通过p38MAPK信号通路探讨仙灵骨葆胶囊对MC3T3-E1成骨分化的影响

目的 探讨仙灵骨葆胶囊含药血清对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞（MC3T3-E1）增殖分化的影响及与p38MAPK信号通路的关系。方法 用仙灵骨葆胶囊含药血清干预MC3T3-E1,CCK8法筛选最佳干预时间及浓度,试剂盒检测各组细胞ALP活性。将细胞分为A、B、C、D 4组,分别加入10%含药血清、10%空白血清、10%含药血清+SB203580、10%空白血清+SB203580,利用免疫印迹法（Western blot）检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38）、磷酸化p38（p-p38）、成骨相关转录因子2（Runx2）、骨形态发生蛋白2（BMP-2）的蛋白表达量,荧光定量PCR检测p38、Runx2和BMP-2 mRNA的表达水平。结果 与空白血清组相比,不同浓度的仙灵骨葆胶囊含药血清均能促进MC3T3-E1的增殖分化,提高ALP的活性,其中10%含药血清干预36 h的作用最为明显（P＜0.05）;与B组比较,A组p38、p-p38、Runx2、BMP-2蛋白及p38、Runx2、BMP-2 mRNA的表达明显增高（P＜0.05）;加入信号通路阻断剂SB203580后,C组与D组上述指标的表达明显降低（P＜0.05）;与C组相比,D组p38、p-p38、Runx2、BMP-2蛋白及p38、Runx2、BMP-2 mRNA表达更低（P＜0.05）。结论 仙灵骨葆胶囊含药血清能促进MC3T3-E1的分化生长,其作用机制可能与激活p38MAPK信号通路、上调成骨相关因子Runx2、BMP-2的表达有关。     

基于p38MAPK信号通路分析咪达唑仑对腰椎间盘突出症模型大鼠疼痛的影响CSCD

目的:探究基于p38MAPK信号通路分析咪达唑仑对腰椎间盘突出症模型大鼠疼痛的影响。方法:选取50只SPF级别SD健康大鼠,雌雄各半,随机分为正常组,模型组,低、中、高剂量组,模型组和低、中、高剂量组先建立腰椎间盘突出症模型。正常组、模型组大鼠腹腔注射生理盐水,低、中、高剂量组大鼠腹腔注射咪达唑仑,分别按30、60、90 mg/kg给药。采用酶联免疫吸检测大鼠血清中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、β-内啡肽(β-endorphin,β-EP)、P物质(substance P,SP)、神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)水平,采用Western blot检测各组大鼠组织中p38 MAPK,基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase-3,MMP3)蛋白表达。结果:模型组大鼠TNF-α、IL-1β、β-EP水平较正常组高,5-HT水平低于正常组(P<0.05);低、中、高剂量组大鼠TNF-α、IL-1β、β-EP水平较模型组下降、5-HT水平升高(P<0.05)。模型组大鼠较正常组SP、NPY水平上升(P<0.05);低、中、高剂量组较模型组大鼠SP、NPY水平下降(P<0.05)。模型组较正常组大鼠p38 MAPK、MMP-3表达上升(P<0.05),低、中、高剂量较模型组大鼠p38 MAPK、MMP-3表达下降(P<0.05)。结论:咪达唑仑可以改善腰椎间盘突出症模型大鼠的免疫炎症反应,可能是通过p38MAPK信号通路调控来实现的。     

益气养阴消癥通络中药对高糖联合AngⅡ培养的大鼠系膜细胞p38MAPK信号通路的影响

目的：探讨益气养阴消癥通络中药对高糖联合血管紧张素Ⅱ培养的大鼠肾小球系膜细胞（MCs）p38MAPK信号通路的作用。方法：原代培养MCs,第5代时,予高糖、高糖联合血管紧张素Ⅱ刺激,并同时进行药物血清干预,48h后ELISA法检测细胞上清ColⅣ蛋白含量,Western blot检测MCs p-p38MAPK、p38MAPK、p-STAT3、STAT3蛋白表达水平。结果：中药血清可显著减少细胞上清ColⅣ蛋白含量（P〈0.01）,且能明显抑制p38MAPK、STAT3蛋白磷酸化水平（P〈0.01）。结论：益气养阴消癥通络中药可能是通过下调p38MAPK信号通路表达,减少细胞外基质合成,从而发挥对肾脏的保护作用。     

