橙皮素对小鼠皮肤急性光损伤的保护作用

目的 探讨橙皮素对中波紫外线(UVB)导致的小鼠皮肤光损伤的抑制作用及可能机制。方法 不同剂量UVB照射小鼠背部皮肤,构建UVB致小鼠皮肤急性光损伤的动物模型。将40只小鼠随机分为4组,即空白组、UVB组、基质+UVB组、橙皮素+UVB组,每组各10只。除空白组外,其余每组小鼠每天以相同剂量照射UVB,连续3 d,末次照射后24 h取照射区皮肤组织。肉眼观察皮肤外观变化,光学显微镜观察组织病理学改变,免疫荧光检测皮肤组织活性氧(ROS)水平,水溶性四唑盐(WST-1)法测定总超氧化物歧化酶(SOD)活力,硫代巴比妥酸(TBA)法测定丙二醛(MDA)蛋白表达量。实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、血红素氧合酶-1(HO-1)的信使核糖核酸(mRNA)表达量,免疫组化检测Nrf2蛋白表达水平,蛋白质印迹法(WB)检测Keap1、HO-1蛋白表达水平。结果 选择辐照度3.6 mJ/(cm²·s)照射UVB 200 s,连续3 d建立小鼠皮肤急性光损伤模型。预先外用橙皮素乳膏后,受照射...     

Nrf2-Keap1-ARE信号通路在复发性流产绒毛组织中的表达及其与氧化应激和炎症反应关系研究

目的 探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)-Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)-抗氧化反应元件(ARE)信号通路在复发性流产绒毛组织中的表达水平及其与氧化应激和炎症反应的关系。方法 纳入2019年3月至2021年9月广东医科大学附属医院收治的59例复发性流产孕妇作为病例组,于同期随机选取65例行人工流产孕妇作为对照组。采用化学比色法检测绒毛组织丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性,酶联免疫吸附试验法检测血清白介素(IL)-6和IL-10水平,免疫组织化学法检测绒毛组织Nrf2、Keap1、ARE阳性表达情况,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测绒毛组织Nrf2、Keap1、ARE mRNA相对表达量。结果 病例组绒毛组织中MDA含量高于对照组,SOD、CAT、GPX活性低于对照组(P<0.05)。病例组血清IL-6、IL-10水平低于对照组(P<0.05)。病例组绒毛组织中Nrf2、ARE阳性表达率低于对照组,Keap1阳性表达率高于对照组(P<0.05)。病例组绒毛组织中Nrf...     

miRNA-7在中波紫外线诱导HaCaT细胞氧化应激损伤中的作用

目的探讨微小RNA-7(microRNA-7,miRNA-7)对中波紫外线(UVB)照射诱导的皮肤氧化应激损伤的保护性作用及其作用机制。方法建立UVB照射诱导的人永生化表皮角质形成细胞(HaCaT)氧化应激损伤模型,脂质体转染法过表达miR-7,并设立阴性对照组(miR-NC)和空白对照组。CKK-8法测定细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,比色法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,荧光法检测细胞内活性氧自由基(ROS)的含量,Real-time PCR和Western blot检测细胞中miR-7、Keap1及Nrf2 mRNA表达。结果与空白对照组相比,UVB模型组HaCaT细胞活性、SOD和GSH-Px活性显著下降(P均0.05),ROS含量显著上升(P0.05)。miR-7过表达能显著增加HaCaT细胞活性、SOD和GSH-Px活性,同时抑制Keap1蛋白的表达,增加Nrf2蛋白表达(P均0.05),siRNA-Nrf2转染后能显著抑制Nrf2表达(P0.05),进而逆转miR-7对细胞的保护作用。结论 miR-7能削弱UVB作用下HaCaT细胞的氧化应激损伤,其机制可能与Keap1-Nrf2信号通路的活化有关。     

