PMA诱导小鼠Lewis肺癌细胞节律基因的表达

目的采用体外节律诱导剂以研究小鼠Lewis肺癌细胞近日节律基因的表达情况。方法采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐（PMA）刺激体外培养的小鼠Lewis肺癌细胞（LLC），RT—PCR检测不同时间点mPer1的mRNA表达水平。Real—time PCR和RT—PCR检测mClock的mRNA表达水平。结果发现LLC细胞的节律基因mClock、mPer1存在近日节律振荡。结论经PMA诱导后，LLC细胞的节律基因存在近日节律振荡，为体外研究授时因子对近日节律的导引机制提供证据。     

转染节律基因mPeriod2对小鼠正常细胞放射损伤的影响

目的评价mPeriod2（mPer2）基因转染后过表达对小鼠肺成纤维细胞NIH3T3放射损伤的影响。方法采用脂质体介导法将roPer2基因转染人NIH3T3细胞中，以空质粒pcDNA3.1和空白组为对照，采用流式细胞术检测mPer2基因在NIH3T3细胞中的表达，经过^60Co—γ射线放射处理后，用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布，采用平板克隆形成试验检测细胞增殖情况。结果射线照射后，与pcDNA3．1空质粒组和空白对照组相比，pcDNA3．1-mPer2转染组凋亡率下降，S期细胞所占比例增高，克隆形成率明显增高。结论节律基因mPer2过表达会使γ射线照射后的NIH3T3细胞凋亡下降，增殖加快，减弱了细胞的放射损伤。     

节律基因mPER1对小鼠Lewis肺癌细胞迁移的影响

目的通过节律基因mPeriod1（mPer1）过表达,研究mPer1对小鼠Lewis肺癌细胞迁移的影响。方法采用脂质体介导法将mPer1基因转染入Lewis细胞。通过RT-PCR检测mPer1在Lewis细胞中的表达;采用Chemico公司QCM（tm）24-Well Colorimetric Cell Migration Assay检测细胞迁移的变化。结果与pcDNA3.1空质粒相比,pcDNA3.1-mPer1转染组mPer1表达增加,其迁移率与对照组比较明显下降。结论节律基因mPer1过表达能够抑制Lewis肺癌细胞的迁移。     

Tat蛋白对节律基因表达的影响

【摘要】目的 探讨HIV Tat 蛋白是否可以在细胞内影响主要节律基因Clock,Cry,Bmal1,Per的表达。方法 用lipofectamineTM2000将HIVat表达质粒转入PC12细胞,使Tat在PC12细胞中表达。转染48h后提取mRNA和蛋白,分别通过实时荧光定量PCR技术和Western blot技术检测节律基因在mRNA和蛋白水平表达的变化。结果 研究结果显示,与未处理组和空质粒组相比,转染组Cry1的表达水平显著升高（P＜0.05）;Clock的表达水平显著降低（P＜0.05）;Bmal1和Per的表达水平无明显变化（P＞0.05）。 结论 HIV Tat影响了近日节律基因Cry1和Clock的表达,表现为Cry1表达水平升高,Clock表达水平下降,提示TAT蛋白可以影响节律基因的表达并且可能通过对近日节律的影响调节细胞生理功能。     

太空环境对人体近日节律的影响

近日节律是生物体适应外周环境产生的最重要的生物节律之一.太空环境影响人体的近日节律,进而引发睡眠障碍等一系列健康问题,影响宇航员高质量的执行太空任务.本文对太空环境如何影响近日节律以及采取措施改善近日节律紊乱进行述评,以供今后研究与探讨.     

小鼠外周血白细胞节律相关基因cry2,per2,timeless,rev-erb表达的近日节律性研究

目的探讨在12 h光照/12 h黑暗（12L/12D）光暗循环条件下,小鼠外周血白细胞中相关基因cry2,per2,timeless,rev-erb近日节律性表达特点。方法用完全随机分组法将C57/BL6小鼠分成6组,每组对应一个时相点,在12L/12D条件下词养4周后分别在6个时相点（9：00,13：00,17：00,21：00,1：00,5：00）取外周血并分离白细胞。抽提总RNA,采用实时荧光定量PCR技术检测小鼠外周血白细胞cry2,per2,timeless,rev-erb 4种节律基因的mRNA水平,用余弦函数拟合节律参数,并经振幅f检验分析是否存在近日节律。结果 cry2,per2,timeless,rev-erb 4种基因mRNA存在明显的近日节律性,各基因的峰值明显高于谷值（P〈0.01）;per2峰值相位时间在4：00左右,而cry2,timeless,rev-erb基因的峰值时间在11：00-12：00;从峰值时间和震荡幅度看,cry2,timeless,rev-erb峰值时间比per2超前,振幅比per2高,cry2、timeless、rev-erb的峰值时间、振幅大小比较接近。结论 C57/BL6小鼠外周血白细胞4种基因cry2,per2,timeless,rev-erb的mRNA存在明显的近日节律性。cry2,timeless,rev-erb在负反馈中的作用强于per2,而cry2,timeless,rev-erb在负反馈中的作用相似。该研究为深入理解哺乳动物的免疫功能昼夜波动打下了基础,也为诊断、治疗免疫功能紊乱相关疾病提供了靶目标。但这4种基因如何调控外周血中的免疫细胞,尚需进一步深入研究。     

