一种模块化三维灌注培养系统的研制

目的:研制一种模块化三维灌注培养系统,解决目前培养系统结构复杂、难消毒、易污染的问题。方法:该系统主要由生物反应器模块、氧合模块、动力模块以及换液模块构成,各模块壳体通过3D打印制作。其中生物反应器模块主体为80 ml蓝口瓶,装载培养基及细胞支架复合物。氧合模块装载膜肺、空气过滤器、气泡过滤器等,为培养系统的核心组件。动力模块由蠕动泵和空气泵组成,为培养基及气体提供动力。换液模块中装有深紫外LED灯,可进行消毒和更换培养基。结果:通过该系统进行大鼠脾脏脱细胞支架培养,细胞与支架黏附紧密、生长状态良好,且未发生污染。结论:该系统具有结构合理、易消毒、污染少、制作成本低、稳定性高、易于扩展且操作简单的优点,可很方便地进行基于脱细胞支架的三维灌注培养,值得推广应用。     

生长激素在辅助生殖技术中的应用及作用机制

生长激素(GH)在生殖过程中具有重要生理作用,辅助生殖技术中应用生长激素对诱导排卵有确切的治疗作用,有助于改善卵巢的反应性和卵细胞及胚胎的质量,提高妊娠率。体外及体内实验也证实生长激素可作用于卵巢,影响配子形成和甾体合成,促进小卵泡的生长并阻止其闭锁,有利于卵泡和配子的成熟,其在早期胚胎分化和代谢中也发挥重要作用,也可促进精子发生,就这些方面做一综述。如何选择最适宜治疗的患者群体及增加卵巢敏感性所需生长激素的最小剂量尚需进一步研究,生长激素作用机制及其是否通过胰岛素样生长因子I影响卵泡发育也需进一步探讨。     

小鼠窦前卵泡与卵泡膜间质细胞的3种共培养方法比较

目的:探索小鼠窦前卵泡与卵泡膜间质细胞体外共培养的最佳模型。方法:分别从14~16日龄和21~25日龄C57BL/6小鼠中分离得到窦前卵泡和卵泡膜间质细胞,采用海藻酸钠凝胶法、Transwell间接、直接接触法体外共培养6天,比较各组卵泡形态、生长发育、激素分泌、存活率、卵母细胞成熟阶段。结果:海藻酸钠凝胶中培养的卵泡能够维持其三维结构,观察更清晰,而Transwell中培养的卵泡更有利于颗粒细胞的增殖,第5天时卵泡直径超过三维培养,雌二醇分泌水平与卵泡的生长模式相一致。第5天时海藻酸钠凝胶法(77.3%)和Transwell直接接触法(76.5%)的卵泡存活率要明显高于Transwell间接接触法(57.4%),P<0.05。3种方法的卵母细胞减数分裂恢复能力间无明显差异。结论:短期(5天内)的体外共培养可以选择Transwell直接接触法,而更长时间的共培养则推荐海藻酸钠凝胶法。     

生长激素在辅助生殖技术中的应用及作用机制

生长激素(GH)在生殖过程中具有重要生理作用,辅助生殖技术中应用生长激素对诱导排卵有确切的治疗作用,有助于改善卵巢的反应性和卵细胞及胚胎的质量,提高妊娠率.体外及体内实验也证实生长激素可作用于卵巢,影响配子形成和甾体合成,促进小卵泡的生长并阻止其闭锁,有利于卵泡和配子的成熟,其在早期胚胎分化和代谢中也发挥重要作用,也可促进精子发生,就这些方面做一综述.如何选择最适宜治疗的患者群体及增加卵巢敏感性所需生长激素的最小剂量尚需进一步研究.生长激素作用机制及其是否通过胰岛素样生长因子Ⅰ影响卵泡发育也需进一步探讨.     

卵泡发育早期细胞因子对卵母细胞发育的调控

在卵泡内,卵母细胞及其周围颗粒细胞间的旁分泌作用对卵母细胞的发育和功能有重要作用.研究证实了源于颗粒细胞的酪氨酸激酶受体配体在卵母细胞生长过程中起重要作用.酪氨酸激酶受体配体和源于卵母细胞的生长分化因子-9以及骨生成蛋白-15间的相互作用表明卵母细胞和颗粒细胞在分子水平上存在复杂的作用.卵泡刺激素调控这些旁分泌作用并调节卵泡正常发育.促进卵母细胞发育的分子机制可应用于人的体外生长系统并改善生育.     

