缺血后处理通过mdm2-p53负反馈通路减轻大鼠缺血再灌注损伤后的氧化应激反应

目的观察和探讨缺血后处理(Ischemic post-conditioning,IPC)对大鼠脊髓缺血再灌注损伤(Spinal cord ischemia reperfusion injury,SCIRI)后氧化应激反应的影响及机制。方法 60只SD大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)和缺血后处理组(IPC组)。Sham组:仅暴露主动脉弓不夹闭;IR组:直视下主动脉弓夹闭14 min后去除动脉夹以模拟SCIRI;IPC组:SCIRI损伤,于再灌注5 min后给予5个循环缺血后处理。SCIRI后48 h内每12 h采用BBB法评价大鼠后肢运动和反射功能;取L_(4-6)节段脊髓测定组织中MDA和SOD的含量;Western blot法测定脊髓组织中p53和mdm2的蛋白含量。结果与Sham组比较,IR组大鼠BBB评分降低,后肢运动和反射能力明显下降;与IR组比较,IPC组上述指标有明显改善(P<0.05)。与Sham组比较,IR组大鼠MDA明显升高,SOD明显下降;与IR组比较,IPC组MDA明显下降,SOD明显升高(P<0.05)。与Sham组比较,IR组大鼠mdm2明显下降,MDA明显升高;与IR组比较,IPC组mdm2明显升高,p53明显下降(P<0.05)。上述变化在术后24 h变化最为显著。结论缺血后处理通过激活脊髓组织中mdm2-p53负反馈通路,增加脊髓组织中SOD含量、减少MDA含量,从而发挥抗氧化应激的神经保护作用。     

缺血预处理对缺血-再灌注大鼠肾脏缝隙连接蛋白43表达的影响

目的 研究缺血预处理对缺血-再灌注大鼠肾脏缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响,探讨Cx43在缺血-再灌注中的作用及其意义.方法 SD大鼠30只分3组:假手术Sham组、缺血-再灌注(I-R)组、缺血预处理(IPC)组.于再灌注2 h后检测肾组织匀浆一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)水平;肾组织切片HE染色行中性粒细胞(PMN)计数及Paller评分,量化肾损害程度;Western blot定量分析Cx43蛋白在肾组织中的表达.结果 IPC组肾组织中NO、总NOS(TNOS)、诱导型NOS(INOS)水平明显高于IR组;IPC组PMN计数及Paller评分明显低于IR组;IPC组Cx43蛋白表达明显高于IR组,IR组Cx43蛋白表达明显低于Sham组.结论 缺血预处理可能通过提高Cx43在肾组织中的表达减轻肾缺血再灌注损伤.     

缺血后处理对再灌注损伤鼠肺IL-17和IL-8的影响

目的研究缺血后处理对再灌注损伤鼠肺IL17和IL-8的影响,并分析其可能的肺保护作用机制。方法构建大鼠在体肺脏缺血再灌注损伤模型,30只SD大鼠随机分为假手术对照组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)和缺血后处理组(IPostC组),每组10只。在体大鼠IR损伤模型制备完成后,阻断左肺门,终止血供及通气,造成左肺缺血,达预定时间后松开阻断带恢复血供及通气形成再灌注损伤。Sham组开胸游离左肺门穿阻断带而不结扎持续180 min;IR组缺血60 min后再灌注120 min;IPostC组缺血60 min后给予重复三次的5 min灌注和5 min缺血的后处理,继以恢复血供行再灌注90 min。三组实验结束后均留取左肺组织、左支气管肺泡灌洗液标本,分别用于测定IL-17、IL-8的含量,留取小块肺组织测定肺湿/干重比(W/D)。结果Sham组支气管肺泡灌洗上清液中IL-17含量明显低于IR组和IPostC组(P0.05);IPostC组支气管肺泡灌洗上清液中IL-17含量明显低于IR组(P0.05)。Sham组支气管肺泡灌洗上清液中IL-8含量明显低于IR组和IPostC组(P0.05);IPostC组支气管肺泡灌洗上清液中IL-8含量明显低于IR组(P0.05)。Sham组肺组织中IL-17明显低于IR组和IPostC组(P0.05);IPostC组肺组织中IL-17明显低于IR组(P0.05)。Sham组肺组织中IL-8明显低于IR组和IPostC组(P0.05);IPostC组肺组织中IL-8明显低于IR组(P0.05)。Sham组肺组织W/D明显低于IR组(P0.05)和IPostC组;IPostC组肺组织W/D明显低于IR组(P0.05)。结论缺血后处理能明显减轻大鼠肺缺血再灌注损伤。其机制可能与抑制IL-17、IL-8活性从而减轻肺组织炎症损害有关。     

