人脐血造血干,祖细胞体外培养的实验研究

采用体外细胞培养的方法，检测了脐血、骨髓、外周血ＣＦＵ－ＧＭ，ＢＦＵ－Ｅ。结果表明脐血中ＣＦＵ－ＧＭ，ＢＦＵ－Ｅ数量高于成人外周血，同骨髓相比，ＣＦＵ－ＧＭ数量无显著差异，ＢＦＵ－Ｅ低于骨髓。同时观察到脐血中ＣＦＵ－ＧＭ大集落比例明显高于骨髓；ＣＦＵ－ＧＭ集落产率时间曲线较骨髓延迟３～４天；Ｓ期ＧＭ－ＣＦＣ所占比例明显低于骨髓，可能提示脐血造血细胞中早期造血细胞比例高于骨髓。实验中还发现脐血红系集落生长同骨髓十分相似，二者均含ＣＦＵ－Ｅ和ＢＦＵＥ集落，而外周血中只含ＢＦＵ－Ｅ集落。我们统计了２７份脐血血量及所含有核细胞数。根据骨髓移植的有核细胞数标准（２×１０￣８／ｋｇ），一份脐血的有核细胞数很难达到此要求，但已达到目前国外小儿异体脐血移植成功病例的有核细胞数值。     

造血祖细胞体外培养用于血液病的诊断

造血祖细胞半固体培养基体外短期培养在临床血液病中有一定的应用价值。在骨髓移植或外周血干细胞移植中,它们被广泛地用于研究移植物以及移植物冻存,特别是各种操作如净化T细胞以预防移植物抗宿主反应或清除骨髓移植中的残留癌细胞;而且,它们尚可用于血液病的诊断,并有判断其预后的价值。     

体外长期培养对脐血造血干/祖细胞细胞周期及凋亡的影响

目前造血干细胞移植 (ＨＳＣＴ)已成为难治性血液病、免疫缺陷病及恶性肿瘤等的主要治疗手段。脐血是造血干 /祖细胞 (ＨＳＰＣ)的一种重要来源 ,由于单份脐血中细胞数量有限而限制了其临床应用 ,故脐血造血干 /祖细胞的体外扩增越来越引起人们的关注。我们观察了体外长期培养对脐血ＨＳＰＣ细胞周期及凋亡的影响 ,以了解脐血ＨＳＰＣ在体外扩增过程中某些生物学特性的变化。材料和方法1　脐血来源　 6份肝素抗凝脐血均来自我院妇产科健康产妇 ,采集量为 5 0～ 10 0ｍｌ,于采集后 4ｈ内分离单个核细胞(ＭＮＣ) ,洗涤 ,备用。2　ＣＤ3 4+细胞…     

造血宜细胞体外培养的实验研究和临床意义

造血祖细胞体外培养技术的发展导致了造血生长因子的发现，为造血生长因子的生物学效应观察及其临床应用奠定了基础，造血祖细胞培养不仅能对造血干／宜细胞进行定量分析，而且可参体外观察多种因素对造血干／宜细胞的影响。在临床上，造血宜细胞培养对白血病，骨髓增生异常综合征，再生障碍性贫血和骨髓增生性疾病等多种血液病的诊断鉴别诊断及预后具有重要参考价值。     

凝集素FRIL体外维持造血干/祖细胞长期活存的机制初探

一种新发现的豆类凝集素FRIL(Flt3receptor interact inglectin)可以在离体条件下长期维持造血干 /祖细胞的活存[1] 。FRIL与FL(Flt3ligand)共用一个受体Flt3,在离体条件下 ,通过与FL的对照使用 ,培养 2 8dFRIL具有相对更高的维持造血干 /祖细胞多潜能性的能力。同时检测了FRIL及FL作用过程中几个基因的表达情况 ,并对应它们的功能进行了分析。材料和方法1　材料及试剂盒FRIL由本实验室分离纯化。 35份脐血取自永定路中西医结合医院。磁性细胞分离仪和CD34 细胞分离试剂盒 (miniMACSmagneticcellsortingsystem)购自Miltenyi…     

