精密肝切片中乙醛活化肝星状细胞模型的建立

目的:在精密肝切片中利用乙醛激活肝星状细胞,建立一种星状细胞激活的体外模型,为研究和筛选阻抑肝纤维化发生的药物奠定基础。方法:利用振荡切片机制备精密肝切片,建立培养系统。以700μmol·L-1乙醛孵育切片,培养0、2、4、6h,测定培养基和组织匀浆中谷胱甘肽S-转移酶(GST)、乳酸脱氢酶(LDH)和羟脯氨酸(Hyp)含量,观察病理切片中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。结果:与0h相比,乙醛培养2、4、6h培养基的GST、LDH漏出量均显著升高(P<0.05)。切片组织Hyp含量6h较0h相比明显升高(P<0.05)。免疫组化片镜下可见4、6h有α-SMA阳性细胞表达,图像分析显示面积和阳性率较0h明显增加(P<0.05)。结论:精密肝切片与终浓度为700μmol·L-1乙醛共孵育6h可活化切片中星状细胞,该技术可作为良好的体外肝星状细胞激活模型。α-SMA免疫组化是一鉴定体外星状细胞激活的可靠指标。     

莪术醇对肝星状细胞内质网应激和凋亡的作用研究

目的 探究莪术醇对肝星状细胞内质网应激和凋亡的作用，阐明其抗肝纤维化作用的机制。方法 将肝星状细胞分为对照组(正常培养)、模型组(1μg·mL^-1脂多糖)和低、中、高剂量实验组(在模型组基础上分别使用12.5、25.0和50.0 mg·L^-1莪术醇处理)组。用噻唑蓝法检测莪术醇对肝星状细胞活力的影响；用流式细胞术检测各组细胞凋亡发生情况和各组活性氧(ROS)的表达；用蛋白质印迹法检测各组B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、内质网应激相关蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶RNA样内质网激酶p-PERK)、半胱氨酸蛋白酶12(caspase12)蛋白表达情况；用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅰ型(collagenⅠ)、胶原蛋白Ⅲ型(collagenⅢ)mRNA表达情况。结果 对照组、模型组、高剂量实验组细胞ROS表达水平分别为(21.09±4.51)%、(32.78±2.90)%和(72.81±6.89)%; GRP78蛋白相对表达水...     

蒿鳖养阴软坚方抗小鼠血吸虫病肝纤维化及其机制的研究

目的 明确蒿鳖养阴软坚方对血吸虫病肝纤维化的治疗作用,探讨肝星状细胞凋亡与抗血吸虫病肝纤维化的关系.方法 血吸虫尾蚴25条/只经腹壁皮肤感染小鼠,12周之后建立小鼠血吸虫病肝纤维化模型.将全部感染小鼠随机分为蒿鳖养阴软坚方(8.20、2.59、0.82 g/kg)治疗组、阳性药物(复方鳖甲软肝片组0.54 g/kg、秋水仙碱组0.1 g/kg)组、模型对照组(短模组、长模组)和正常对照组.蒿鳖养阴软坚方组ig蒿鳖养阴软坚方干粉状提取物混悬液;阳性药物对照组ig相应的阳性药物;模型组ig生理盐水,1次/d,共12周.光镜观察肝细胞病理变化;盐酸水解法测定肝细胞羟脯氨酸含量;免疫组化法测定α-SMA表达和ISOL技术测定细胞凋亡情况.结果 蒿鳖养阴软坚方高、中剂量组胶原蛋白含量均明显降低(P＜0.05).模型组HSC细胞α-SMA大量表达;而蒿鳖养阴软坚方组肝星状细胞(HSC)细胞α-SMA表达较模型组明显减少(P＜0.01).蒿鳖养阴软坚方中剂量组比模型组肝星状细胞数量有显著差异(P＜0.05),与正常组肝星状细胞凋亡差异无显著性(P＞0.05).结论 蒿鳖养阴软坚方对小鼠血吸虫病肝纤维化有治疗作用.抑制HSC的活化,并诱导其发生凋亡,是蒿鳖养阴软坚方抗血吸虫病肝纤维化的机制之一.     

