促性腺激素释放激素激动剂对大鼠睾丸间质细胞annexin5和3β-HSD的表达影响

目的：探讨阿拉瑞林（GnRHa）对大鼠睾丸间质细胞中膜联蛋白V（annexin5）和3β-羟类固醇脱氢酶（3β-HSD）的表达的影响。方法：建立体外分离、纯化和培养大鼠睾丸间质细胞原代培养技术,采用3β-HSD免疫细胞化学方法对间质细胞进行鉴定,同时用不同终浓度的GnRHa（分别为1×10^,1×10^-6,1×10^-1moL／L）作用于间质细胞24h后,通过Western Blot检测间质细胞中annexig 5和3β-HSD的表达变化情况．结果：间质细胞经GnRHa处理后,Western Blot结果显示,与对照组相比,当GnRHa终浓度为1×10^-5 moL／L时,anenxin5的表达量显著升高了69．2％（P〈0．01）,3B—HSD的表达量也升高了25．2％（P〈0．05）;当GnRHa的终浓度为1×10^-6mol／L和1×10mol／L时,anenxin5的表达量分别升高了61．5％（P〈0．05）和16．64％（P〉0．05）,3β-HSD的表达量则无显著性变化,分别升高了7．7％（P〉0．05）和2．22％（P〉0．05）．结论：GnRHa在原代培养的睾丸问质细胞中,对annexin5,3β-HSD的表达具有调节作用。     

醋酸曲谱瑞林对人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B的作用及对PCNA表达的影响

目的研究醋酸曲谱瑞林对人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B的作用及其分子作用机制。方法以不同浓度醋酸曲谱瑞林（0，10^-9，10^-8，10^-7，10^-6，10^-5mol／L）体外作用于中分化人子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B（0mol/L组作为对照组，其余各组作为实验组），用MTT法检测细胞抑制率；免疫细胞化学检测HEC-1-B细胞PCNA蛋白表达，并用病理图像分析软件进行半定量分析。RT—PCR法检测HEC-1-B细胞PCNAmRNA的表达。结果①当醋酸曲谱瑞林浓度为10^-9mol／g时，HEC-1-B细胞即受到抑制，抑制率为36．8％；随着浓度的增大，抑制率渐高，到浓度为10^-5mol／g时抑制率上升至57．4％。与对照组比较，实验组抑制率差异有统计学意义（P〈0．05）。②浓度从10^-9 - 10^-5mol／L的醋酸曲谱瑞林作用72h后，PC—NA蛋白和PCNAmRNA表达均有不同程度的下降，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论醋酸曲谱瑞林在体外对HEC-1-B细胞可能有直接的抑制作用，且呈剂量依赖关系。醋酸曲谱瑞林抑制HEC-1-B细胞增殖的分子机制可能与下调PCNA蛋白表达有关。     

垂体肿瘤转化基因和碱性成纤维细胞生长因子在胶质瘤中的表达及意义

目的探讨垂体瘤转化基因（PTTG）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在胶质瘤中表达及二者相互关系。方法40例星形细胞胶质瘤患者手术标本,病理学分级为Ⅰ级8例、Ⅱ级10例、Ⅲ级13例、Ⅳ级9例。逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测PTTG mRNA及bFGF mRNA的表达,免疫组化检测二者蛋白表达。结果PTTG mRNA、bFGF mRNA及蛋白表达均随着肿瘤病理级别的增高而增加（P〈0.05或P〈0.01）;PTTG蛋白表达与bFGF蛋白表达呈显著正相关（r=0.523,P〈0.05）。结论PTTG和bFGF与胶质瘤的生物学行为有密切关系,二者共同促进胶质瘤的发生发展。     