TGF-β1对脐血体外扩增中造血祖细胞生物学特性影响

为了了解TGF-β1对扩增中脐血(UCB)造血祖细胞(HPC)增殖和分化等生物学特性的影响，探讨利用其进行UCB-HPC体外扩增的可行性，在含有若干细胞因子的UCB CD133^ 细胞体外扩增体系中加入不同浓度的TGF-β1，对扩增细胞的有核细胞(NC)数、免疫表型、细胞周期、祖细胞集落及粘附分子表达等进行了动态观察。结果显示，TGF-β1各组NC总数及其扩增倍数均低于对照组，且呈明显的剂量负相关性。扩增中TGF-β1各组的CD34^ 、CD133^ 、CD34^ CD38^-细胞的比例、细胞总数及其扩增倍数均明显高于对照组。在扩增早期，TGF—β1各组的CFU—GM，CFU—mix和HPP-CFC集落的产率均高于对照组。高浓度TGF—β1组的S期细胞比例明显减少，而G1／G0期的细胞明显增加。对粘附分子表达的检测表明，TGF—β1能够上调CD49d，CD11a和CD54的表达；TGF-β1各组表达CD49d，CD11a和CD54细胞的比例明显高于对照组，而表达这些粘附分子的CD34^ 细胞的比例也明显高于对照组。结论：适当剂量的TGF-β1能够促进CD133^ 细胞的扩增，延缓和减少扩增中HPC的过度分化，提高扩增细胞中造血祖细胞的含量，同时还能上调扩增细胞的部分粘附分子的表达，从而提高扩增细胞的植入能力，对提高UCB体外扩增的质量具有重要意义。     

新的人趋化素样因子对骨髓造血干/祖细胞的体外刺激作用

目的　探讨新克隆的人趋化素样因子 (chemokine likefactor 1,CKLF1)对人造血干 /祖细胞的体外刺激作用。方法　分离正常人骨髓单个核细胞 ,进行液体和半固体集落培养 ,研究CKLF1对CFU GM和CFU Mix的作用。结果　加入转染CKLF1质粒上清组的CFU GM集落数明显增多 ,平均值为每 10 5细胞 2 34.81± 98.71,为对照组的 2 .4 2倍 (P <0 .0 5 ) ;CFU Mix平均集落数在正常对照、CKLF1、PHA和GM CSF组分别为每 10 5细胞 82 .0 0± 2 0 .2 5 ,10 5 .76± 36 .70 ,14 6 .6 3± 2 7.0 9和 14 3.33± 6 0 2 3,CKLF1的集落数多且较大 ,但统计学上差异无显著性 ;流式细胞术检测CD3 4 + 细胞百分率 ,正常对照、CKLF1、PHA、GM CSF组分别为 (0 .75± 0 .6 2 ) % ,(1.32± 0 .87) % ,(0 .15± 0 .0 2 ) % ,(0 .2 9± 0 .2 3) % ,与对照组相比 ,各组间差异无显著性。结论　新发现的具有CC家族结构的人趋化素样因子CKLF1对骨髓CFU GM集落的形成具有促增殖作用 ,提示CKLF1对人骨髓造血祖细胞的增殖和集落形成具有促进作用     

外周血造血干/祖细胞动员与采集时动态快速监测造血祖细胞的意义

为了获得高效的外周血干/祖细胞采集,探索一种简便、快速的外周血干/祖细胞监测方法，采用Sysmex XE-2100血细胞分析仪的幼稚细胞信号（IMI）检测通道识别和计数外周血造血祖细胞（HPC）。对25例行异基因外周血造血干细胞移植动员的供和11例自体外周血干细胞动员的患的外周血造血干/祖细胞进行了动态观察。于动员过程中取外周血进行HPC，CD34^ 细胞和CFU-GM的检测，对采集物也进行上述检测。结果表明：在外周血标本中HPC与CD34^ 细胞和CFU-GM二间均呈良好的正相关性。所有检测病例外周血CD34^ 细胞与HPC同时上升，同时达高峰。供的峰值出现在动员的第5天，快速升高晚于白细胞。而患外周血干/祖细胞的快速升高早于白细胞。采集物中HPC与CD34^ 细胞和CFU-GM呈正相关性。采集当日外周血中HPC和CD34^ 细胞计数与采集所得CD34^ 细胞数量亦具有良好的线性相关。结论：造血祖细胞的监测是一种快速、简便又经济的监测外周血干细胞采集时机和预测成功采集的可靠指标。     