鞘内注射右美托咪定增加神经元自噬改善大鼠脊髓缺血再灌注损伤后神经运动功能

目的观察注射右美托咪定(Dexmedetomidine,DEX)预处理对在体大鼠脊髓缺血再灌注损伤(Spinal cord ischemia reperfusion injury,SCIRI)后神经元自噬和下肢运动功能的影响。方法 SD大鼠随机分为4组(每组30只):假手术组(Sham组)、缺血再灌注损伤组(IR组,鞘内注射30μL生理盐水)、Dex组(缺血前3 d鞘内注射右美托咪定10μg/30μL)、Dex+ATIP组(缺血前3 d鞘内注射10μg右美托咪定+10μg阿替美唑共30μL)。Sham组仅暴露主动脉弓而不结扎,其他各组开胸后无创动脉夹夹闭主动脉弓14 min后再开放,建立SCIRI模型。各组手术前均于L5-6鞘内置管并连续注射3 d。损伤后48 h内每12小时取5只大鼠,采用Tarlov法评价大鼠下肢运动功能;HE染色观察和计数损伤后48 h脊髓前角神经元形态和数量;Western blot和RT-PCR法测定损伤后48 h大鼠脊髓组织中自噬相关蛋白Beclin1、LC3蛋白及mRNA含量。结果与Sham组比较,术后各观察点IR组下肢运动功能明显受损,Tarlov评分下降,脊髓组织中Beclin1、LC3蛋白及mRNA的表达均明显降低(P<0.05);损伤前3 d鞘内注射10μg DEX(Dex组)可改善缺血再灌注损伤后下肢运动功能,提高Tarlov评分,改善脊髓Beclin1、LC3 mRNA蛋白的表达(P<0.05),而Dex+ATIP组与IR组比较差异无统计学意义(P>0.05)。损伤后48 h,HE染色显示,Sham组脊髓前角神经元轮廓清晰,结构完整,无出血、水肿等异常表现;IR组、Dex+ATIP组细胞质中的尼氏体消失,神经元胞核出现固缩或溶解,广泛空泡形成;而Dex组神经元形态明显规整,且正常神经元数量增多。结论鞘内注射右美托咪定预处理通过上调Beclin1、LC3蛋白和基因表达,增加神经元自噬,改善大鼠缺血再灌注后下肢运动功能。     

miR-122a对大鼠脊髓缺血/再灌注损伤后血-脊髓屏障的影响

目的探讨miR-122a对脊髓缺血/再灌注损伤后血-脊髓屏障的影响。方法 SD大鼠36只,随机分为3组:假手术组(S组)、对照组(C组)、miR-122a反义寡核苷酸(miR-122a antagomir)组(M组)。S组开胸游离主动脉弓,但不阻断;C组和M组开胸阻断主动脉弓14 min造成脊髓缺血/再灌注损伤。M组和C组脊髓缺血/再灌注损伤后,鞘内注射miR-122a antagomir或空白对照,每日1次,共3次。Real-time PCR测定损伤节段脊髓组织的miR-122a表达,Western blot测定脊髓组织中紧密连接蛋白occludin表达,伊文思蓝测定血-脊髓屏障通透性,Basso Beattie Bresnahan评分法评价神经运动功能。结果与S组比较,C组miR-122a表达增加,occludin表达减少,血-脊髓屏障通透性增加,神经运动功能评分降低(P<0.05)。与C组比较,M组miR-122a表达降低,occludin表达增加,血-脊髓屏障通透性降低,神经运动功能评分增加(P<0.05)。结论 miR-122a参与调控脊髓缺血/再灌注损伤后occludin表达,影响血-脊髓屏障通透性。     