经阴道超声监测不孕症患者卵泡发育及子宫内膜厚度的意义

目的:应用经阴道超声监测不孕症妇女的卵泡发育及子宫内膜生长情况,根据超声的图像特征判断卵泡的成熟度和是否排卵,并观察子宫内膜与卵泡生长之间的关系。方法:198例不孕妇女,从月经周期第9天开始监测卵泡发育情况,同时记录子宫内膜厚度及形态。结果:根据卵泡发育情况超声图像表现可分为排卵正常型、小卵泡型、卵泡黄体化不破裂型、卵泡生长过度形成囊肿型及无卵泡发育型。各种类型内膜生长均有其特征性表现。结论:经阴道超声监测排卵及子宫内膜厚度对诊断和指导不孕症有重要的意义。     

应用SGBG/PHBV复合材料构建牙本质牙髓复合体样结构的初步研究

目的初步研究溶胶-凝胶生物活性玻璃（SGBG）/聚羟基烷酸酯（PHBV）与猪牙乳头细胞的生物相容性,为构建牙本质牙髓复合体样结构的组织工程支架材料提供选择依据。方法通过体外细胞培养实验和扫描电镜观察细胞在材料表面生长增殖的情况。结果细胞在SGBG/PHBV三维支架上贴附及生长良好。结论 SGBG/PHBV作为支架材料有望应用于牙本质牙髓复合体样结构的组织工程修复。     

组织工程化胆管中平滑肌及内皮细胞的来源及培养研究

目的解决组织工程化胆管的支架材料及细胞来源⑴体外培养人胚动脉平滑肌细胞(VSMCs),并观察人胚VSMCs在乳酸与羟基乙酸共聚物(PLGA)上的三维培养情况。⑵探讨体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)定向分化为肝干细胞的可行性。方法⑴成功培养人胚VSMCs后,将其与PLGA(膜材和三维材料)进行三维培养,通过倒置显微镜、扫描电镜和MTT法观察细胞的生长情况。⑵采用全骨髓培养法体外培养rBMSCs(设实验组及对照组)。应用肝细胞生长因子(HGF)诱导分化,采用倒置相差显微镜观察细胞形态变化,ELISA等方法检测甲胎蛋白,白(清)蛋白及碱性磷酸酶。结果⑴体外培养的人胚VSMCs生长旺盛,与PLGA具有良好的相容性,在PLGA上生长良好。⑵rBMSCs经体外培养诱导后呈多角形、卵圆形改变,白(清)蛋白,AFP表达阳性,碱性磷酸酶出现明显改变。结论⑴体外培养的人胚VSMCs成功培养纯化并与PLGA有良好的相容性,⑵在HGF诱导下,rBMSCs体外具有向肝干细胞分化的能力,为进一步分化为胆管内皮细胞提供实验依据。     

小鼠腔前卵泡体外培养方法的建立

目的建立可供毒理学研究的小鼠腔前卵泡体外培养方法。方法采用机械方法分离出生后12～14天(C57B1/6JxCBA/Ca)小鼠卵巢内直径为100～130μm的腔前卵泡,96孔板单个卵泡连续培养12天后诱导排卵16h,观察卵泡发育、激素分泌和卵子形成,并将体外卵母细胞的成熟情况(IVG)与体内卵母细胞的生长情况(IVM)进行比较,以判断体外培养方法是否成功。结果分离完整卵泡率为89.74%(376/419);培养12天卵泡存活率为96.81%(364/376),有腔形成率为48.94%(184/376);卵泡和卵母细胞直径显著增加。诱导排卵后卵丘细胞-卵母细胞复合体排出率为56.38%(212/376);培养卵泡经历从腔前卵泡到卵母细胞成熟和极体排出的形态学变化,也有部分卵泡不发生腔样结构改变。体外培养卵泡分泌E2和P激素与体内分泌特征一致。IVG组4.61%(10/217)卵母细胞不能恢复成熟[停止在生发泡期(GV期)],76.50%(166/217)停止减数分裂在生发泡破裂期(GVBD期),18.89%(41/217)卵母细胞停止在第2次减数分裂(MII期)(PB);而IVM组1.24%(3/241)的卵母细胞不能恢复成熟(停止在GV期),45.23%(109/241)停止减数分裂在GVBD,53.53%(41/241)卵母细胞停止在MII期(PB);卵母细胞染色体核型完整,无染色体数目和结构异常。结论本研究建立的小鼠腔前卵泡体外培养方法基本成功,可作为卵泡发育生理研究和毒理学研究的模型。     

