扇贝多肽抑制紫外线A波诱导的HaCaT细胞凋亡依赖p38 MAPK通路和caspase-3

 目的从p38促细胞分裂剂激活性蛋白激酶(p38 MAPK)通路和半胱天冬酶-3(caspase-3)的角度,研究扇贝多肽(poly-peptide from Chlamys farreri,PCF)抑制紫外线A波(UVA)引起的HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法实验分为6组:对照组、UVA模型组、UVA+5.68mmol·L^-1维生素C阳性对照组、UVA+5.69mmol·L^-1PCF组、UVA+2.84mmol·L^-1 PCF组、UVA+1.42mmol·L^-1 PCF组。以正交实验设计确立UVA诱导HaCaT细胞凋亡模型;琼脂糖凝胶电泳分析PCF、p38MAPK抑制剂(SB203580)及caspase-3特异性抑制剂(Ac-DEVD-CHO)对细胞凋亡的影响;蛋白质印迹法检测p38MAPK及磷酸化p38MAPK表达;流式细胞术检测caspase-3的活性。结果PCF能明显抑制UVA引起的HaCaT细胞凋亡;SB203580和Ac-DEVD-CHO对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡有抑制作用;1.42～5.69mmol·L^-1内的PCF可剂量依赖性抑制UVA引起的p38MAPK磷酸化及caspase-3的活化。结论PCF可抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制p38MAPK通路和caspase-3活性有关。     

姜黄素对UVB辐射诱导HaCaT细胞凋亡的抑制作用

目的:建立中波紫外线(UVB)对体外培养的永生化人角质形成细胞(HaCaT细胞)辐射损伤病理模型,探讨姜黄素(Cur)对其细胞辐射损伤的保护作用。方法:以10、20、30、40和50m J/cm2的UVB辐照其细胞,分别在辐照后6、12、18、24、48和72h,用MTT和流式细胞仪检测细胞活性及其凋亡的变化,建立辐照损伤病理模型;用30m J/cm2的剂量辐照其细胞后,立即分别给予0.625、1.25、2.5和5μg/mL的Cur处理,在处理18h后检测其细胞凋亡。结果:HaCaT细胞经UVB辐照后,以剂量和时间依赖方式抑制其细胞存活,且主要由于细胞凋亡引起;Cur以浓度依赖方式抑制由UVB所致的细胞凋亡。结论:Cur能抑制UVB辐射诱导的HaCaT细胞凋亡,对UVB辐射损伤HaCaT细胞具有保护作用,其作用机制可能与Cur清除体内自由基而增强细胞的抗氧化能力有关。     

延龄草诱导人结肠癌RKO细胞凋亡的作用机制研究

目的:探讨延龄草诱导结肠癌RKO细胞凋亡的作用机制。方法:以人结肠癌RKO细胞株为模型,通过MTT实验检测延龄草不同提取部位对RKO细胞的细胞毒性;以流式细胞术及光比色法检测延龄草乙酸乙酯部位对RKO细胞线粒体膜电位及Caspase9和Caspase3活性的影响。结果:延龄草乙酸乙酯部位(EE-TM)对RKO细胞增殖抑制作用最显著(P<0.01),干预24、48及72 h后的IC50值依次为52.64、22.56及18.39μg/mL;EE-TM干预12 h后可以导致RKO细胞线粒体膜电位下降(P<0.01),干预24 h及48 h后可以导致RKO细胞内Caspase9及Caspase3的活性增强(P<0.01)。结论:延龄草具有体外抗结肠癌活性,作用机制可能是通过线粒体通路介导细胞走向凋亡。     

甘草酸抑制UVB诱导HaCaT细胞凋亡的机制研究

目的:研究甘草酸抑制中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞(Ha Ca T)凋亡的机制。方法:以不同浓度的甘草酸作用于人皮肤角质形成细胞(Ha Ca T细胞),噻唑蓝比色(MTT)法筛选药物的有效安全浓度;用30 mJ/cm~2的UVB照射Ha Ca T细胞,制备光老化模型,MTT法检测细胞增殖率;流式细胞仪检测各组细胞总凋亡率;实时定量PCR(RT-PCR)法检测Bax、Bcl-2 m RNA表达水平变化;Western Blot法检测各组细胞上清中Bax、Bcl-2蛋白表达量。结果:1×10~(-7)、1×10~(-6)、1×10~(-5)mol/L甘草酸为最佳有效安全浓度。与空白组比较,UVB组细胞增殖率显著降低(P0.01);细胞总凋亡率显著显著升高(P0.01);Bax m RNA表达水平显著升高,Bcl-2m RNA表达水平显著降低(P0.01);Bax蛋白表达量升高,Bcl-2蛋白表达量显著降低(P0.01)。与UVB组比较,1×10~(-7)、1×10~(-6)、1×10~(-5)mol/L甘草酸+UVB组细胞增殖率显著升高(P0.01);细胞总凋亡率显著降低(P0.01);Bax m RNA表达水平显著降低,Bcl-2 m RNA表达水平显著升高(P0.01,P0.05);Bax蛋白表达量显著降低,Bcl-2蛋白表达量显著升高(P0.01,P0.05)。结论:甘草酸能抑制UVB诱导的Ha Ca T细胞凋亡,其机制与其下调促凋亡基因Bax m RNA和蛋白的表达,上调抑凋亡基因Bcl-2 m RNA和蛋白的表达有关。     