磁共振扩散加权成像在胶质瘤术前分级中的应用研究

目的通过磁共振扩散加权成像研究肿瘤实性区域的组织扩散情况，探讨扩散加权成像在胶质瘤术前分级中的应用价值。方法回顾性分析手术病理证实的脑胶质瘤患者常规MRI、DWI检查资料，按照2000年WHO脑肿瘤分级标准，低级别胶质瘤（Ⅰ-Ⅱ级）22例，高级别胶质瘤（Ⅲ-Ⅳ级）17例。所有病例均术前行DWI扫描，在工作站构建ADC图，分别测量肿瘤实性区域和相应部位正常参照区域的ADC值，观察高级别胶质瘤组和低级别组肿瘤实性区域ADC值与正常对照的相互关系，并着重观察两组肿瘤各自与正常参照区域的相对（肿瘤／参照）ADC值之间的关系。低级别和高级别胶质瘤之间肿瘤实性区域各项比值的比较均采用两样本￡检验。结果高级别胶质瘤组肿瘤实性区域ADC值（1．27±0．20）×10^-3 mm^2／s较正常对照区（1．10±0．15）×10^-3mm^2/s稍高，两者之间具有统计学差异（P〈0．05）；而低级别胶质瘤组肿瘤实性区域ADC值（1．84±0．29）×10^-3 mm^2／s明显高于正常对照区（1．00±0．08）×10^-3 mm^2／s，具有显著性差异（P〈0．01）。结论高级别胶质瘤与低级别胶质瘤瘤体实性区域rADC值有显著性差异，这提示MRDWI有助于提高胶质瘤术前分级评价准确性。     

电离辐射对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因表达的影响

目的探讨电离辐射对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因（pituitary tumor transforming gene,PTTG）表达的影响。方法胶质瘤C6细胞分为4组（n=6）：A组（空白对照组）、B组（2 Gy剂量X射线组）、C组（4 Gy剂量X射线组）、D组（6 Gy剂量X射线组）,X射线照射后12 h,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测PTTG mRNA的表达,免疫细胞化学检测其蛋白表达。结果PTTG mRNA在X射线处理组均降低,随着X射线剂量的增加,其表达降低越明显,A、B、C、D 4组的表达分别为1.910±0.141、1.398±0.157、1.010±0.133、0.743±0.092,各组间差异均有统计学意义（P〈0.01）。PTTG蛋白积分光密度（integrated optical density,IOD）在X射线处理组均降低,随着X射线剂量的增加,其表达降低越明显,A、B、C、D 4组的IOD分别为1.840±0.089、1.395±0.139、0.893±0.125、0.597±0.104,各组间差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论电离辐射可以剂量依赖的方式降低胶质瘤C6细胞PTTG mRNA及其蛋白的表达。     

胰岛素样生长因子-1对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因的影响

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(Insulin-like-growth factor-1,IGF-1)在体外对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因(pitu-itary tumor transforming gene,PTTG)表达的影响.方法:体外培养胶质瘤C6细胞,给与不同浓度的IGF-1(0.1、1.0、10.0 ng/ml)作用24 h后半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测pTTGmRNA,Western blot检测PTTG蛋白表达.结果:不同浓度IGF-1作用后C6细胞PTTG mRNA表达与蛋白水平均增高,差异有统计学意义(P<0.01),且随着浓度的增加,其升高越明显.结论:IGF-1可以卜调PTTG的表达,并剂量依赖性.     