雌激素对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨雌激素对兔脊髓缺血再灌注损伤的神经保护效应。方法成年新西兰大白兔肾下腹主动脉钳夹20min恢复再灌注。实验分组如下：Control组（n=8）仅行肾下腹主动脉钳夹20min恢复再灌注;Sham组（n=8）行对照组操作除外肾下腹主动脉钳夹;雌激素处理组（n=8）分别在再灌注开始即刻经兔耳缘静脉给予雌激素200,400,800μg/kg。再灌注后48h进行下肢神经功能评分（Tarlov法）后处死受试动物,取脊髓行组织HE染色切片病理分析。结果Tarlov评分发现雌激素处理组神经功能评分明显高于control组（P＜0.05）。组织病理分析可见脊髓前角运动神经元凋亡,坏死较明显。雌激素处理组脊髓前角运动神经元计数明显多于Control组（P＜0.01）。结论兔脊髓缺血后静脉给予雌激素可明显改善下肢神经功能,增加脊髓前角正常运动神经元数量,减轻缺血再灌注损伤。     

重组人促红细胞生成素对缺血后处理大鼠心脏功能的保护作用

目的:研究PI3K/Akt信号通路介导重组人促红细胞生成素(rhEPO)对缺血后处理(IPC)大鼠心脏功能的保护作用。方法:构建大鼠缺血/再灌注(I/R)模型,将42只♂SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、I/R组、IPC组、IPC+PI3K/Akt特异抑制剂Wort-mannin(W)组、rhEPO组、rhEPO+W组及rhEPO+IPC组,分别测定结扎前基础状态下(Baseline)、缺血后30min(I30min)、再灌注后30min(R30min)、再灌注后180min(R180min)的心功能参数左室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)和左室内压最大下降速率(-dp/dtmax)。结果:与Sham组比较,I/R组在各不同时间点LVSP均明显降低;I30min时各组与Sham组比较,LVSP明显降低;与I/R组相比,IPC组、rhEPO组和rhEPO+IPC组R30min、R180min时LVSP明显升高;IPC+W组较IPC组、rhEPO+W组较rhEPO组LVSP前者均显著降低;各组+dp/dtmax、-dp/dtmax变化趋势类似LVSP;而LVEDP变化趋势与之相反;rhEPO+IPC组上述各指标较IPC组和rhEPO组无显著性差异。结论:IPC及rhEPO均能保护心肌缺血再灌注大鼠的心脏功能,其保护效应可能与PI3K信号转导通路的激活有关;联合应用rhEPO和IPC并不能进一步发挥心脏功能保护作用。     

后处理对肺缺血再灌注丙二醛和谷胱甘肽的影响

目的研究缺血后处理对离体大鼠怖缺血再灌注丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSH）的影响并分析其可能的作用机制。方法建立离体大鼠肺缺血再灌注损伤模型。12只SD大鼠随机分为2组,每组6只。缺血再灌注（IR）组缺血2h后以Krebs-Henseleit Buffer（KHB）液再灌注1h,后处理（IPostC）组缺血2h后给予重复一次的5min灌注和5min缺血的后处理,即以KHB液行再灌注1h。持续监测及记录肺动脉压（PAP）,缺血前及再灌注末分别留取3ml的灌流液,缺血前、再灌注始及再灌注末分别切取约20mg肺组织制作10％的组织匀浆,灌流液及肺组织匀浆用于测定MDA及GSH的含量,再灌注结束测定肺湿／于重比（W／D）。结果IPostC组MDA、GSH及W／D较IR组明显降低（P〈0．05）。结论缺血后处理能明显减轻离体大鼠肺缺血再灌注损伤。     