广西虎纹捕鸟蛛毒诱导U251胶质瘤细胞凋亡 及Caspase-3的激活

目的:探讨虎纹捕鸟蛛毒抑制体外脑胶质瘤细胞系U251生长并诱导其凋亡,激活半胱天冬酶-3(Caspase-3)的作用。方法:将U251细胞分为3组:空白组、顺铂组、加药组(虎纹捕鸟蛛毒素浓度为37.5,50,75,100,150 mg·L-1),毒素作用24,48 h后用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活性并与顺铂组、空白组做对比;流式细胞仪AnnexinV-FITC检测细胞凋亡率;Caspase-3分光光度法检测Caspase-3的相对活性。结果:虎纹捕鸟蛛毒素剂量为37.5,50,75,100,150 mg·L-1时,对U251细胞的增殖有显著性抑制作用(P<0.05或P<0.01),IC50为53.48 mg·L-1。虎纹捕鸟蛛毒素可诱导U251胶质瘤细胞凋亡并呈浓度依赖关系。在剂量为150 mg·L-1诱导48 h,细胞早期凋亡率84.1%,晚期凋亡率4.48%。用不同浓度分别处理细胞,Caspase-3活性于48 h,150 mg·L-1时达高峰,对细胞中的执行分子Caspase-3的激活速度快,活化程度为9.23,并存在剂量依赖关系和浓度依赖性的升高。结论:虎纹捕鸟蛛毒素明显抑制U251细胞生长并诱导其发生凋亡,凋亡过程中有Caspase-3的激活。     

组织型转谷氨酰胺酶、核酸内切酶和半胱天冬酶在细胞凋亡中的作用研究

细胞凋亡（apoptosis）在生物体进化、内环境稳定以及系统的发育过程中起着重要的作用。细胞凋亡受基因的严格控制,具有复杂的分子生物学机制,是一种特殊的细胞死亡类型。在细胞凋亡发生发展的每一个环节都离不开酶的作用。因此,研究酶学变化是细胞凋亡研究领域的重要部分,本文就组织型转谷氨酰胺酶、核酸内切酶和半胱天冬酶对细胞凋亡的作用的最新研究进展作一综述。     

调心方对β淀粉样蛋白所致大鼠海马神经元凋亡的调控作用

目的 探讨调心方的药效及作用机制。方法 原代培养大鼠海马神经元,Aβ 1-42诱导神经细胞毒模型。采用FDA与PI双染检测神经元存活率,Hoechst 33258染色、TUNEL判断神经元凋亡,免疫细胞化学研究Caspase-3表达,Northern Blot、RT-PCR研究凋亡相关基因(bcl-2、bax、c-jun、c-fos)表达。结果 神经元经Aβ 1-42处理后,活细胞数减少,染色质浓缩、核碎裂,TUNEL染色阳性神经元增多,Caspase3表达增加,bcl-2 mRNA表达减少,而bax与c-jun表达增加、c-fos的表达变化不明显。调心方可显著改善上述变化。结论 调心方对Aβ 1-42神经细胞毒有保护作用,可提高细胞存活率,抑制凋亡。其机制可能通过提高bcl-2 mRAN水平,降低bax和c-jun mRAN水平,减少Caspase-3表达而实现。     