复方鳖甲软肝方血清防治肝纤维化作用机制的实验研究

目的探讨复方鳖甲软肝方血清防治肝纤维化的作用机制。方法将45只雄性SD大鼠按照1∶1∶1的比例随机均分为正常组、模型组及复方鳖甲软肝片组(FFBJRGP组),正常组皮下注射橄榄油3 m L/(kg·d),并以1g/(kg·d)的剂量灌服蒸馏水,连续6周;模型组皮下注射以橄榄油配制的40%的CCl4构建大鼠肝纤维化模型,并以1 g/(kg·d)的剂量灌服蒸馏水,连续6周;FFBJRGP组皮下注射以橄榄油配制的40%CCl4,3 m L/(kg·d),并以1g/(kg·d)的剂量灌服复方鳖甲软肝片,连续6周。比较3组血清相关指标、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)mRNA、COX-2蛋白、鼠抗α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、血栓烷B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-K-PGF1α)及TXB2/6-K-PGF1α水平。结果模型组与FFBJRGP组总蛋白、AST及ALT水平均显著高于正常组(P<0.05),白蛋白水平均显著低于正常组(P<0.05);FFBJRGP组总蛋白、AST及ALT水平均显著低于模型组(P<0.05),白蛋白水平显著高于模型组(P<0.05)。模型组与FFBJRGP组COX-2mRNA、COX-2蛋白、α-SMA评分均显著高于正常组(P<0.05),FFBJRGP组上述指标评分均显著低于模型组(P<0.05)。正常组与FFBJRGP组TXB2、TXB2/6-K-PGF1α水平均显著小于模型组(P<0.05),3组6-K-PGF1α水平差异无统计学意义。结论复方鳖甲软肝方可有效改善肝纤维化大鼠肝功能,其通过降低肝纤维化大鼠COX-2水平可能是其防治肝纤维化的作用机制之一。     

丹参素通过MEK/ERK信号通路抑制肝纤维化

目的探讨丹参素对大鼠肝纤维化的防治作用及其作用机制。方法将48只雄性成年SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、丹参素给药组(低剂量组20 mg·kg-1和高剂量组40 mg·kg-1),每组各12只。除正常对照组外,其余3组每周2次50%CCl4/橄榄油溶液(1 m L·kg-1)灌胃建立肝纤维化模型,同时治疗组大鼠分别每日1次腹腔注射丹参素20、40 mg·kg-1。8周后处死所有实验大鼠,观察其肝脏形态和肝脏指数的变化,HE和VG染色检测肝组织病理学的变化,全自动生化分析仪检测肝功能(AST、ALT)和肝纤维化指标(PⅢNP、collagenⅣ、HA、LN),Western blot测定肝组织中MEK/ERK信号通路相关蛋白,同时结合免疫组化、免疫荧光实验结果,探究丹参素抗肝纤维化作用的机制。实时定量PCR检测肝脏细胞外基质的降解(MMP-13、MMP-1、TIMP-1、collagenⅠ和collagenⅢ)、血管生成及调控因子(VEGF、β-FGF、PD-ECGF)及肝脏星状细胞激活因子(α-SMA,TGF-β,Desmin,Vimentin)m RNA的表达,检测Bcl-2、Bax、cleaved caspase 3、caspase-3蛋白表达量的变化,研究丹参素对肝星状细胞激活与凋亡的影响。结果与模型组相比,丹参素给药组显著提高大鼠肝功能指标,并降低其肝纤维化程度,同时大鼠肝组织病理学形态也获得了改善(P<0.05);丹参素增强Bax、cleaved caspase 3蛋白表达水平时的同时能降低Bcl-2及总caspase 3表达。实验结果表明丹参素能促进肝脏星状细胞的凋亡,有效调节细胞外基质的降解并降低血管生成调控因子的表达,抑制肝脏星状细胞的激活。同时丹参素能够降低肝组织中p-MEK、p-ERK蛋白的表达水平。结论丹参素可通过调节MEK/ERK信号途径发挥抗肝纤维化的作用。     