经腹主动脉灌注瑞芬太尼聚己内酯对脊髓缺血再灌注损伤中脊髓能量代谢的影响

目的:观察腹主动脉内灌注Mu阿片受体激动剂REM-PCL对兔脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)中脊髓能量代谢的影响。方法:30只健康新西兰大白兔随机分为对照组(C组)、REM-PCL组(RP组,0.1 mg·kg^-1)和REM-PCL+ GSK1521498组(RG组,0.1 mg·kg^-1 REM-PCL+1 mg·kg^-1 GSK1521498),每组10只。采用肾下腹主动脉阻断法,建立SCIRI模型。分别于缺血前、缺血45 min及再灌注60 min时,取脊髓测定腺苷酸(ADP、AMP、ATP、TAN、EC)、Mu阿片受体表达、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量、线粒体肿胀度(MSD)、总抗氧化能力(T-AOC) 并观察其病理学改变。分别于缺血前、缺血45 min、再灌注30 min及再灌注60 min监测血清神经特异性烯醇化酶(NSE)浓度变化。结果:与缺血前比较,缺血45 min及再灌注60 min时C组和RG组ATP、EC、TAN、T-AOC及Mu阿片受体表达均降低(P<0.01),ROS、MDA和MSD均升高(P<0.01);RP组在缺血45 min时和再灌注60 min时ATP、T-AOC、TAN、EC及Mu阿片受体表达均显著高于C组和RG组(P<0.01),ROS、MDA和MSD含量均显著低于C组和RG组(P<0.01),RP组脊髓灰质的病理损害程度明显轻于C和RG组(P<0.01)。缺血45 min、再灌注30 min及再灌注60minRP组血清NSE浓度明显低于C组和RG组(P<0.01)。结论:腹主动脉内灌注REM-PCL通过激活Mu阿片受体能够明显改善SCIRI中脊髓能量代谢,保护脊髓线粒体的结构,从而减轻SCIRI。     

右美托咪定预处理对大鼠肢体缺血再灌注肺损伤时血红素加氧酶-1的影响

目的探讨右美托咪定预处理对大鼠肢体缺血再灌注诱发肺损伤时血红素加氧酶-1的影响。方法健康SD大鼠30只,体重300³50 g,随机分为3组,每组10只:假手术组(Sham组);肢体缺血再灌注组(IR组),右美托咪定组(Dex组)。Dex组于缺血前10 min经腹腔注射右美托咪定25μg/kg体重,IR组、Sham组输注等容量的生理盐水。再灌注末,观察肺组织病理变化,测定肺组织湿/干质量比(W/D),行血气分析,测定血红素加氧酶-1(HO-1)的含量。结果与Sham组比较,IR组和Dex组PaO2、PaCO2降低,W/D、HO-1含量升高(P<0.05),且出现病理损伤;与IR组比较,Dex组肺损伤明显减轻,PaO2、PaCO2升高,W/D降低,HO-1含量升高(P<0.05)。结论右美托咪定预处理能增加肢体缺血再灌注诱发肺损伤大鼠肺组织中HO-1的活性,上调HO-1蛋白的表达,减轻肺缺血再灌注损伤。     

脊髓背角神经元上调Nav1.8通道参与缺血再灌注损伤后痛觉过敏的机制

目的观察鞘内注射钠通道抑制剂619C89对脊髓缺血再灌注损伤引起的痛觉过敏大鼠的痛阈、脊髓背角神经元中Nav1.8通道表达的影响。方法 SD大鼠随机分为3组:假手术组(S组)、痛觉过敏组(H组,缺血再灌注前3 d鞘内注射30μL生理盐水)、钠通道抑制剂组(I组,缺血再灌注前3 d鞘内注射619C895μg/30μL)。S组仅暴露主动脉弓而不结扎,其他各组开胸后无创动脉夹夹闭主动脉弓14 min后再开放,建立SCIRI引起的痛觉过敏模型。各组手术前均于L_(5-6)鞘内置管并连续注射3 d。术后1、3、5、7、14 d分别测定各组大鼠的热痛阈及机械性痛阈;取第4~6节腰段脊髓,采用免疫双荧光法观察背角神经元状态及其Nav1.8的表达,Real time-PCR法检测各组大鼠脊髓组织Nav1.8表达。结果与S组相比,术后各观察点(尤以第7天为著)H组大鼠热痛阈和机械性痛阈降低,损伤后7 d脊髓组织中Nav1.8 mRNA的表达增加(P<0.05);I组大鼠热痛阈和机械性痛阈值明显提高(P<0.05),脊髓组织中Nav1.8 mRNA的表达降低(P<0.05)。免疫双荧光染色显示,损伤后7 d,H组大鼠脊髓背角Nav1.8的荧光强度明显增加,且主要表达在NeuN表达阳性的神经元的胞浆中;且与S组相比,H组中NeuN/Nav1.8双阳性的细胞数量明显增多,而I组双阳性的细胞数量减少(P<0.05)。结论脊髓背角神经元通过上调Nav1.8通道参与缺血再灌注损伤后痛觉过敏的形成。     