妊娠高血压综合征血压近日节律的改变对预后的影响

目的研究血压近日节律的改变与妊娠高血压综合征预后的关系。方法收集155例妊娠高血压综合征孕产妇,每例患者均进行连续24 h血压监测,记录1次/4 h。用单一余弦法进行术后24 h血压的近日节律分析。根据近日节律的出现和消失将患者分组,分别为63例节律出现组与92例节律消失组,利用统计学比较两组预后的差异。结果近日节律出现组预后好的构成比明显优于节律消失组（P〈0.01）。结论近日节律的改变有可能早期预测妊娠高血压综合征的预后。     

哺乳动物近日节律的研究进展

近日节律是一种以近似24 h为周期的节律,起着调控机体生命活动的作用。它主要依赖中枢振荡器、外周振荡器和外界的因素来共同维持其正常运行。在外界环境因素(导引因子)的影响下,近日节律能够被重新设置,使哺乳动物自身机体活动与外界同步、处于最佳状态。这些导引因子包括光、食物、社会因子、某些化学物质(如褪黑素、激素等)。本文综述了这一进展,并展望导引近日节律在各领域应用的前景。     

近日节律与肿瘤治疗的研究进展

生物界存在着周期不同的节律,其中,近日节律使有机体能适应每日外界环境如光照,温度,社会活动等的变化,使机体生命代谢中生理、生化、社会行为等功能活动之间能协调一致地进行。生物的另一个具有明显节律的生命现象就是细胞周期。了解肿瘤细胞以及正常组织细胞的增殖分化,生长代谢的节律性对于肿瘤的临床治疗具有重要意义。研究发现,近日节律可通过调控原癌基因与抑癌基因的表达,在肿瘤的发生中起直接或间接的作用,这表明人体和癌症之间的平衡存在着日,月或季节的节律性变化。了解和承认这些日,月或季节变化可以帮助我们更好的预防、诊断,更安全,更有效地治疗人类癌症。     

光照对小鼠活动节律及生长的影响

目的探讨光照周期变化对小鼠活动节律及生长的影响。方法利用不同光暗周期（LD5／5、LD10／10、LD12／12、LD14／14、LD16／16）对小鼠施加影响，观察小鼠活动性变化，并检测其生长速度和血浆皮质酮水平。结果备组小鼠活动性周期与光暗循环周期一致，LD5／5、LD16／16组的生长速度快于其余三组，LD5／5、LD16／16血浆皮质酮水平高于LD12／12组。结论小鼠的活动可以很好的适应环境变化，但超过其近日节律可调范围（20-28h）的光暗循环条件可影响其生长，很可能使其处于应激状态。     

超氧阴离子自由基致NIH3T3细胞DMA损伤与c—myc基因表达

目的 研究超氧阴离子自由基（Ｏ２．＾－）对ＮＩＨ３Ｔ３细胞ＤＮＡ的损伤及其脂质过氧化作用和对ｃ－ｍｙｃ基因表达的影响。方法 用黄嘌呤黄嘌呤氧化酶（Ｘ－ＸＯ）系统产生Ｏ２．＾－,测定ＤＮＡ－溴乙锭结合物荧光强度变化确定ＤＮＡ损伤程度以太代巴比妥酸法测定脂质过氧化产物丙二醛（ＭＤＡ）含量,以细胞原位杂交法检测ｃ－ｍｙｃ基因表达。结果 高剂量Ｏ２．＾－能直接引起ＤＮＡ断裂损伤。Ｏ２．＾－能引起明显的ｃ－     