一株新的卵巢癌细胞系的建立及其生物学特性分析

目的 从人卵巢癌组织建立一株卵巢癌细胞系，为卵巢癌发病机制研究和治疗药物筛选提供可靠的材料。方法 取手术切除的卵巢癌组织，进行组织块培养法，待长满90％汇合面后消化传代培养，并进行形态学、生长动力学及致瘤性等生物学特性分析。结果 该卵巢癌细胞系已在体外培养生存1年以上，传80余代，命名为湖南卵巢癌细胞系1号(HOC1)，其生物学特性显示：这些细胞系体外生长的倍增时间为47．2h；软琼脂集落形成率为18．5％；接种至裸鼠后具100％致瘤性；染色体核型分析为非整倍体，众数为74～92条；透射电镜下可观察到卵巢癌细胞表面含有丰富的微绒毛，胞浆内含有丰富的核糖体。结论 该卵巢癌细胞系经体外长期培养后已形成永生化细胞系，并具有明显的恶性表型特征。     

三维超声在卵泡监测中的应用

目的:探讨三维超声在卵泡监测周期中的实际应用价值。方法:以2015年7月~2017年7月来本院进行卵泡监测的108例患者为研究对象,通过三维超声技术对其实施卵泡监测,统计分析患者不同时点卵泡监测结果。结果:二维与三维超声虚拟球径2种方式测量单卵泡直径的一致性分析结果证实,临床可接受一致性区间d±l0为(-2.57,2.43)mm,95%Lo A的95%CI为(-3.43,3.29)mm,95%Lo A为(-3.11,2.98)mm,差值的均数d=-0.07mm。二维与三维超声平均直径2种方式测量单卵泡直径的测量的一致性分析结果证实,临床可接受一致性区间d±l0为(-3.56,1.44)mm,95%Lo A的95%CI为(-5.21,3.08),95%Lo A为(-4.82,2.70)mm,差值的均数d=-1.06mm。结论:三维超声在卵泡监测中有一定的价值,但是不能夸大其作用,卵泡监测周期内每次都用三维监测比较费时费力,不利于实际操作,如果在近排卵时期用三维超声会有更好的价值。     

胚胎干细胞的培养特性

胚胎干细胞体外生长的环境要求极为苛刻,原则上应满足两个条件:(1)促进细胞的分裂增殖;(2)抑制细胞的分化。不同动物胚胎在体内发育有不同特点,对体外生长的环境要求不同,针对不同动物,应采取相应的策略,才能建立起真正的胚胎干细胞系。     

骨髓间充质干细胞的三维培养

目的：研究三维培养环境下骨髓间充质干细胞的生长情况,探讨骨髓间充质干细胞复合支架构建组织工程软骨的可行性。方法：全骨髓培养法分离骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）,免疫细胞化学测定其细胞表面抗原CD44、CD45,对BMSCs进行鉴定;冻干法制备壳聚糖（Chitosan,CS）支架,扫描电镜观测支架孔径;取BMSCs复合CS支架,通过三维培养观察BMSCs在CS支架上不同时段的生长情况。结果：三维培养环境下骨髓间充质干细胞生长良好,细胞在支架上分泌大量细胞外基质,并与支架黏附良好。结论：骨髓间充质干细胞可作为组织工程的种子细胞,构建组织工程软骨。     

