科罗索酸对HepG2细胞糖消耗以及细胞内糖原的影响

目的：研究糖原磷酸化酶抑制剂科罗索酸对HepG2细胞的葡萄糖消耗以及对正常和应激状态下细胞内糖原含量的影响。方法：不同浓度的科罗索酸与HepG2细胞共同孵育24小时后,用葡萄糖氧化酶法测定单位细胞的糖消耗量,并分别测定正常和应激状态下细胞内糖原的含量。结果：1和10μmol.L-1的科罗索酸能显著增加HepG2细胞的单位细胞糖消耗量,提高HepG2细胞内的糖原含量（P〈0.05,P〈0.01）。HepG2细胞经去甲肾上腺素处理后,细胞内糖原降解明显增加1,0μmol.L-1的科罗索酸能显著升高细胞内糖原含量水平（P〈0.05）。结论：科罗索酸能够增加细胞的葡萄糖消耗,抑制糖原过度降解。     

氧化苦参碱对HepG2细胞胰岛素抵抗模型的影响

目的 探讨氧化苦参碱对Hep G2细胞胰岛素抵抗(IR-Hep G2)模型的影响。方法 采用以棕榈酸为诱导剂建立IR-Hep G2细胞模型,给予不同剂量的氧化苦参碱溶液(12.5~100μg·m L-1),分别测定葡萄糖消耗量、己糖激酶活力、丙酮酸激酶活力和肝糖原含量。结果 与正常组相比,模型组细胞的葡萄糖消耗量、己糖激酶活力、丙酮酸激酶活力和肝糖原含量均显著降低,表明胰岛素抵抗模型建立成功;与模型组相比,25~100μg·m L-1的氧化苦参碱可显著增加IR-Hep G2细胞的葡萄糖消耗量,50~100μg·m L-1的氧化苦参碱可显著提高IR-Hep G2细胞的己糖激酶活力、丙酮酸活力和肝糖原合成量。结论 氧化苦参碱可通过增加葡萄糖消耗量、己糖激酶活力、丙酮酸活力和肝糖原合成量改善IRHep G2细胞的胰岛素抵抗。     

橙皮苷对胰岛素抵抗HepG2细胞体外糖代谢的影响

目的探讨橙皮苷(hesperidin)对胰岛素抵抗HepG2细胞体外糖代谢的影响。方法采用高浓度胰岛素(INS)持续作用HepG2 12h建立胰岛素抵抗(IR-HepG2)模型,同时培养液中给予不同质量浓度橙皮苷(10,40和60μg.mL-1)或盐酸二甲双胍(30μg.mL-1)干预。药物作用12h后,换含低浓度INS的培养液培养细胞12h,使细胞同步化。然后,测定各组细胞葡萄糖消耗量、细胞内肝糖原含量、己糖激酶(hexokinase,HK)和丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)的活力。结果与正常组相比,模型组细胞葡萄糖消耗量、肝糖原含量及HK和PK酶活力显著下降(P<0.01);与模型组相比,40和60μg.mL-1的橙皮苷可极显著增加IR-HepG2细胞葡萄糖消耗量、肝糖原合成量及HK酶活力(P<0.01),显著增加PK酶活力(P<0.05)。结论橙皮苷可增加IR-HepG2细胞对葡萄糖的利用,增加肝糖原合成量,提高HK、PK活力,从而促进IR-HepG2细胞糖代谢,改善胰岛素抵抗能力。     

岩藻黄素对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响

摘要：目的 建立胰岛素抵抗细胞模型,探讨岩藻黄素体外改善胰岛素抵抗及降血糖活性。方法 采用高浓度胰岛素诱导HepG2细胞,筛选最佳诱导条件建立IR-HepG2细胞模型。用不同浓度岩藻黄素处理模型细胞,用葡萄糖氧化酶法（GOD-POD) 检测岩藻黄素对IR-HepG2细胞葡萄糖消耗量的影响。结果 10-6 mol/L胰岛素处理细胞24 h为建立IR-HepG2细胞模型的最佳条件。5~20 μmol/L的岩藻黄素均可促进IR-HepG2细胞对葡萄糖的利用,10、12.5和15 μmol/L组的糖消耗量显著高于模型组(P<0.01)。结论 岩藻黄素可改善体外IR-HepG2细胞的胰岛素抵抗,促进IR-HepG2细胞的葡萄糖消耗,具有改善胰岛素抵抗和降血糖活性。     