青蒿琥酯抗大鼠免疫性肝纤维化的作用及机制研究

目的研究青蒿琥酯抗实验性肝纤维化的作用及其可能机制。方法制备牛血清白蛋白免疫性大鼠肝纤维化模型。动物随机分为6组:正常对照组、模型对照组、Art组(5、15、45 mg.kg-1)、阳性对照Col组(0.1 mg.kg-1)。Masson染色观察肝组织病理变化,Jamall法测定肝组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量,RT-PCR技术检测肝组织转化生长因子β1(TGF-β1),α-肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达。体外培养大鼠肝星状细胞株(HSC-T6),用TGF-β1(5μg.L-1)刺激,与Art(终浓度6.25、25、50 mg.L-1)共培养后,检测HSC-T6中Ⅰ型前胶原(procollagenⅠ)mRNA及Ⅰ型胶原(collagenⅠ)蛋白的表达。结果与模型组相比,Art各组能减轻肝组织纤维增生的程度,降低肝组织Hyp含量,使肝组织α-SMA、TGF-β1 mRNA和HSC-T6中procollagenⅠmRNA和collagenⅠ蛋白的表达水平下降。结论 Art有明显的抗肝纤维化作用,其机制可能与抑制HSC活化,降低TGF-β1 mR-NA及collagenⅠ蛋白的表达有关。     

双参饮对肝纤维化模型大鼠的改善作用及机制研究

目的:研究双参饮对肝纤维化模型大鼠的肝功能和肝纤维化程度的改善作用及其机制。方法:取健康SD大鼠,以含40%四氯化碳的橄榄油溶液连续7周腹腔注射,建立肝纤维化模型。将造模成功的47只大鼠随机分为模型组、阳性对照组和双参饮低、中、高剂量组,各组分别为9、9、9、10、10只;另取10只健康SD大鼠作为正常组。从造模结束后次周开始,模型组与正常组大鼠灌胃水,阳性对照组[秋水仙碱0.2 mg/(kg·d)]和双参饮各剂量组[双参饮水煎液3、6、12 g/(kg·d),以总生药量计算]大鼠分别灌胃相应药液,连续给药28 d。采用赖氏分析法检测血清中肝功能指标[丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)]水平,采用酶联免疫吸附法检测血清中肝纤维化指标[透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型胶原(Ⅲ-PC)、Ⅳ型胶原前体(Ⅳ-C)]水平;采用苏木精-伊红染色法和苦味酸酸性复红染色法观察大鼠肝组织病理学变化;采用分光光度法检测大鼠肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(HYP)水平;采用免疫组化法检测大鼠肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清中ALT、AST、TBIL、HA、LN、PC-Ⅲ、Ⅳ-C水平均显著升高,ALB水平显著降低(P<0.05);大鼠肝组织出现空泡变性、纤维组织增生等病理现象;肝组织中SOD水平显著降低,MDA、HYP水平均显著升高(P<0.05);肝组织中可见大量α-SMA蛋白阳性染色颗粒,其蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,双参饮各剂量组大鼠血清中ALT、AST和肝纤维化指标水平均显著降低,ALB水平显著升高,双参饮中、高剂量组TBIL水平均显著降低(P<0.05);肝细胞变性、纤维化组织增生现象均有较大改善;肝组织中SOD水平显著升高,MDA、HYP水平均显著降低(P<0.05);α-SMA蛋白阳性染色明显减少,其蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:双参饮对肝纤维化模型大鼠有保肝、抗肝纤维化的作用,其机制可能主要是通过增强机体抗氧化能力、下调α-SMA蛋白表达、抑制肝星状细胞的活化、减少细胞外间质的合成,从而逆转肝纤维化进程。     