Naloxone Postconditioning Alleviates Rat Myocardial Ischemia Reperfusion Injury by Inhibiting JNK Activity

To investigate the alteration of c-Jun N-terminal kinase (JNK) activity after myocardial ischemia reperfusion injury (MIRI) and further explore the effect of naloxone postconditioning on MIRI. Forty male Sprague Dawley rats were randomly divided into five groups: sham operation (sham, n=8); ischemia reperfusion (IR, n=8); IR+naloxone 0.5 mg/kg (Nal L, n=8); IR+naloxone 1.0 mg/kg (Nal M, n=8); IR+naloxone 2.0 mg/kg (Nal H, n=8). Pathological changes of myocardial tissue were visualized by HE staining. The expression of p-JNK, and the apoptosis of cardiomyocytes were investigated with Western blotting and the TUNEL assay, respectively. Irregular arrangement and aberrant structure of myocardial fibers, cardiomyocytes with granular or vacuolar degeneration, and inflammatory cells infiltrating the myocardial interstitial regions characterized MIRI in the IR group. Signs of myocardial injury and inflammatory infiltration were less prominent in the Nal-treated groups. The expression of p-JNK in the sham group and in all Nal-treated groups was significantly lower than that in the IR group (p<0.01). The apoptosis index of cardiomyocytes in the IR group was significantly higher than in the sham group (p< 0.01). The apoptosis indices of cardiomyocytes in all Nal-treated groups were significantly reduced to 55.4%, 26.2%, and 27.6%, respectively, of the IR group (p< 0.01). This study revealed that Naloxone postconditioning before reperfusion inhibits p-JNK expression and decreases cell apoptosis, thus alleviating MIRI.     

瑞芬太尼聚己内酯对脊髓缺血再灌注损伤中运动诱发电位的影响

目的:应用诱发电位监测脊髓电生理的改变,探讨腹主动脉内灌注Mu阿片受体激动剂REM-PCL对Mu阿片受体信号转导介导的神经元保护效果。通过建立兔脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)模型,腹主动脉内灌注Mu阿片受体激动剂REM-PCL和选择性Mu阿片受体拮抗剂GSK1521498对Mu阿片受体信号转导介导的神经元保护效果和作用机制进行探讨,并应用诱发电位监测脊髓电生理的改变以及REM-PCL干预后的影响,为临床脊髓保护提供理论和实验依据。方法:30只健康新西兰大白兔随机分为对照组(C组)、REM-PCL组(RP组,0.1 mg·kg^-1)和REM-PCL+ GSK1521498组(RG组,0.1 mg·kg^-1REM-PCL+1 mg·kg^-1GSK1521498),每组10只。采用肾下腹主动脉阻断法,建立兔脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)模型。分别于阻断前、再灌注15 min、再灌注30 min、再灌注60 min及再灌注24 h监测血清神经特异性烯醇化酶浓度和MEP变化。再灌注24 h神经行为学评定后取脊髓组织检测Mu阿片受体mRNA表达情况并观察其病理学改变。结果:运动诱发电位可准确反映SCIRI程度。C和RG组血清NSE浓度明显增加而Mu阿片受体mRNA表达明显降低(P<0.01),MEP和脊髓灰质病理损害严重(P<0.01)。RP组血清NSE浓度明显降低而Mu阿片受体mRNA表达明显增加(P<0.01),MEP和脊髓灰质的病理损害程度明显轻于C和RG组(P<0.01),神经行为学评分恢复迅速(P<0.01)。结论:SCIRI能导致脊髓电生理功能损害,应用REM-PCL可以通过激活Mu阿片受体减轻脊髓缺血再灌注损伤。     

