HLA-B40交叉反应组血清学与高分辨度DNA分型的比较研究

目的 比较研究中国汉族人群ＨＬＡＢ４０ 交叉反应组血清学分型与高分辨度ＤＮＡ 分型结果。方法研究样本１９９ 份,包括血清学分型Ｂ４０ 组阳性样本１７７ 份、可疑阳性１２ 份和阴性对照１０ 份。同时对血清学分型和高分辨度顺序特异引物聚合酶链反应（ＰＣＲＳＳＰ） ＤＮＡ 分型进行比较。结果 ＤＮＡ分型成功率９９ ．５ ％ ,总耗时５ 小时,特异性和敏感性好,可准确分辨出Ｂ４０ 组１０ 个等位基因。血清学分型成功率９９ ．４ ％ ,总耗时２ 小时,总误差２０ 个,误差率１１ ．２ ％ 。检出中国汉族人群Ｂ４０ 组各等位基因所占比例：Ｂ６０ 为６７ ．４ ％ 、Ｂ６１ 为２０ ．８ ％ 、Ｂ４８０１ 为９ ．６ ％ 、Ｂ４００５ 为２ ．２ ％ 。结论 高分辨度ＰＣＲＳＳＰ 方法用于ＨＬＡＢ４０ 组分型比血清学分型更加精确,适合于临床应用。     

微量聚合酶链反应对人类白细胞抗原的基因分型

目的 探讨应用于移植的人类白细胞抗原（ＨＬＡ）二类基因（ＤＲＢ／ＤＱＢ）快速分型新技术。方法 采用快速ＤＮＡ抽提技术,建立了ＨＬＡ＿ＤＲＢ／ＤＱＢ微量序列特异性引物聚合酶链反应基因分型方法,对１４２份供受者ＤＮＡ进行ＨＬＡ－ＤＲＢ／ＤＱＢ基因分型,并与单克隆抗体一叔法ＨＬＡ血清学分型技术进行对比研究。结果 应用微量ＰＣＲ－ＳＳＰ方法共检出１３种ＤＲＢ１等位基因和 ＤＱＢ１等位基因,与血清学分型结果     

反向PCR—SSOP技术行HLA—AB分型与临床应用

建立快速,准确的DNA分型技术并用于临床移植前HLA-AB配型,以弥补血清学分型技术的局限性。采用反向聚合酶链反应-序列特异寡核苷酸探针杂交技术（反向PCR-SSOP）进行DNA分型,可检出HLA-A（*0101-8001）和B（*07021-8201）等等位基因。结果表明,发现利用反向PCR-SSOP技术对所有样本分型均获成功,无假阳性和假阴性结果出现;美国洛杉矶加州大学（UCLA）质控细胞DNA分型结果与UCLA公布的测序结果一致。血清学与基因分型相比。血甭学结果HLA-A错检率6.4%和HLA-B错检率为7.4%。2例白血病病人分别有一个HLA抗原血清学方法不能检出。结论提示,反向PCR-SSOP技术用于HLA分型分辨率高,简单快速。结果直观、准确。分型结果较血清学方法更加精确,可适用于临床应用。     

A new PCR-SSP method for HLA DR-DQ risk assessment for celiac disease

BackgroundSusceptibility to celiac disease is essentially restricted to carriers of specific HLA DQA1 and DQB1 alleles. We have developed a semi-automated sequence specific primer (SSP) PCR method for clinical HLA typing and compared the test results with those from a commercial method.MethodsPrimers for each DQA1 and DQB1 allele group were included in our PCR-SSP reaction to allow differentiation of homozygous from heterozygous carriers of risk alleles. Primers detecting the tightly linked DRB1*04, *03, *07 and *09 alleles were included to resolve potentially ambiguous results. Fluorescently labeled PCR products of 119 clinical samples were analyzed by capillary electrophoresis, and results were compared to those previously obtained from the DELFIA® Type 1 Diabetes Genetic Predisposition assay.ResultsThe risk assessment derived from the two methods was 100% concordant. One previously unreported haplotype was detected and haplotype assignments in two of the 119 samples were improved from previous reports.ConclusionsThe use of three PCR reactions and a single electrophoretic step for DQA1, DQB1 and DRB1 typing provides distinction of celiac disease associated alleles and their homo- or heterozygous status. This multiplex analysis reduces reagent costs, personnel and instrument time, while enabling improved allelic assignment through HLA-DR-DQ haplotype association.     

A rapid and sensitive method to detect specific human lymphocyte antigen (HLA) class II alleles associated with celiac disease.