紫外线对人皮肤成纤维细胞中Hrd1及Nrf2表达的影响

目的探讨紫外线(UV)照射对人皮肤成纤维细胞中羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白(Hrd)1及核因子E2相关因子(Nrf)2表达的影响及可能机制。方法共收集12份人皮肤组织标本,曝光及非曝光部位标本各6份,免疫组化检测2组Hrd1及Nrf2的表达。将体外培养人皮肤成纤维细胞分为对照组、UVA组、UVB组,照光后用Western blot法检测各组成纤维细胞中Hrd1及Nrf2的表达。应用Hrd1-siRNA转染体外培养人皮肤成纤维细胞,下调细胞中Hrd1的表达后,Western blot检测成纤维细胞Nrf2的表达。应用免疫荧光分析检测细胞中Hrd1与Nrf2在细胞中的共定位情况,应用免疫共沉淀检测体外培养人成纤维细胞中Hrd1与Nrf2是否存在内源性结合。结果临床标本实验中,曝光部位皮肤组织中Hrd1表达(0.4756±0.0785)明显高于避光部位(0.1270±0.0253,t=7.317,P<0.05),曝光部位皮肤组织中Nrf2表达(0.1190±0.0217)明显低于避光部位(0.2629±0.0263,t=7.306,P<0.05)。体外培养成纤维细胞实验中,经紫外线照射后,UVA组与对照组相比,Hrd1蛋白表达水平明显增高(t=7.227,P<0.05),Nrf2蛋白表达水平明显下降(t=6.456,P<0.05);同样,UVB组与对照组相比,Hrd1蛋白表达水平明显增高(t=2.980,P<0.05),Nrf2蛋白表达水平明显下降(t=13.52,P<0.05)。应用Hrd1-SiRNA下调体外培养人纤维细胞中Hrd1的表达后,无论是经UVA照射还是UVB照射,被下调Hrd1组细胞内Nrf2的表达较未下调组明显升高。免疫荧光分析结果显示Hrd1与Nrf2在体外培养人皮肤成纤维细胞中的均有表达,并且在细胞中存在Hrd1与Nrf2共定位。免疫共沉淀验证了Hrd1与Nrf2在体外培养人皮肤成纤维细胞中存在内源性结合。结论Hrd1与Nrf2在人皮肤成纤维细胞中存在结合,紫外线照射可通过增加细胞中Hrd1的表达从而抑制Nrf2的表达。     

茶多酚对长波紫外线诱导HaCaT细胞急性光损伤的防护作用

目的探讨茶多酚对长波紫外线(UVA)诱导HaCaT细胞急性光损伤的防护作用及其机制。方法用光学显微镜、MTT法检测UVA对细胞形态及增殖活性影响,构建UVA致HaCaT细胞急性光损伤模型;用MTT法检测茶多酚对细胞增殖活性影响,获得茶多酚对HaCaT细胞最适浓度;检测茶多酚处理前后细胞增殖活性(MTT法)、细胞膜损伤(LDH)情况;Western blot、RT-PCR检测茶多酚处理前后核因子NF-E2相关因子2(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)蛋白胞内分布、Nrf2 mRNA及下游Ⅱ相解毒酶表达情况。结果 20 J/cm~2 UVA致HaCaT细胞形态学改变且抑制细胞增殖活性(0.11±0.50;P0.05),可用于构建UVA致HaCaT细胞急性光损伤模型;茶多酚剂量依赖性抑制细胞增殖活性,11μg/mL为本实验最适茶多酚浓度;相比对照组、UVA组的细胞增殖活性(1.043±0.203;0.113±0.050)和LDH(1.000±0.092;1.858±0.016),照射前加入茶多酚可显著提高细胞增殖活性(1.322±0.080;均P0.05)和减少LDH释放(0.500±0.079;均P0.05);Western blot、RT-PCR结果显示,茶多酚可显著增加核内Nrf2蛋白表达,上调Nrf2 mRNA(1.804±0.229)及下游Ⅱ相解毒酶SOD mRNA(1.172±0.148)、CAT mRNA(1.617±0.259)、GCLC mRNA(1.183±0.083)、GCLM mRNA(1.228±0.256)的表达。结论茶多酚可有效防护UVA诱导HaCaT细胞急性光损伤,且茶多酚可增加核内Nrf2蛋白及其mRNA和下游Ⅱ相解毒酶mRNA的表达,茶多酚的光防护作用可能与Nrf2信号通路有关。     

白癜风患者血浆中氧化与抗氧化相关指标的检测

目的通过对白癜风患者及健康对照者血浆中氧化与抗氧化相关指标——超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、维生素E(VitE)及一氧化氮(NO)表达水平的测定,探讨氧化应激在白癜风发病机制及疾病发展中的作用和意义。方法选择60例白癜风患者(患者组)和40名健康志愿者(健康对照组)为研究对象,化学法检测血浆中SOD,CAT,GSH-Px的活性及MDA,VE和NO的含量。结果患者组血浆中MDA含量及SOD活性明显高于健康对照组(P<0.01),而GSH-Px活性明显低于健康对照组(P<0.01);进展期白癜风患者血浆中MDA的含量及SOD的活性明显高于稳定期白癜风组(P<0.01),而GSH-Px活性明显低于稳定期白癜风患者(P<0.01);随MDA含量增加,GSH-Px活性逐渐降低,呈显著负相关关系(r=-0.337,P<0.01),而SOD活性逐渐升高,呈显著正相关关系(r=0.347,P<0.01);而在进展期和稳定期白癜风患者血浆中CAT,VE和NO的含量与健康对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论白癜风患者血浆中存在氧化-抗氧化失衡,白癜风的发病及病情活动与氧化应激可能相关。     

抗氧化因子Nrf2对H2O2诱导的人黑素细胞氧化应激水平和抗氧化基因表达的影响

目的 干预人黑素细胞中激活转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)的表达,观察其对过氧化氢(H₂O₂)诱导的氧化损伤作用,以及对Nrf2下游相关抗氧化基因表达影响。方法 将siRNA或pCMV6-XL5-Nrf2瞬时转染入PIG1细胞,从而上调或者下调Nrf2的表达,检测黑素细胞内活性氧簇(ROS)和丙二醛(MDA)浓度、细胞增殖情况,以及下游抗氧化基因还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸[NAD(P)H]、醌氧化还原酶(NQO-1)、血红素氧化酶(HO-1)和谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的表达。结果 H₂O₂预处理可促进PIG1细胞中ROS和MDA的生成。上调Nrf2的表达可在人黑素细胞中抑制H₂O₂诱导的ROS和MDA产生,促进细胞增殖及Nrf2核转位,增强NQO-1、HO-1及γ-GCS的表达,而下调Nrf2表达可观察到相反的结果。结论 在人黑素细胞中干预抗氧化因子Nrf2的表达可通过影响Nrf2相关抗氧化酶的活性来调控H₂O<...     