蛛网膜下隙注射胶质细胞源性神经营养因子抑制脊神经结扎大鼠脊髓背角胶质原纤维酸性蛋白表达

目的观察蛛网膜下隙注射胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对脊神经结扎(SNL)大鼠脊髓背角胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的影响。方法采用结扎SD大鼠第5~第6腰脊神经(L5~L6)制备SNL模型。术后隔日一次性蛛网膜下隙注射10μl GDNF2 g·L-1组。术后第3,7和14天采用免疫组织化学和Western免疫印迹法测定脊髓背角处GFAP蛋白表达。结果免疫组化结果显示,SNL组在术后第3天、第7天和第14天脊髓GFAP阳性细胞数目明显增加,可持续至第14天,而正常对照组与假手术组的星形胶质细胞未发生此种改变。GDNF组的阳性细胞显著减少。Western印迹结果显示,正常对照组和假手术组脊髓背角均出现GFAP免疫阳性条带,灰度值较低;SNL在术后第3天即可诱导脊髓背角GFAP蛋白的表达,随着时间的延长,GFAP蛋白的灰度值逐渐升高,术后第3,7,14天分别为2.55±0.33,2.88±0.79和3.12±0.75(P<0.01)。与SNL模型组比较,GDNF可显著降低GFAP的表达水平,术后第3,7,14天分别为1.61±0.38,1.65±0.64和1.57±0.41(P<0.01)。结论蛛网膜下隙注射GDNF减轻大鼠神经病理性疼痛机制可能与其抑制脊髓背角GFAP蛋白表达有关。     

microRNA-125b在脓毒症急性肺损伤中的表达及其与炎症因子水平相关性

摘要：目的探讨microRNA-125b（miR-125b）在脓毒症急性肺损伤中的表达及其与炎症因子的相关性。方法 腹腔注射脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤大鼠模型,对照组注射等量的生理盐水（n=20）;各模型组（n=20）大鼠注射LPS 4、8、12及24 h后取其肺组织,HE染色观察病理学变化;PCR检测各组各时点肺组织中miR-125b、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）与白细胞介素-6（IL-6）变化。Pearson相关性分析实验组肺组织中miR-125b的表达与TNF-α、IL-6水平的相关性。NR8383细胞培养后分组,对照组不进行LPS刺激,实验组加入LPS刺激4 h、8 h、12 h及24 h时收集细胞,检测各组miR-125b、TNF-α与IL-6的含量变化。另NR8383细胞设3组,阴性对照组只转染空表达质粒,miR-125b mimic组转染miR-125b mimic表达质粒,miR-125b inhibitor组转染miR-125b inhibitor质粒。PCR测各组细胞中miR-125b 表达情况,Western blot测Notch1的表达情况。结果LPS各处理组大鼠模型肺组织严重出血、水肿及大量炎症细胞浸润。与对照组比较,在注射LPS 4、8、12以24 h后,实验组大鼠肺组织中miR-125b显著降低;而肺组织中TNF-α与IL-6水平则升高,其中在LPS注射4 h后,TNF-α与IL-6的表达水平达到峰值（P＜0.05）。实验组肺组织中miR-125b的表达与TNF-α及IL-6呈负相关（r 分别为-0.599、-0.580;P＜0.05）。在LPS诱导的第4、8、12、24 h,实验组NR8383细胞系miR-125b表达水平均低于对照组,而TNF-α、IL-6的表达水平均高于对照组（P＜0.05）。与阴性对照组比较,miR-125b mimic组miR-125b 相对表达量升高、Notch1蛋白相对表达量则降低（P＜0.05）,miR-125binhibitor组miR-125b 相对表达量降低、Notch1蛋白相对表达量升高（P＜0.05）;与miR-125b mimic组比较,miR-125binhibitor组miR-125b 相对表达量降低、Notch1蛋白相对表达量升高（P＜0.05）。结论在脓毒症急性肺损伤中,microRNA-125b可能通过调控Notch1蛋白的表达,影响炎症因子TNF-α与IL-6的表达,参与其免疫炎症调控过程。     