BACKGROUND: Celiac disease (CD) is a complex disorder triggered by gluten affecting genetically predisposed individuals. More than 90% of patients carry human lymphocyte antigen (HLA)-DQ2 (DQA1*05, DQB1*02) and/or HLA-DQ8 (DQA1*03, DQB1*0302). We propose the use of the DQ-CD Typing kit that allows identification of the HLA class II alleles (DQA1*0201,*03,*05, DQB1*02,*0302, DRB1*03,*04,*07) selected to be informative in the CD risk evaluation and of a second kit, namely DQ-CD Zygosis, for DQB1*02 homozygosity determination. METHODS: The study was performed on a cohort of 100 individuals previously HLA typed with commercial kits. Fresh blood or previously extracted DNA was amplified in a unique PCR program using allele-specific primers and visualized on agarose gel. RESULTS: DNA amplification yielded strong and clear products without non specific signals or ghost bands. All the samples showed the expected alleles in accordance with the previous HLA typing. CONCLUSIONS: The DQ-CD Typing and Zygosis kits are fast, simple, economical and accurate tools that can be used to determinate the HLA-DQ2/DQ8 status in laboratory practice addressed for the diagnosis of CD. Molecular HLA testing is considered a valid support in the confirmation/exclusion of CD, especially in high-risk groups, such as CD relatives, or when serological and histological data are ambiguous.     

应用PCR—SSP进行HLA—AB基因分型及与血清学方法的比较

目的 建立HLAⅠ类基因分型技术并应用于骨髓七配型。方法 采用序列特异性聚合酶链反应（PCR－SSP）进行HLA－AB基因分型，并与HLAⅠ类血清学分型（微量淋巴细胞毒试验）进行比较。结果 运用PCR－SSP技术共对22例需骨髓移植的病人和48例供者进行基因分型，2例病人确认了HLA 新缘骨髓供者，其中1 已成功进行了骨髓移植；基因分型和血清分型比较，43例结果完全一致（61.4%），血清分型错误率高达38.6%(27/70)。结论 PCR－SSP分型技术具有准确性高，简便快速等优点，将取代传统的血清学方法。     

四川骨髓库汉族人群HLA-A~* 02等位基因分布

目的研究四川骨髓库汉族人群HLA-A* 02等位基因分布,分析HLA-A和HLA-B、-DRB1的单体型。方法在中华骨髓库四川分库8934名四川汉族造血干细胞志愿者4508份HLA-A* 02阳性样本中随机筛选110份,采用PCR-SBT分型技术对HLA-A* 02等位基因进行测序分析,用χ2检验比较四川骨髓库汉族与亚洲5个不同国家和地区以及美国亚裔人群A* 02等位基因分布的差异,并采用最大似然法计算HLA-A、-B和-DRB1的3位点单体型频率。结果共检出5种A* 02等位基因,A* 0207(49.59%)是优势等位基因,其余依次是A*02 0101(25.62%),A*02 0301(19.01%),A*02 0601(4.96%),A*02 05(0.83%)。同其它6个亚裔人群的相比,四川骨髓库汉族人群的HLA-A* 02等位基因分布与台湾人群的比较无统计学意义(P>0.05),而与香港,北京,美国亚太裔,日本,韩国等人群的比较均有统计学意义(P<0.01)。HLA-A* 0207-B*46-DRB1*09是四川骨髓库汉族人群最常见的单体型。结论四川汉族人群HLA-A* 02等位基因的分布符合南方汉族人群的分布特点,但更为集中。     

吉林汉族人群HLA-A高分辨基因的多态性分析

背景:HLA与免疫遗传学、免疫生物学密切相关,其分型对于器官移植和非感染性疾病的易感性有重要意义。目的:调查吉林汉族人群HLA-A位点基因多态性,分析不同人群HLA-A等位基因频率分布特征。方法:采用基因测序技术检测2196名吉林汉族人HLA-A位点第2、3、4外显子序列,软件分析得到分型结果,计算各等位基因频率并与不同人群进行比较。结果与结论:共检测到42种HLA-A等位基因,其中3种等位基因频率≥5%,分别是HLA-A*02:01(8.5%),HLA-A*11:01(8.2%)和HLA-A*24:02(7.3%),这3种等位基因频率合计为24.0%。同时,检测到39种等位基因频率<0.5%的HLA-A等位基因,这39种等位基因频率合计为76.0%。吉林汉族人群HLA-A等位基因频率分布与美国亚裔人群、中国香港华人、日本人相比存在一定差异。提示吉林汉族人群HLA-A基因的分布有地域特征。     