鬼箭羽醇提物对四氯化碳诱导小鼠肝纤维化模型的作用

目的探讨鬼箭羽醇提物对四氯化碳(CCl_4)致小鼠肝纤维化的作用与机制。方法 80只C57BL/6♂小鼠随机分成8组:正常组、CCl_4组、鬼箭羽醇提物早期治疗组(EAE)和后期治疗组(EAL),治疗组再分别分为低、中、高剂量组(EAE-L/M/H,EAL-L/M/H),每组10只。腹腔注射CCl_4制备肝纤维化模型,共30 d,EAE和EAL分别于前15 d和后15 d灌胃不同剂量EA。处死后,HE和Masson染色观察肝组织与胶原纤维变化,ELISA检测血清(ALT)、(AST)、(TNF-α)变化,免疫组化和Western blot检测α-SMA、CollagenⅠ的表达。结果与正常组相比,EA各组的肝指数、ALT、AST、TNF-α及α-SMA、CollagenⅠ的表达呈剂量依赖性的低于模型组(P<0.05或P<0.01);EAE和EAL各组肝组织形态与胶原纤维变化也明显呈剂量依赖性优于模型组;且EAE组在HE染色、Masson染色及α-SMA、CollagenⅠ的表达方面,效果明显优于EAL组(P<0.05)。结论 EA呈剂量依赖性阻止CCl_4所诱导的小鼠肝纤维化,且早期治疗效果明显,其机制可能与抑制TNF-α的生成,进而影响α-SMA、CollagenⅠ的表达有关。     

高血糖对肝纤维化大鼠肝组织α—SMA和CTGF表达的影响

目的 探讨高血糖对肝纤维化大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA反映肝星状细胞HSC活化)和结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响.方法 将52只SD雄性大鼠随机分为糖尿病肝纤维化组、正常血糖肝纤维化组与正常对照组.通过链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱导糖尿病,后用四氯化碳诱导肝纤维化.肝组织HE染色检测病理改变.免疫组化法检测肝组织α-SMA、CTGT蛋白表达.结果 高血糖肝纤维化组α-SMA(灰度值142.5±3.67)和CTGF(灰度值144.2±5.01)表达水平较正常血糖肝纤维化组(α-SMA灰度值158.9±2.18,CTGF灰度值157.7±6.80)显著升高(P＜0.05).结论 高血糖可通过诱导肝脏α-SMA、CTGF表达,加重大鼠肝纤维化的程度,促进肝纤维化的形成.其机制与促进肝星状细胞的增殖活化及细胞外基质的合成分泌等有关.     

青蒿琥酯在大鼠体内外抗肝纤维化的作用

目的观察青蒿琥酯(artesunate,Art)对大鼠肝纤维化的治疗作用及其对大鼠原代肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)增殖的影响,并探讨其作用机制。方法建立牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)免疫性肝纤维化大鼠模型,分为正常对照组、模型对照组及青蒿琥酯低、中、高剂量组;给药组分别给予不同剂量的青蒿琥酯灌胃,正常和模型对照组给予同体积蒸馏水灌胃,每日1次,连续2个月;酸水解法检测其肝组织胶原蛋白含量,测定血清白蛋白(albumin,Alb)、丙氨酸氨基转移酶(alanine amino transferase,ALT)及天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate amino transferase,AST)水平;苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE染色)和胶原染色法对肝组织切片染色。分离大鼠HSCs,以培养活化HSCs。用MTT法测定HSCs增殖率,消化法测定细胞培养上清液中的羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量,Western blot和RT-PCR法检测HSCs p53表达。结果与正常对照组相比,模型对照组大鼠血清Alb水平降低(P<0.05),ALT、AST水平增高(P<0.05);与模型对照组相比,青蒿琥酯低、中、高剂量组血清AST水平降低(P<0.05),大鼠肝组织胶原蛋白含量降低(P<0.05)。青蒿琥酯对培养活化的HSCs有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性(P<0.05);青蒿琥酯作用24 h后,HSCs分泌羟脯氨酸减少(P<0.05),p53 mRNA表达增加(P<0.05)。结论青蒿琥酯在大鼠体内、体外均有抗肝纤维化作用,该作用与其增加HSCs p53的表达有关。     