miR-196b-5p减轻大鼠脊髓损伤后组织水肿和星形胶质细胞活化机制探讨

目的 探讨miR-196b-5p靶向水通道蛋白4(AQP4)促进大鼠脊髓损伤（SCI）后组织修复和神经元轴突再生的机制。方法 双荧光素酶报告检测miR-196b-5p与AQP4靶向关系;实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测SCI后1 d、2 d、3 d、5 d和7 d miR-196b-5p与AQP4变化;RT-qPCR检测假手术（Sham）组、单纯脊髓损伤（SCI）组、agomiR-196b-5p干预（miRNA）组和miR-196b-5p阴性对照（NC）组脊髓miR-196b-5p与AQP4 m RNA相对表达水平,Western blot检测各组脊髓AQP4、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、增殖细胞核抗原（PCNA）和生长相关蛋白43(GAP-43)蛋白相对表达水平,干湿质量法和苏木精-伊红（HE）染色检测脊髓含水量及脊髓空洞大小。结果 双荧光素酶报告显示AQP4是miR-196b-5p的靶基因。与Sham组比较,SCI后各时间点miR-196b-5p表达水平降低（P<0.05）,而AQP4 mRNA表达升高并在2 d时达到高峰,随后逐渐降低。与Sham组比较,SCI组...     

蛇床子素通过抑制髓核致炎大鼠脊髓背角CXCL1/CXCR2的表达发挥抗炎镇痛作用

目的研究蛇床子素(osthole,Ost)对大鼠髓核源性神经根痛的抗炎镇痛作用。方法雄性SD大鼠60只随机分为3组:髓核致炎组(NP组,n=36)、Sham组(n=12)、Blank组(n=12),检测术前和术后3、7、14、21、28 d的50%MWT;q-PCR检测术后各时间点脊髓背角CXCL1、CXCR2和TNF-α的mRNA水平,Western blot检测术后各时间点脊髓背角CXCL1/CXCR2的蛋白水平。另外雄性SD大鼠64只髓核致炎后随机均分为4组:生理盐水组(NP+NS),DMSO组(NP+DMSO),Ost组(NP+Ost),CXCL1中和抗体组(NP+AF-515),于术后d 3经硬膜外注射相应药物50μL。给药前后多个时点均检测50%MWT。于术后d 7取L5脊髓背角,通过Western blot检测各组脊髓背角CXCL1/CXCR2的蛋白水平。结果NP组术后各时间点的50%MWT较Sham组均降低(P<0.05)。NP组术后各时间点脊髓背角CX-CL1、CXCR2和TNF-α的mRNA水平均较Sham组升高(P<0.05),且NP组术后各时间点脊髓背角CXCL1/CXCR2的蛋白水平较Sham组升高(P<0.05)。NP+Ost组给药后50%MWT比给药前升高(P<0.05),NP+AF515组在给药后3 h 50%MWT升高,持续到给药后12 h(P<0.05)。NP+Ost组术后7d脊髓背角CXCL1/CXCR2蛋白表达降低(P<0.05)。结论脊髓背角CXCL1/CXCR2可能参与了大鼠髓核源性神经根痛的发生发展,蛇床子素通过抑制脊髓背角CXCL1/CXCR2的表达而缓解髓核致炎大鼠神经根性疼痛。     