新型格列酮类化合物ANY2对HepG2细胞糖代谢的影响

目的：体外实验研究新型格列酮类化合物ANY2对糖代谢的影响。方法：采用高浓度胰岛素持续作用肝癌细胞株（HepG2）24h建立胰岛素抵抗模型（IR-HepG2）,并观察ANY2对细胞葡萄糖消耗（GC）、对细胞内糖原含量、糖异生及糖酵解作用的影响。结果：ANY2能显著增加IR-HepG2在高、中、低糖条件下的葡萄糖消耗,并呈明显的剂量依赖性;增加IR-HepG2细胞内糖原含量,但与模型组相比,仅在高浓度差异有统计学意义;减少IR-HepG2细胞以乳酸为底物的糖异生量;提高糖酵解作用中IR-HepG2细胞乳酸的生成和细胞内丙酮酸激酶（PK）活力。结论：ANY2可显著改善IR-HepG2细胞的糖代谢作用。     

软脂酸诱导HepG2细胞胰岛素抵抗及其机理

目的 研究游离脂肪酸（FFA）诱导人肝癌细胞（HepG2）产生胰岛素抵抗及其分子机理。方法 用含0．25mmol／L的软脂酸（软脂酸组）或100nmol／L胰岛素（高胰岛素组）的DMEM培养基培养HepG2细胞,再用100nmol／L胰岛素刺激后,测定其培养液中的葡萄糖浓度、细胞内的糖原含量以及胰岛素受体底物2（IRS-2）的蛋白水甲。加入磷酯酰肌醇3激酶（P13K）的抑制剂wortmannin,再次检测IRS-2的蛋白水平。结果 软脂酸组和高胰岛素组培养液中葡萄糖含量明显高于正常对照组（P＜0．05）,而细胞内糖原含量显著减少（P〈0．01）。软脂酸组胰岛素刺激的IRS2蛋白水平显著低于正常对照组（P〈0．01）。用wortmannin处理后,软脂酸组中的IR导2蛋白水平差异无显著意义（P〉0．05）,而正常细胞组中IRS-2蛋白水平差异有显著意义（P〈0．01）。结论 0．25mmol／L的软脂酸培养24h后,HepG2细胞可产生胰岛素抵抗,且胰岛素信号转导途径存在障碍;P13K是胰岛素信号转导途径中的关键调节点,可能IRS-2和一些P13K相关分子缺陷与游离脂肪酸诱导的肝胰岛素抵抗的形成有关。     

荔枝核皂苷和荔枝核黄酮对HepG2细胞胰岛素抵抗作用研究

目的 探讨荔枝核皂苷、荔枝核黄酮对胰岛素抵抗HepG2细胞糖代谢的影响。 方法 采用高浓度胰岛素培养基诱导HepG2细胞形成胰岛素抵抗模型,葡萄糖氧化酶法测定对照组、荔枝核皂苷组、荔枝核黄酮组、罗格列酮组细胞培养上清液中的葡萄糖含量,观察荔枝核皂苷、荔枝核黄酮对HepG2细胞胰岛素抵抗的作用。 结果 HepG2细胞在10^-6mol/L的胰岛素中作用24 h,细胞对胰岛素的抵抗作用最为明显。以此条件构建胰岛素抵抗细胞模型,对该模型给予荔枝核皂苷、荔枝核黄酮干预后,细胞培养上清液中葡葡糖含量未能显著降低。 结论 本研究提示荔枝核皂苷、荔枝核黄酮不能有效改善胰岛素抵抗。     

胰岛素抵抗HepG2细胞模型建立的正交实验研究

目的探索联合应用胰岛素(INS)、棕榈酸(PA)和高糖建立HepG2细胞胰岛素抵抗(IR)模型的最佳实验方法。方法单因素考察INS、PA浓度及孵育时间对HepG2细胞增殖活性的影响;正交实验确定建立HepG2细胞IR模型的最佳条件。蒽酮法检测细胞糖原含量,油红O染色观察细胞形态变化。结果影响HepG2细胞葡萄糖消耗的主次因素顺序为:孵育时间>PA>INS,10 μmol·L-~1 PA联合1.0 μmol·L-~1 INS的高糖培养基孵育HepG2细胞48 h,葡萄糖消耗减少了22.36%。模型组细胞糖原合成较对照组显著减少,细胞脂肪颗粒明显增加。模型细胞IR作用可持续存在48 h,但24 h时作用最强。结论高糖培养基联合小剂量PA和INS,较长时间作用于HepG2细胞建立的IR模型,稳定可靠,重复性好,接近人体IR的病理生理状态,为防治IR药物筛选及发病机制研究奠定基础。     

