糖尿病肾病中微小RNA在肾脏内皮-间充质转化中的调控机制

<正>内皮细胞是一种呈多边形厚度极薄的扁平状细胞,由其嵌合排列组成毛细血管、小动脉、动脉、静脉和淋巴管等血管结构的内表面,参与调节和维持血管通透性及物质交换的过程[1]。特殊情况下,完全分化的内皮细胞具有转化为其他类型细胞的可塑性,内皮细胞被生长因子刺激后发生形态功能变化,获得间充质样标志物,这一过程称为内皮-间充质转化(EndMT)[2]。机体在纤维化过程中,由成纤维细胞组成的纤维化组织不受控制地过度积累,同时分泌大量细胞外基质(ECM),     

内皮间充质转化的研究进展

内皮间充质转化(EndMT)即内皮细胞在促成纤维刺激下可获得成纤维细胞样表型。EndMT不仅参与人体心脏正常发育,还参与诸多疾病的发生发展。本文就近年来EndMT发生机制及其相关疾病研究进展作一综述,以期为临床相关疾病治疗提供新靶点。     

间充质干细胞对糖尿病肾病小鼠lncRNA的干预及肾脏保护的可能机制

目的 筛选糖尿病肾病(DN)小鼠模型中异常表达的长链非编码RNA(lncRNA),探索与间充质干细胞(MSC)干预可能的lncRNA是否对小鼠肾脏起保护作用及可能机制。方法 利用基因表达综合数据库(GEO)来源的转录组测序(RNAseq)数据,对DN小鼠RNAseq数据与正常小鼠进行筛选,得到与DN相关的lncRNA并进行验证,得到上调前3名的lncRNA,选取变化最显著的lncRNA进行下一步实验。分离培养小鼠肾小管上皮细胞(mRTECs)及骨髓间充质干细胞(BMSC),分组培养mRTECs[对照组、高糖(HG)组、HG+BMSC组],四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测各组mRTECs细胞增殖率,荧光定量PCR法检测各组mRTECs中胶原蛋白(collagen)Ⅰ、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、波形蛋白(vimentin)、E-钙黏蛋白(cadherin) mRNA表达。采用siRNA敲减mRTECs中lncRNA的表达,构建正确的pcDNA3.1(+)质粒扩大培养。分组培养mRTECs(对照组、NC组、lncRNA组;si-NC组、si-lncRNA组、HG组、HG+si-lncRNA组...     

结缔组织生长因子在糖尿病肾病中的作用研究进展

结缔组织生长因子具有促进细胞增殖分化、血管生成、基质合成积聚等作用,在糖尿病肾病导致肾小球硬化和肾小管间质纤维化的过程中起关键性作用.通过干预结缔组织生长因子可以缓解糖尿病肾病肾脏纤维化的进展.本文对结缔组织生长因子在糖尿病肾病发生发展中的作用进行综述.     

肾小管上皮细胞表型转化与糖尿病肾病

肾小管病变及肾间质纤维化在糖尿病肾病中的重要作用逐渐被认识,其中肾小管上皮细胞向间充质细胞转化(EMT)可能是其发挥作用的关键环节,与肾间质纤维化的程度相平行。在糖尿病肾病中引发EMT的因素主要有高血糖、晚期糖基化终末产物、蛋白尿、血管紧张素Ⅱ、结缔组织生长因子等。     

尿转化生长因子-β1的检测在IgA肾病纤维化中的临床意义

目的　探讨检测尿转化生长因子 β1(TGF β1)在lgA肾病纤维化中的临床意义。 方法　采用双抗体夹心ELISA法、天狼猩红染色后偏光镜、免疫组织化学方法检测 3 0例IgA肾病、5例正常人尿中TGF β1水平 (用同一尿标本Cr水平作标准比 )及肾小球和肾小管中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原水平。结果　lgA肾病各组尿TGF β1/Cr明显高于对照组 (P <0 .0 1)。其中中、重度组明显高于轻度组及对照组 (P值均 <0 .0 1)。尿TGF β1/Cr水平与肾小球Ⅰ、Ⅲ、IV型胶原 ,肾小管中Ⅰ、Ⅲ、IV型胶原、2 4小时尿蛋白呈显著正相关 (r值分别为 0 .85 5 ,0 .82 6,0 .92 ;0 .92 2 ,0 .862 ,0 .886;0 .86。P均<0 .0 1)。结论　尿TGF β1/Cr可以作为一种无创伤的肾纤维化活动性病变的临床检测指标     