蛇床子素对髓核致炎神经根痛大鼠的保护作用

目的研究蛇床子素通过抑制脊髓背角胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路对髓核致炎神经根痛大鼠的保护作用。方法将80只大鼠随机分为对照组(n=20)、模型组(n=20)及低(n=20)、高剂量实验组(n=20)。模型组及低、高剂量实验组大鼠均用手术在特定椎节(L_5-6)左侧建立髓核致炎神经根痛大鼠模型。造模后,低、高剂量实验组分别于L_5根周注射20,30 mg·kg^-1·d^-1蛇床子素,模型组与对照组注射等量生理盐水,连续干预7 d。用Up-Down法检测各组大鼠50%机械性撤足痛阈值(MWT);用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)水平;用苏木精-伊红(HE)染色法观察大鼠脊髓背角组织病理变化;用蛋白质印迹(Wb)法检测脊髓背角磷酸化ERK(p-ERK)与磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)蛋白表达。结果对照组、模型组与低、高剂量实验组大鼠术后7 d时的50%MWT分别为24.31±1.79,10.12±1.36,17.33±2.15和26.96±3.11,各组大鼠脊髓背角p-ERK蛋白相对表达量分别为0.14±0.07,0.95±0.05,0.33±0.12和0.25±0.10,p-p38 MAPK蛋白相对表达量分别为0.38±0.11,0.93±0.07,0.69±0.14和0.47±0.09。各组的上述指标相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论蛇床子素可改善髓核致炎神经根痛大鼠的痛敏程度,抑制炎性反应,其机制可能与抑制脊髓背角ERK/MAPK通路的信号转导有关。     

簇集蛋白在大鼠急性脊髓损伤组织中的表达及其意义

目的　探讨簇集蛋白 (clusterin)在急性脊髓损伤组织中的表达及其在继发性脊髓损伤中可能发挥的重要作用。方法　采用改良Allen重物打击法制成SD大鼠脊髓急性损伤模型 ,通过苏木素 伊红 (HE)染色及免疫组织化学染色观察损伤组和假手术组伤后 0. 5、1、3、7、14、2 1d脊髓损伤组织变性坏死及簇集蛋白的表达情况。结果　损伤组在伤后 1d簇集蛋白阳性表达开始增加 ,约在伤后 7d达到高峰 ,之后表达逐渐减少 ,伤后2 1d趋于稳定 ,随时间延长存在动态变化过程 ,并与脊髓损伤程度相一致。损伤组在伤后 1、3、7、14、2 1d簇集蛋白表达与假手术组及正常对照组差异有统计学意义 (P <0 . 0 1) ;假手术组及正常对照组伤后各时间点均有簇集蛋白阳性表达 ,但表达随时间延长无动态变化过程。结论　簇集蛋白在急性脊髓损伤组织中表达明显增加 ,并可能通过补体调节、抗凋亡及热休克蛋白活性等机制减轻继发性脊髓损伤。     

BMP-7/Smad1/5/8信号通路在肾缺血后处理减轻 大鼠肾缺血再灌注损伤中的作用

目的：观察肾缺血后处理后BMP-7/Smad1/5/8信号通路活性改变,探讨肾缺血后处理减轻肾缺血再灌注损伤(IRI)的机制。方法：雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham组),缺血再灌注组(IR组),缺血后处理组(IPostC组)。各组又分成再灌注1.5 h、3 h、6 h、12 h和24 h 共五个时间点亚组,每组6只动物。IR组采用结扎左侧肾蒂60 min后松开动脉夹制备肾脏缺血再灌注损伤模型;IPostC组操作同IR组,恢复灌注前给予6个循环10s再灌注/10s缺血处理,然后恢复灌注。测定血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)浓度;免疫印迹法测定肾组织中BMP-7、USAG-1和p-Smad1/5/8蛋白的表达变化;TUNEL法分析肾小管上皮细胞凋亡情况。结果：与sham组相比,IR组各时间点SCr和BUN含量、USAG-1表达水平以及TUNEL凋亡指数(apoptotic index,AI)明显增高,而BMP-7和p-Smad1/5/8蛋白表达水平显著下调,差异均具有统计学意义(P<0.05);与IR组各对应时间点相比,IPostC组SCr和BUN含量、USAG-1表达水平以及AI明显降低,而BMP-7和p-Smad1/5/8蛋白表达水平显著上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论：肾IPostC对大鼠肾缺血再灌注损伤有一定的保护作用,其机制可能与上调BMP-7的表达、下调USAG-1的表达,继而激活BMP-7/Smad1/5/8信号通路以及抑制细胞凋亡有关。