用荧光原位杂交技术研究慢性粒细胞性白血病变异Ph染色体易位的形成

目的：研究慢性粒细胞性白血病（ｃｈｒｏｎｉｃｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｉｅｍｉａ,ＣＭＬ）变异Ｐｈ染色体的形成,方法：应用荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＦＩＳＨ）技术,以９号,１５号,２２号整条染色体ＤＮＡ探针和Ｍ－ｂｃｒ／ａｂｌ易位探针检测７例具有变异ｐｈ染色体易位ｔ（９;２２）（ｑ３４：ｑ１１）衍生而来,结论：ＦＩＳＨ技术比传统细胞遗传学方法更敏感。     

Alu-PCR联合荧光原位杂交技术鉴定bcr基因相关YAC克隆

目的制备慢性髓细胞性白血病（ＣＭＬ）ｂｃｒ基因重排的ＤＮＡ探针。方法应用Ａｌｕ－ＰＣＲ和荧光原位杂交（ＦＩＳＨ） 技术,对３个酵母人工染色体（ＹＡＣ）候选克隆进行鉴定,制备ＤＮＡ探针,并经正常人外周血淋巴细胞和慢性髓细胞性 白血病患者骨髓细胞筛选。结果确定了ＹＡＣ７６５Ｅ３为非嵌合体,定位于染色体２２ｑｌｌ ｂｃｒ基因区域,而且可在Ｐｈ染 色体阳性细胞中易位至９ｑ３４。探针特异性杂交效率达９５％。结论ＦＩＳＨ技术是染色体、染色体畸变鉴定和染色体上特 殊序列定位的重要检测方法。联合应用Ａｌｕ－ＰＣＲ技术特异性扩增载体ＹＡＣ中人类基因组来源的ＤＮＡ制备探针,为慢性髓细胞白血病的诊断和监测微小残留病提供了一个新的手段。     

应用bcr5’探针检测慢性粒细胞白血病基因重排

应用ｂｃｒ５’探针检测慢性粒细胞白血病基因重排北京医科大学第一医院血液内科武淑兰北京医科大学第一医院实验中心王丽辉Ｐｈ染色体是慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）多能干细胞的克隆标记，系２２号和９号染色体易位ｔ（９；２２）（ｑ３４；ｑ１１）的结果。２２号染色体...     

双色FISH检测21号染色体及DSCR Cosmid克隆制图

应用Ｂｉｏｔｉｎ－１６－ｄＵＴＰ和Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－１１－ｄＵＴＰ分别标记人２１／１３号染色体着丝粒区ＤＮＡ探针（Ｄ１３ＺＩ／Ｄ２１ＺＩ）和Ｄｏｗｎ综合征核心区（ＤＳＣＲ）ＣｏｓｍｉｄＤＮＡ探针，与人类正常二倍体染色体进行原位杂交（ＩＳＨ），并用相应的免疫荧光系统检测杂交信号，在两条１３号和两条２１号染色体着丝粒区显示绿色（ＦＩＴＣ）信号；在两条２１号染色体长臂（２１ｑ２２）显示红色（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ）信号。双色ＦＩＳＨ为检测２１号染色体数目和结构异常提供了可靠的手段，为基因在染色体上制图提供了有效的方法。     

用荧光原位杂交技术显示染色体易位

目的：应用荧光原位杂交技术（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＦＩＳＨ）对Ｇ显带提示有染色体易位的病例进行分析,阐明易位本质。方法：以定位于待研究染色体区段的酵母人工染色体（ｙｅａｓｔ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ,ＹＡＣ）作为ＤＮＡ来源,结果：两组经Ｇ显带未能明确显示的染色体结构异常,经ＦＩＳＨ证实,一例为发生于１１号染色体与１３号染色体之间的平衡     

应用荧光原位杂交技术在人肺癌中发现c－myc基因易位

基因易位是癌基因激活的一种机制，但是以往检测基因改变的方法较难检测基因易位。我们建立了荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）技术，井应用这项技术在人肺癌细胞系ＧＬＣ－８２和１例经ＳＶ４０Ｔ转化了的人支气管上皮细胞中发现了癌基因ｃ－ｍｙｃ易位。在ＧＬＣ－８２细胞系中ｃ－ｍｙｃ基因易位到一条Ｃ组大小标记染色体的短臂。在ＳＶ４０Ｔ转化支气管上皮细胞中ｃ－ｍｙｃ易位到１４ｑ３２，提示ｃ－ｍｙｃ基因易位可能在肺癌起因中起重要作用。     

