沉默miR-107对乳腺癌细胞侵袭及上皮-间质转化的影响

目的 探究miR-107对乳腺癌细胞侵袭及上皮-间质转化(EMT)的影响和机制。方法 利用荧光定量PCR方法分析miR-107在正常乳腺细胞及乳腺癌细胞系中的表达差异;HS578T细胞分别转染对照miRNA和miR-107抑制剂,利用划痕实验分析细胞迁移能力,用Transwell实验分析细胞侵袭能力,用实时荧光定量PCR方法检测细胞EMT标志物的表达水平,用蛋白质免疫印迹实验检测细胞PTEN/AKT信号通路。结果 与正常乳腺细胞相比,miR-107在乳腺癌细胞株中高表达;沉默miR-107的表达抑制HS578T细胞的迁移、侵袭及EMT,促进PTEN/AKT信号通路。结论 miR-107在乳腺癌细胞中高表达,沉默miR-107表达通过PTEN/AKT信号通路抑制乳腺癌细胞迁移、侵袭和EMT。     

miR-498过表达对鼻咽癌细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化的影响及其机制

目的 探讨微小RNA-498(miR-498)过表达对鼻咽癌细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化（EMT）的影响及其机制。方法 体外传代培养人永生化鼻咽上皮细胞系NP69及人鼻咽癌细胞系CNE-2Z、CNE-1、HNE-1、SUNE-1,采用RT-qPCR法检测各细胞miR-498表达,选择miR-498表达最低的鼻咽癌细胞进行后续实验。取传3代、对数生长期、生长状态良好的鼻咽癌细胞,随机分为miR-498 mimics组和NC mimics组,分别转染miR-498 mimics、NC mimics。转染6 h更换新鲜培养基继续培养24 h,收集细胞。采用CCK-8法检测细胞增殖活性,采用平板克隆形成实验检测集落形成能力,采用Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力,采用Western blotting法检测EMT相关上皮型钙黏素（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、纤连蛋白（Fibronectin）以及高迁移率族蛋白A2(HMGA2)表达。结果 CNE-1、HNE-1、CNE-2Z、SUNE-1细胞miR-498相对表达量均低于NP69细胞（P均<0.0...     

HOXC9在肝细胞癌组织中的表达以及对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

[目的]探讨HOXC9在肝细胞癌(HCC)组织中的表达以及对癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.[方法]收集2015～2019年于我院接受手术治疗的65例HCC患者的癌组织及相应癌旁组织,通过免疫组化检测HOXC9在癌组织及癌旁组织中的表达情况,通过RT-qPCR检测HOXC9在肝上皮细胞THLE-3、HCC细胞系HepG2...     

miR-425对胶质瘤细胞迁移与侵袭的影响

目的探讨miR-425对人胶质细胞瘤U87细胞迁移与侵袭能力的影响。方法利用Lipo2000转染试剂体外瞬时转染人胶质细胞瘤U87,将细胞分为实验组(转染miR-425 mimics)、抑制组(转染miR-425 inhibitors)、空白组(无转染)。Real-time PCR检测细胞中miR-425表达;划痕实验检测细胞的迁移距离,Transwell实验检测细胞的迁移以及侵袭能力,Western印迹检测基质金属蛋白(MMP)2、MMP9的表达水平。结果与空白组相比,miR-425 mimics组miR-425表达明显上调,约为空白组的8倍,细胞侵袭与迁移能力下降,MMP2、MMP9表达下降,miR-425 inhibitors组miR-425表达明显下调,约为空白组的0.14倍,细胞侵袭与迁移能力显著增强,MMP2、MMP9表达增强。结论 miR-425的表达水平与胶质瘤U87细胞的迁移与侵袭能力密切相关。     

上皮间质转化在原发性肝癌侵袭、转移中的作用

上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是指上皮细胞在特定的情况下向间质细胞转分化的现象。在原发性肝细胞癌的侵袭、转移中存在这一现象。因此,本文除介绍EMT及其诱导调控因素之外,还对它在原发性肝癌侵袭、转移中的作用进行综述。     

