miR-21a-5p靶向MATN2抑制LPS诱导的巨噬细胞损伤的实验研究

目的 miR-21a-5p对脂多糖( LPS)处理的 RAW264. 7 巨噬细胞的调控作用及分子机制研究.方法 实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测不同浓度 LPS处理的巨噬细胞中 miR-21a-5p水平;应用 miR -21a-5p模拟物( mimics)和阴性对照( miRNA-NC)分别转染 LPS处理...     

miR-28-5p对结肠癌细胞增殖和迁移的影响

目的 探究miR-28-5p对结肠癌细胞增殖和迁移能力的影响.方法 采用qRT-PCR检测miR-28-5p在正常结肠细胞NCM460与结肠癌细胞HCT116、SW480、SW620中表达量的差异.将HCT116、SW480、SW620各分为三组:对照组,过表达组,沉默组.对照组不予特殊处理,其余两组分别转染miR-2...     

miR-146a-3p靶向TLR4减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤

目的 研究微小RNA (miR)-146a-3p对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)和炎症反应的作用及机制.方法 将32只BALB/c小鼠随机分为假手术组、ALI组、ALI+agomiR-阴性对照(NC)组以及ALI+miR-146a-3p激动剂组(ALI+agomiR-146a-3p组),每组8只.通过气...     

艾司氯胺酮调控miR-204-5p/CXCR4轴减轻机械通气诱导的大鼠肺损伤

目的：探讨艾司氯胺酮（Esket）调控miR-204-5p/趋化因子受体4(CXCR4)轴对机械通气诱导的大鼠肺损伤的影响。方法：将SD大鼠随机分为对照组（NC组）、模型组（model组）、低剂量Esket组（Esket-L组）、高剂量Esket组（Esket-H组）、antagomir阴性对照组（antagomir NC组）、miR-204-5p antagomir组、Esket-H+antagomir NC组、Esket-H+miR-204-5p antagomir组。除NC组外,其余各组大鼠机械通气4 h,在机械通气前3 d给予相应药物处理。比较各组肺组织湿重（W）/干重（D）比值、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量及血清中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,苏木精—伊红（HE）染色观察大鼠肺组织病理变化,TUNEL法检测肺组织细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-204-5p表达,western blotting法检测Bax、Caspase-3、CXCR4蛋白表达。结果：与model组比较,Esket-L组、Esk...     

miR-218-5p通过靶向LIN28B调控COPD时气道上皮细胞凋亡和炎症反应

目的 探讨miR-218-5p通过靶向LIN28B调控慢性阻塞性肺疾病(COPD)时气道上皮细胞凋亡和炎症反应的作用及其机制.方法 将人肺支气管上皮细胞BEAS-2B分为正常对照(NC)组、香烟烟雾提取物(CSE)组、miR-NC+CSE组、miR-218-5p+CSE组、si-NC+CSE组、si-LIN28B+CS...     

miR-17-5p在动脉粥样硬化小鼠中的作用机制研究

目的 探讨miR-17-5p在动脉粥样硬化发展中对组织炎症反应及氧化应激水平的影响.方法 高脂喂养ApoE-/ -小鼠12周构建动脉粥样硬化( AS)模型,尾静脉注射miR-17-5p拮抗剂. HE染色观察主动脉的病理变化;TUNEL染色观察细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白的表达情况; ELISA 检测炎症因子的表达.通过检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶( SOD )和髓过氧化物酶(MPO)的活性评估氧化应激水平.结果 抑制 miR-17-5p减轻了AS小鼠主动脉的病变程度,减少了主动脉细胞凋亡,同时下调了 Bax、 cleaved-caspase-3、 cleaved-PARP 的表达,上调了Bcl-2 蛋白表达.抑制 miR-17-5p后,AS小鼠主动脉TNF-α、IL-6水平下降,IL-10水平上升,同时MDA含量及MPO活性受到抑制,SOD活性上调.结论 抑制miR-17-5p可以通过减轻动脉粥样硬化小鼠主动脉的炎症反应和氧化应激水平缓解动脉粥样硬化病变. miR-17-5p可能是治疗动脉粥样硬化的潜在靶点.     