藤梨根对RKO结肠癌细胞失巢凋亡的作用

目的:观察藤梨根对人结肠癌RKO细胞悬浮生长及失巢凋亡作用.方法:200～800 mg·L-1藤梨根作用于RKO细胞,CCK-8(CCK-8)法检测藤梨根对RKO细胞悬浮生长作用,双嵌入剂乙锭均二聚物(EthD-1)染色检测失巢凋亡,比色法检测半胱天冬酶-3(caspase-3)活性,2-7-二氯氢化荧光素乙二脂染色法结合荧光酶标仪检测细胞内活性氧的产生.结果:200 ～800 mg·L-1藤梨根可显著抑制RKO悬浮生长,呈剂量依赖性(P＜0.01).200 ～800 mg·L-1藤梨根作用后悬浮生长RKO细胞吸收EthD-1散发红色荧光,部分细胞可见核碎裂,呈现凋亡形态改变;藤梨根组EthD-1荧光吸光度与对照组比较差异显著(P＜0.01).终质量浓度200 ～800 mg·L-1藤梨根可显著增强RKO细胞caspase-3活性以及细胞内活性氧的产生(P＜0.01).结论:藤梨根可抑制RKO细胞悬浮生长,促使RKO细胞发生失巢凋亡,可能与活化caspase-3以及升高细胞内活性氧水平相关.     

荷包牡丹碱诱导人肺腺癌细胞A549凋亡及其机制初探

 目的 探讨荷包牡丹碱对人肺腺癌细胞A549的增殖抑制作用并对其作用机制进行研究。方法 MTT比色法检测荷包牡丹碱在不同浓度及不同时间对人肺癌细胞A549的增殖抑制作用。利用TUNEL法探讨荷包牡丹碱诱导人肺腺癌细胞A549的凋亡效果;流式细胞术（FMC）测定荷包牡丹碱对A549肿瘤细胞周期的分布;比色法测定荷包牡丹碱对半胱天冬酶（caspase）-3蛋白活性的影响。结果 荷包牡丹碱对人肺腺癌细胞A549增殖抑制作用随着药物浓度的升高和作用时间的延长而增强;荷包牡丹碱对A549肿瘤细胞具有明显的凋亡效应;荷包牡丹碱与A549肿瘤细胞作用后,发生S期阻滞（P<0.05);荷包牡丹碱促使caspase-3蛋白活化(P<0.05)。结论 荷包牡丹碱能有效抑制人肺腺癌细胞A549的生长,使细胞周期阻滞在S期,进一步诱导其凋亡,并使caspase-3蛋白活化。caspase-3蛋白的激活可能在荷包牡丹碱诱导A549细胞凋亡过程中起重要作用。     

小半夏加茯苓方含药血清抑制HepG2细胞增殖及促进凋亡

目的:采用血清药理学的方法,观察小半夏茯苓方对肝癌HepG2细胞增殖的影响,初步探索该方诱导肝癌细胞凋亡相关因子表达的影响。方法:制备含药血清,正常实验用动物Wistar大鼠,采用灌胃或腹腔注射给药途径,连续给药3 d,其中,正常对照组,灌服生理盐水;环磷酰胺(CTX)组,腹腔注射CTX;原方汤剂组,灌服小半夏加茯苓汤;原方汤剂加CTX组,灌服小半夏加茯苓汤的同时腹腔注射CTX;颗粒剂高中剂量组,灌服相当于小半夏加茯苓汤等量、二倍量的颗粒剂,末次给药后12 h,腹主静脉取血,制备含药血清,刺激体外培养的HepG2肝癌细胞,采用MTT法检测其对细胞增殖抑制的影响,流式细胞术检测其对各时相细胞周期分布,免疫组织化学的方法观察其对凋亡相关蛋白半胱天冬酶-3(caspase-3)、半胱天冬酶-9(caspase-9)的影响。结果:小半夏加茯苓方能抑制人肝癌HepG2细胞的生长,在作用24 h时效果最明显。流式检测结果显示,药物作用细胞24 h,小半夏加茯苓方阻滞细胞于S期,环磷酰胺将细胞阻滞于G2期。小半夏加茯苓方作用24 h能诱导HepG2细胞的凋亡,caspase-3表达与药物的剂量呈正相关。结论:小半夏加茯苓方可能通过激活caspase-3蛋白表达,从而诱导肝癌细胞凋亡,阻滞细胞周期于S期,有效抑制细胞增殖,发挥抗肿瘤的作用。     

龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的线粒体通路研究

 目的观察龙葵碱诱导HepG₂细胞凋亡与线粒体通路的关系。方法MTT法测定龙葵碱对HepG₂细胞的细胞毒作用;AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微镜观察龙葵碱对HepG₂细胞形态学的影响;TMRE和Fluo-3/AM双染,激光共聚焦扫描显微镜同时观察细胞线粒体膜电位和细胞内[Ca²⁺]_i的变化。结果龙葵碱对HepG₂细胞有细胞毒作用;龙葵碱诱导HepG₂细胞形态出现凋亡形态时TMRE和Fluo-3/AM双染观察表明,龙葵碱在降低线粒体膜电位的同时能够升高细胞内[Ca²⁺]_i浓度。结论龙葵碱降低膜电位,开放细胞膜PT通道,使细胞内Ca²⁺顺浓度梯度转运,从而升高细胞内Ca²⁺浓度启动细胞凋亡机制。     