小干扰RNA沉默甲胎蛋白基因对HepG2细胞迁移及侵袭的影响

目的研究甲胎蛋白(AFP)对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法应用合成的靶向沉默AFP小干扰RNA(siRNA)转染肝癌HepG2细胞,分为空白对照、阴性对照组及AFP siRNA组,各组细胞干预48 h后,采用实时定量PCR(qRT-PCR)和ELISA法检测细胞转染后的沉默效率,Transwell小室实验检测沉默AFP基因后HepG2细胞的侵袭、迁移能力,用Western blotting法观察沉默AFP基因的表达对上皮-间质转化(EMT)相关蛋白(N-cadherin、Vimentin和E-cadherin)、AKT和p-AKT蛋白表达的影响。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果转染沉默后,与空白对照组相比,AFP siRNA组中AFP mRNA的相对表达量明显降低(P 0.01),抑制率达86.440%,同时AFP siR NA组细胞上清液中AFP蛋白表达水平同样明显降低(P 0.01)。与空白对照组相比,AFP siRNA组的迁移细胞数和侵袭细胞数显著下降,差异具有统计学意义(P值均0.01)。沉默HepG2细胞中AFP基因的表达后,与空白对照组比较,AFP siRNA组EMT相关蛋白E-cadherin蛋白的表达水平升高(P 0.01),而N-cadherin及Vimentin表达水平均明显降低(P值均0.05),且PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-AKT的表达水平明显降低(P 0.01)。结论沉默AFP可抑制肝癌细胞转移,基于HepG2细胞株的机制研究可能与阻断PI3K/Akt通路抑制EMT相关。     

miR-155在肝细胞癌中的表达及对肝癌细胞增殖的影响

目的:检测微小RNA-155(miR-155)在肝癌组织中的表达并分析其对肝癌细胞增殖和细胞凋亡的影响.方法:采用TagMan MGB探针法荧光定量P C R分析42例原发性肝癌及对应的癌旁组织miR-155的表达;利用miR-155反义寡核苷酸(ASO-miR-155)降低肝癌细胞HepG2和SMMC7721中miR-155的表达;利用MTT比色法检测肝癌细胞增殖的变化,并通过流式细胞技术检测肝癌细胞早期凋亡情况.结果:42例肝癌及癌旁组织标本中,miR-155在52%(22/42)肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.05);利用脂质体将ASO-miR-155转染肝癌细胞HepG2和SMMC7721后,miR-155的表达明显降低,肝癌细胞HepG2和SMMC7721生长受到明显抑制;并且细胞的早期凋亡明显增加.结论:miR-155在肝癌组织中过表达,降低其表达能明显抑制肝癌细胞的生长并诱导细胞早期凋亡,miR-155有可能成为肝癌治疗的新靶点.     

miR-21在大肠癌细胞迁移和侵袭中的作用及机制探讨

目的 探讨miR-21在大肠癌细胞迁移和侵袭中的作用及机制.方法 取大肠癌SW480细胞培养、传代,分为两组.观察组转染miR-21 mimics,对照组加入同浓度的miRNA mimics negative control.采用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-21的表达情况,采用Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blot法检测上皮一间质转化(EMT)相关蛋白表达情况.结果 转染组miR-21的表达量、细胞的迁移和侵袭能力均明显高于对照组(P均＜0.05);细胞中紧密连接蛋白(ZO-1)和上皮钙黏蛋白(E-cad)的表达明显降低、神经钙黏蛋白(N-cad)和转录因子Slug的表达明显升高,第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)表达明显降低、而磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达明显升高(P均＜0.05).结论 miR-21可促进人大肠癌细胞发生EMT发生细胞迁移和侵袭,其机制为下调PTEN蛋白表达、激活P13K/Akt,促进EMT.     

转移消失蛋白B基因表达对MHCC97H细胞侵袭和转移潜能的影响

目的 观察慢病毒载体携带靶向人源性MTSS1(转移消失蛋白B基因,MIM-B基因)小干扰RNA对人肝癌细胞株MHCC97H细胞侵袭和转移潜能的影响.方法 构建靶向MTSS1基因的慢病毒载体-siMTSS1,转染MHCC97H细胞.实时荧光定量PCR和Western blot用于测定MIM-B mRNA和蛋白表达;侵袭实验用于评估侵袭潜能;明胶酶谱用于检测基质金属蛋白酶2(MMP2)活性.以MHCC97H构建裸鼠原位移植瘤模型,第14天将24只成模裸鼠随机分成空白对照组、空载体组及治疗组(每组8只),在超声引导下瘤周及瘤内多点注射硼酸盐缓冲液、Lenti-GFP及Lenti-siMTSS1,第35天检测肺转移情况.采用SPSS13.0统计软件对计量资料进行方差分析.结果 成功构建慢病毒载体携带的针对MTSS1基因小干扰RNA,Lenti-siMTSS1感染效率为97.0%,显著抑制MIM-B蛋白表达,下调MMP2活性.体外实验结果显示空白对照组、空载体组和干扰组细胞穿膜数分别为37.9±4.4、37.4±5.3和26.6±4.6(F=26.695,P＜0.01).体内实验结果显示空白对照组、空载体组及治疗组肺转移结节数分别为6.5±2.6、6.4±2.7和3.8±1.3(F=3.637,P＜0.05);肿瘤组织MIM-B mRNA相对表达量分别为0.39±0.19、0.38±0.10和0.16±0.11(F=11.644,P＜0.01).结论 慢病毒介导小干扰RNA抑制MIM-B mRNA和蛋白表达进而抑制HCC侵袭、转移潜能可能与下调MMP2活性相关,为肝癌患者提供一条新的分子靶向治疗思路.     

miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力的实验研究

目的探讨miR-302a对胃癌BGC-823细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移能力的影响和机制。方法在胃癌BGC-823细胞中转染miR-302a mimics,CCK-8测定细胞增殖变化,Transwell小室测定迁移和侵袭,Western blotting检测E-cadherin、Vimentin、N-cadherin蛋白表达。靶基因预测软件预测E2F1可能为miR-302a的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在胃癌BGC-823细胞中共转染pcDNA 3.1-E2F1和miR-302a mimics,按照上述方法测定细胞增殖、侵袭、迁移和E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、E2F1蛋白表达水平。结果miR-302a mimics降低胃癌BGC-823细胞增殖、侵袭和迁移能力,下调细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达水平,促进细胞中E-cadherin蛋白表达。miR-302a靶向负调控E2F1表达。pcDNA 3.1-E2F1能够提高miR-302a mimics条件下胃癌BGC-823细胞中E2F1蛋白表达水平,促进细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达,减少细胞中E-cadherin蛋白表达。结论miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力。     

肝细胞癌miR-449a表达及临床意义

目的探讨miR-449a在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者癌组织中的表达与预后的关系。方法选取2012年1月至2013年10月在我院接受手术根治切除治疗的HCC患者289例,应用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-449a在HCC患者癌组织中的表达,并随访其生存状况。绘制受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)并评价miR-449a对HCC预后的预测价值。采用Kaplan-Meier并Log-rank检验进行单因素生存分析,将单因素有意义的因素引入Cox多因素回归模型。结果 289例患者中,男性231例,女性58例。平均年龄(53.1±10.3)岁(范围:32～74岁)。根据Chid-Pugh分级,肝功能A级者258例,肝功能B级者31例。感染肝炎病毒者256例,未感染肝炎病毒者33例。miR-449a表达水平为1.84±0.78。截至2018年10月,289例HCC患者中,失访21例,随访率92.7%。平均随访时间(38.5±17.9)个月。在随访到的268例患者中,死亡146人。miR-449a预测HCC死亡的最佳临界点为1.2。当miR-449a为1.2时, miR-449a预测HCC死亡的灵敏度为63.0%,特异度为60.7%;AUC曲线下面积为0.63。多因素Cox回归分析显示:Child-Pugh B级[HR(95%CI):1.11(1.07～1.15)]、较高ALT水平[HR(95%CI):1.58(1.26～1.97)]、较高AST[HR(95%CI):1.73(1.31～2.28)]、ALP[HR(95%CI):1.36(1.05～1.76)]、AFP[HR(95%CI):2.09(1.85～2.12)]、较大肿瘤[HR(95%CI):1.14(1.06～1.18)]、较低ALB[HR(95%CI):1.38(1.37～1.52)]、miR-449a表达[HR(95%CI):2.17(1.68～2.28)]是HCC患者死亡风险增加的独立危险因素。结论 miR-449a表达是HCC患者预后独立危险因素,miR-449a表达下调者预后更差。     

miR-495在肝癌组织中的表达及其对肝癌MHCC-97H细胞的影响

目的:探讨miR-495在肝癌组织中的表达以及对肝癌MHCC-97H细胞的影响。方法:选取2017年1月至2018年1月我院保存的肝癌组织标本56例（肝癌组）,同时选取正常肝脏组织标本40例作为对照组,采用逆转录实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测miR-495表达;选取肝癌MHCC-97H细胞,随机分为对照组、空...     

硫酸右旋糖苷对宫颈癌细胞迁移、侵袭的影响及其分子机制

目的 探讨硫酸右旋糖苷(DS)对宫颈癌细胞迁移、侵袭及上皮间质转化(EMT)的影响,并探讨其作用机制.方法 取宫颈癌Hela细胞,分别加入0、0.1％、0.3％、0.6％、1％的DS处理,采用CCK-8增殖实验筛选DS的最佳作用浓度和最佳作用时间分别为0.3％和48 h,选择该浓度与作用时间进行后续实验.将Hela细胞...     