氧化应激、Nrf2和HO-1在白塞病中的表达及相关性分析

目的探讨白塞病(Behet's disease,BD)患者氧化应激、转录因子NF-E2相关因子(NF-E2-related factor2,Nrf2)和HO-1的表达情况及Nrf2,HO-1与BD的相关性。方法将38例BD患者分为活动期BD组和非活动期(稳定期)BD组,正常组以20例健康人为对照。分别对BD两组患者进行病情评分,采用常规法检测血中ESR和CRP水平、ELISA法检测Nrf2,HO-1和ROS的表达以及化学比色法检测MDA,T-AOC,SOD和GSH的含量。结果活动期BD组病情评分显著高于非活动期BD组(P0.01);活动期BD组ESR和CRP水平均较非活动期BD和正常组明显升高(P均0.01)。与正常组比较,BD两组血清ROS和MDA水平均明显升高(P0.05),T-AOC,SOD和GSH水平均显著下降(P0.05);而活动期BD组较非活动期BD组表达ROS,MDA,T-AOC,SOD和GSH差异明显(P0.05)。活动期BD组Nrf2和HO-1水平较非活动期BD组和正常组下降(P0.05),与病情评分、ESR和CRP呈负相关(P0.05),尤以Nrf2与病情评分和CRP相关性强(P0.01)。结论 BD存在氧化应激异常;在活动期Nrf2和HO-1下降,并随着病情加重而降低;Nrf2的下降可能与BD的发展和加重密切相关。     

低剂量中波紫外线照射Nrf2基因缺陷小鼠后诱导晒伤反应的实验研究

[目的]观察Nrf2-Keap1通路在保护皮肤免受中波紫外线(UVB)影响中的作用.[方法]8周龄雌性野生型(即Nrf2+/+组)和Nrf2-/-小鼠,每组8只,分别用200 mJ/cm2 UVB(FL120SE灯)照射小鼠耳朵背侧,用刻度计分别测量UVB照射前和照射后1、2、4、7、9、11、14 d小鼠耳朵厚度,记录照射前后两组鼠耳皮肤镜下形态,36 h取各组鼠耳标本进行HE染色及TUNEL实验,记录结果并进行统计学分析.[结果]Nrf2-/-组小鼠耳平均厚度为(0.49±0.22) cm,Nrf2+/+组为(0.25±0.03) cm,经秩和检验,差异有统计学意义(P＜0.01).UVB照射小鼠后36 h组织学检查,Nrf2-/-组真皮水肿和表皮坏死,淋巴细胞浸润和真皮血管扩张更显著；表皮晒伤细胞数[(17.0±3.9)/视野]也较Nrf2+/+组[(5.0±1.7)/视野]明显,两组差异有统计学意义(P＜ 0.01)；Nrf2-/-组TUNEL阳性细胞数约是Nrf2+/+组的5倍.单一UVB照射Nrf2-/-小鼠较Nrf2+/+小鼠发生更强烈而持久的晒伤反应.[结论]Nrf2-Keap1通路可保护皮肤免受UVB的影响,包括由于UVB照射引起的细胞凋亡和氧化损伤.     

维生素B_2修饰的纳米酶对紫外线诱导HaCaT细胞氧化应激损伤的作用及机制

目的探讨维生素B_2修饰的纳米酶(VB_2-IONzymes)对中波紫外线(UVB)照射后HaCaT细胞氧化应激损伤的作用及可能的机制。方法 UVB照射诱导HaCaT细胞光损伤模型,将培养的HaCaT细胞分为空白组、UVB照射组、VB_2-IONzymes组、UVB+VB_2-IONzymes组。CCK-8检测HaCaT细胞增殖活性,酶生化法检测细胞醛缩酶(MDA)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平,ELISA法检测细胞中Nrf2及HO-1蛋白水平。结果 UVB照射组HaCaT细胞增殖活性显著降低,细胞MDA水平升高,SOD水平降低,Nrf2及HO-1蛋白表达下降,与空白组相比,差异均有统计学意义(P0.01);加入VB_2-IONzymes后,与UVB照射组相比,细胞活力明显提高(P0.05),细胞MDA水平显著降低,细胞内SOD水平、Nrf2及HO-1蛋白表达均显著上升(P均0.01)。结论 VB_2-IONzymes有抗氧化应激作用,其机制可能与促进Nrf2和HO-1表达相关。