糖肾安对糖尿病肾病大鼠肾脏TGF-β_1及VEGF表达的影响

目的 探讨糖肾安对糖尿病肾病模型大鼠肾脏转化生长因子-β1（TGF-β1）及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达的影响,并探讨其作用机制。方法 采用单侧肾脏切除、高糖高脂饲料喂养、小剂量链脲佐菌素腹腔注射法成功制作糖尿病肾病（DKD）大鼠模型18只并随机分为糖肾安组和模型组各9只;10只健康大鼠为对照组。连续灌药6周,测定各组肾重、血糖、24 h尿蛋白定量、血浆Ⅳ型胶原蛋白（COLⅣ）水平及肾脏TGF-β1、VEGF mRNA水平。结果 与对照组相比,模型组血浆COLⅣ水平及肾脏TGF-β1、VEGF mRNA水平明显升高（P均〈0.01）,且TGF-β1、VEGF mRNA水平与24 h尿蛋白排泄量及血浆COLⅣ水平呈正相关（P〈0.05）。与模型组相比,糖肾安组血糖降低、24 h尿蛋白定量减少、血浆COLⅣ水平及肾脏TGF-β1、VEGF mRNA水平降低（P均〈0.01）。结论 糖肾安联合糖适平对DKD大鼠肾脏有保护作用,其机制可能是通过降低TGF-β1、VEGF的表达水平而实现的。     

骨髓间充质干细胞对糖尿病肾病大鼠肾脏结缔组织生长因子的干预效果

目的观察骨髓间充质干细胞(MSCs)对糖尿病大鼠肾组织纤维结缔生长因子(CTGF)表达的影响。方法 SD大鼠高脂高糖喂养联合小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立2型糖尿病模型,并按随机数字表法分为:糖尿病肾病对照组(DN)、干细胞移植组(MSC)、前列地尔组(AL)。非糖尿病大鼠作为正常对照组(NC)。MSCs经体外培养、鉴定、标记后,经尾静脉注射到MSC大鼠体内(6×106MSCs/ml),同时AL大鼠每日经尾静脉注射10μg·kg-1·d-1,连续注射21 d。于开始治疗后第7、14、21天测定大鼠血糖、24 h尿总蛋白、血肌酐、尿素氮,采用HE染色观察大鼠肾脏病理变化并应用免疫组化检测肾组织CTGF蛋白的表达。结果与NC组比较,造模鼠血糖、24 h尿蛋白、肌酐、尿素氮均显著升高(P<0.05);与DN组比较,MSC组及AL组血肌酐、尿素氮、尿蛋白均显著降低(P<0.05);与NC组比较,DN组肾组织CTGF表达显著升高(P<0.05);与DN组比较,MSC组及AL组肾组织CTGF表达显著降低(P<0.05),但仍高于NC组(P<0.05);与AL组比较,MSC组血肌酐、尿素氮、尿蛋白、肾组织CTGF的表达均显著降低(P<0.05)。结论 MSCs可以抑制CTGF蛋白的过度表达,进而减缓DN的病程进展。     

转化生长因子-β1在人类糖尿病肾病的临床意义

转化生长因子-β1(TGF-β1)系统在体内广泛存在。细胞培养、动物实验及人体研究都证实TGF-β1在糖尿病肾病(DN)发生发展中起了重要作用。本文就TGF-β1在DN发病机制中的作用及在DN临床诊断和治疗中的意义作一综述。     

转化生长因子β在糖尿病肾病发生中的作用

糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DM)患者常见和特异的微血管并发症,其发病机制尚未完全明确,转化生长因子(TGF)-β特别是TGF-β1在DN的发病中发挥了重要作用,阻断TGF-β1的过度表达、抑制或降低其生物活性,有可能成为一种新的预防和治疗DN的有效措施.本文就TGF-β的生物学特性、在DN发生中的作用及目前所作的相关研究做一简单综述.     

上皮-间叶转化在肝纤维化中调控机制研究进展

肝纤维化是各种不同病因慢性肝损伤疾病的共同病理转归,其发生机制目前仍未十分明确。近年研究发现,肝脏细胞如肝星状细胞、肝细胞、胆管细胞和肝卵圆细胞等均能发生上皮-间叶转化(EMT),成为肌成纤维样细胞参与肝纤维化发生。TGF-β/Smad、Hedgehog、MAPK、磷脂酰肌醇3-激蛋白激酶B等途径的信号通路激活是EMT发生的重要正向调节机制,抑制这些信号途径能逆转EMT,改善肝纤维化。深入研究EMT的分子调控机制可能成为肝纤维化治疗的新靶标。     