选择性黄体生成激素缺失症体外受精-胚胎移植助孕成功一例报告

正黄体生成激素(LH)对女性发育和生育起重要作用。早卵泡期LH可促进雄激素的合成,增加卵泡募集,促进优势卵泡的选择及调控卵泡发育;在月经中期可促排卵和恢复卵母细胞减数分裂。LH含有2个糖基非共价键的亚基,分别是激素特有的β亚基及所有糖蛋白激素共有的α亚基。LH亚基基因     

人未成熟卵母细胞体外成熟影响因素的探讨

随着阴道B超、胞浆内单精子注射(ICSI)技术的开展,未成熟卵母细胞体外成熟培养(IVM)已成为治疗不孕症的一种经济有效的新途径。向IVM培养系统添加促性腺激素、卵泡液、表皮生长因子、血管内皮生长因子、抑制素/激活素、人绒毛膜促性腺激素以及共培养系统有助于卵母细胞体外成熟。根据卵母细胞所处发育阶段选择不同的培养系统,探索卵母细胞的生长和成熟是未来的重要研究方向。     

生长分化因子-9和卵母细胞体外成熟培养

人卵母细胞体外成熟培养(IVM)在辅助生殖技术中逐渐显示出重要的临床价值。但胚胎发育潜能差,妊娠率低,阻碍了其在临床上的广泛应用。某些细胞因子可能是卵母细胞体外培养的新研究途径,为研究生长分化因子-9(QDF-9)的现状及其在IVM中的作用,参考国内外近年来的研究,发现GDF-9能促进卵母细胞的正常生长及减数分裂,促进初级卵泡颗粒细胞继续生长、增殖,对卵泡的生长和分化起着重要作用,可能是卵母细胞体外培养研究的新途径。     

人未成熟卵母细胞体外成熟影响因素的探讨

随着阴道B超、胞浆内单精子注射(ICSI)技术的开展,未成熟卵母细胞体外成熟培养(IVM)已成为治疗不孕症的一种经济有效的新途径.向IVM培养系统添加促性腺激素、卵泡液、表皮生长因子、血管内皮生长因子、抑制素/激活索、人绒毛膜促性腺激素以及共培养系统有助于卵母细胞体外成熟.根据卵母细胞所处发育阶段选择不同的培养系统,探索卵母细胞的生长和成熟是未来的重要研究方向.     

卵巢内激活素/抑制素系统与卵泡发育

卵巢内激活素(activin,ACT)/抑制素(inhibin,INH)系统主要由ACT、INH和与ACT和INH调节有关的因子,如卵泡抑素(follistatin,FS)、Smads等组成。综述ACT/INH系统在卵泡生长、卵泡选择和排卵方面的作用和机制以及其异常调节与多囊卵巢综合征(PCOS)的关系,以提示卵巢局部调节因子ACT/INH系统在卵泡发育中的作用。     

生长分化因子-9和卵母细胞体外成熟培养

人卵母细胞体外成熟培养(IVM)在辅助生殖技术中逐渐显示出重要的临床价值.但胚胎发育潜能差,妊娠率低,阻碍了其在临床上的广泛应用.某些细胞因子可能是卵母细胞体外培养的新研究途径,为研究生长分化因子-9(QDF-9)的现状及其在IVM中的作用,参考国内外近年来的研究,发现GDF-9能促进卵母细胞的正常生长及减数分裂,促进初级卵泡颗粒细胞继续生长、增殖,对卵泡的生长和分化起着重要作用,可能是卵母细胞体外培养研究的新途径.     

体外窦前卵泡添加微量FSH促卵泡发育及卵母细胞成熟效果显著

体内窦前卵泡是非促卵泡成熟激素(FSH)依赖性的，不同的FSH受体(FSH—R)却在此期的颗粒细胞表达；窦状卵泡是FSH依赖性的，窦形成早期FSH促进颗粒细胞增生，激活芳香化酶，诱导颗粒细胞LH—R表达，从而形成卵泡生长必需的微环境。文献显示，添加FSH和LH是体外培养卵母细胞核成熟的重要保证，且维持卵泡发育的重组FSH(rFSH)最小有效剂量是10IU／L。本研究于体外培养窦前卵泡7个不同时间添加rFSH，探索最佳rFSH调控时间域，获取高质量卵泡和成熟卵母细胞。