汉黄芩素对胶质瘤U251细胞Survivin mRNA及Caspase-3mRNA表达的影响研究

目的 探讨汉黄芩素对胶质瘤U251细胞Survivin mRNA及Caspase-3 mRNA表达的影响.方法 192株人胶质瘤U251细胞株分别用汉黄芩素（96株）、替莫唑胺（TMZ）（48株）处理,留取48株作为空白对照组,半定量RT-PCR法检测Survivin mRNA与Caspase-3 mRNA表达强度,并在3组之间进行对比分析.结果 空白对照组Survivin mRNA表达强度为（0.773±0.176） μM,显著高于汉黄芩素组的（0.382±0.087） μM及TMZ组的（0.408±0.092） μM （P ＜ 0.05）;Caspase-3 mRNA表达强度为（0.097±0.043） μM,显著低于汉黄芩素组的（0.454±0.213） μM及TMZ组的（0.432±0.187） μM（P ＜ 0.05）,汉黄芩组与TMZ组之间比较差异无统计学意义（P ＞ 0.05）.结论 汉黄芩素可通过下调Survivin mRNA的表达并上调Caspase-3 mRNA的表达起到有效诱导人胶质瘤U251细胞凋亡的作用.     

自噬抑制剂对乙醇诱导的肝星状细胞活化作用的影响

【摘要】目的 观察自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）对乙醇诱导的肝星状细胞（HSC）活化作用,并探讨其作用机制。方法 体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,设立空白对照组、阳性对照组（乙醇刺激组）、低剂量组（5 mmol/L3-MA+100mmol/L乙醇）、高剂量组（10mmol/L3-MA+100mmol/L乙醇）。RT-PCR分析各组HSC活化标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原基因表达,Western blot法检测各组HSC中自噬水平标志蛋白LC3Ⅱ、α- SMA、Ⅰ型胶原表达;MTT法检测3-MA对乙醇诱导的HSC增殖的影响。结果与空白对照组比较,阳性对照组中α- SMA、Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达及LC3Ⅱ表达量明显增加（P＜0.05）,高剂量组却显著减少（P＜0.01）;与阳性对照组比较,低剂量组和高剂量组中α-SMA、Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达及LC3Ⅱ表达量逐渐减少（P＜0.05）;与低剂量组比较,高剂量组中α-SMA、Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达及LC3Ⅱ表达减少（P＜0.05）。与阳性对照组比较,加入3- MA处理后的HSC增殖显著减少（P＜0.05）。结论3-MA可抑制乙醇诱导的HSC-T6细胞中LC3Ⅱ蛋白的表达、α- SMA、Ⅰ型胶原mRNA及蛋白的表达,抑制HSC增殖,且高剂量的作用更明显。     

鬼针草总黄酮对免疫性肝纤维化大鼠胶原代谢的影响及机制

目的探讨鬼针草总黄酮(TFB)对免疫性肝纤维化大鼠胶原代谢的影响及机制。方法 SD大鼠随机分为正常组、模型组、TFB大、中、小剂量组和秋水仙碱阳性药对照组,采用腹腔注射猪血清诱导肝纤维化模型,造模后灌服相应的受试药物。ELISA法测定大鼠血清Ⅲ型前胶原酶(PCⅢ)、Ⅳ型胶原酶(CⅣ)含量;免疫组化法测定肝组织中Ⅰ型胶原蛋白的表达;RT-PCR技术检测肝组织中Ⅰ型胶原、α-SMA、TGF-β1 mRNA的表达情况;Western blot检测肝组织中Smad2蛋白的表达。结果与模型组相比,TFB能明显降低肝纤维化大鼠血清中PCⅢ、CⅣ含量,抑制肝组织中Ⅰ型胶原、α-SMA、TGF-β1 mRNA及Ⅰ型胶原、Smad2蛋白的表达。结论 TFB能明显降低免疫性大鼠肝纤维化胶原含量,其机制可能与降低TGF-β1表达进而抑制肝星状细胞活化减少胶原生成有关。     