女贞子的化学成分研究

 目的 研究木犀科药用植物女贞子（Ligustrum lucidum的化学成分。 方法 用溶剂提取、萃取、硅胶正相柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱及结晶法进行化学成分的分离纯化,通过理化性质和波谱分析鉴定结构。 结果 从女贞子中分离鉴定了9个化合物,结构分别为3-O-cis-P-coumaroyl maslinic acid(1,oleoside 11-methyl ester(2,oleonuezhenide(3,G 13(4,oleoside dimethyl ester(5,nuezhenide(6,oleuropein(7,3,4-dihydroxyphenethyl-β-D-glucoside(8和3,4-dihydroxyphenethyl-(6′-caffeoyl-β-D-glucoside(9。 结论 化合物1为首次从该属植物中分离得到,化合物2～4,8,9为首次从该植物中分离得到。     

左旋奥硝唑剂量递增人体耐受性及药动学研究

 目的 研究中国健康志愿者静脉滴注左旋奥硝唑剂量递增的耐受性、安全性及药动学。方法 20名健康男性、20名健康女性受试者按体重分层随机分入4组,分别接受500,1 000,1 250,1 500 mg单次用药试验;单次用药试验结束清洗2周后,500 mg剂量组再次接受每天早、晚500 mg连续5 d的多次用药试验;1 000 mg剂量组再次接受1 000 mg奥硝唑（阳性对照比较不良反应的单次用药试验。观察不良事件,HPLC测定血浆中左旋奥硝唑浓度,BPSS2.0计算主要药动学参数。结果 单次静脉滴注左旋奥硝唑500,1 000,1 250,1 500 mg的不良反应为0/9,0/10,0/10,2/10;多次静脉滴注左旋奥硝唑500 mg的不良反应为3/10;单次静脉滴注消旋奥硝唑1 000 mg的不良反应为5/10。单次用药500,1 000,1 500 mg,多次用药500 mg的ρmax分别是（8.63±2.57,（18.6±4.08,（27.5±10.6,（23.4±4.67 mg·L-1;AUC_0-60分别为（109.5±24.0,（293.1±69.9,（422.9±84.0,（412.3±99.4 mg·h·L-1。结论 中国健康志愿者静脉滴注左旋奥硝唑500~1 500 mg单剂量,500 mg多剂量是安全,能够耐受的;500~1 500 mg内呈线性药动学特征,多次用药后体内有一定蓄积。     

杭白菊中黄酮类化合物及其抑制人源肿瘤细胞增殖活性的研究

 目的 分离和鉴定杭白菊中黄酮类化合物并对其进行抗肿瘤活性研究。方法 利用系统溶剂萃取法、聚酰胺柱色谱、半制备型高效液相色谱法分离。通过理化性质和IR、UV、MS、¹H-NMR、¹³C-NMR等光谱数据鉴定化合物。采用MTT法测定化合物对人肿瘤细胞增殖的影响, 并以氟尿嘧啶（5-FU）作为阳性对照,比较其对正常细胞的毒性作用。流式细胞术检测细胞周期分布的改变。结果 分离得到8个黄酮化合物单体,分别鉴定为木犀草素(Ⅰ),木犀草素7-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅱ),木犀草素7-O-β-D (6″-O-丙二酸单酰) -葡萄糖苷(Ⅲ),芹菜素(Ⅳ),芹菜素 7-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅴ),芹菜素 7-O-β-D-(6″-O-丙二酸单酰)-葡萄糖苷(Ⅵ),香叶木素(Ⅶ),香叶木素 7-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅷ)。MTT法测定木犀草素抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞 和肝癌SMMC-7721细胞的IC₅₀分别为56.67和72.92 μmol·L^-1。结论 化合物Ⅲ和Ⅵ首次从杭白菊中分离得到。木犀草素能抑制MDA-MB-231和SMMC-7721增殖,阻滞其细胞周期于G2/M期,且对正常细胞无毒性。     

