Rb基因突变及其检测

随着ＤＮＡ重组技术的发展，使得克隆致病基因，分析检测基因突变进展很快。从ＤＮＡ序列改变的角度来年地，突变不外乎单核苷酸的取代和ＤＮＡ片断的插入或缺失两大类型，而所产生的后果则取决于其发生的位置和性质，只要影响了基因表达过程的任何一个环节，都会导致遗传性疾病。     

10遗传型视网膜母细胞瘤肿瘤Rb基因突变分析

１０例遗传型视网膜母细胞瘤肿瘤组织Ｒｂ基因突变分析张清炯箕田健生曾瑞萍吴中耀遗传性视网膜母细胞瘤（ｒｅｔｎｏｂｌａｓｔｏｍａ，ＲＢ）是由Ｒｂ基因两次突变而失活所致，第一次突变为生殖细胞性突变，第二次突变为体细胞性突变。生殖细胞性突变决定携带者患ＲＢ的...     

双眼视网膜母细胞瘤Rb基因缺失研究

利用Ｒｂ基因ＣＡＤ探针，采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ方法，检测５例双眼视网膜母细胞瘤患者及家系中相关人员共１９例外周血白细胞ＤＮＡ。２例患者体细胞出现Ｒｂ基因半合缺失，其中１例Ｒｂ基因半合缺失来自亲代生殖细胞，另１例Ｒｂ基因半合缺失可能发生于配子形成期。这一结果为以分子水平为基因的“二次突变论”提供了依据，并表明此方法在临床上有推广应用价值。文中还讨论了第二恶性肿瘤问题。     

视网膜母细胞瘤细胞系SO—Rb50瘤细胞Rb基因突变动态变化研究

目的：研究SO－Rb50细胞系瘤细胞Rb基因突变的动态变化。方法：1．用Southern blot杂交法分析SO－Rb50细胞系第327代瘤细胞DNA。2．用PCR－SSCP法对SO－Rb50细胞系第415代及第713代瘤细胞的Rb基因27个外显子和1个启动子逐个筛查。3．将SO－Rb50细胞系的第775代克隆出3个细胞株：MC2、MC3及MC4。用PCR－SSCP－HA法对MC2、MC3及MC4第11代细胞和MC3第138代细胞的Rb基因的27个外显子逐个筛查。结果：SO－Rb50细胞系第327代细胞DNA缺失3．5Kb、2.9Kb及1.0Kb的三条带,证明SO－Rb50细胞系瘤细胞Rb基因缺失。第415代瘤细胞Rb基因第23外显子少一条单链;第713代第25外显子发生新的突变。SO－Rb50细胞系第775代的3个克隆株MC2、MC3及MC4的第11代细胞,只有MC4第24外显子突变;而MC3第138代第24外显子突变,提示MC3经多次传代后第24外显子发生新突变。结论：SO－Rb50细胞系在长期培养传代过程中,瘤细胞的Rb基因突变有动态变化。     

视网膜母细胞瘤基因（Rb基因）的作用机制

Ｒｂ基因是与视网膜母细胞瘤发生有关的基因，是人类克隆成功的第一个抗癌基因。Ｒｂ基因具有抑制肿瘤细胞的生长及肿瘤性的抗癌作用。Ｒｂ基因的这种抗癌性主要与Ｒｂ蛋白的蛋白结合功能、Ｒｂ蛋白对多种与细胞增殖有关的基因转录的影响，以及由此导致的细胞周期在Ｇ１期停滞有关。Ｒｂ基因的功能还受到各种细胞机制的调节，特别是Ｒｂ蛋白细胞周期性的磷酸化和脱磷酸化对Ｒｂ蛋白功能的调节最为重要。     

三个Rb基因突变嵌合体家系分子遗传学分析

目的：遗传型RB是一种单基因疾病，由定位在13q14的Rb基因突变所致。大多数遗传性RB表现出典型的孟德尔常染色体显性遗传特征。作者分析三个遗传性RB家系RB外显不全及表型传递规律变异的原因。 方法：RELPs和VNTRs作单体型分析，SSCP及直接DNA序列分析检测Rb基因点突变。 结果：Rb基因突充嵌合体是造成某些Rb基因突变携带者不发病以及家庭成员中RB表型遗传不符合孟德尔规则的重要原因之一。结论：直接检测致病性的Rb基因突变才能准确判断携带者，估计患病风险。 （中华眼底病杂志，1996，12：37-40）     

Rb基因扩增与视网膜母细胞瘤发生的关系初步探讨

在对视网膜母细胞瘤病人的Rb 基因存在状态进行检测时,发现一例患者体细胞Rb 基因有明显扩增改变。Rb 基因在视网膜母细胞瘤患者中的扩增改变,为首次报导,是否意味着Rb 基因扩增与肿瘤发生有着某种关联。     

运用PCR－VNTR技术结合银染色检测Rb基因的缺失

运用ＰＣＲ－ＶＮＴＲ技术结合银染色对视网膜母细胞瘤、肝癌组织Ｒｂ基因进行了检测，发现９例视网膜母细胞瘤组织中有４例（４４．４％），４２例肝癌组织中有８例（１９．０４％）存在Ｒｂ基因的缺失。认为ＰＣＲ－ＶＮＴＲ技术结合银染色是一种快速灵敏检出Ｒｂ基因缺失的方法，适于在临床运用。     