紫花牡荆素对宫颈癌HeLa细胞上皮间质转化、侵袭和迁移作用的影响

目的 探讨紫花牡荆素(CAS)对宫颈癌HeLa细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移作用的影响及其可能机制.方法 将体外培养的HeLa细胞用不同浓度的人转化生长因子β1处理,倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化;用HE染色法观察不同浓度CAS对间质转化的HeLa细胞形态学的影响;用Transwell法检测细胞侵袭、迁移能力;用Westem blot分析细胞E-cadherin、N-cadherin和Twist蛋白表达情况.结果 CAS能抑制HeLa细胞向间质细胞形态转化,并下调N-cadherin蛋白的表达及上调E-cadherin蛋白的表达;与对照组相比,CAS作用72 h后能抑制宫颈癌HeLa细胞的侵袭和迁移能力,并下调Twist蛋白的表达.结论 CAS能抑制宫颈癌HeLa细胞EMT、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与其下调Twist蛋白表达相关.     

苦参碱调控JAK2/STAT3通路影响肝癌细胞迁移、侵袭和EMT的作用研究

目的 探究苦参碱通过介导Janus激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路对肝癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。方法 将体外培养人肝癌细胞MHCC97-H分为：对照组(不做处理),苦参碱组(0.125、0.25、0.5、1和2 mg/mL苦参碱),AG490组(10μmol/L JAK2/STAT3信号通路抑制剂AG490),抑制剂组(0.5 mg/mL苦参碱和10μmol/L AG490),干预24 h。MHCC97-H细胞活力采用细胞计数试剂盒法测定;细胞迁移和侵袭能力采用Transwell小室法测定;EMT相关因子mRNA表达采用RT-qPCR法测定;蛋白水平采用蛋白免疫印迹法测定。结果 与对照组相比,0.125、0.25和0.5 mg/mL苦参碱组细胞活力无显著影响(P>0.05),1和2 mg/mL苦参碱组和AG490组细胞活力显著降低(P<0.05),其中0.5 mg/mL苦参碱组MHCC97-H细胞迁移数、侵袭数和p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、N-钙粘蛋白、波形蛋白及纤连蛋白表达水平显著降低(P<...     

姜黄素调节miR-133a表达对肝癌细胞迁移和侵袭的影响

背景姜黄素对包括肝癌在内的多种肿瘤的发生发展表现出较好的抑制作用,但其抗肝癌的作用机制尚不完全清晰.有研究发现,姜黄素可通过调控miR-133a表达抑制胃癌细胞增殖和转移; miR-133a在肝癌中低表达的结果已有数据证实,但姜黄素是否介导miR-133a表达发挥抗肝癌的作用并不清楚.目的探讨姜黄素调节miR-133a表达对肝癌细胞迁移和侵袭的影响.方法以姜黄素(0、10、20μmol/L)处理肝癌SMMC-7721细胞48 h后, MTT法检测细胞活力, Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭; RT-PCR检测细胞中miR-133a表达.采用RT-PCR检测正常肝LO2细胞和肝癌SMMC-7721细胞中miR-133a表达;将miR-133a模拟物转染至SMMC-7721细胞后, Transwell小室检测miR-133a对姜黄素作用前后细胞迁移和侵袭的影响.结果姜黄素能够有效抑制SMMC-7721细胞活力(10μmol/L姜黄素存活率:0.71±0.07 vs 1.02±0.09; 20μmol/L姜黄素存活率:0.45±0.05 vs 1.02±0.09)、迁移(52.32±5.48 vs121.43±12.35)和侵袭(46.33±5.38 vs109.25±10.75),上调miR-133a表达(10μmol/L姜黄素:1.62±0.11 vs 1.00±0.09; 20μmol/L姜黄素:2.96±0.25vs1.00±0.09);与LO2细胞相比,SMCC-7721细胞中miR-133a的表达水平明显降低(0.32±0.03 vs1.03±0.08);上调miR-133a表达后,SMCC-7721细胞的迁移(32.84±3.95 vs 96.35±9.08)和侵袭(42.75±5.06vs119.32±11.71)能力均明显减弱,同时姜黄素对SMCC-7721细胞迁移(29.6±3.32 vs134.62±13.41)和侵袭(31.86±4.05 vs 129.73±12.74)的抑制作用增强.结论姜黄素可通过上调miR-133a表达抑制肝癌细胞的迁移和侵袭.