常春藤皂苷元通过JNK/p38 MAPK信号通路抑制膀胱癌细胞体外和裸鼠体内增殖能力的相关研究

目的探索常春藤皂苷元(hederagenin, HE)在体外和裸鼠体内对膀胱癌细胞T24增殖能力的影响。方法把人膀胱癌细胞T24分为对照组和实验组, 实验组给予含25 μg/ml常春藤皂苷元的DMEM培养基进行培养, 用CCK8检测细胞的增殖能力;将裸鼠分为对照组和实验组并注射T24细胞, 实验组细胞按30 mg/kg隔天注射常春藤皂苷元。提取T24细胞和瘤块蛋白检测其p-JNK/JNK、p-p38/p38的表达量。结果膀胱癌细胞T24经常春藤皂苷元处理后, CCK8结果显示实验组细胞增殖能力明显下降(P<0.05);实验组与对照组细胞p-JNK的表达量分别为(0.21±0.06)和(0.89±0.15), p-p38的表达量分别(0.38±0.09)和(1.44±0.26), p-JNK、p-p38的表达均上调(均P<0.05)。体内实验发现, 常春藤皂苷元处理后, T24细胞裸鼠皮下瘤实验组瘤块与对照组瘤块体积分别为(1192.07±250.92)μm3和(2280.50±600.10)μm3, 质量分别为(0.65±0.29)g和(1.62±0.38)g, 实验组质量...     

超分子水杨酸对兔耳痤疮模型p38MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的：探究超分子水杨酸对兔耳痤疮模型p38MAPK/NF-κB信号通路的影响机制。方法：将30只实验兔随机分成正常对照组、2%超分子水杨酸（Salicylic acid,SA）组、30%SA组、夫西地酸组、模型对照组,每组6只,并予以相应外用药物干预,连续4周,并分别于用药2周后、用药4周后检测p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8蛋白的表达。结果：结果显示,随着用药时间的延长,各组的p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8均呈下降趋势。用药前,各组间p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8蛋白表达均差异无统计学意义（P>0.05）。用药2周后,2%SA组、30%SA组、夫西地酸组p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8低于模型对照组（P<0.001）;三个用药组之间p38MAPK、NF-κB、IL-1β两两比较差异无统计学意义（P>0.05）;2%SA组IL-8低于30%SA组、夫西地酸组（均P<0.05）;30%SA组与夫西地酸组IL-8差异无统计学意义（P>0.05）。用药4周后,三个用药组p38MAPK、NF-κB...     

白细胞介素1β通过p38信号通路上调大鼠肾小球系膜细胞骨调素mRNA的表达

目的 探讨p38信号通路(1938MAPK)在白细胞介素1(IL-1)β介导的大鼠肾小球系膜细胞表达骨调素(OPN)中的作用。方法 应用Western印迹检测p38MAPK在IL-1β诱导的肾小球系膜细胞炎症反应中的活化程度。应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法观察p38MAPK特异性阻断剂SB203580对IL-1β诱导的系膜细胞促炎症介质OPNmRNA的影响。结果 IL-1β以时间和剂量依赖方式刺激系膜细胞引起p38MAPK的活化，并明显上调系膜细胞OPNmRNA的表达。p38MAPK特异性抑制剂SB203580以剂量依赖性方式显著抑制IL-1β诱导的OPNmRNA的表达。结论 p38MAPK在IL-16介导的肾小球系膜细胞上调表达黏附分子OPN中起重要作用。     

p38MAPK信号通路在内毒素性休克诱发急性肺损伤大鼠肺组织HO-1表达上调中的作用

目的 评价p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在内毒素性休克诱发急性肺损伤大鼠肺组织血红素加氧酶-1(HO-1)表达上调中的作用.方法 雄性SD大鼠48只,8周龄,体重180～ 200g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=12):对照组(C组)、内毒素性休克组(LS组)、内毒素性休克+ p38MAPK特异性抑制剂SB203580组(LSS组)和SB203580组(SB组).C组和SB组股静脉注射生理盐水0.5 ml;LS和LSS组股静脉注射LPS 10 mg/kg(溶于0.5ml生理盐水)；2h内MAP下降至基础值的75％时,C组和IS组股静脉输注10％二甲基亚砜0.1ml；LSS组和SB组股静脉输注SB203580 5 μmol/kg(溶于0.1 ml 10％二甲基亚砜),输注速率0.01 ml/min.给予LPS或生理盐水后6h时采集动脉血样,进行血气分析,计算氧合指数(PaO2/FiO2)；然后处死大鼠取肺组织,光镜下观察病理学结果,并进行病理学损伤评分,计算肺含水率,测定SOD活性、MDA含量、HO-1 mRNA及其蛋白、p38MAPK蛋白和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白的表达.结果 与C组比较,IS组和LSS组氧合指数和SOD活性降低,病理学损伤评分、肺含水率和MDA含量升高,肺组织HO-1 mRNA及其蛋白和p-p38MAPK蛋白的表达上调(P＜0.05),p38MAPK蛋白表达差异无统计学意义,SB组各指标差异无统计学意义(P＞0.05)；与LS组比较,LSS组氧合指数和SOD活性升高,病理学损伤评分、肺含水率和MDA含量降低,肺组织HO-1 mRNA及其蛋白表达上调,p-p38MAPK蛋白表达下调(P＜0.05),p38MAPK蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 抑制p38MAPK信号通路可导致内毒素性休克诱发急性肺损伤大鼠肺组织HO-1表达上调.     