视网膜母细胞瘤易感基因（Rb基因）抑制人肝癌细胞的生长

利用流式细胞学检查及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ、Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交技术对中国人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１进行分析，发现该细胞ＤＮＡ指数为０．８ｌ，为亚倍体细胞。该细胞Ｒｂ基因的５′端存在内部缺失，Ｒｂ基因失活，没有Ｒｂ蛋白产生。将正常人ＲｂｃＤＮＡ正向插入逆转录病毒载体ＤＯＬ，得到重组逆转录病毒载体ＤＯＬＲＢ。用电穿孔转染技术把ＤＯＬＲＢ转入ＳＭＭＣ７７２１细胞，发现Ｒｂ基因导致约７５％的肝癌细胞死亡，另外２５％的肝癌细胞则因外源性Ｒｂ基因突变失活而继续存活。     

单眼散发性视网膜母细胞瘤Rb基因缺失的研究

对12例单眼散发性视网膜母细胞瘤患者进行了Rb基因存在状态的检测,其中3例Rb基因剂量低于正常对照、2例有异常大小DNA片段出现、2例DNA片段部分缺失,并且1例体细胞Rb基因有扩增改变,这种改变为首次报导。     

Rb基因诱导视网膜母细胞瘤移植瘤细胞凋亡的实验研究

目的观察外源性Ｒｂ基因对视网膜母细胞瘤（ＲＢ）细胞凋亡的影响。方法建立裸鼠眼玻璃体腔ＲＢ移植瘤模型及构建Ｒｂ基因的逆转录病毒表达载体Ｐｂａｂｅ－Ｒｂ，用脂质体Ｄｏｓｐｅｒ介导法将Ｒｂ基因导入裸鼠ＲＢ移植瘤，采用流式细胞术（ＦＣＭ），光镜、电镜及ＴＵＮＥＬ细胞凋亡原位末端标记法进行ＲＢ细胞凋亡的检测。结果Ｒｂ基因在ＲＢ移植瘤内表达至少持续７天。ＦＣＭ检测发现在Ｒｂ基因转染后第４天，各实验组治疗眼ＲＢ中均可检测到凋亡细胞峰，凋亡细胞百分率高于对照眼；第２０天，各实验组治疗眼细胞凋亡百分率与对照眼比无差异（Ｐ＞０．０５）。透射电镜下可见到典型的早期凋亡细胞及晚期凋亡小体形成。ＴＵＮＥＬ方法可在荧光显微镜下见到发黄绿色荧光的凋亡细胞，光镜下可见到紫红色的被标记的凋亡细胞。结论Ｒｂ基因可诱导ＲＢ移植瘤细胞凋亡，这可能是Ｒｂ基因体内抗癌的又一作用机制。     

Genetic Predisposition to Retinoblastoma (Rb)

Determination of 8 cytogenetic indicators in 14 cases of Rb,their 21 parents and 14 normal controls revealed various degrees ofchromosome instability and nondisjunction in the patients and their parents,indicating the presence of genetic neoplastic predisposition to neoplasm inRb patients.Eye Science 1993;9:149-152.     

陕西省两个原发性开角型青光眼家系MYOC基因突变的研究

目的:研究陕西省两个原发性开角型青光眼家系MYOC基因突变情况。方法:分析陕西省两个原发性开角型青光眼家系。从先证者、家族成员及正常对照者外周静脉血中提取基因组DNA;根据MYOC基因编码序列合成7对特异性引物;应用PCR扩增MYOC基因3个外显子序列,DNA测序法双向测序筛选突变位点。结果:家系1中并未发现MYOC基因编码序列的突变位点;家系2中三个患者MYOC基因均存在异常(c.1021T>C杂合突变),导致myocilin蛋白第341位氨基酸由丝氨酸(S)转变为脯氨酸(P)即Ser341Pro错义突变,该家系正常成员及100例对照者中均未发现此突变。结论:MYOC基因Ser341Pro突变可能为家系2原发性开角型青光眼的致病原因。     

Rb1基因第16内含子内21个碱基缺失1例

目地研究双眼视网膜母细胞瘤患者Rb1基因杂合性突变的分子生物学特性。方法应用PCR—SSCP直接测序技术检测双眼视网膜母细胞瘤患者白细胞DNA中Rb1基因杂合性突变。结果50例证实有Rb1基因杂合性突变的病例中有1例发生于第16内含子中可以用3种定位方法解释、具有相同序列的21个碱基缺失。结论这种极为少见的Rb1基因突变方式可能是由于破坏了正常拼接位点的结构而激活了“隐蔽拼接位点”，导致异常的Rb1基因mRNA产生或由此影响整个拼接过程。     

Preliminary Report of Molecular Detection of Retinoblastoma Gene Mutations

To develop gene diagnosis for retinoblastoma predisposition, it is necessary to disclose the retinoblastoma gene mutations or deletions in detail. Genomic DNA from tumor and peripheral white blood cells in 33 patients with retinoblastoma was detected with 3.8kb probe derived from 3‘ end of retinoblastoma gene cDNA. The gene abnormalities, including deletion, partial deletion and rearrangement, were found in 18 patients. Further research will be aimed at microdeletions or mutations for those patients wti...