生长抑制因子AcSDKP对转化生长因子β1促活化肝星状细胞合成和分泌细胞外基质的影响

目的:观察生长抑制因子N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对转化生长因子β(1TGF-β1)促活化肝星状细胞(HSC)合成和分泌细胞外基质(ECM)的影响,探讨其抗纤维化作用机制。方法:大鼠HSC经原代分离培养活化后,分为空白对照组、TGF-β1组(5μg.L-1)、AcSDKP组(1nmol.L-1)、混合处理组(AcSDKP1nmol.L-1+TGF-β15μg.L-1),每组6个复孔,加入相应药物培养72h后,观察各组HSC形态学变化,检测其中Ⅰ型胶原(ColⅠ)mRNA、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的表达及HSC上清液中玻璃酸(HA)的含量。结果:与空白对照组比较,TGF-β1组HSCColⅠmRNA表达、HA含量均明显升高(P<0.05),AcSDKP组ColⅠmRNA表达、HA含量、α-SMA蛋白表达均明显降低(P<0.05);与TGF-β1组比较,混合处理组ColⅠmRNA表达、HA含量、α-SMA蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论:AcSDKP可能通过抑制TGF-β1介导的活化HSC合成和分泌ECM,从而发挥其抗肝纤维化作用。     

雌二醇对大鼠肝星状细胞MMP-2、TIMP-1表达的影响

目的探讨雌二醇对肝星状细胞（HSC）的影响及其可能的作用途径。方法培养大鼠HSC,初次传代后,HSC随机分为4组,分别加入不同浓度的雌二醇,噻唑蓝（MTT）法检测雌二醇对HSC增殖的影响;逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）分析其对HSC的基质金属蛋白酶因子（MMP-2）、组织金属蛋白酶抑制剂（TIMP-1）的mRNA表达的影响;免疫细胞化学分析其对HSC的α—SMA蛋白的表达的影响。结果MTT法发现雌二醇抑制HSC的增殖,并且随浓度增加抑制作用增强,与阳性对照组比较雌二醇干预组HSCMMP-2mRNA表达增加（P〈0．01）,TIMP—1mRNA的表达下降（P〈0．01）,α-SMA蛋白表达明显下降（P〈0．05）。结论雌二醇具有抑制肝纤维化作用是因为：①可以抑制HSC的增殖、活化;②促进MMP-2mRNA的表达,抑制了TIMP-1mRNA的表达。     

Paeoniae radix reduces PDGF-stimulated hepatic stellate cell migration

Hepatic stellate cells (HSCs) play a key role in the pathogenesis of liver fibrosis. In chronic liver injury, HSCs undergo transdifferentiation to an activated myofibroblastic phenotype and migrate to injured areas in response to chemotactic factors, producing extracellular matrix proteins such as collagen type I to repair the damage as well as overexpression of α-smooth muscle actin (α-SMA). Paeoniae Radix, the root of Paeonia lactiflora Pall, was investigated for PDGF-BB-induced HSC chemotaxis. Rat HSCs and LX-2, a human HSC cell line, were used for the in vitro experiments. Cell migration was analyzed by wound-healing and transwell assays. An ELISA and a Sircol collagen assay kit were used to detect the expressions of α-SMA and of collagen, respectively. Phosphorylations of mitogen-activated protein kinases, including ERK 1/2, p38, and JNK, were evaluated with immunoblotting. Results indicated that PDGF-BB increased migration as well as α-SMA and collagen expression in HSCs. Paeoniae Radix extracts and its active components, paeonol and 1,2,3,4,6-penta- O-galloyl- β-D-glucose (PGG), inhibited PDGF-BB-induced HSC migration and α-SMA and collagen expressions in a concentration-dependent manner. The inhibitory effects were associated with downregulation of PDGF receptor- α, ERK, p38, and JNK activation. Both paeonol and PGG participate in HSC migration, but via differential mechanisms.     