山东省汉族人群HLA-A、B、DRB1位点基因多态性研究

目的分析山东省汉族人群HLA-A、B、DRB1位点基因多态性,获得更完整、准确的群体HLA分子遗传学数据。方法应用PCR-SSP及SSOP技术对7418名山东省汉族造血干细胞志愿捐献者进行HLA-A、B、DRB1位点基因分型。结果共检出低分辨HLA-A基因18种,B基因44种,DRB1基因13种,其中包括一些以前国内未检出的低频率基因。山东汉族人群最常见的HLA基因为A*02、B*13和DRB1*15,其相应基因频率分别为0.2883、0.1431和0.1762;山东汉族人群最常见的A-B单倍型为A*30-B*13,频率为0.0896,最常见的A-B-DRB1单倍型是A*30-B*13-DRB1*07,频率为0.0743。结论山东省汉族人群HLA-A、B、DRB1基因具有显著多态性,大样本和DNA分型有助于低频率基因的检出,适当扩大造血干细胞库志愿捐献者登记人数及各地重新进行HLA多态性分析实有必要。     

中国北方汉族造血干细胞捐献者人类白细胞抗原-A、B、DRB1基因和单倍型高分辨水平的多态性研究

目的 从高分辨率水平研究中国北方汉族人群人类白细胞抗原(Human Leukocyte Antigens,HLA)-A、B、DRB1基因和单倍型的多态性.方法 采用聚合酶链反应-测序分型方法(Polymerase Chain Reaction-Sequence Based Typing,PCR-SBT)对631名随机北方汉族个体的HLA-A、B、DRB1基冈进行序列分析,进而采用最大似然性方法计算等位基因和单倍型的分布频率.结果 30个HLA-A等位基因中,频率高于0.05的5种常见等位基因A*1101、A*2402、A*0207、A*0201和A*3303的频率总和为69.26%;64个HLA-B等位基因中,频率高于0.05的4种常见等位基因B*4001、B*4601、B*5801和B*1502的频率总和为38.11%,41个DRB1等位基因中,频率高于0.05的7种常见等位基因DRB1*0901、DRB1*1501、DRB1*1202、DRB1*0701、DRB1*0803、DRB1*1101和DRB1*0405的频率总和为59.98%.499条A-B、659条BDRB1和2 426条A-B-DRB1单倍型中,分别有38、39和31条单倍型频率高于0.005,其频率总和分别为59.82%、53.69%和32.38%,A*0207-B*4601、B*4601-DRB1*0901和A*0207-B*4601-DRB1*0901分别为其最主要单倍型.结论 中国北方汉族人群高分辨水平的HLA-A、B、DRB1等位基因和单倍型的多态性数据可作为人类学、法医学、移植配型和疾病相关性研究和应用的参考数据.     

在中国汉族人中发现新不表达等位基因HLA-A~*0253N

目的　鉴定在中国浙江一个汉族家庭中发现的新的HLA新不表达等位基因。方法　对 1个无γ球蛋白血症患儿及其母作HLA血清学分型与基因分型 ,针对二者结果有差异 (血清学不能检出其中的 1个抗原 ,而DNA基因分型结果为HLA 0 2XX) ,进行基因克隆和基因组DNA全长测序 ,分析该HLA 0 2XX和HLA A 0 2 0 11基因序列差异。结果　该基因与HLA A 0 2 0 11的差异 ,仅在外显子 2区域的 32 4C >G的单个碱基的替换 ,导致了密码子 10 8由酪氨酸变为终止密码子。家系调查表明 ,在被检测的 2 2个家庭成员中 ,患儿及其母亲、外祖父、姐姐和舅舅携带有该基因。而在 718名具有A 0 2基因的随机造血干细胞供者中 ,未发现带有该基因的个体。结论　该基因是 1个HLA A不表达等位基因 ,世界卫生组织 (WHO)基因命名委员会于 2 0 0 1年 9月将其正式命名为HLA A 0 2 5 3N ,其单倍型为A 0 2 5 3N ,B 370 1,DRB1 10 0 1。     

脐血HLA-AB分型方法探讨

目的　探讨脐血HLA AB分型方法。方法　分别采用血清学方法和PCR SSP基因定型方法对 1 0 2份脐血HLA A、B位点进行检测。结果　两方法对比分析结果显示血清学近 1 8.6 %不能得出满意结果 ,HLA A、B位点错定率分别为 6 .1 %和 1 0 .8% ,总错误率 1 6 .9%。结论　脐血HLA表达水平低 ,单个核细胞反应弱及部分交叉反应是造成血清学不能确定或错定的主要原因     