干扰Gnb21l对节律基因mPer1表达的影响

目的研究干扰Gnb211表达对节律基因mPer1表达的影响。方法采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐（Phorbol 12-Myristate 13-acetate,PMA）诱导NIH3T3细胞,使其节律基因稳定表达,然后用脂质体介导法将pGenesil-1／Gnb211质粒（实验组）及pGenesil-1／vector质粒（对照组）分别转染入NIH3T3细胞中,采用RT—PCR半定量技术检测不同时间点NTH3T3细胞中Gnb2l1及mPerl mRNA的表达水平的变化情况。结果实验组比对照组的白6221以及roPer1 mRNA的表达量均明显降低（P〈0．05）,但经余弦分析比较两组的mPer1表达周期无明显改变。结论干扰Gnb2l1使节律基因mPer1表达量降低。     

Effects of secretive bone morphogenetic protein 2 induced by gene transfection on the biological changes of NIH3T3 cells

Background Bone morphogenetic proteins (BMPs), which belong to the transforming growth factor beta superfamily, are powerful regulators of cartilage and bone formation. This study investigated the biological changes of NIH3T3 cells incubated with secretive BMP2 that was induced by gene transfection through transwell. Methods Eukaryonic expression vector (pcDNA3.1-B2) was transfered into NIH3T3 cells with Sofast™,a positive compound transfection agent. The positive cell clones were selected with G418. The cytoplasmic and extracellular expressions of BMP2 were determined by immunohistochemical stain and enzyme-linked immunosorbent assay. NIH3T3 cells were co-cultured with hBMP2 gene transfecting cells through transwell, and the ultrastructure, alkaline phosphatase activity and the expression of osteocalcin (the marker of osteogenetic differentiation) changes were observed. Results There were cytoplasmic and extracellular expressions of BMP2 in transfecting NIH3T3 cells. The ultrastructural changes, the high activity of alkaline phosphatase and the positive stain of osteocalcin suggested the osteogenetic differentiation tendency of NIH3T3 cells co-cultured with transfecting NIH3T3 cells. Conclusion Secretive BMP2 that is induced by gene transfection could promote the osteogenetic differentiation of fibroblast cells.     

The effect of MAGE-A1 gene on NIH3T3 cells

Objective: Melanoma antigen genes(MAGE) genes have been found in many kinds of tumor tissue, but not in normal tissue except testis and placentas. The Ags encoded by MAGE genes therefore are strictly tumor-specific. The most current researches associated with these genes focus on the tumor vaccination using these Ags. Few reports are concerning these genes‘ functions. In this study, we investigated the role of MAGE-A1 gene on NIH3T3 cells after transferring with it. Methods: Clone the MAGE-A1 into the plasmids pEGFP-C3 and pcDNA3.1, then transfer the reconstructed plasmids and primary plasmids into the NIH3T3 cells using a new transfer reagent FuGENE 6. Selecting the positively transferred cells by G418. Identified by RT-PCR, Western blot, Immunocytochemistry,Laser Scanning Confocal Microscope and Fluoroscope. The cells mobile ability was measured with Millicell-PCF. The cell cycle and apoptosis were measured with Flow Cytometry. Results: The apoptosis rate of NIH3T3 cells that transferred with control plasmid pcDNA3.1 was 13.4% and the ratios that stay in S phase and G2-M phase were 5.68% and 1.04,% respectively. The apoptosis rate of NIH3T3 cells that transferred with pcDNA3, l-A1 was 0.90% and the ratios that stayed in S phase and G2-M phase were 19.31% and 13.47% respectively. The apoptosisrate of the cells that transferred with control plasmid pEGFP-C3 was 1.87%, a little higher than 1.47% of those transferred with pEGFP-C3-A1. Conclusion:The MAGE-A1 gene may enhance the cell cycle, inhibit the apoptosis and raise the mobile ability of NIH3T3 cells.     

苯代谢物氢醌对K562细胞WRN基因转录及表达的影响

目的 探讨苯代谢物氢醌(HQ)对人白血病细胞K562中解旋酶WRN基因mRNA转录及蛋白表达的影响.方法 常规培养白血病细胞K562至生长对数期,低剂量HQ组、中剂量HQ组、高剂量HQ组分别以15、30、60μmol/L浓度HQ重复间隔柒毒48及72 h,以等体积的PBS培养的细胞组为空白对照组.采用单细胞凝胶电泳法(SCGE)检测细胞DNA损伤;采用Taqman探针实时荧光定量PCR法检测WRN基因mRNA水平,采用免疫印迹分析WRN基因蛋白表达水平,计算mRNA及蛋白的相对表达量.结果 (1)HQ可导致细胞DNA损伤,且损伤效应随染毒浓度增加而增大,72 h比48 h的DNA损伤程度增加,呈时间-剂量依赖性;(2)HQ染毒48 h,WRN基因mRNA在各组差异均无统计学意义(P＞0.05);HQ染毒72 h,各剂量组与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),低、中剂量组与高剂量组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),低剂量组与中剂量组组间差异无统计学意义(P＞0.05);(3)HQ染毒48 h,WRN蛋白相对表达量在各组差异无统计学意义(P＞0.05);HQ染毒72 h,各剂量组与空白对照组比较,蛋白表述随着染毒剂量增大而降低,差异有统计学意义(P＜0.05),HQ各剂量组之间两两比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HQ可导致K562细胞DNA损伤,且呈时间-剂量依赖性,其机制可能与HQ下调WRN基因mRNA转录及蛋白的表达有关.     