PUVA诱导HL-60细胞凋亡时对Fas、FasL表达的影响

[目的]探讨补骨脂素（PSO）加长波紫外线（UVA）光化学疗法（PUVA）诱导人白血病细胞HL-60凋亡时对Fas、FasL表达的影响。[方法]以HL-60细胞为研究对象。以细胞凋亡率、电镜下细胞超微结构改变以及细胞Fas、FasL在基因、蛋白水平的表达为检测指标,观察中药补骨脂中提取的PSO加波长为360nm的UVA对人白血病细胞诱导凋亡的作用以及部分作用途径,并采用多因素方差分析法进行统计学处理。[结果]（1）PSO、UVA照射及PUVA均可诱导HL～60细胞发生凋亡,对照组、80μg／mL PSO组、5min UVA组及PUVA（80μg／mL PSO＋5min UVA）组凋亡率分别为（10．60±0．31）％、（26。94±0．26）％、（28．53±0．05）％、（37．72±0．09）％,各组间P〈0．01,PUVA的作用明显强于前两者。（2）电镜下观察经PUVA处理后的HL-60细胞超微结构,可见明显的凋亡形态学改变。（3）PSO、UVA照射及PUVA均可上调HL-60细胞Fas在基因、蛋白水平的表达,下调FasL在基因、蛋白水平的表达。上述四组FasmRNA的表达量分别为（8．40±0．59）×10^3、（1．62±0.36）×10^5、（1.50±0.26）×10^5、（7．88±0．38）×10^6拷贝数／μg;Fas蛋白的表达量分别为（3．29±0．39）％、（18．73±1．22）％、（18．17±1．07）％、（47．03±1．36）％;FasL mRNA的表达量分别为（8．69±0．44）×10^7、（2．71±0．29）×10^7、（2.64±0．31）×10^7、（2．61±0.33）×10^5拷贝数/μg;FasL蛋白的表达量分别为（58．67±1．75）％、（37．40±1.73）％、（33．90±1．90）％、（15．60±1．42）％,各组间P〈0．01,PUVA的作用明显强于前两者。[结论]（1）PUVA可诱导白血病细胞HL-60发生凋亡,作用强于PS0及UVA照射。（2）PUVA诱导HL-60凋亡的途径之一为上调HL-60细胞FasmRNA表达水平,下调FasL mRNA表达水平。     

三苯氧胺对人脑胶质瘤细胞SHG-44增殖的影响

目的研究三苯氧胺（TAM）对人脑胶质瘤细胞SHG-44增殖的影响并探究其可能机制。方法将不同浓度TAM和脑胶质瘤细胞作用,分别用细胞划痕法、3H-TdR掺入法、流式细胞仪和免疫组化法检测细胞转移能力、细胞DNA合成情况、细胞周期改变和细胞凋亡率及雌激素受体的表达情况。结果TAM在体外能明显抑制SHG-44细胞转移,抑制细胞DNA合成,且抑制作用呈浓度依赖性。流式细胞仪显示细胞经TAM处理后,表现为G0/G1期和G2/M期细胞所占比例增加,而S期细胞所占比例减少。用0、2、10μmol/LTAM处理时细胞凋亡率分别为（2.05±0.28）%、（7.66±0.52）%和（19.00±0.77）%,SHG-44细胞不表达雌激素受体。结论TAM可能通过改变细胞周期和诱导细胞凋亡来抑制脑胶质瘤细胞SHG-44的生长。     

TAM诱导MA782细胞凋亡与CDK4关系

目的 探讨Tamoxifen（TAM）诱导ER（-）小鼠乳腺癌细胞MA782细胞凋亡及其分子作用机制。方法 TAM体外作用于MA782细胞，用MTT法检测细胞增殖活性、流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布，免疫组化检测CDK4蛋白表达，并用病理图像分析软件进行半定量分析。结果 6、10μmol／L TAM在体外能明显抑制MA782细胞生长，诱导细胞凋亡，作用24h细胞凋亡率分别为7．04％、19．04％，10μmol／L TAM作用48h后细胞凋亡率从19．04％上升到51．27％，与对照组比较有显著差异（P〈0．01）。2μmol／L TAM作用于细胞不同时间后检测CDK4蛋白，与对照组无明显变化（P〉0．05），而6、10μmol／L TAM作用不同时间后，CDK4蛋白表达有不同程度的下降，与对照组相比差异显著（P〈0．05或P〈0．01）。结论 TAM诱导MA782细胞凋亡其分子作用机制可能与下调细胞CDK4蛋白表达有关。     