血清miR-423-5p、miR-499-5p和miR-210-3p在慢性心力衰竭大鼠中的表达及意义

目的 探讨血清微小RNA-423-5p(miR-423-5p)、微小RNA-499-5p(miR-499-5p)、微小RNA-210-3p(miR-210-3p)在慢性心力衰竭(CHF)大鼠中的表达及意义。方法 SD大鼠随机分为对照(NC)组(n=15)和CHF组(n=15),采用腹腔注射阿霉素建立CHF模型。建模6周后检测两组心功能指标[左心室舒张末期容积(LVEDV)、左心室收缩末期容积(LVESV)、左室射血分数(LVEF)]、血清miR-423-5p、miR-499-5p、miR-210-3p表达水平及氨基末端脑利钠肽前体(NTpro-BNP)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平。采用Pearson法分析血清miR-423-5p、miR-499-5p、miR-210-3p与心功能指标、NTpro-BNP、cTnI相关性。结果 与NC组比较,CHF组心功能指标LVEDV和LVESV升高(P<0.05),miR-423-5p、miR-499-5p和miR-210-3p表达水平升高(P<0.05),NTpro-BNP和cTnI水平升高(P<0.05),LVEF降低(P&...     

穗花杉双黄酮调控miR-140-5p介导脂多糖致急性肺损伤的机制研究

目的 探究穗花杉双黄酮对脂多糖（lipopolysaccharides ,LPS）致大鼠急性肺损伤（acute lung injury ,ALI）的保护作用及机制研究。方法 将60只大鼠随机分为4组：对照组、模型组、阳性对照组、实验组。模型组、阳性对照组和实验组大鼠均通过气道滴注3.00 mg/kg LPS 100μl,空白对照组气道滴注等体积的生理盐水,6 h后阳性对照组大鼠腹腔注射地塞米松（2.5 mg/kg）,实验组大鼠腹腔注射穗花杉双黄酮（2.5 mg/kg）,对照组和模型组注射等体积生理盐水。48 h后称重测定大鼠肺组织湿/干比;苏木精-伊红染色( hematoxylin-Eosin staining,HE )观察各组大鼠肺组织病理结构;ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin 6,IL-6）和白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）水平;RT-PCR检测miR-140-5p在肺组织中的表达情况;蛋白印迹法（western Blot,WB）检测肺组织中Toll样受体4（Toll Like Receptor 4,TLR4）、核因子活化B细胞κ轻链增强子（nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB）蛋白表达水平。RT-PCR检测肺组织中miR-140-5p的表达情况。利用LPS刺激肺上皮细胞A549,加入穗花杉双黄酮RT-PCR检测miR-140-5P的表达,利用LPS刺激肺上皮细胞A549,加入miR-140-5P抑制剂、mimic-NC干预,RT-PCR检测TLR4、NF-κB的表达。结果 实验组肺组织湿/干比明显低于模型组（P＜0.05）;HE染色结果显示实验组大鼠肺组织结构相比于ALI模型组大鼠炎症细胞明显减少,肺泡间隔明显减轻;ELISA结果显示实验组大鼠肺组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均明显低于模型组（P＜0.05）;WB结果发现实验组大鼠肺组织中TLR4、NF-κB表达量明显低于模型组;RT-PCR结果显示实验组大鼠肺组织和细胞中miR-140-5P表达均明显高于模型组（P＜0.05）,而miR-140-5P mimic能明显抑制TLR4、NF-κB的表达（P＜0.05）。结论 穗花杉双黄酮能明显缓解LPS诱导的大鼠ALI,降低肺损伤病理进程中血清TNF-α、IL-6和IL-1β的含量,对ALI起保护作用,其作用机制可能是通过促进了miR-140-5P的表达,从而减低ALI炎症过程中关键炎症信号TLR4、NF-κB的表达。     

miR-499a-5p靶向MMP-16通过Nrf2信号通路减轻急性呼吸窘迫综合征大鼠的肺损伤

目的 探讨miR-499a-5p高表达靶向基质金属蛋白酶-16(MMP-16)对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺损伤的影响.方法 实验设置假手术组、模型组、miR-499a-5p模拟物组、MMP-16组、miR-499a-5p模拟物+MMP-16组、Nrf2信号通路抑制剂D-呋喃核糖基苯并咪唑(DRB)组、miR-...     