~(60)Coγ射线诱导的白血病小鼠中辐射致癌相关基因的筛选

目的：研究辐射诱导的白血病小鼠胸腺组织中的辐射致癌相关基因。方法：应用基因芯片技术对^60Coγ射线诱导的小鼠白血病胸腺和正常对照组织中的mRNA进行检测。结果：在8000条目的基因中共发现显著差异的表达基因(差异在3倍以上)319条，其中表达上升的有111条，下降的有208条，这些基因涉及到信号转导、细胞周期调节、免疫球蛋白、DNA修复等功能。结论：辐射致癌过程中涉及到多个种类肿瘤相关基因的改变。     

昼夜节律的改变对视网膜感光视蛋白melanopsin表达的影响

目的 研究昼夜节律的改变对视网膜感光视蛋白melanopsin表达的影响。方法出生14 d (P14) C57BL/6J小鼠随机分为实验组和正常对照组,实验组每天给予24 h持续光照,对照组模拟正常昼夜节律每天给予12 h光照、12 h黑暗环境,运用免疫荧光染色结合RT-PCR技术,分别检测实验组和对照组小鼠在光照1周后和8周后视网膜感光视蛋白melanopsin的表达情况。 结果免疫荧光染色结果显示感光视蛋白melanopsin主要位于视网膜神经节细胞层,少部分位于内核层。小鼠光照1周后melanopsin阳性细胞的表达数目实验组少于对照组;RT-PCR结果示小鼠光照1周和8周时melanopsin的mRNA含量实验组均少于各自的对照组,两者具有统计学意义(P<0.01)。结论持续光照可以减少视网膜感光视蛋白melanopsin的表达,提示melanopsin阳性神经节细胞为光敏感性细胞,其表达可能对维持正常的昼夜节律有重要作用。      

大肠癌细胞 XRCC2基因对电离辐射损伤的反应

目的：构建稳定的XRCC2基因沉默大肠癌细胞系及阐明沉默XRCC2基因表达的大肠癌细胞对电离辐射损伤的反应。方法采用Western blot法检测不同肿瘤细胞系人大肠癌细胞系（ T84、HT29、Lovo）、食管癌EC9706细胞、乳腺癌MCF－7细胞和人正常胚肾HEK293细胞中XRCC2蛋白的表达水平。大肠癌T84细胞经0、2、4、8、12 Gy X射线照射后和8 Gy X线照射后0、6、24、48 h,用Western blot法和实时定量PCR法测定XRCC2蛋白和mRNA的表达水平。将XRCC2 shRNA质粒转染T84细胞,用嘌呤霉素进行细胞筛选,采用Western blot法和实时定量PCR法,检测沉默XRCC2蛋白和mRNA表达的效率。将XRCC2 shRNA质粒转染T84细胞,经X线照射后,采用单细胞凝胶电泳测定沉默XRCC2基因表达的T84细胞的DNA损伤修复。结果与人正常胚肾HEK293细胞相比,在不同肿瘤细胞系中XRCC2蛋白均呈不同程度的高表达,其中在大肠癌T84细胞中XRCC2蛋白表达最高。随着X线照射剂量的增加,T84细胞中XRCC2蛋白的表达水平逐渐升高,8 Gy照射后XRCC2蛋白表达水平在48 h内随着时间的延长而逐渐升高;XRCC2 mRNA表达也表现出随剂量增加和时间延长而逐渐升高。与未处理的细胞相比,转染XRCC2 shRNA质粒的细胞中XRCC2蛋白和mRNA表达明显下降,约分别减少了70％和60％。照射后的T84细胞DNA损伤修复中shRNA－XRCC2组TDNA％、TM和OTM均显著高于未处理组和shR-NA－SC组,差异有统计学意义（t＝15.12、11.36、13.15,P＜0.01）。结论成功建立了稳定表达XRCC2基因沉默的大肠癌T84细胞系,XRCC2基因沉默导致辐射诱导的DNA损伤修复能力下降。