孕酮、他莫西芬对子宫内膜癌细胞增殖及雌激素受体相关受体表达的影响

目的探讨孕酮及他莫西芬（tamoxifen,TAM）对子宫内膜癌细胞生长的影响及其对雌激素受体相关受体（ERRα）表达的影响。方法体外培养子宫内膜癌Ishikawa细胞,采用MTT法检测不同浓度孕酮及TAM对子宫内膜癌细胞生长的影响,同时采用Western Blot方法检测细胞中ERRα蛋白水平的变化。结果不同浓度孕酮对Ishikawa细胞体外增殖具有抑制作用,呈剂量-时间依赖性。TAM对Ishikawa细胞体外增殖具有双向作用,在×10-9~×10-7mol/L TAM作用下促进细胞增殖,并呈剂量-时间依赖性;在×10-5mol/L TAM作用下抑制细胞增殖。×10-9~10-6mol/L TAM作用后下调细胞中ERRα蛋白表达,×10-5mol/L TAM及孕酮作用后上调ERRα蛋白表达。结论孕酮及高浓度他莫西芬（×10-5mol/L）可抑制子宫内膜癌细胞的增殖,这种抑制作用可能通过调控细胞中ERRα表达实现;而低浓度他莫西芬则促进子宫内膜癌细胞的增殖。     

垂体肿瘤转化基因在人肾透明细胞癌中的表达及意义

目的 探讨垂体肿瘤转化基因(PTTG)在人肾透明细胞癌中的表达及其意义.方法 采用免疫组织化学法分别检测正常肾脏组织及肾透明细胞癌组织中PTTG蛋白的表达.结果 在正常肾脏和肾透明细胞癌组织中PTTG蛋白的表达存在显著差异(P<0.001),肾透明细胞癌中PTTG蛋白表达率(74.56%)明显高于正常肾组织(11.11%).在肾透明细胞癌组织中,PTTG蛋白表达阳性率与肾透明细胞癌的肿瘤大小、临床分期和Fuhrman分级呈正相关,差异具有显著性(P=0.009、0.008和0.035).结论 PTTG在肾透明细胞癌组织中高表达,与肾透明细胞癌的发生、发展密切相关.     

PTTG和bFGF在非小细胞肺癌组织中的表达

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）中垂体肿瘤转化基因（PTTG）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达和意义。方法采用免疫组化SABC法检测PTTG和bFGF在61例非小细胞肺癌组织和20例正常肺组织中的表达。结果61例非小细胞肺癌组织中PTTG和bFGF的阳性表达率分别为68．85％（42／61）和73．77％（45／61），显著高于正常肺组织中的表达（分别为10％和15％，P〈0．05），PTTG和bFGF的表达与肿瘤细胞的分化程度和有无淋巴结转移、TNM分期显著相关，与患者年龄、性别和肿瘤组织类型无相关性；PTTG和bFGF的表达呈正相关（P〈0．05）。结论非小细胞肺癌存在PTTG和bFGF蛋白高表达，提示PTTG可能通过激活bFGF表达促进微血管的形成，在肺癌发生发展中起重要作用．PTTG基因有望成为肺癌新的肿瘤分子标记和基因治疗的靶点．     

垂体瘤转化基因和血管内皮生长因子在胶质瘤中的表达及其相关性研究

目的:探讨胶质瘤中垂体瘤转化基因(PTTG)和血管内皮生长因子(VEGF)在胶质瘤中的表达以及二者之间的相关性。方法:将40例胶质瘤患者手术标本按病理级别分为级8例,级10例,级13例,级9例,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PTTG及VEGFmRNA的表达,免疫组化检测PTTG、VEGF蛋白的表达。结果:PTTG蛋白表达在～级的阳性率分别为37.5%,50.0%,76.9%,100.0%,其表达随着肿瘤级别的增高而增加(χ2=9.602,P<0.05);VEGF蛋白～级的阳性率分别为25.0%,40.0%,76.9%,88.9%,二者的表达均随着肿瘤级别的增高而增加(P<0.05)。PTTGmRNA的表达在～级分别为0.907±0.065、1.109±0.083、1.312±0.089、1.499±0.215,组间有极显著性差异(P<0.01);VEGFmRNA的表达在～级分别为1.024±0.118、1.139±0.057、1.415±0.094、1.693±0.128,组间有显著性差异(P<0.01)。PTTG、VEGF蛋白表达呈显著正相关(P<0.01)。结论:PTTG、VEGF的异常表达在胶质瘤中起协同作用,二者共同促进胶质瘤的发生发展。     

