PUMA、COX-2、Caspase-3在结直肠癌中的表达及临床意义

目的进一步探讨结直肠癌的发生机制。方法选择手术切除的结直肠癌标本60份（结直肠癌组）、腺瘤组织20份（腺瘤组）,另取癌组织切缘正常黏膜44份（正常组）,采用免疫组化法检测其p53上调凋亡调控因子（PUMA）、环氧合酶-2（COX-2）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）表达情况,采用计数资料列联表的相关分析法分析三指标间及与结直肠癌临床病理特征的关系。结果结直肠癌组PUMA、COX-2、Caspase-3阳性表达率分别为31.7%7、8.3%6、6.7%,腺瘤组分别为30.0%、75.0%、70%,正常组分别为63.6%、84.1%、95.5%,结直肠癌和腺瘤组PUMA、Caspase-3阳性表达率明显低于正常组,P均〈0.01;COX-2阳性表达率亦低于正常组,P均〉0.05;结直肠癌组和腺瘤组三指标间阳性率比较均无统计学差异。PUMA的表达与结直肠癌肿瘤直径相关,与其他临床病理特征无关;Caspase-3和COX-2的表达均与结直肠癌中临床病理参数无关。PUMA与Caspase-3表达呈正相关。结论 PUMA和Caspase-3的表达下调可能在结直肠癌发生的早期阶段起作用。     

PUMA蛋白在胰腺癌中的表达及临床意义

目的:初步探讨PUMA (P53 up-regulated modulator of apoptosis)蛋白在胰腺癌发生发展中的作用及其可能机制,并研究PUMA蛋白表达与临床病理学指标的关系.方法:应用免疫组化Envision方法检测60例导管胰腺癌组织石蜡标本中PuMA,Bcl-2和P53蛋白表达以及19例正常胰腺组织石蜡标本中PUMA蛋白表达;TUNEL检测细胞凋亡(AI);分析PUMA表达与临床病理学指标的关系以及其与AI和P53、Bcl.2表达的相关性.结果:PUMA在胰腺癌组织中的阳性率低于正常胰腺组织,有统计学差异(30% VS 57.9%,P＜0.05);PUMA表达与肿瘤大小,淋巴结转移和远处转移有关(P＜0.05),而与肿瘤分化程度和TNM分期无关:AI在PUMAFa性和阴性表达的肿瘤组织中,有统计学差异(20.63%±6.27%vs1 7.44%±5.86%,P＜0.05);P53和Bcl-2在胰腺癌中的表达率分别为46.7%(28/60)和41.7%(25/60);PUMA与P53和Bcl-2表达分别有显著的相关性P=0.013,P=0.046).结论:胰腺癌的生长、淋巴结和远处转移与PUMA蛋白表达缺失有关,PUMA可能是胰腺癌基因治疗的新粑点.     

浸润性乳腺癌组织中14-3-3σ、p73α蛋白表达及临床意义

目的探讨表皮细胞特异性标志物14-3-3σ、p73α蛋白在浸润性乳腺癌发生发展中的作用。方法选择我院手术切除的浸润性乳腺癌组织标本94份（浸润癌组）,导管原位癌15份（原位癌组）,上皮不典型增生15份（不典型增生组）,导管内乳头状瘤15份（乳头状瘤组）,乳腺增生症20份（增生症组）,乳腺癌旁5 cm组织10份（癌旁组）,采用免疫组化PV-9000两步法检测各组14-3-3σ、p73α蛋白表达情况,并分析两者间及与浸润性乳腺癌临床病理特征的相关性。结果浸润癌组14-3-3σ蛋白阳性率明显低于其余各组,p73α蛋白阳性率明显高于其余各组,P均〈0.05。14-3-3σ蛋白阳性表达与乳腺癌腋窝淋巴结转移、HER-2受体、组织学分级、TNM分期相关,p73α蛋白与腋窝淋巴结转移、ER受体、PR受体、TNM分期相关。14-3-3σ与p73α蛋白表达呈负相关。结论 14-3-3σ和p73α蛋白与浸润性乳腺癌的发生发展相关,两者联合检测可为乳腺癌早期诊断和治疗提供参考。     