HLA新等位基因HLA-A~*2451的认定

目的发现和认定1个HLA新等位基因。方法应用PCR-SSO基因分型技术筛选可能的HLA新等位基因,PCR产物测序和基因克隆DNA测序,通过软件分析基因序列及与最同源HLA等位基因序列的差异。结果检出1样本,其HLA-A位点显示出多种不一致的结果,其中包括与已知所有HLA-A等位基因谱型不一致的新谱型,其HLA-A位点第3外显子序列与所有已知HLA-A等位基因序列不一致。软件分析表明该基因序列与同源性最高等位基因A*2415的差异只是在外显子3区域中的363位碱基发生了G→A1个碱基替代,并导致相应的121密码子由ATG(M)→ATA(I)。结论该等位基因为HLA-A位点的1个新等位基因,已被WHOHLA因子命名委员会正式命名为HLA-A*2451。     

PCR-SSO流式荧光微珠法HLA-A*02高分辨分型检测模棱两可结果的统计分析

背景:由于HLA的复杂多态性,实际分型过程中难免会出现一些结果判读模棱两可现象.目的:统计分析基于PCR-SSO 流式荧光微珠HLA-A*02高分辨分型方法的模棱两可组合结果种类、比例,探讨解决模棱两可解决方法,提高高分辨分型比例.方法:对河南骨髓库捐献者 1 100人份HLA分型结果进行统计分析,计数法进行分类统计分析软件给出的包含HLA-A*02:01\02:09模棱两可组合代码,计算百分比;与确认为A*02:09的基因多态性分布进行比对,找出与A*02:09关联性较强的等位基因,用补充实验进行复核、确认,建立A*02:01\02:09模棱两可组合的判读方法.结果与结论:1 039例有效数据中包含A*02:01\02:09模棱两可组合279例(279/1 039,26.853%),代码种类19种,检出比例较高的有DMDC,DYVK,GMDD,GMDE;34例确认为A*0209的基因多态性统计显示A*0209的出现与A*11:01 (0.147 1)B*07:02(0.264 7)、DRB1*01:01(0.264 7 )、DRB1*03:01(0.117 6)有较强关联,选出高风险标本38例,经检测外显子1~7,并用SBT复核确认有1例结果为A*02:09(代码组合为GMDC),其余241例未检出A*02:09.提示 A*02:09的出现与B*07:02、DRB1*01:01、DRB1*03:01有较强关联,重点对这些关联标本进行外显子1~7检测,可有效地检出A*02:09.通过统计分析制定合理的判定规则和必要的复核实验可有效地简化操作程序,节省时间,降低费用,提高高分辨比例.     

WHO HLA命名委员会命名的新等位基因HLA-A*24:327序列分析及确认

目的 发现一个人类白细胞抗原(HLA)-A新等位基因并对其核苷酸序列进行分析及确认。方法 采用序列特异性寡核苷酸探针技术(SSO)对2015年中国造血干细胞捐献者资料库(CMDP)陕西分库入库数据进行HLA常规检测,针对罕见结果进一步选择多聚酶链反应-测序(PCR-SBT)和组序列特异性引物(GSSP)进行确证试验,明确突变位点。结果 SSO分型结果显示为罕见等位基因,经PCR-SBT复核无完全匹配结果,提示疑似新等位基因,经GSSP确证发现该基因与同源基因HLA-B*24:02:01:01相比,在第3外显子544位置发生碱基变异由G>A,该突变造成氨基酸序列158位由丙氨酸(GCC)变成苏氨酸(ACC)。结论 确认了一个新的HLA-A等位基因,2015年12月31日被世界卫生组织HLA命名委员会正式命名为HLA-A*24:327。     