PTTG mRNA及其蛋白在食管鳞癌中的表达及临床意义

目的:探讨食管鳞癌组织中PTTG mRNA与蛋白的表达及其二者间的相互关系。研究它们的表达与肿瘤临床资料之间的联系。方法:采用原位杂交技术检测30例食管鳞癌及相应的癌旁组织中PTTGmRNA的表达,同时采用免疫组织化学SP法检测相应标本中PTTG蛋白的表达。结果:在食管鳞癌和相应的癌旁组织中PTTG mRNA表达的阳性率分别为66.7%(20/30),10%(3/30)。PTTG蛋白表达的阳性率分别为76.7%(23/30),16%(5/30)。食管鳞癌组远高于癌旁组,有显著性差异(P<0.01)。PTTG mRNA与蛋白在食管鳞癌组织的阳性表达具有一致性(P>0.05),其阳性率高低与性别、年龄、肿瘤大小无关,而与组织学分级、淋巴结转移、TNM分期有关。结论:PTTG基因的异常表达可能对食管鳞癌的发生和发展起重要作用,它可能为食管鳞癌的早期诊断和基因治疗提供新的靶点。     

PTTG表达与垂体腺瘤侵袭性关系

目的 探讨垂体瘤转化基因(Pituitary tumor transforming gene，PTTG)表达与腺瘤侵袭性的关系及其临床意义。方法 回顾近年我科经手术切除的44例垂体腺瘤标本及6例正常垂体组织，均经10％的福尔马林固定、石蜡包埋。联合运用Knosp影像学标准及任祖渊标准，参考术中情况，将肿瘤标本分为侵袭组与非侵袭组；运用免疫组化的方法检测这50例标本中PTTG蛋白表达情况；分析PTTG表达与垂体腺瘤侵袭性的内在关系。结果 免疫组化实验结果显示PTTG蛋白在侵袭性垂体腺瘤组中显著高表达，在非侵袭性腺瘤组中有一定表达，在正常垂体组织中未见表达。结论 原癌基因PTTG表达水平和垂体腺瘤侵袭性密切相关，可作为腺瘤侵袭性的标志物。     

siRNA介导垂体瘤转化基因沉默抑制人泌乳素型垂体瘤凋亡的研究

目的探讨垂体瘤转化基因(PTTG)对人泌乳素型垂体瘤(HPA)细胞凋亡的影响。方法设计并合成针对PTTG的特异性siRNA序列,通过siPORTTM NeoFXTM转入原代培养HPA细胞,Western blot法检测siRNA作用后PTTG蛋白表达,DNA ladder和annexin V/PI染色法检测PTTG沉默对细胞凋亡的影响。结果siRNA转染组细胞内PTTG蛋白表达减弱;在CDDP诱导后,对照组和siRNA组均出现细胞凋亡,siRNA组DNA ladder形成不明显,Annexin V染色凋亡细胞数目减少,对照组细胞凋亡率为18.6%,而siRNA组仅为8.7%。结论垂体瘤转化基因对人泌乳素型垂体瘤细胞具有促进凋亡作用。     

