurologic and histopathologic outcomes in the HBO group were better than that of the control group (P < 0.01). The histopathologic outcome in the HO group was better than that in the control group (P < 0.05).     

大鼠脊髓损伤松质骨神经SP免疫反应性的变化

目的：探讨脊髓损伤后大鼠松质骨中神经末梢P物质（SubstanceP,SP)免疫反应性的变化及在脊髓损伤（Spin al Cord Injury,SCI)后骨代谢变化中的意义。方法：3月龄SD大鼠60只随机均分为SCI组与对照组，SCI组于T10处完全横断脊髓；对照组仅行椎板切除术，术后1、3、6周处死动物测定血钙，碱性磷酸酶，尿钙、尿机苷；对股骨髁松质骨行SP免疫组化染色，结合计算机图像分析系统对SP免疫阳性神经的染色强度进行定量分析。结果：血尿生化结果SCI组各时间段骨吸收显著增强；分布于小梁骨内的SP阳性神经的免疫反应性在1、3周组显著增高与对照组比较差异显著。结论：SCI后松质骨内SP的增加可能与SCI早期破骨性骨吸收增强有关。