14-3-3-zeta在Ⅲ/Ⅳ期套细胞淋巴瘤患者中的表达及其临床意义

目的探讨14-3-3zeta蛋白表达与套细胞淋巴瘤(MCL)患者疗效和预后的关系。方法收集2007年3月至2012年3月期间于第四军医大学病理科确诊、血液科住院治疗的12例MCL患者的临床资料,采用免疫组织化学染色方法检测14-3-3zeta蛋白在12例MCL患者中的表达情况,分析其与MCL预后的关系。结果与淋巴结反应性增生相比,12例MCL患者中8例细胞浆中表达14-3--3zeta阳性,阳性表达率为66.7%。14-3-3zeta阳性表达患者总反应率(ORR)、2年总生存(OS)率、2年无进展生存(PFS)率(62.5%,50.0%,37.5%)均低于14-3-3zeta阴性表达患者(75.0%,100.0%,75.0%),有待扩大样本量深入研究。结论 MCL中存在14-3.-3zeta蛋白的异常高表达,其表达强弱可能与预后相关。     

Hp阳性胃癌组织miR-1290、miR-490-3p表达变化及其临床意义

目的 探讨幽门螺旋杆菌(Hp)阳性胃癌组织微小RNA-1290(miR-1290)、微小RNA-490-3p(miR-490-3p)表达变化及其临床意义.方法 选择胃癌患者92例,其中Hp阳性61例、Hp阴性31例.采用RT-qPCR法检测胃癌组织及其配对的癌旁正常组织miR-1290、miR-490-3p表达.分析胃...     

结直肠癌组织miR-331-3p、MLLT10 mRNA表达变化及其临床意义

目的 观察结直肠癌（CRC）组织微小RNA-331-3p(miR-331-3p)、混合谱系白血病转位辅因子10(MLLT10)mRNA表达变化,并探讨其表达与临床病理特征和上皮间质转化的关系。方法 选择CRC患者156例,取术中获取的CRC组织及其配对的癌旁正常组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-331-3p、MLLT10mRNA表达以及上皮间质转化相关基因E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、锌指转录因子Snail mRNA表达。比较CRC组织与癌旁正常组织miR-331-3p及MLLT10、E-cadherin、N-cadherin、Snail mRNA表达;分析CRC组织miR-331-3p、MLLT10 mRNA表达与临床病理特征的关系,二者表达的关系及其与E-cadherin、N-cadherin、Snail mRNA表达的关系。结果 CRC组织MLLT10、N-cadherin、Snail mRNA相对表达量均高于癌旁正常组织,miR-331-3p、E-cadherin mRNA相对表达量均低于癌旁正常组织（P均<0.0...     

结肠癌患者血清miR-370-3p、ANO1表达变化及其临床意义

目的 探讨血清微小RNA-370-3p(miR-370-3p)、茴香胺1(ANO1)表达与结肠癌病理特征及术后复发的关系。方法 选取94例接受腹腔镜手术治疗的结肠癌患者为结肠癌组、50例结肠息肉患者为良性病变组、50名健康体检者为对照组。用实时荧光定量PCR法检测各组血清miR-370-3p、ANO1表达。术后随访3年,复发31例（复发组）、未复发63例（未复发组）。在线网站TargetScan预测miR-370-3p与ANO1的靶向关系,用Pearson相关法分析结肠癌患者血清miR-370-3p与ANO1 mRNA表达的相关性;多因素Logistic回归分析结肠癌患者术后复发的影响因素;用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清miR-370-3p、ANO1 mRNA对结肠癌患者术后复发的预测价值。结果结肠癌组血清miR-370-3p表达低于良性病变组、对照组（P均<0.05）,ANO1 mRNA表达高于良性病变组、对照组（P均<0.05）,良性病变组与对照组血清miR-370-3p、ANO1 mRNA表达比较差异均无统计学意义（P均>0.05）。在线网站Target...     

胰腺癌组织中miR-338-3p、B3GNT3表达变化及意义

目的 探讨胰腺癌组织中miR-338-3p、β-1,3-N-乙酰氨基葡萄糖氨基转移酶3(B3GNT3)的表达变化及意义.方法 选择行腹腔镜切除手术的胰腺癌患者92例,术中取癌组织及其癌旁组织(距肿瘤组织边缘≥5 cm),采用qRT-PCR检测组织中miR-338-3p、B3GNT3 mRNA表达,用Pearson相关分...     