褪黑素通过Akt抑制胰岛素抵抗HepG2细胞糖内生

目的探讨褪黑素(melatonin,MLT)对胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)肝HepG2细胞葡萄糖内生的影响及其机制。方法HepG2 IR细胞模型采用高糖(25 mmol·L-1)联合高胰岛素(1μmol·L-1)培养诱导建立。MLT(10 nmol·L-1)处理模型细胞6 h后检测糖消耗及糖原含量,GSK-3β、Akt和FoxO1蛋白磷酸化水平检测采用Western blot,免疫荧光法检测FoxO1蛋白核外排情况。结果IR HepG2细胞经MLT处理后,葡萄糖的摄取和糖原合成增加,p-GSK-3β和p-Akt蛋白水平分别增高约66%和48%,FoxO1磷酸化水平明显提高且细胞质含量增加。结论MLT可能通过Akt/GSK-3β及Akt/FoxO1信号通路促进胰岛素抵抗HepG2细胞的糖原合成和抑制糖异生,从而改善糖代谢。     

山药多糖对人肝癌HepG2细胞葡萄糖消耗能力及胰岛素抵抗的影响

目的:研究山药多糖对人肝癌HepG2细胞葡萄糖消耗能力和胰岛素抵抗的影响。方法:采用胰岛素(1×10-7mol/L)持续作用于HepG2细胞24 h以复制细胞胰岛素抵抗模型。将正常HepG2细胞分为正常对照(常规培养液)组、二甲双胍(0.01 mg/ml)组与山药多糖高、中、低浓度(质量浓度分别为1.00、0.10、0.01 mg/ml)组;将胰岛素抵抗HepG2细胞分为模型(常规培养液)组、二甲双胍(0.01 mg/ml)组与山药多糖高、中、低浓度(质量浓度分别为1.00、0.10、0.01 mg/ml)组,另设正常对照(正常细胞,常规培养液)组。加入相应药物后作用24 h,倒置显微镜下观察正常细胞与模型细胞的形态;测定细胞葡萄糖消耗量(ΔGC),MTT法测定单位细胞ΔGC(ΔGC/OD)。结果:与正常对照组比较,山药多糖高、中、低浓度组正常细胞ΔGC增加,ΔGC/OD升高,差异有统计学意义(P<0.01);模型组细胞ΔGC减少,ΔGC/OD降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,山药多糖高、中、低浓度组细胞ΔGC增加,ΔGC/OD升高,差异有统计学意义(P<0.01)。正常Hep G2细胞与胰岛素抵抗Hep G2细胞的形态未见明显差异。结论:山药多糖能改善HepG2细胞的葡萄糖消耗能力,并且可以增强细胞对胰岛素的敏感性,具有体外降糖作用。     

HDL对3T3-L1细胞葡萄糖转运的影响及其机制研究

目的探讨HDL对3T3-L1细胞葡萄糖转运的影响及其机制。方法通过对3T3-L1成纤维细胞的分化,培养符合实验要求的3T3-L1脂肪细胞。通过葡萄糖消耗实验和~3H标记的2-脱氧葡萄糖的摄取实验,研究HDL对葡萄糖转运的影响,应用RT-PCR和Western blot探讨其机制。结果 HDL可以促进3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的转运和摄取。3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的转运和摄取过程中,蛋白在RNA转录水平上没有增加,而是发生了AKT、AMPK蛋白的磷酸化。结论 HDL促进3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的摄取是通过AKT和AMPK两种途径来实现的。     