诱导多能干细胞建系及体外造血祖细胞定向分化体系的建立

背景：目前,大量文献报道了诱导多能性干细胞系的建立,但大规模体外诱导分化造血祖细胞的研究还缺乏深入的探讨。 目的：建立诱导多能性干细胞体外定向诱导形成造血祖细胞的方法。 方法：采用慢病毒感染的方法将含有Oct4、Sox2、Nanog和Lin28全能性基因的慢病毒颗粒转导人皮肤成纤维细胞,获得了诱导多能性干细胞;在诱导分化体系中添加了 Y-27632,克服干细胞扩增中的凋亡现象;运用OP9细胞产生的条件培养液建立诱导多能性干细胞体外定向分化形成造血祖细胞的分化体系。 结果与结论：①前3代细胞克隆传代时,诱导多能性干细胞发生凋亡的现象很多,很难大规模扩增培养。培养基中添加阻断 ROCK活化的抑制剂,能够明显抑制胚胎干细胞的凋亡。②诱导多能性干细胞在 OP9细胞条件培养液作用下,经过体外诱导分化,形成CD34＋造血祖细胞。     

脐血CD34^＋／CD19^—细胞与体外培养集落的相关性分析

用两种单克隆抗体（单抗）标记脐血造血祖细胞表面抗原（ＨＰＣＡ，ＣＤ３４）用流式细胞仪分析，并比较两种单抗标记的ＣＤ３４＾＋细胞与体外培养的粒单细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ），红系爆式集落形成单位（ＢＦＵ－Ｅ）和混合集落形成单位的相关性，结果表明脐血有核细胞中，抗ＨＰＣＡ－２ＦＩＴＣ阳性的细胞占１．０５±０．７２％，Ｔｕｋ３（纯抗体）阳性细胞占２．０６±１．２５％，差别显（Ｐ＜０．０５），每μｌ     

磁力搅拌悬浮培养大规模扩增脐血造血祖细胞

为了利用磁力搅拌悬浮培养装置大规模体外扩增脐血造血祖细胞，从脐血分离单个核细胞，以无血清培养基stemspan添加干细胞因子、FLT-3配基及血小板生成素为培养体系进行培养。先研究磁场（25和50mT）对静态扩增培养的造血祖细胞生长和集落形成能力的影响，再研究磁力搅拌悬浮大规模培养对造血细胞总数扩增、造血集落形成和表面分子标志表达变化。结果表明，在0，25和50mT磁场组和磁转子组，细胞总数扩增倍数和造血集落形成数在各组间均无明显区别（P〉0．05）。经过7天的扩增培养，磁力搅拌悬浮大规模培养细胞总数扩增倍数为2．8±0．45，高于静态培养细胞总数扩增倍数（2．1±0．48）（P〈0．01）；磁力搅拌悬浮培养组形成的红系集落数（1983．5±582．6）、粒-巨噬细胞集落数（186．4±62．7）明显高于静态培养形成的相应的造血集落数（分别为1396．2±425．7和136．5±40．8）（P均〈0．05）：磁力搅拌悬浮扩增后造血干细胞（CD34^＋、CD34^＋／CD38^-或CD133^＋）比例分别为（0.9±0．34）％、（0．7±0．21）％和（1．1±0．35）％，低于静态培养的干细胞比例[分别为（1．4±0．35）％、（1．2±0．34）％和（1．6±0．68％）]（P均〈0．05）；但是，归巢相关分子CD184和CD62L高于静态扩增培养．．结论：磁力搅拌悬浮装置可能有利于脐血造血祖细胞规模扩增，本研究结果还有待于动物实验及临床移植试验进一步验证.     