转化生长因子β在糖尿病肾病中的作用

阐述了转化生长因子β的生物学效应，并对它在糖尿病肾病中的致病作用进行了综述。     

骨髓间充质干细胞共培养对转化生长因子β1诱导的ARPE-19上皮间充质转化的影响

目的分析间充质干细胞(MSCs)共培养对转化生长因子(TGF)β1诱导的ARPE-19细胞上皮间充质转化(EMT)的影响。方法常规培养人视网膜色素上皮(RPE)细胞系ARPE-19细胞并进行分组处理:正常组(CON组)常规培养不作处理;TGFβ1组给予5 ng/ml浓度的重组人TGFβ1诱导EMT;共培养组(MSCs组)在MSCs与ARPE-19共培养的基础上诱导EMT。利用CCK8法检测细胞增殖活性;检测各组EMT指标α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、Vimentin、闭锁连接蛋白(ZO)-1及E-cadherin表达变化;利用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP)-1和基质金属蛋白酶(MMP)-9水平。结果 TGFβ1组ARPE-19细胞的增殖活性显著低于CON组,而MSCs组细胞增殖能力显著高于TGFβ1组。TGFβ1刺激可引起细胞内α-SMA与Vimentin蛋白与mRNA表达显著增高,ZO-1与E-cadherin蛋白与mRNA表达水平显著降低(P0.05);MSCs共培养预处理能逆转TGFβ1诱导的EMT水平,降低α-SMA与Vimentin蛋白及mRNA表达,提高ZO-1与E-cadherin蛋白与mRNA表达水平。此外,TGFβ1组MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP-1水平均显著增加,而MSCs组能逆转TGFβ1刺激效应,显著降低MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP-1水平(P0.05)。结论 MSCs共培养能减轻TGFβ1诱导的ARPE-19细胞EMT水平,且对ARPE-19细胞增殖有一定影响。     

糖尿病肾病患者血、尿转化生长因子-β1水平变化及其临床意义

目的探讨不同阶段糖尿病肾病患者血、尿转化生长因子β1(TGFβ1)水平变化及其临床意义。方法依据尿微量白蛋白排泄率(UAER)的不同,将68例2糖尿病患者分为3组,正常白蛋白尿糖尿病组23例,UAER<20μg/min;早期糖尿病肾病组25例,UAER>20～200μg/min;临床糖尿病肾病组20例,UAER>200μg/min。用ELISE法测定血、尿转化生长因子β1水平,并对其临床意义进行分析。结果与正常对照组比较,正常白蛋白尿糖尿病组血TGFβ1水平轻度升高,无显著差异(P>0.05);而早期糖尿病肾病组、临床糖尿病肾病组血TGFβ1水平明显升高(P<0.01);3组糖尿病组尿TGFβ1均较对照组明显升高(P<0.05～0.01)。各组糖尿病患者尿TGFβ1水平与UAER呈正相关(r值分别为0.612,0.572,0.624,P均<0.01)。尿TGFβ1与血肌酐也呈正相关(r值为0.513,P<0.05)。结论尿TGFβ1变化可能更早显示基底膜成份和结构变化,可作为较白蛋白更敏感的糖尿病肾病早期诊断的一个指标。     

TGF-β1诱导的上皮-间充质转化与糖尿病肾病

糖尿病肾病(DN)肾间质纤维化的初始环节之一是肾小管上皮-间充质转化(EMT),而转化生长因子-β1(TGF-β1)是EMT发生的重要诱导因子.了解DN中肾小管上皮细胞EMT的发生及过程,探讨Smad7、C-肽、TGF-β1抗体、组蛋白去乙酰化酶抑制剂和血管紧张素受体抑制剂在DN中的作用,将为DN治疗提供新的思路.     

蛋白激酶C和TGF-β1在糖尿病大鼠肾脏中的表达

目的研究糖尿病大鼠肾小球中蛋白激酶C（PKC）活性变化和转化生长因子-β1（TGF-β1）的动态变化，探讨二者之间相互关系及其与糖尿病肾病（DN）发生发展的关系。方法用链脲佐菌素制备糖尿病大鼠实验模型，将大鼠随机分为正常对照组（N）、糖碌病2w组（DM2）和糖尿病4w组（DM4）。断头处死，分离肾小球，提取纯化胞浆及胞膜蛋白，利用（γ-32^P）-ATP底物磷酸化的方法检测胞浆及胞膜PKC括性。用免疫组织化学和400倍光镜检测TGF-β1在各组大鼠肾脏的表达。结果（1）糖尿病大鼠肾小球细胞内总的PKC活性与对照组无显著性差异，胞浆PKC活性略有下降，相差不显著；肾小球细胞膜PKC活性明显高于正常对照组，膜结合PKC百分比显著增加，且细胞膜PKC活性与肾脏肥大指数及Cer呈正相关。（2）糖尿病组TGF-β1的表达多于正常组。（3）肾小球细胞膜PKC活性与TGF-β1的表达正相关。结论高血糖慢性刺激可引起肾小球PKC活性增高，并诱导TGF-β1的表达。在糖尿病早期肾内血流动力学改变中发挥着重要的调控作用。     