PUMA基因在胃癌组织及细胞中的表达

目的:研究p53正向细胞凋亡调控因子(PUMA)基因的四种剪接体(PUMA-α,-β,-γ及-δ)在胃癌组织及细胞中的表达特点.方法:应用生物信息学分析PUMA基因四种剪接体的结构特点;同时利用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃癌组织、癌旁组织及不同胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901细胞中四种剪接体的mRNA表达水平.结果:PUMA-α和-β在癌旁组织中表达阳性,但在癌组织中表达难以检测,差异显著(t=9.492,15.875,均P<0.05);PUMA-γ和-δ在癌旁及癌组织中均可见表达,且在癌旁组织中的表达量显著高于癌组织(t=4.823,4.056,P<0.05).PUMA-α,-γ及-δ在胃癌不同分化程度的细胞系BGC-823(低分化)及SGC-7901(中分化)中均有表达,但两细胞系间无统计学差异.而PUMA-β在BGC-823中的表达明显高于SGC-7901细胞(t=8.710,P<0.05).结论:PUMA四种剪接体在胃癌组织中的表达下调,与癌的发生呈负相关;PUMA-β的表达还可能与细胞的分化程度有关.     

胃癌组织lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达变化及其临床意义

目的 观察胃癌组织长链非编码RNA(lncRNA)碱性亮氨酸拉链家族转录因子V-Maf鸟类肌筋膜纤维肉瘤癌基因同源物G-反义核糖核酸1(MAFG-AS1)、微小RNA-143-3p(miR-143-3p)表达变化,并探讨二者表达与患者临床病理特征和预后的关系.方法 选择胃癌患者105例,取手术切除的胃癌组织及其配对的癌...     

直肠癌患者血清miR-144-5p、miR-876-5p表达变化及其与临床病理特征和预后的关系

目的 探讨直肠癌患者血清微小RNA-144-5p(miR-144-5p)、miR-876-5p表达变化及其与临床病理特征和预后的关系。方法 选择直肠癌患者85例（观察组）、健康志愿者52例（对照组）,采集所有研究对象外周静脉血,离心留取血清,采用RT-q PCR法检测血清miR-144-5p、miR-876-5p表达。分析血清miR-144-5p、miR-876-5p表达与直肠癌患者临床病理特征和预后的关系。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清miR-144-5p、miR-876-5p表达对直肠癌患者预后不良的预测价值。结果 观察组血清miR-144-5p、miR-876-5p表达均显著低于对照组（P均<0.05）。血清miR-144-5p、miR-876-5p表达与直肠癌浸润深度、TNM分期和淋巴结转移有关（P均<0.05）,与性别、年龄、肿瘤最大径、组织分化程度无关（P均>0.05）。随访3年,85例直肠癌患者3年生存率为76.47%(65/85)。miR-144-5p、miR-876-5p高表达者3年生存率均显著高于其低表达者（P均<0.05）。ROC...     

肝癌组织中14-3-3基因差异表达的意义

目的:检测肝癌组织中,4-3-3基因家族成员表达差异的临床意义.方法:用TRIzol一步法提取肝癌组织、硬化肝组织及正常肝组织的总RNA并纯化mRNA.逆转录合成荧光分子(Cy3/Cy5)标记的cDNA探针与含有14-3-3基因家族成员的基因芯片杂交,用GenePix Pro3.0图像分析软件分析不同病变肝组织中该基因家族成员的表达差异,行半定量RT-PCR对结果进行验证并探讨差异表达基因的临床意义.结果:在肝癌组织中14-3-3基因家族成员呈差异表达,其中14-3-3γ在肝癌组织中明显下调,与肿瘤包膜的完整性相关.14-3-3η在肝癌组织中明显上调,与肿瘤患者的临床分期相关.14-3-3γ与14-3-3ηmRNA的表达强度呈负相关(γ=-0.403,P<0.05).结论:14-3-3基因家族调控机制的紊乱参与肝癌的发生、发展,其中14-3-3γ和14-3-3η与肝癌的关系最为密切.     

结直肠癌组织中LGR5、CSF1R蛋白的表达及其临床意义

目的 探讨富含亮氨酸重复单位的G蛋白耦联受体5 (LGR5)与集落刺激因子1受体(CSF1R)在结直肠癌样本中的表达及其预后价值。方法 回顾性选取2016年2月至2019年1月南通大学附属如皋医院初诊并行手术治疗的114例结直肠癌患者,通过免疫组化染色检测配对组织样本中LGR5、CSF1R蛋白的表达水平,分析它们与结直肠癌患者临床病理资料及总生存期(OS)的关系。采用多因素Cox分析明确LGR5、CSF1R在结直肠癌患者中的预后意义。结果 LGR5、CSF1R蛋白在结直肠癌组织中的阳性表达率分别为61.4%(70/114)和63.2%(72/114),均显著高于癌旁组织(P <0.05)。LGR5阳性表达与肿瘤直径、淋巴血管浸润、浆膜侵犯及远处转移显著相关(P均<0.05)。CSF1R阳性表达者浆膜侵犯、淋巴结转移及淋巴血管浸润风险显著高于阴性表达者(P均<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示LGR5(中位OS:45.1 vs 56.1)、CSF1R(中位OS:42.3 vs 59.2)阳性表达与结直肠患者不良预后显著相关。LGR5表达(HR=2.385,...     