白鲜碱对HepG2细胞的毒性作用及其机制

目的研究白鲜碱的肝细胞毒性作用及其毒性机制。方法白鲜碱2.5～800μmol·L-1与HepG2细胞作用24 h,用MTT法检测细胞存活率并计算IC50值,用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞膜损伤。白鲜碱25～100μmol·L-1与HepG2细胞作用4,24或48 h,用试剂盒方法分别检测细胞培养液中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)和谷氨酰转肽酶(GGT)活性。用倒置显微镜观察细胞形态变化;激光共聚焦扫描显微镜检测细胞线粒体膜电位的变化。结果白鲜碱25～800μmol· L-1与HepG2细胞作用24 h对HepG2细胞存活的抑制作用随着浓度的增加而降低(r=0.965,P<0.05),IC50值为(283±27)μmol·L-1。与溶剂对照组相比,白鲜碱12.5～50μmol·L-1作用24 h,HepG2细胞LDH释放率显著升高(P<0.01)。白鲜碱100和200μmol·L-1可引起HepG2细胞形态发生明显变化,细胞皱缩脱落,细胞数目减少,并使HepG2细胞线粒体膜电位下降(P<0.05,P<0.01)。白鲜碱100和200μmol·L-1与HepG2细胞作用24 h可使细胞培养液中ALT和AST活性显著升高,并呈浓度依赖性(r=0.995,P<0.05和r=0.996,P<0.05),线粒体膜电位亦明显下降(r=0.978,P<0.05)。与溶剂对照组相比,白鲜碱100和200μmol·L-1与HepG2细胞作用4 h,细胞培养液中GST活性明显升高(P<0.05);作用24 h,GST活性升高呈浓度依赖性(r=0.987,P<0.05)。白鲜碱200μmol· L-1作用48 h导致HepG2细胞培养液中GGT活性升高(P<0.05)。结论较高浓度的白鲜碱(≥100μmol· L-1)具有潜在的肝毒性,细胞膜损伤和线粒体损伤可能是其肝毒性作用机制之一。     

山奈酚对HepG2细胞增殖的影响及诱导其凋亡的机制研究

目的研究山奈酚对人肝癌细胞(HepG2细胞)增殖与凋亡的影响及其机制。方法将HepG2细胞分为空白组和实验组,实验组以CCK-8法检测10个不同浓度的(10,20,30,40,50,60,70,80,90,100μmol·L^-1)山奈酚处理HepG2细胞24 h后的存活率。最终以3个浓度(20,40,50μmol·L^-1)山奈酚作为低、中、高3个浓度实验组。以免疫印迹法检测核苷酸结合寡聚化域样受体蛋白3(NLRP3)和死骨片-1(P62)蛋白表达水平(灰度值)。结果山奈酚处理HepG2细胞24 h后,空白组与低、中、高3个浓度实验组HepG2细胞的存活率分别为(100.00±0.00)%,(87.92±3.13)%,(77.92±4.40)%和(70.53±4.19)%;上述这4组的NLRP3表达水平分别为0.27±0.05,0.50±0.03,0.71±0.08和0.93±0.10;上述这4组的P62表达水平分别为0.54±0.06,0.76±0.05, 0.87±0.04和1.09±0.10。上述指标:3个浓度实验组与空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论山奈酚可有效抑制HepG2细胞增殖、抑制其自噬并诱导其凋亡,其机制可能为有效促进P62的沉积,同时能诱导凋亡经典途径中NLRP3的合成,从而抑制HepG2细胞自噬并促进其凋亡。     

白藜芦醇烟酸酯抑制人肝癌细胞HepG2增殖并诱导细胞的凋亡

目的：观察白藜芦醇的修饰物白藜芦醇烟酸酯（ResT）对人肝癌细胞HepG2生长增殖的影响及诱导凋亡的作用。方法：用不同浓度的ResT处理HepG2细胞，MTT法检测ResT对HepG2细胞生长增殖的抑制作用；应用Hochest荧光染色法观察凋亡细胞的发生；流式细胞术（FCM）检测分析细胞周期和细胞凋亡率；比色法测定Caspase-3酶活性。结果：ResT抑制HepG2细胞的增殖并呈现一定的量效和时效关系，HepG2细胞与ResT作用后出现典型的凋亡细胞形态改变，FCM分析显示大部分细胞阻滞于G1期，S期细胞比例降低。且药物作用组出现凋亡峰。药物作用12、24、48h后，细胞的凋亡率分别为8．7％、21．1％、和32.7％。显示ResT诱导的细胞凋亡作用随时间的延长而增加，同时Caspase-3酶活性显著增强。结论：ResT可抑制人肝癌细胞HepG2的生长增殖，其作用机制之一可能与阻滞细胞于G1期及诱导细胞凋亡有关。     