荧光原位杂交技术及其在医学临床中的应用

染色体荧光原位杂交（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｌｌｈｙ ｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎＦＩＳＨ）技术是 80年代在放射性原位杂交技术基础上发展起来的一种非放射性的分子细胞遗传学技术。在临床细胞遗传学研究中,常规的染色体显带技术常常存在难以分辨染色体缺失、重复及复杂、细微的相互易位等问题,ＦＩＳＨ是在细胞水平上的一种分子技术手段,该技术与ＦＩＳＨ技术的结合为人类染色体畸变的研究提供了更为精确可靠的诊断依据［1］。因而ＦＩＳＨ技术已广泛应用于产前诊断、肿瘤生物学以及哺乳动物染色体进化等研究领域,成为医学…     

残留白血病的检测与诊断

新化疗药物和骨髓移植治疗的出现使白血病完全缓解率大大提高，许多患者有望彻底治愈，确定完全缓解患者体内是否存在微小残留白血病细胞（微小残留病，ＭＲＤ），以及是否需要继续治疗，对白血病治疗开始具有更重要的意义。目前检测ＭＲＤ主要有３种方式：荧光原位杂交（ＦＩＳＨ），聚合酶链反应（ＰＣＲ）和流式细胞术（ＦＣＭ）。大多数白血病细胞具有特殊的染色体易位，ＦＩＳＨ可以检测有易位的ＭＲＤ间期和分裂相细胞；易位后     

干扰素,高三尖形酯碱,阿糖胞苷对慢性粒细胞性白血病Ph^＋细胞生长影响的实

为观察干扰素;（ＩＦＮ）、高三尖杉酯碱（ＨＨＴ）及阿糖胞苷（Ａｒａ－ｃ）体外对慢性粒细胞性白血病（ＣＭＬ）Ｐｈ＾＋细胞的生长影响,探讨其临床治疗ＣＭＬ的有效组合方案。以药物作用２４小时液体培养及常规染色体分析法研究ＩＦＮ、ＨＨＴ及Ａｒａ－ｃ对１０例ＣＭＬ慢性期患者的骨髓中Ｐｈ＾＋细胞的生长影响。结果显示：ＩＦＮ、ＨＨＴ及Ａｒａ－ｃ对ＣＭＬ Ｐｈ＾＋细胞均有选择性杀伤作用,以ＩＦＮ作用最强。ＩＦＮ与ＨＨＴ及Ａｒａ－ｃ联合对Ｐｈ＾＋细胞的杀伤作用明显强于ＨＨＴ及Ａｒａ－ｃ单药运用（Ｐ〈０．０５）,而ＨＨＴ及Ａｒａ－ｃ有促ＩＦＮ清除Ｐｈ＾＋细胞趋势（Ｐ〉０．０５）。以上结果提示,ＩＦＮ、ＨＨＴ及Ａｒａ－ｃ皆可作为治疗ＣＭＬ慢性期患者的有效药物;两药或三药的联合应用有望获得比单药更好的效应。     

慢性粒细胞白血病染色体分析

目的：研究ＣＭＬ在初治,常规化疗,干扰素治疗,Ａｌｌｏ－ＢＭＩ后染色体的病变。方法：对１３例初治ＣＭＬ,其中７例接受Ｈｕ化疗６－１２月,４例联用干扰素治疗６－１２月,３例行Ａｌｌｏ－ＢＭＴ,后＋３０天－＋１８月进行染色体Ｇ显带分析（共４５例次）,４例同时检测ｂｃｒ＝／ａｂｌ融合基因。结果：１３例初治ＣＭＬ检测到１００％Ｐｈ＾１染色体,均为标准易位ｔ（９;２２）。其中７例接受Ｈｕ化疗６－１２月复查仍     

慢性髓细胞白血病的细胞遗传学和荧光原位杂交分析

目的 探讨慢性髓细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）细胞遗传学、分子遗传学特点及其临床意义.方法 选择196例CML患者,采用直接法和（或）24 h短期培养法制备骨髓染色体标本,采用R显带技术（RHG）进行染色体核型分析;用BCR-ABL双色双融合探针或ES探针对骨髓间期细胞进行荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）检测.结果 将患者分为慢性期和加速/急变期2组.细胞遗传学分析：附加染色体异常、变异易位在2组中比例分别为9/166（5.4%）、7/166（4.2%）和19/30（63.3%）、3/30（10.0%）.196例患者中检出179例Ph阳性标本,占91.3%;其中典型易位169例（94.4%）,变异易位10例（5.6%）,附加染色体异常出现频率最多的为双Ph、＋ 8、I（17q）、-Y.分子遗传学分析：68例患者行FISH 检测,均为BCR-ABL融合基因阳性（含10例变异易位、11例Ph染色体阴性及6例染色体检测失败者）,其中10例（14.7%）为der（9）缺失（含1例染色体检测失败者）,在慢性期、加速/急变期中比例分别为8/55（14.5%）、2/13（15.4%）.68例患者中典型易位41例,变异易位10例,der（9）缺失在典型易位、变异易位中比例分别为5/41（12.2%）和4/10（40.0%）.结论 与慢性期相比,加速/急变期附加染色体、变异易位等异常明显增加,染色体核型分析有助于疾病诊断和进展的分析,并且在遗传学分析的基础上,选用分子遗传学FISH技术可以明显提高疾病的诊断率和染色体异常的检出率及准确率,并可有效检测der（9）缺失.     