14-3-3蛋白在心肌细胞缺氧预处理中的表达及意义

目的:研究14-3-3蛋白在心肌细胞缺氧预处理中的表达及意义。方法:实验用SD新生大鼠(1～3d龄),雌雄不拘,无菌取出乳鼠心脏,经分离附着组织,胰蛋白酶消化,纯化制成心肌细胞。在培养的第4天随机分为3组:正常对照组、缺氧/复氧(A/R)组、缺氧预处理(APC)组。各组分别进行以下指标观察:①心肌细胞搏动频率;②细胞存活率(MTT法);③培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;④透射电镜观察细胞超微结构;⑤Western Blotting法检测14-3-3蛋白的表达变化。RT-PCR法检测14-3-3蛋白η、σmRNA的表达变化。结果:A/R组和APC组的14-3-3蛋白表达均上调,分别是正常对照组的(3.61±0.37)倍和(5.52±0.49)倍,A/R组和APC组与正常对照组比较、A/R组与APC组比较,均P<0.01。A/R组、APC组心肌细胞14-3-3η亚型mRNA分别为正常对照组的(1.82±0.30)倍、(2.93±0.52)倍,差异均有统计学意义(P<0.01);APC组与A/R组比较,差异亦有统计学意义(P<0.01)。A/R组、APC组心肌细胞14-3-3σ亚型mRNA表达量分别为正常对照组的...     

弓形虫信号转导蛋白14-3-3基因的克隆与表达

目的　体外扩增弓形虫RH株信号转导蛋白1433(Toxo1433)基因编码序列,构建原核表达质粒,并表达Toxo1433。　方法　收集、纯化弓形虫RH株速殖子,提取RNA,在设计合成的引物中引入EcoRI和XhoI酶切位点。应用RTPCR扩增Toxo1433基因片段,插入原核表达质粒pET28a中,重组子双酶切、PCR和测序鉴定,转化大肠杆菌BL21并以异丙基βD硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。　结果　从弓形虫RH株RNA中扩增出803bp的Toxo1433基因片段,构建重组质粒pET28a/1433;IPTG诱导,SDSPAGE显示表达产物的大小约30.7kDa,Western印迹鉴定为Toxo1433。　结论　成功地从弓形虫RH株基因组DNA中获取了1433基因,构建了pET28a/Toxo1433重组质粒,并获得高效表达。     

日本血吸虫信号传导蛋白14-3-3的制备及其特性分析

目的制备可溶性重组日本血吸虫信号传导蛋白14-3-3（rSj14-3-3）,并研究其免疫学特性。方法采用反转录聚合酶链反应方法从日本血吸虫成虫mRNA中制备Sj14-3-3基因cDNA片段,将此cDNA片段亚克隆至表达载体pGEX-4T-3的谷胱甘肽还原酶的基因下游,构建重组表达质粒Sj14-3-3/pGEX-4T-3。重组质粒转化大肠埃希菌BL21,转化子细菌采用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）进行诱导,表达产物经SDS-PAGE以观察重组GST-Sj14-3-3表达情况。GST-rSj14-3-3经凝血酶消化后,经过Glutathione Sepharose-4B胶亲和层析制备纯化的rSj14-3-3。rSj14-3-3免疫家兔制备免疫兔血清,经免疫印迹试验分析rSj14-3-3免疫原性和反应性。结果日本血吸虫江苏株Sj14-3-3蛋白基因编码序列被成功克隆,开放阅读框的DNA序列与基因库中的登录序列同源性为99.08%。构建的含Sj14-3-3蛋白基因的重组表达质粒经IPTG诱导能表达分子量约为55 kDa的融合蛋白,融合蛋白经凝血酶切割和亲和层析获得纯化的rSj14-3-3。rSj14-3-3能诱导家兔产生高效价的特异性抗体,该抗体可识别重组和天然的14-3-3蛋白。结论本研究成功制备了可溶性rSj14-3-3,其具有良好的免疫原性与反应性。