鼻咽癌高发区非癌人群HLA-A~* 02分子多态性及分布

目的了解中国南方鼻咽癌高发区非癌人群HLA-A*02等位基因多态性及其分布特点。方法采用PCR-SSOP方法对来源于广西鼻咽癌高发区的342例非癌对照标本作HLA-A基因分型;等位基因频率统计采用直接计数法,并应用卡方检验将其与已报道的中国南方及北方汉族群体HLA-A*02等位基因频率作比较。结果所检测的广西鼻咽癌高发区非癌人群的HLA-A*02等位基因分布频率为33.77%(231/684),共检测出5种HLA-A*02等位基因亚型,检出比例依次为:A*02∶03占48.92%(113/231)、A*02∶07占33.77%(78/231)、A*02∶01占9.52%(22/231)、A*02∶06占7.36%(17/231)和A*02∶11占0.05%(1/231);对比分析显示A*02∶01、A*02∶03、A*02∶06及A*02∶07在不同地区汉族人群中呈现出明显的分布差异(P<0.05)。结论中国南方鼻咽癌高发区非癌人群HLA-A*02等位基因中以A*02∶03最为常见、A*02∶07次之,其HLA-A*02等位基因亚型与中国其地域的汉族人群相比存在明显的差异分布特征,提示该等位基因亚型是人群分析中较好的多态性标志。     

河南省骨髓库汉族捐献者HLA-A、B、DR高分辨基因多态性调查分析

背景：2009年开始,中华骨髓库加大HLA高分检测的力度,可缩短配型检索周期,提高配型成功率。目的：统计分析河南省骨髓捐献者HLA-A、B、DRB1高分辨基因多态性。方法：河南省汉族造血干细胞志愿捐献者血样3874人份,志愿捐献静脉血,EDTA抗凝。采用SSOHD荧光微珠流式高分辨HLA-A、B、DRB1基因分型检测方法,对3874份骨髓捐献志愿者血样进行高分辨分型检测,用PCR-SSP高分辨检测、SBT检测解决存在的模棱两可问题。等位基因计数法计算等位基因的基因频率。结果与结论：共检出A34个,B84个,DRB150个,A位点基因频率处于前5位的有A＊0201（0.1609）、A＊1101（0.1627）、A＊2402（0.1602）、A＊3001（0.0808）、A＊3303（0.0789）;B位点处于前5位的是B＊1302（0.0777）、B＊4001（0.0722）、B＊5101（0.0628）、B＊4601（0.0612）和B＊0702（0.0507）;DRB1位点处于前5位的是DRB1＊1501（0.1469）、DRB1＊0901（0.1318）、DRB1＊0701（0.1211）、DRB1＊1202（0.0612）、DRB1＊0405（0.0582）。     

应用反向斑点杂交技术进行脐血HLA-DRB基因分型方法的建立

HLA分子的多态性对于移植有十分重要的意义。常用的HLA基因分型方法中SSOP基因分型方法有较高分辨率，但操作过程复杂，仅适于大样本的HLA分型。PCR－SSP基因分型方法分辨率较低，但操作过程简单，适于临床要求。有必要建立一种简便、快速、价廉、高分辨率的基因分型方法。本研究取63份已知HLA－DRB型的脐血标本，经盐酸胍方法提取DNA用于反向斑点杂交（RDB）基因分型，同时采用SSOP和PCR－SSP方法进行比较。结果表明，所有样本用RDB方法基因分型均获得成功，可准确地分辨60个HLA－DRB等位基因，且结果与用SSOP和PCR－SSP方法的结果完全一致。结论提示，RDB方法可准确地分辨HLA－DRB等位基因，分辨率高，操作简单，适用于各种情况的HLA分型。     

安徽省汉族人群HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1等位基因分布及单体型多态性研究

目的 研究安徽省汉族人群HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1等位基因和单体型频率分布特征.方法 PCR-测序分型技术(SBT)对3 169例随机无血缘关系的干细胞捐献者进行HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1基因分型,利用计数法、最大期望算法和PyPop软件计算等位基因频率、单体型频率和连锁不平衡参...     

168名广东β-重症地中海贫血患者的HLA高分辨基因多态性分析

目的探讨广东地区β-重症地中海贫血患者HLA高分辨多态性及其遗传易感性。方法采用PCR-SSP技术对168名广东籍β-重症地中海贫血患者(病例组)及138名正常无血缘关系广东供者(对照组)作HLA-A、-B和-DRB1基因高分辨分型,并对这2组人群的HLA-A、-B、-DRB1等位基因频率、A-B、B-DRB1和A-B-DRB1单体型频率作统计学分析。结果病例组HLA-A*02∶03、A*11∶02/11∶53、DRB1*16∶02等位基因频率分别为9.27%、4.21%、8.23%,高于对照组的3.70%、1.11%、4.44%(P0.05)。病例组单体型B*38∶02-DRB1*16∶02频率与对照组相比具有统计学差异(P0.05)。结论广东地区β-重症地中海贫血患者HLA高分辨基因多态性广泛,单体型分布分散,其与正常人之间HLA基因多态性和单体型的差异有可能是疾病易感因素。