Diagnostic role of conventional cytogenetics and fluorescence in situ hybridization (FISH) in chronic myeloid leukemia patients

Introduction: The limitation of cytogenetic analysis is that the Ph chromosome cannot be detected in clumped metaphase or in interphase cells. Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a highly sensitive molecular genetic technique, which enables to detect break point cluster region - Abelson (BCR-ABL) complex and minimal residual disease in all Ph positive CML patients not only in metaphase but also in interphase cells. Aims: To detect Ph chromosome in CML patients by the use of conventional cytogenetics and FISH. Material and methods: The bone marrow samples were collected in heparinised syringe from 35 diagnosed CML patients and transported to cytogenetic laboratory for chromosomal analysis. Conventional karyotype was prepared by direct harvesting and short-term culture. The FISH analysis was carried out on interphase cells of two patients to confirm the cytogenetic diagnosis. Results: Out of 35 CML patients, 17 (49.9%) were 100% Philadelphia positive, 10(28.5%) were 50-70% Ph+ mosaics and 3(9%) were 100% Ph negative. In 5 patients (14.25%) cytogenetic analysis failed to confirm the presence or absence of Ph chromosome. FISH was carried out in interphase cells from bone marrow preparations of two patients. The signals for BCR-ABL fusion gene was absent in Ph- negative CML patients. In Ph positive patients, the FISH analysis detected BCR-ABL fusion gene seen as a yellow signal on interphase cells. Conclusion: Conventional cytogenetics is a useful method for detection of Ph chromosome in metaphase stage of cell division. FISH can be used in interphase stage of cell division for the same purpose. Key words: CML, FISH, Chromosomal analysis, Philadelphia chromosome.     

染色体核型分析和荧光原位杂交技术对慢性粒细胞性白血病的诊治意义

目的 分析染色体核型分析和荧光原位杂交（FISH）检测方法在慢性粒细胞性白血病（CML） 中的诊治意义。方法 171 例标本应用染色体R 显带进行核型分析,218 例标本应用间期FISH 进行分析。 结果 在171 例患者中,116 例（68%）检出Ph 染色体,22 例（13%）存在其他异常核型。218 例CML 患者 标本应用FISH 进行分析,174 例（80%）检出BCR/ABL 基因。76% CML 患者BCR/ABL 融合基因产生的蛋 白类型为P210,3% CML 患者BCR/ABL 融合基因产生的蛋白类型为P210 共表达P190,0.95% CML 患者融 合基因产生的蛋白类型为P190。另外,18% CML 患者存在der（9）部分序列缺失。结论 FISH 对BCR/ABL 融合基因检出率高于染色体核型分析对Ph 的检出率。染色体核型分析可提示Ph 染色体及多种其他异常核型。 FISH 分析可提示是否存在BCR/ABL 融合基因,也可提示不同的融合蛋白类型,还可提示der（9）的部分序 列缺失与否。2 种分析方法可以多角度提示CML 患者的疾病信息,在CML 的诊治中有重要的临床价值。     

变异型Ph易位慢性粒细胞白血病der（9）缺失的FISH研究

目的研究29例变异型Ph易位慢性粒细胞白血病（CML）患者衍生9号染色体[der（9）]部分序列的缺失情况。方法患者骨髓标本采用直接法和短期培养法制备染色体,采用R显带技术进行核型分析。运用BCR-ABL双色双融合DNA探针对骨髓间期细胞进行荧光原位杂交（FISH）技术检测der（9）染色体部分序列的缺失。结果29例变异型Ph易位CML患者中,4例伴有缺失,4例Ph＋中期和间期细胞均伴有缺失。结论在变异性Ph易位（CML）病患者中der（9）缺失的发生率13.7%,该缺失是不良预后指标。     