路边青配伍穿心莲对脱水穿心莲内酯的小鼠血液药动学影响

 目的研究路边青与穿心莲配伍使用对脱水穿心莲内酯(DAP)的小鼠血液药动学性质的影响。方法小鼠灌胃穿心莲总内酯干浸膏和复方穿心莲干浸膏药液后于不同时间点取血,血样经前处理后用反相高效液相色谱分离、测定脱水穿心莲内酯含量,采用3P97药动学软件对数据进行处理。结果小鼠灌胃穿心莲总内酯干浸膏和复方穿心莲片干浸膏后,脱水穿心莲内酯的血药浓度动态变化规律均符合一室开放模型。路边青与穿心莲配伍使用可导致脱水穿心莲内酯的吸收慢、消除快、生物利用度低。结论穿心莲与路边青配伍使用是否科学,值得深入研究。     

千里香中多甲氧基黄酮类成分

 目的 研究千里香叶及其嫩枝中多甲氧基黄酮类成分。方法 利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱等方法对千里香提取物的乙酸乙酯萃取部分进行分离纯化,通过现代谱学方法及其理化性质鉴定其化学结构。结果 从千里香叶及其嫩枝中分离鉴定了7个多甲氧基黄酮类化合物,分别为：5,3′-二羟基-6,7,4′,5′-四甲氧基黄酮（1）,5, 4′-二羟基-7, 3′-二甲氧基黄酮（2）,5-羟基-7, 3′, 4′-三甲氧基黄酮（3）,(2S)-5, 6, 7, 3′, 4′-五甲氧基二氢黄酮（4）,5, 6, 7, 8, 3′, 4′, 5′-七甲氧基黄酮（5）,5-羟基-6, 7, 3′, 4′-四甲氧基黄酮（6）,(2S)-5, 6, 7, 3′, 4′, 5′-六甲氧基二氢黄酮(7)。结论 化合物1~7均为首次从该属植物中分离得到。     

绣球花的化学成分研究

 目的 研究虎耳草科植物绣球花［Hydrangea macrophylla(Thunb. Seringe］的化学成分。方法 利用Diaion HP-20, Toyopearl HW-40, 硅胶等柱色谱技术进行分离纯化, 根据化合物的光谱数据和理化性质鉴定结构。结果 分离并鉴定了12个化合物的结构, 即甲基-β-芸香糖苷(Ⅰ, 龙胆酸(Ⅱ, 邻苯二酚(Ⅲ, 8-表番木鳖酸(Ⅳ, caryoptoside(Ⅴ, 槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅵ, 山柰酚-3-O-β-芸香糖苷(Ⅶ, 5,4′-二羟基山柰酚-7-O-β-芸香糖苷(Ⅷ, 山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅸ, 1,2,4-苯三酚(Ⅹ, 7-羟基香豆素(Ⅺ, 芦丁(Ⅻ。结论 化合物Ⅰ~Ⅹ为首次从该植物中分离得到。     

镰形棘豆的化学成分研究(Ⅰ)

 目的对藏药镰形棘豆的石油醚和氯仿萃取部分的化学成分进行研究。方法使用硅胶柱色谱对这两个部分的化学成分进行分离和纯化,通过理化方法、MS和NMR对化合物进行鉴定。结果从镰形棘豆的石油醚部分分离得到3个化合物,经鉴定分别为正二十九烷(n-nonacosane,Ⅰ)、花生酸(eicosanoic acid,Ⅱ)和β-谷甾醇(β-sitosterol,Ⅲ);从氯仿部分分离得到6个化合物,经鉴定分别为5-羟基-7-甲氧基二氢黄酮(pinostrobin,Ⅳ)、2′,4′-二羟基二氢查尔酮(2′,4′-dihydroxy dihydroch- alcone,Ⅴ)、2′,4′-二羟基查尔酮(2′,4′-dihydroxy chalcone,Ⅵ)、5,7-二羟基二氢黄酮(pinocembrin,Ⅶ)、豆甾醇(stigmasterol,Ⅷ)和2′-羟基-4′-甲氧基查尔酮(2′-hydroxy-4′-methoxy chalcone,Ⅸ)。结论化合物Ⅰ,Ⅷ为首次从该植物中分离得到;化合物Ⅱ,Ⅳ,Ⅶ为首次从棘豆属中分离得到。     

露水草中的植物甾醇

 目的研究植物露水草中的化学成分。方法利用多种柱色谱进行分离提纯,通过理化常数和光谱数据确定化合物的结构。结果从中得到2个植物甾醇类化合物;分别为5α-胆甾-7-烯-3β,22ξ-二醇(Ⅰ),5α-胆甾-7-烯-22ξ-醇-3-棕榈酸酯(Ⅱ)。结论化合物Ⅰ为一新天然产物,Ⅱ为一新化合物。