Tetrahydrocurcumin ameliorates free fatty acid-induced hepatic steatosis and improves insulin resistance in HepG2 cells

Elevated levels of free fatty acids (FFAs) in the liver, resulting from either increased lipolysis or imbalanced FFAs flux, is a key pathogenic factor of hepatic steatosis. This study was conducted to examine the therapeutic effect of tetrahydrocurcumin (THC), a naturally occurring curcuminoid and a metabolite of curcumin, on oleic acid (OA)-induced steatosis in human hepatocellular carcinoma cells and to elucidate the underlying mechanism. HepG2 cells were incubated with OA to induce steatosis, and then treated with various concentrations of THC. The results showed that THC treatment significantly decreased lipid accumulation in OA-treated HepG2 cells, possibly, by inhibiting the expression of the lipogenic proteins, sterol regulatory element-binding protein 1 (SREBP-1c), peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARγ), fatty acid synthase (FAS), and fatty acid-binding protein 4 (FABP4). Moreover, THC attenuated OA-induced hepatic lipogenesis in an adenosine monophosphate–activated protein kinase (AMPK)-dependent manner, which was reversed by pretreatment with an AMPK inhibitor. THC promoted lipolysis and upregulated the expression of genes involved in β-oxidation. Glucose uptake and insulin signaling impaired in HepG2 cells incubated with OA were abated by THC treatment, including phosphorylation of the insulin receptor substrate 1 (IRS-1)/phosphoinositide 3-kinase (PI3K)/Akt and downstream signaling pathways, forkhead box protein O1 (FOXO1) and glycogen synthase kinase 3 β (GSK3β), which are involved in gluconeogenesis and glycogen synthesis, respectively. Altogether, these results demonstrated the novel therapeutic benefit of THC against hepatic steatosis and, consequently, a potential treatment for non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD).     

仙鹤草水提物对HepG2细胞凋亡的影响

目的研究仙鹤草水提液对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其可能机制。方法将细胞分为6组:空白组、对照组、仙鹤草水提液-C、-D、-E、-F组。空白组加入正常培养液0. 1 m L,对照组加入质量浓度为50μg·m L^-1的5-FU培养液0. 1 m L,仙鹤草水提液-C、-D、-E、-F组别加入含不同浓度(1. 00,0. 75,0. 50,0. 25 mg·m L^-1)仙鹤草水提液的培养液0. 1 m L。以噻唑蓝法检测不同药物浓度与不同作用时间对肝癌细胞Hep G2生长的抑制作用;以流式细胞仪检测细胞凋亡率;以实时定量-聚合酶链反应和免疫印迹法检测Bax mRNA表达水平和Caspase-3蛋白的表达水平。结果在48 h,空白组、对照组与仙鹤草水提液-C、-D、-E、-F组对HepG2的生长的抑制率分别为0,22. 10%,71. 10%,67. 88%,47. 19%和27. 35%,这5个给药组与空白组比较,差异均有统计学意义(P <0. 05,P <0. 01);且仙鹤草水提液对HepG2细胞的抑制作用呈剂量、时间依赖性。空白组与仙鹤草水提液-C、-D、-E组的Bax mRNA表达量分别为1. 00±0. 00,2. 53±0. 13,4. 95±0. 11和3. 39±0. 17,仙鹤草水提液-C、-D、-E组与空白组相比,差异均有统计学意义(P <0. 05,P <0. 01);空白组、对照组与仙鹤草水提液-C、-E组的Caspase-3蛋白表达水平分别为0. 72±0. 00,1. 06±0. 02,1. 02±0. 11和0. 88±0. 07,对照组和仙鹤草水提液-C、-E组与空白组比较,差异均有统计学意义(均P <0. 01)。空白组和仙鹤草水提液-C组的人肝癌HepG2细胞凋亡率分别为0. 2%和24. 3%,仙鹤草水提液-C组与空白组比较,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论仙鹤草水提液能显著促进HepG2凋亡,抑制其增殖,可通过上调线粒体凋亡通路Bax基因和Caspase-3蛋白表达诱导细胞凋亡,其抗肿瘤作用可能与线粒体凋亡途径有关。