miR-145-5p靶向ARK5调控人上皮性卵巢癌细胞增殖凋亡的作用

目的 探讨miR-145-5p对人上皮性卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及可能涉及的分子机制。方法 实时定量PCR检测miR-145-5p在正常卵巢上皮细胞及卵巢癌细胞中的表达差异,CCK-8、流式细胞术检测过表达miR-145-5p对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。靶基因预测软件预测miR-145-5p的靶基因,生物信息学、Western blot、双荧光素酶基因验证报告实验、挽救实验等方法预测并验证miR-145-5p在卵巢癌细胞中发挥作用涉及的分子机制。结果 卵巢癌细胞中miR-145-5p的表达水平明显低于正常卵巢上皮细胞(t=4.345,P=0.049)。与对照组相比,过表达miR-145-5p的卵巢癌细胞增殖率明显降低(t=-15.790,P<0.001),凋亡率明显增加(t=5.433,P=0.032)。TargetScan软件在线预测及双荧光素酶基因验证报告实验结果表明,ARK5是miR-145-5p的直接靶基因(t=4.583,P=0.010)。ARK5过表达细胞的增殖率明显升高(t=27.290,P<0.001),凋亡率明显下降(t=-8.241,P=0.001)。过表达miR-145-5p可在mRNA(t=-12.824,P<0.001)及蛋白水平(t=-4.792,P=0.001)明显下调ARK5的表达。ARK5的挽救性表达显著抵消了miR-145-5p对细胞增殖的抑制(t=15.580,P=0.004)和促细胞凋亡(t=-12.470,P=0.006)的效果。结论 miR-145-5p可能是通过靶向抑制ARK5来抑制卵巢癌细胞增殖和促进细胞凋亡的。     

宫颈癌患者血清miR-574-5p和miR-497-5p表达的临床意义

目的:研究宫颈癌患者血清miR-574-5p和miR-497-5p表达的临床意义.方法:选择2016年1月至2018年12月在我院诊治的宫颈癌患者116例,为宫颈癌组;选择同期在我院病理确诊为宫颈上皮内瘤变患者45例,为宫颈上皮内瘤变组;选择同期在我院行健康体检者30例,为健康对照组.运用实时荧光定量PCR方法检测各组...     

内毒素诱导急性肺损伤巨噬细胞炎症蛋白-2的表达

目的:探讨趋化性细胞因子巨噬细胞炎症蛋白-2(MIP-2)在内毒素诱导急性肺损伤(ALI)中的可能作用.方法:采用斑点杂交及原位杂交技术对ALI大鼠肺组织中MIP-2 mRNA的表达进行定量和定位研究.结果:内毒素性ALI各组大鼠肺组织MIP-2 mRNA表达量显著高于对照组,且在峰值水平与血浆及肺组织匀浆髓过氧化物酶(MPO)活力呈正相关(r=0.729,r=0.885,P<0.05).原位杂交发现在ALI早期肺内巨噬细胞是MIP-2的主要分泌细胞.结论:肺巨噬细胞释放的MIP-2可能是ALI时多形核白细胞(PMN)在肺内大量浸润并激活的原因之一,因而参与了ALI的早期发病过程.     

血清miR-181c-5p和miR-582-5p水平在老年急性缺血性脑卒中早期诊断中的应用

目的 探讨血清miR-181c-5p、miR-582-5p在老年急性缺血性脑卒中(AIS)早期诊断中的应用。方法 选取2019年3月至2021年3月成都市第六人民医院神经内科治疗的89例老年AIS患者为AIS组,根据NIHSS评分将患者分为重度组24例、中度组34例、轻度组31例。另选取同期到本院就诊并确诊为无神经功能障碍、无梗死病灶的一般脑血管疾病患者60例为对照组。采用qRT-PCR检测血清miR-181c-5p、miR-582-5p表达水平;Spearman法分析老年AIS患者血清miR-181c-5p、miR-582-5p水平与NIHSS评分的相关性;Logistic回归分析老年AIS发生的影响因素;ROC曲线分析血清miR-181c-5p、miR-582-5p水平对老年AIS的诊断价值。结果 与对照组相比,AIS组血清miR-181c-5p显著升高(P<0.05),血清miR-582-5p显著降低(P<0.05)。老年AIS患者血清miR-181c-5p水平与NIHSS评分呈正相关(r=0.676,P<0.001),血清miR-582-5p水平与NIHSS评...     