染色体核型和bcr/abl融合基因表达与慢性髓细胞白血病急变的关系

目的 探讨慢性髓细胞白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)的细胞遗传学特性及其与病程发展的关系.方法 短期培养法直接法G显带检测CML的骨髓染色体核型,双色荧光原位杂交检测CML的bcr/abl融合基因,统计学方法采用t 检验.结果 264例CML患者的骨髓染色体检测,检测出Ph染色体阴性14例,阴性率5.3 %,其余为Ph染色体阳性,阳性率为94.7%.在观察到CML急变的43例患者中,标准Ph染色体22例,Ph染色体阴性9例,双Ph染色体2例,变异Ph染色体3例,标准Ph染色体伴其它染色体易位3例,Ph染色体阴性伴其它染色体易位1例,Ph染色体阴性伴倒位2例,Ph染色体阳性伴倒位1例.43例患者中24例患者急变时发生了染色体核型及融合基因改变,19例患者染色体核型及融合基因没有发生变化;[t(9;22)(q11;34)]的CML患者与[Ph-,变异Ph,复杂染色体]的CML患者急变时间(月)差异有统计学意义(P＜0.05).结论(1)慢性髓细胞性白血病加速/急变期发生克隆演化;(2)[Ph-,变异Ph,复杂染色体]的CML患者急变时间(月)明显短于[t(9;22)(q11;34)]的CML患者;(3) 染色体核型和bcr/abl融合基因表达可为诊断提供可靠、可循的依据,对预后判断有重要意义.     

慢性粒细胞白血病骨髓细胞染色体畸变的研究

报道４５例慢性粒白血病的骨髓细胞染色体检查结果。检出Ｐｈ１染色体阳性患者４２例,其中标准型Ｐｈ＾１染色体畸变３７例,标准型Ｐｈ＾１伴其它染色体易位者２例;双Ｐｈ＾１染体者１例,变异Ｐｈ＾１染色体２例;还检出Ｐｈ＾１染然体阴性患者３例,其中２例为其它染色体畸变类型。     

慢性粒细胞白血病染色体异常的研究

目的 研究慢性粒细胞性白血病急变过程中基因组的异常,方法 对１５例急变期,３例加速期和２０例慢性期的患者进行了常规细胞遗传学分析,用比较基因组杂交和双色染色体涂抹的方法。结果 在所有被研究的病例中均检测到费城染色体,其中１５例演进病例中有１２例还伴有其它的染色体数量和／或结构的异常,而２０例慢性期中仅５例伴其它异常。染色体数量变化是Ｐｈ染色体双体或三体（５／１４例）和８号染色体三体（５／１４）,另     

Chromosomal cryptic insertion of the terminal region and its formative mechani sm determined by fluorescence in situ hybridization

Objective To determine the karyotype of a cryptic structural abnormality and explore the mechanism of apparent chromosomal terminal deletion. Methods Fluorescence in situ hybridization(FISH) with a whole chromosome 7 painting probe and a 7q subterminal probe (7q36→qter), prepared by chromosome microdissection technique, was used to analyze a case with a history of spontaneous abortion and 7q terminal deletion detected by conventional G-banding technique.Results The case was a maternal cryptic insertional translocation between chromosome region 1p32 and 7q32→q35. The region of chromosome 7q36→qter was not inserted into chromosome 1, and the abnormal chromosome 7 was not a terminal deletion but an interstitial deletion. Conclusions Chromosome insertion of the terminal region retains its telomere, which is consistent with the concept of a three-break rearrangement. Interstitial deletion may be regarded as another mechanism for terminal deletion in the chromosome banding level. Combined with chromosome microdissection, FISH technique could be a powerful diagnostic tool for detecting chromosome structural abnormalities.     

双色双融合荧光原位杂交检测慢性粒细胞白血病的bcr/abl融合基因研究

目的：探讨双标双融合荧光原住杂交技术(dual-color and dual-fusion fluorescence in—situ hybridization，D—FISH)在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia，CML)中检测bcr／abl融合基因的灵敏度及特异性。方法：应用细胞遗传学G显带(CCG)核型分析、双色荧光原住杂交(D—FISH)和染色体涂染技术，检测了29例CML患者骨髓中期分裂相和间期细胞。结果：CCG检出Ph( )24例，D—FISH检测均为bcr／abl( )；Ph(-)5例，其中4例核型为46，XY，经D—FISH检测2例bcr／abl( )，2例ber／abl(-)，另1例核型为46，XYt(20；22)，D—F1SH检测ber／abl( )，以9号，20号和22号全染色体探针涂染，确定该例核型为46，XYt(9；20；22)，D—FISH检测总阳性率为93．10％(27／29)，高于CCG检查时阳性率82．76％(24／29)(P=0．025)。结论：与CCG方法相比，D—FISH检测CML的ber／abl融合基因具有简便、快速、灵敏、特异性强等优点，可以作为CML临床诊断和微小残留病监测的一种重要检测方法。．