肝细胞生长因子抑制高糖诱导肾间质成纤维细胞胶原合成和转化生长因子-β1的表达

目的:探讨重组人肝细胞生长因子(rhHGF)对高糖诱导肾间质成纤维细胞损伤的影响.方法:体外培养肾间质成纤维细胞,在高糖环境下加入rhHGF,以酶联免疫吸附法检测培养上清中Ⅲ型胶原浓度,RT-PCR检测细胞HGF和TGF-β1基因表达,Western blot方法检测TGF-β1蛋白合成.结果:高糖预处理的细胞Ⅲ型胶原合成增加(同正常对照组相比,P＜0.01).高糖作用早期HGF表达升高,随着作用时间延长,其分泌量下降,而TGF-β1 出现持续高表达.此外,HGF可以抑制TGF-β1基因和蛋白表达,结果显示,加入HGF后,TGF-β1基因表达显著下降,表达量下降了50%,并且HGF以剂量依赖形式抑制TGF-β1表达,相关分析证实r=-0.8726,P＜0.01.同时HGF对Ⅲ型胶原合成产生抑制作用.结论:高糖环境促进Ⅲ型胶原合成和TGF-β1持续高表达.rhHGF可以部分抑制Ⅲ型胶原和TGF-β1表达.     

老年糖尿病肾病患者转化生长因子β1基因表达调控区甲基化改变及机制

目的观察老年糖尿病肾病患者转化生长因子(TGF)β1基因表达调控区甲基化改变情况,探讨甲基化在糖尿病肾病发病机制中的作用。方法老年2型糖尿病患者182例,分为单纯糖尿病组84例、糖尿病肾病组98例,选取同期体检的老年健康志愿者60名为健康对照组。提取3组外周血基因组DNA,进行亚硫酸氢盐修饰处理。采用甲基化特异性PCR技术初筛3组TGF-β1基因表达调控区DNA甲基化人群,用亚硫酸氢盐修饰后测序技术检测3组TGF-β1基因表达调控区DNA甲基化水平。ELISA法检测3组血清TGF-β1蛋白表达水平;分析糖尿病肾病组TGF-β1蛋白表达相关影响因素。结果单纯糖尿病组和糖尿病肾病组TGF-β1基因第一外显子区甲基化比例均明显低于健康对照组(P0.05),糖尿病肾病组与单纯糖尿病组相比进一步降低。单纯糖尿病组甲基化水平明显低于健康对照组(P0.05);糖尿病肾病甲基化水平明显低于健康对照组和单纯糖尿病组(P0.05)。单纯糖尿病组和糖尿病肾病组TGF-β1蛋白水平均明显高于健康对照组(P0.05);糖尿病肾病组与单纯糖尿病组相比进一步升高。血清TGF-β1蛋白表达水平与UACR、BUN、Scr、FBS、PBS呈明显正相关,与e GFR、基因甲基化呈明显负相关。进一步多元逐步回归分析显示,e GFR和基因甲基化与血清TGF-β1蛋白表达水平存在明显相关性,是影响TGF-β1表达的因素。血清TGF-β1蛋白表达水平与病理分级呈明显正相关;糖尿病肾病组12个Cp G位点甲基化含量与病理分级相关。结论 TGF-β1基因表达调控区甲基化是高糖诱导系膜细胞TGF-β1基因表达激活的重要机制,参与老年糖尿病肾病的发生与发展。     

转化生长因子β1在糖尿病肾病患者血清中的含量及其意义

目的探讨血清TGF-β1和糖尿病肾病的关系.方法48例2型糖尿病根据尿蛋白的排泄率(UAER)分为正常蛋白尿组(MA)、微量蛋白尿组(HA)、临床蛋白尿组(ODA).分别检测各组的血清TGF-β1、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1C)及肾功能(BUN、Cr、Ccr).MA、ODN分别分为缬沙坦治疗组和常规组.结果糖尿病三组与正常对照组比较血清TGF-β1有显著性差异,糖尿病三组也有组间差异.相关分析表明血清TGF-β1与血Cr、HbA1C、UAER呈正相关,HA和ODN两组中缬沙坦治疗前后TGF-β1有显著性差异.结论糖尿病肾病患者血清TGF-β1明显增高,且和糖化血红蛋白、肾功损害呈明显正相关.血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂能部分地纠正DN患者的血清TGF-β1变化,从而延缓DN的发展.