大肠癌中环氧化酶-2和生存素的表达与肿瘤血管生成的关系种

目的:探讨大肠癌中环氧化酶-2(COX-2)、生存素(Survivin)的表达及二者与微血管密度(MVD)的关系。方法:应用免疫组织化学S-P法检测48例大肠癌中COX-2、Survivin以及MVD(采用CD34标记)的表达情况,将其在大肠癌中的表达情况与临床病理指标的关系进行了统计分析。结果:(1)COX-2和Survivin在大肠癌中的表达与Dukes分期有关(P<0.05)。(2)COX-2与Survivin在大肠癌中的表达呈正相关(r=0.318,P<0.05)。(3)大肠癌中COX-2、Survivin表达阳性组的MVD值高于表达阴性组(P<0.01);Survivin,COX-2表达共同阳性组的MVD值高于共同阴性组(P<0.01)。结论:COX-2和Survivin在大肠癌的发生和发展中起了重要作用,并可能协同促进了大肠癌血管的形成。     

血小板衍生生长因子体外对大鼠肝星状细胞表达细胞外基质的影响

目的研究体外大鼠肝星状细胞(HSC)中血小板衍生生长因子(PDGF)信号通路的激活对于HSC表达细胞外基质(ECM)的影响。方法分离、纯化大鼠原代HSC并体外培养;以MTT实验检测PDGF对HSC增殖的作用;以West-ern blot和Real-time PCR方法分别检测PDGF对PDGF-βR与CTGF、ECM成分α-SMA、α1(I)collagen和fibronectin,以及调控ECM降解平衡的MMP-2和TIMP-1表达的影响。结果 MTT实验结果表明PDGF以剂量依赖性和时间依赖性的方式促进HSC的增殖。PDGF可以促进其受体PDGF-βR和CTGF的蛋白与mRNA表达。PDGF还可明显上调ECM成分α-SMA、α1(I)collagen和fibronectin的表达。此外,PDGF影响ECM的降解平衡,表现为TIMP-1的表达上调,而MMP-2的表达下调。结论 PDGF/PDGF-βR信号转导途径可明显促进HSC活化与ECM生成,抑制ECM降解。所得结果可以为药物阻滞PDGF信号转导从而抑制肝纤维化提供依据。     

虫草菌丝对实验性肝纤维化的防治作用及其机制研究

目的 :探讨虫草菌丝对实验性慢性肝炎纤维化形成的抑制作用及其可能的作用机制。方法 :以CCl4 及乙醇诱导大鼠肝纤维化模型 ,自造模 10d后给予虫草菌丝悬浊液灌胃 ,同时设立正常对照组和模型对照组。于造模 9wk后处死全部大鼠 ,取血及肝组织标本。使用HE染色法观察肝组织形态学变化和肝纤维化病理学分级 ,生化及放免法测定血清ALT ,AST ,透明质酸 (HA) ,板层素 (LN)含量 ,使用免疫组化法及原位杂交法观察α 平滑肌动蛋白(α SMA) ,转化生长因子 β1(TGFβ1) ,血小板衍生生长因子 (PDGF) ,Ⅰ型和Ⅲ型胶原的蛋白或mRNA表达情况。结果 :与模型组相比 ,虫草组大鼠血清HA ,LN ,AST ,ALT含量均显著下降 (2 0 2±s 79vs316± 94 ;5 0± 3vs 6 0± 10 ;86± 34vs 2 2 4± 179;14 7± 6 0vs 2 73± 130 ;P <0 .0 5 )。肝组织表达α SMA ,TGFβ1,TGFβ1mRNA ,Ⅰ型胶原mRNA ,PDGF均显著减少 (0 .2± 0 .14vs 1.7± 1.4 ;1.7±0 .5vs 3.2± 1.2 ;1.1± 0 .8vs 2 .6± 1.4 ;0 .9±0 .4vs 1.9± 0 .7,P <0 .0 5 )。Ⅲ型胶原mRNA表达呈下调趋势 (0 .4± 0 .3vs 1.0± 0 .7,P =0 .0 6 95 )。而PDGFmRNA的表达下调则不明显 (0 .4± 0 .3vs 0 .7± 0 .5 ,P >0 .0 5 )。结论 :虫草菌丝能够抑制慢性肝炎纤维化的形成 ,延缓其