p38MAPK信号途径抑制剂SB203580对大鼠重症急性胰腺炎胰腺组织中TNF-α表达的调控作用

目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号转导通路在大鼠重症急性胰腺炎(SAP)胰腺组织中的变化规律,探讨p38 MAPK特异性抑制剂SB203580对SAP发展和胰腺组织中TNF-α表达水平的影响。方法采用胰胆管内注射牛磺胆酸钠的方法诱导大鼠重症急性胰腺炎模型,使用SB203580抑制P38MAPK信号传导通路,通过监测大鼠血清淀粉酶(Serum amylase,AMS)和TNF-α的表达检测,观察P38MAPK抑制剂SB203580对大鼠SAP发展和TNF-α表达水平的影响。结果 SAP组TNF-α的表达明显高于对照组。胰腺组织TNF-α的表达水平随胰腺炎病情的进展而升高(P<0.05),使用p38MAPK抑制剂可以显著降低TNF-α的表达(P<0.05)。结论 SB203580可能通过抑制胰腺组织p38 MAPK信号通路进而降低TNF-α的活性,减少炎症介质的释放,达到减轻胰腺损伤,治疗急性胰腺炎的目的。     

甲泼尼龙减轻大鼠呼吸机相关性肺损伤机制与p38 MAPK/NLRP3通路的关系

目的:评价甲泼尼龙减轻大鼠呼吸机相关性肺损伤(VILI)机制与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 (NLRP3)通路的关系。方法:清洁级雄性SD大鼠60只,体重270~320 g,4~5月龄,采用随机数字表法分为3组( n＝20)：对照组(C组)、机械通气组(V...     

miR-3189-3p在肾癌组织中的表达及对肾癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨miR-3189-3p在肾癌组织和癌旁组织中的表达差异及其对肾癌细胞生物学功能的影响。方法:通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-3189-3p在肾癌组织及癌旁组织、肾癌细胞株(Caki-1、ACHN、A498、OS-RC-2)和正常肾小管上皮细胞HK-2中的表达。分别转染miR-NC或m...     

艾塞那肽通过p38MAPK通路对成骨细胞促增殖和抗凋亡的作用研究

目的探讨艾塞那肽通过p38MAPK通路对成骨细胞促增殖和抗凋亡的作用机制。方法将小鼠成骨细胞MC3T3-E1Subclone 14分为对照组、艾塞那肽组、棕榈酸钠组、棕榈酸钠组+艾塞那肽组,分别使用相应试剂培养48 h。通过CCK-8和流式细胞术检测细胞活力与凋亡。通过Western blot检测细胞中P38MAPK、Cyclin D1、Caspase-3的蛋白水平。结果艾塞那肽对正常细胞活力无显著影响(P0.05),棕榈酸钠组的细胞活力显著低于对照组(P0.01),艾塞那肽+棕榈酸钠组的细胞活力显著高于棕榈酸钠组(P0.01);艾塞那肽对正常细胞凋亡无显著影响(P0.05),棕榈酸钠组的细胞凋亡率显著高于对照组(P0.01),艾塞那肽+棕榈酸钠组的细胞凋亡率显著低于棕榈酸钠组(P0.01);艾塞那肽对正常细胞中P38MAPK、Cyclin D1和Caspase-3蛋白水平无明显影响(P0.05),棕榈酸钠组的P38MAPK和Caspase-3显著高于对照组而Cyclin D1显著低于对照组(P0.01),艾塞那肽+棕榈酸钠组的P38MAPK和Caspase-3显著低于棕榈酸钠组而Cyclin D1显著高于棕榈酸钠组(P0.01)。结论艾塞那肽可以通过p38MAPK通路,减少Caspase-3蛋白并上调Cyclin D1蛋白的表达,抑制高脂环境下成骨细胞的凋亡并提高细胞活力。     