miR-335-5p通过靶向Oct4调控胃癌细胞的增殖

目的：研究微小（miR）-335-5p对胃癌细胞增殖的影响及其机制。方法：采用荧光定量PCR检测miR-335-5p在胃癌细胞系SGC-7901、BGC-823、MKN-28、MKN-45和人正常胃黏膜上皮细胞系GES-1中的表达水平,利用miR-335-5p过表达慢病毒及封闭慢病毒分别感染SGC-7901和BGC-823细胞株,实验分为SGC-7901细胞中miR-335-5p组（转染过表达miR-335-5p组）和阴性对照组（空病毒组,NC）,BGC-823细胞中antago-miR-335-5p组（转染封闭miR-335-5p慢病毒）和阴性对照组（空病毒组,NC）。通过CCK-8实验、平板克隆实验、EdU实验检测miR-335-5p对细胞增殖的影响,用生物信息学软件预测miR-335-5p可能的靶基因,通过Western blot验证miR-335-5p对靶基因的调控作用并检测AKT及pAKT的表达。结果：miR-335-5p在胃癌细胞系中表达明显下降。CCK-8实验、平板克隆实验及EdU实验中过表达miR-335-5p组光密度值、克隆形成率、EdU阳性细胞率均低于其阴性对照组,而封闭miR-335-5p组光密度值、克隆形成率、EdU阳性细胞率均高于其阴性对照组。同时用生物信息学软件预测了Oct4作为miR-335-5p的靶基因,Western blot表明过表达miR-335-5p组Oct4的表达量（0.469±0.054）明显低于阴性对照组（0.670±0.045）（P=0.008）,封闭miR-335-5p组Oct4的表达（0.804±0.046）高于阴性对照组（0.600±0.073）（P=0.015）,同时双荧光素酶报告实验证明miR-335-5p能够靶向Oct4;过表达miR-335-5p组中pAKT的表达量（0.525±0.046）较阴性对照组（0.847±0.053）有所下降（P=0.001）,封闭miR-335-5p组（0.841±0.069）中pAKT的表达量较阴性对照组（0.563±0.063）有所升高（P=0.007）。结论：miR-335-5p可以通过靶向Oct4抑制AKT通路从而抑制胃癌细胞的增殖。     

miR-324-5p和miR-215-5p在多发性骨髓瘤中的表达及预后分析

目的 检测多发性骨髓瘤（MM)患者血清中miR-324-5p和miR-215-5p的表达水平,研究其表达水平和预后的关系。方法收集60例MM患者血清标本,为初治组（20例）、巩固治疗组（20例）、复发难治组（20例）;20例健康人血清标本（健康对照组）,实时荧光定量PCR检测血清中miR-324-5p和miR-215-5p的表达水平。结果与健康对照组比较,MM患者血清中miR-215-5p表达水平下降（P<0.008 3）,初治组和难治复发组患者血清miR-324-5p表达水平下降（P<0.008 3）,巩固治疗组与健康对照组血清miR-324-5p表达水平差异无统计学意义（P>0.008 3）;巩固治疗组血清miR-324-5p表达水平高于初治组及难治复发组（P<0.008 3）;巩固治疗组血清miR-215-5p表达水平高于初治组（P<0.008 3）,巩固治疗和难治复发患者间差异无统计学意义（P>0.008 3）;初治组与复发难治组之间两种miRNAs表达水平差异无统计学意义（P>0.008 3）。miR-324-5p和miR-215-5p表达水平与β2微球蛋白和红细胞体积分布宽度呈负相关,与血红蛋白呈正相关。初治MM患者血清miR-324-5p和miR-215-5p高表达组无进展生存期高于低表达组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论miR-324-5p和miR-215-5p在MM血清中表达水平降低,miR-324-5p和miR-215-5p可能与疾病密切相关,其低表达可能提示预后不良。     

lncRNA NEAT1/miR-181a-5p/bcl-2轴在脓毒症致急性肺损伤中的作用机制研究

目的 探讨lnc RNA NEAT1/miR-181a-5p/bcl-2轴在脓毒症急性肺损伤（ALI）中的作用及机制。方法 结扎盲肠头尾端穿孔（CLP）构建脓毒症ALI小鼠模型,将C57BL/6雄性小鼠分为假手术组和ALI组,每组各8只。术后24 h取肺组织,测定肺湿/干比（W/D）,苏木素-伊红（HE）染色后光镜观察肺组织形态学改变,qRT-PCR检测肺组织长链非编码RNA(lncRNA)NEAT1,NEAT1的海绵miR-181a-5p以及结合蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)的表达水平。双荧光素酶报告基因实验检测NEAT1和mi R-181a-5p的结合情况。通过Western blot检测肺组织中miR-181a-5p结合蛋白bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果 与假手术组相比,ALI组小鼠W/D明显升高（P <0.01）;HE染色发现ALI组部分肺组织呈实质肺泡萎缩或消失。与假手术组相比,ALI组小鼠肺组织中lncRNA NEAT1的表达水平显著升高（P <0.01）,miR-181a-5p的表达水平显著降低（P <0.01）,bcl-2的表达水平...     