小鼠骨髓内皮细胞条件培养液体外扩增胚胎及成体造血干/祖细胞的差异及其机制探讨

本研究比较小鼠骨髓内皮细胞条件培养液(mBMEC-CM)联合FL和TPO对卵黄囊和骨髓造血干／祖细胞体外生长的影响，并对其机制进行探讨。取卵黄囊和骨髓单细胞悬液，对照组中加入含10％FBS的DMEM，实验组分别加入10％mBMEC-CM，FL(5ng/ml)和TPO(2ng／ml)，10％mBMEC-CM复合FL和TPO培养24小时后进行集落培养，计数CFU-GM和HPP-CFC的集落数。应用Atlas cDNA Expression Array对卵黄囊和骨髓造血细胞表达的细胞因子受体进行检测。结果表明：mBMEC-CM能扩增卵黄囊和骨髓CFU-GM和HPP-CFC，其与FL和TPO联合后扩增能力明显增强；mBMEC-CM扩增骨髓CFU-GM和HPP-CFC的能力明显强于其扩增卵黄囊CFU-GM和HPP-CFC的能力。检测到小鼠卵黄囊及骨髓造血细胞存在差异表达的细胞因子受体；卵黄囊造血细胞表达PDGF-Rβ，PDGF-Ra和促肾上腺皮质激素释放因子受体，而在骨髓造血细胞中未检测到上述受体的表达；在骨髓造血细胞中表达的IFN-γR，GM-CSFR，多巴胺D2受体和卵泡刺激素受体则未在卵黄囊造血细胞中检测到mRNA的表达。结论：mBMEC-CM能支持卵黄囊和骨髓造血祖细胞的体外扩增，其与FL和TPO联合后扩增能力明显增强；mBMEC-CM对骨髓造血祖细胞表现出更强的扩增作用。检测到卵黄囊和骨髓造血细胞之问存在差异表达的细胞因子受体，提示mBMEC-CM对胚胎及成体造血细胞扩增中存在的差异可能与两种造血细胞存在差异表达的细胞因子受体有关。     

脐血造血干／祖细胞的密度分离实验研究

目的：为建立脐血造血细胞库,减少脐血储存空间,探讨脐血造血干／祖细胞的密度分离效果。方法：选用五种不同比密的Ficoll分离液（1.084、1.077、1.072、1.064、1.054g/L）分离脐血细胞,采用流式细胞技术（FCM）和全自动血细胞分析仪分析了41例脐血造血干／祖细胞和有核细胞（NC）的回收率并作了对比研究。结果：1.064g/L Ficoll分离脐血有核细胞回收率3.6％,淋巴细胞去除率为86.6％;所分离的单个核细胞(MNC）中CD34^ 细胞平均纯度为10.3％,最高可高达46.6％;所分离的细胞体外易形成CFU－GM及BFU－E。结论：不同比密分离脐血造血干／祖细胞具有不同影响。其中1.064g/L Ficoll分离脐血造血干／祖细胞是一种方便、实用、有效的方法。所分离的细胞体外有较强的增殖能力。     

脐血造血祖细胞培养及T淋巴细胞亚群的研究

采用甲基纤维素半固体体外培养法对脐带血造血祖细胞进行研究。人脐带血粒单祖细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ），红系爆式集落（ＢＦＵ－Ｅ）含量显著高于成人外周血，也高于骨髓（ＣＦＵ－ＧＭ，Ｐ＜０．０５；ＢＦＵ－Ｅ，Ｐ＜０．０１）。脐血造血祖细胞的出现晚于骨髓，但存活时间较长。在不外加促红细胞生成素时，脐血中有少量ＢＦＵ－Ｅ生成。将两份不同胎儿的脐血细胞混合后培养并与单个胎儿脐血细胞培养相比较，两者在祖细胞生成数量和生长特征方面无明显差别。采用单克隆抗体技术检测脐血中ＯＫＴ＿３，ＯＫＴ＿４，ＯＫＴ＿８阳性率，与成人相比，ＯＫＴ＿３￣＋降低，而ＯＫＴ＿４￣＋，ＯＫＴ＿８￣＋和ＯＫＴ＿４￣＋／ＯＫＴ＿８￣＋与成人相似。     

有关造血干/祖细胞的若干新概念

近年来,我国实验血液学学科发展很快,本刊收到了许多高质量、高水平的好文章,令人欣喜鼓舞,但本学科的发展还不平衡,某些分子领域赶上或接近国际水平,而某些重要的细胞领域却远远地落后了。有关造血干、祖细胞的新概念,干细胞与祖细胞的界限以及早期和晚期祖细胞的区别等理论问题,有必要展开讨论,以引起大家的关注。 造血的定义为造血干/祖细胞增殖、分化形成血细胞的动态平衡过程。造血活动不包括成熟血细胞在体内储存、释放、分配的过程。造血