PTTG基因表达在原发性肝细胞癌发生中的作用及其机制的初步研究

目的研究PTTG基因表达在原发性肝细胞癌(HCC)发生发展中的作用.方法应用原位杂交(DNA-RNA)技术与免疫组化SP法分别检测61例原发性肝细胞癌及癌旁肝组织中PTTG mRNA和PTTG蛋白及c-myc mRNA和c-myc蛋白的表达.结果在原发性肝细胞癌(HCC)中,PTTG mRNA和PTTG蛋白阳性细胞呈弥漫性、小巢状或散在分布,在胞浆内呈全浆型、膜下型表达.PTTG mRNA和PTTG蛋白在HCC中表达率分别为72.1%(44/61)和78.7%(48/61),在癌旁肝组织中分别为93.4%(57/61)和91.8%(56/61),在HCC中表达明显低于癌旁组织(P＜0.005,P＜0.05).相关性检验显示癌及癌旁PTTG基因表达与c-myc基因表达呈正相关(P＜0.005).结论PTTG基因过度表达参与了肝细胞癌发生发展,过度表达的PTTG可能通过激活癌基因c-myc来参与肝细胞恶性转化和肝细胞癌的发生发展过程.     

PTTG反义cDNA对胆囊癌细胞5-FU敏感性的影响

目的:探讨垂体肿瘤转化基因(PTTG)反义cDNA对胆囊癌GBC-SD细胞系5-FU化疗敏感性的影响.方法:脂质体法将PTTG反义cDNA转染胆囊癌细胞GBS-SD;G418筛选阳性克隆;Western blot检测PTTG蛋白;MTT检测细胞增殖情况及不同浓度5-FU作用下各组细胞相对存活率差别,计算IC50值;流式细胞术检测各组细胞凋亡率.结果:转染组细胞较未转染组PTTG表达明显减少;转染组细胞增殖与凋亡明显增强;转染组IC50值(0.605 mmol/L)明显低于未转染组(1.17 mmol/L)和空载体转染组(0.914 mmol/L);转染组细胞的5-FU凋亡诱导作用(26.24%)明显高于未转染组(2.67%)和空载体转染组(7.62%).结论:转染PTTG反义cDNA可增强胆囊癌细胞对5-FU化疗敏感性,二者联合应用可能是一种治疗胆囊癌的有效方法.     

siRNA沉默PTTG表达对子宫内膜癌细胞生长及放疗敏感性的影响

目的:观察垂体瘤转化基因(pituitary tumor transforming gene,PTTG)小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)干扰对子宫内膜癌细胞HEC-1A的生长及放疗敏感性的影响?方法:构建PTTG干扰载体(pSilencer3.0-Hl-PTTG-siRNA),利用脂质体将其转染至HEC-1A细胞,Western blot检测PTTG蛋白表达水平,筛选干扰效果最强的序列?另用2Gy X线作用于转染PTTGsiRNA的HEC-1A细胞,同时设不予任何处理的对照组?只转染PTTGsiRNA的处理组?只用X线处理的放疗组?MTT检测细胞生长状况,流式细胞仪检测细胞凋亡?结果:成功构建了靶向抑制PTTG基因的siRNA干扰载体?MTT实验结果显示,与对照组相比,放疗组?PTTGsiRNA转染组?PTTGsiRNA联合放疗组细胞增殖抑制率分别为(31.39 ± 5.62)%?(38.37 ± 5.48)%?(54.65 ± 6.27)%?流式细胞仪检测显示细胞凋亡率在对照组? 放疗组?PTTGsiRNA转染组?PTTGsiRNA转染联合放疗组中分别为(6.53 ± 0.80)%?(32.72 ± 4.56)%?(38.96 ± 4.37)%?(64.76 ± 6.53)%?PTTGsiRNA转染组或放疗组与对照组比较,细胞凋亡率及细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(P < 0.01),而PTTGsiRNA转染联合放疗组的凋亡率及细胞增殖抑制率较PTTGsiRNA转染组或放疗组明显增高,组间比较差异均有统计学意义(P < 0.01)?结论:成功构建了靶向抑制PTTG基因的siRNA干扰载体,PTTG siRNA可抑制子宫内膜癌细胞HEC-1A的增殖,诱导其凋亡,增强其对放疗的敏感性?