miR-590-5p和miR-590-3p参与肝细胞肝癌发展的机制

目的研究miR-590的两个臂—miR-590-5p和miR-590-3p对肝癌细胞增殖能力的影响,以及参与肿瘤发生发展的机制。
方法利用miRNA芯片、QPCR对肝癌标本和各细胞株miR-590的表达谱系进行分析和验证。通过脂质体将miR-590 mimic或
inhibitor 转染正常肝细胞或肝癌细胞,MTT生长曲线分析和软琼脂克隆形成实验检测转染后细胞增殖及存活能力的变化。
Targetscan预测miR-590-5p和miR-590-3p的靶基因,并通过萤光素酶报告系统以及western blot进行验证。结果miRNA芯片
结果显示3个肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC）组织相对于癌旁正常组织,miR-590-5p和miR-590-3p表达上调。通
过QPCR验证了10 例临床HCC肿瘤标本发现80%的HCC组织相对于癌旁组织miR-590-5p 和miR-590-3p 均同步显著上调。
QPCR结果进一步发现,HepG2、Hep3B、Huh7三株HCC细胞株相对于正常肝细胞株L-O2 miR-590-5p/3p同样表达上调。MTT
和软琼脂克隆形成结果显示,L-O2 分别过表达miR-590-5p 和miR-590-3p,细胞的增殖能力都显著增加（P<0.05）;而HepG2、
Hep3B、Huh7分别下调miR-590-5p和miR-590-3p的表达后,细胞的增殖能力也都显著降低（P<0.05）。Targetscan预测,PDCD4
和PTEN 分别作为miR-590-5p 和miR-590-3p 的潜在靶基因。萤光素酶报告系统以及western blot 结果显示miR-590-5p 和
miR-590-3p 可以分别直接下调靶基因PDCD4 和PTEN的表达（P<0.05）。进一步我们发现miR-590-3p 通过下调PTEN激活
PI3K-AKT信号通路,促进AKT1-S473的磷酸化水平。结论在HCC发展过程中miR-590扮演着重要的致癌因子角色,我们结
果发现miR-590的两个臂都具有促进肿瘤发生的生物学功能,它们分别通过靶向调节抑癌基因PDCD4和PTEN的表达来促进
HCC细胞的增殖和存活,并激活核心的PI3K-AKT肿瘤信号通路。由此可见miR-590 在HCC发生发展过程中具有重要的意
义,也可作为临床诊治潜在的新靶标。
     

miR-21-5p改善阿霉素诱导的心脏毒性及其作用机制

目的 探究miR-21-5p对阿霉素(doxorubicin, DOX)引起的心脏毒性的影响及潜在的作用机制。方法 将C57BL/6小鼠分为对照组(Con组)、阿霉素组(DOX组)、NC agomir处理组(DOX+ago NC组)、miR-21-5p agomir处理组(DOX+ago-miR-21-5p组)、NC antagomir处理组(DOX+anta NC组)、miR-21-5p antagomir处理组(DOX+anta-miR-21-5p组)。DOX组小鼠采用腹腔注射DOX构建小鼠阿霉素心脏毒性模型。DOX+ago NC组、DOX+ago-miR-21-5p组、DOX+anta NC组和DOX+anta-miR-21-5p组小鼠在DOX处理前分别经尾静脉连续注射NC agomir、miR-21-5p agomir(上调靶基因)、NC antagomir及miR-21-5p antagomir(下调靶基因)载体3 d。通过qRT-PCR检测各组小鼠心肌组织miR-21-5p的表达情况。测定小鼠心脏功能,包括左室射血分数(LVEF)和左室短轴缩短率(LVFS),观察心肌组织病...     

上调miR-126对LPS诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用及机制

目的 探讨上调微小RNA(miR)-126对小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的影响及可能的作用机制.方法 将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为control组、ALI组、ALI+agomiR-NC和ALI+agomiR-126组,每组10只.利用腹腔注射脂多糖(LPS)诱导建立ALI小鼠模...