P38MAPK和P13K/Akt信号通路在大鼠糖尿病神经病理性疼痛中的交互作用

目的 观察p38MAPK和P13K/Akt信号通路在大鼠糖尿病神经病珲性疼痛中的交互作用.方法 Wistar大鼠腹腔单次注射链脲菌素65 mg/kg制作糖尿病神经病理痛模型.4周后用von frey纤维测双后足机械痛阈,痛阈明显下降为糖尿病神经病理性疼痛造模成功.将96只成模大鼠随机均分为三组:糖尿病神经病理痛组(D组),PI3K抑制药组(E组)和p38MAPK抑制药组(F组).另取同窝大鼠32只作为对照组(C组).成模后的每周周一,E组和F组大鼠分别静脉注射P13K抑制药Wortmannin 0.5 mg/kg和p38MAPK抑制药SB203580 1 mg/kg,直至处死大鼠.于给药前(T1)和给药后第2周末(T2)、第4周末(T3)、第6周末(T4)分别随机取8只大鼠,检测机械缩足反应阈值(MWT)、神经传导速度(NCV)、脊髓和背根神经节(DRG)磷酸化Akt(p-Akt)水平和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)水平.结果 与C组比较,D、E和F组在T1～T4时MWT下降,NCV减慢,p-Akt和p-p38MAPK水平升高(P<0.05);与D组比较,E和F组在T2～T4时MWT升高,NCV增快,E和F组p-Akt明显下降,F组p-p38MAPK水平明显下降(P<0.05).结论 P38MAPK通过激活其下游的P13K/Akt信号通路参与了糖尿病大鼠神经病理痛的形成和维持.     

Suppression of p38α MAPK Signaling in Osteoblast Lineage Cells Impairs Bone Anabolic Action of Parathyroid Hormone

Intermittent parathyroid hormone administration (iPTH) increases bone mass and strength by stimulating osteoblast number and activity. PTH exerts its anabolic effects through cAMP/protein kinase A (PKA) signaling pathway in mature osteoblasts and osteocytes. Here, we show that inactivation of the p38α MAPK‐encoding gene with the use of an osteocalcin‐cre transgene prevents iPTH bone anabolic action. Indeed, iPTH fails to increase insulin‐like growth factor 1 expression, osteoblast number and activity, and bone formation in mice lacking p38α in osteoblasts and osteocytes. Moreover, iPTH‐induced expression of receptor activator of NF‐κB ligand (RANKL) and subsequent increased bone resorption are suppressed in those mice. Finally, we found that PTH activates p38α MAPK downstream of cAMP/PKA signaling pathway in mature osteoblasts. Our findings identify p38α MAPK as a key component of PTH signaling in osteoblast lineage cells and highlight its requirement in iPTH osteoanabolic activity. © 2015 American Society for Bone and Mineral Research.     

Beneficial effects of hyperbaric oxygen on human degenerated intervertebral disk cells via suppression of IL‐1β and p38 MAPK signal

Nucleus pulposus cells (NPCs) from degenerating disks produce catabolic and inflammatory factors, including interleukin (IL)‐1, nitric oxide (NO), prostaglandin E2 (PGE‐2), and matrix metalloproteinaes (MMPs). An imbalance between MMPs and tissue inhibitors of matrix metalloproteinases (TIMPs) has been proposed to exist in the degenerating disk. This study evaluates the effects of hyperbaric oxygen (HBO) on the human degenerated NPCs. NPCs were maintained in alginate bead culture. All hyperoxic cells were exposed to 100% O₂ at 2.5 atmospheres absolute (ATA) in a hyperbaric chamber. p38 MAPK phosphorylation of the NPCs was detected using the phosphor‐kinase array kit. RNA was isolated for real‐time quantitative polymerase chain reaction (Q‐PCR) analysis of aggrecan and type II collagen gene expression. The amounts of IL‐1β, NO, PGE‐2, MMP‐3, and TIMP‐1 in the conditioned media were quantified by enzyme‐linked immunosorbent assay (ELISA). Our data showed that HBO treatment decreased expression of IL‐1β, increased the gene expression of aggrecan and type II collagen, suppressed the phosphorylation of p38 MAPK, decreased NO, PGE‐2, and MMP‐3, and increased TIMP‐1 expression in NPCs as compared with the atmospheric treatment. These results support the hypothesis that IL‐1β and the p38 MAPK signal may be responsible for many of the inflammatory and catabolic changes seen in the human disk degeneration, and support our proposal that HBO treatment‐induced increase of the anabolic factor (TIMP‐1)/catabolic factor (MMP‐3) ratio may provide a therapeutic approach to slow the course of intervertebral disk degeneration. © 2010 Orthopaedic Research Society. Published by Wiley Periodicals, Inc. J Orthop Res 29:14–19, 2011