环状RNA在胰腺癌中的研究进展

胰腺癌是预后最差的消化道恶性肿瘤, 其发生发展机制仍待研究。环状RNA(circRNA)是一类具有连续、共价闭合的环状结构的单链RNA, 其生物学功能包括作为微小RNA的海绵、调节基因转录、影响同源信使RNA(mRNA)剪接、与蛋白质交互作用、翻译蛋白质等。研究显示circRNA在胰腺癌中表达失调, 通过多种途径影响肿瘤进展, 并调节胰腺癌的肿瘤微环境。本文综述circRNA的生物学功能及其对胰腺癌恶性表型的调控作用, 为其临床应用及基础研究提供新的思路。     

环状RNA中的相关特定分子对膀胱癌细胞影响的研究进展

环状RNA(circRNA)是存在于真核细胞内的内源性非编码RNA,它是一种具有不同性质和功能的非编码RNA,其在肿瘤发生发展过程中所发挥的作用在很大程度上尚未被阐明。但随着近年来的研究,已发现其在膀胱癌细胞增殖迁徙、侵袭以及细胞周期和凋亡发挥着重要作用。本文章就circRNA中的某些靶向分子有望成为膀胱肿瘤细胞发生的有效靶点和肿瘤标记作一综述。     

环状RNA在胰腺癌中的研究现状与展望

目的 了解环状RNA(circRNA)在胰腺癌中的研究现状和未来的研究方向,为其进一步深入研究提供参考.方法 复习近年来关于circRNA在胰腺癌中研究的相关文献并加以综述.结果 有高通量测序结果显示,大量circRNA在胰腺癌组织和胰腺癌细胞系中表达异常,并且通过调控下游靶分子如微小RNA或RNA结合蛋白进而参与胰腺...     

环状RNA在肝细胞癌发生发展中的作用研究进展

环状RNA (circRNA)是一类内源性非编码RNA,是由线性RNA经反向剪切形成的闭合环状结构,广泛存在于真核细胞中,且可在多种体液中检测到,具有结构稳定、高度保守以及表达具有特异性等特点,是肿瘤的重要调节因子.circRNA主要通过吸附微小RNA (miRNA)或者RNA结合蛋白(RBP)发挥"海绵作用",进而调...     

环状RNA在脑缺血性损伤中作用机制的研究进展

环状RNA（circular RNA, circRNA）是广泛存在于生物体内的一种非编码RNA,具有闭合环状结构,经过特殊剪切机制形成,在基因转录后水平发挥重要调控作用。哺乳动物中枢神经系统中存在大量circRNA,与神经细胞增殖、分化、凋亡及脑缺血后神经细胞损伤密切相关。有研究表明脑缺血性疾病发生时,circRNA表...     

环状RNA与骨科相关疾病研究进展

环状RNA是最近发现的一类非编码RNA,缺少5'帽子和3'多聚A尾,以反向剪接的方式形成一个共价闭合的环形结构。最初认为circRNA是由基因转录过程中的错误引起的,然而,经过进一步调查,科学家们认为circRNAs具有重要的生物学意义。circRNAs具有稳定性、保守性和组织特异性。它们还可以作为miRNA海绵起作用,调节基因表达,并与蛋白质相互作用以影响细胞行为,参与多种骨科疾病(包括骨性关节炎、骨肉瘤等)的发生和发展,有望成为诊断生物标志物和治疗靶标。笔者简要回顾了circRNA的特征、生物起源、分类和功能,特别关注circRNA在多种骨科疾病中的作用。     

环状RNA FBXW7在三阴乳腺癌中的表达及其临床意义

背景与目的:环状RNA(circRNA)是参与多种癌症进程的重要调节因子.据报道,环状RNA FBXW7(circFBXW7)在胶质瘤中通过编码一种新蛋白发挥抑癌作用.然而,其在三阴性乳腺癌(TNBC)中的功能和机制尚不明确.本研究探讨了circFBXW7在TNBC中的作用及其临床意义.方法:收集240例TNBC患者的...     

肝内胆管细胞癌中hsa_circ_0089153的表达及其生物学功能

背景与目的:肝内胆管细胞癌(ICC)是仅次于肝细胞癌的第二大肝脏恶性肿瘤,其发病隐匿、恶性度高、预后差.环状RNA(circRNA)异常表达与多种恶性肿瘤的发生发展关系密切,但circRNA与ICC的关系研究较少.因此,本研究初步探讨ICC中差异表达circRNA及其生物学功能.方法:采用福建省立医院经病理确诊的5例I...     

环状RNA在膀胱癌中的研究进展

膀胱癌是男性泌尿生殖系统中最常见的恶性肿瘤之一。环状RNA（circRNA）是一种特殊类型的非编码RNA，其在生物学和病理学过程中具有重要的功能。目前，越来越多的证据表明，circRNA在膀胱癌的发生和发展中发挥重要作用。本文就circRNA在膀胱癌中的研究进展进行了综述。     

创伤性脊髓损伤后环状非编码RNA-微小RNA潜在调控网络信息挖掘

目的通过高通量测序获取创伤性脊髓损伤(traumatic spinal cord injury,TSCI)后环状非编码RNA(circular RNA,circRNA)与微小RNA(microRNA,miRNA)表达谱,预测潜在circRNA-miRNA调控网络。方法取48只雄性C57BL/6小鼠(体质量18~22 g)随机均分为两组(n=24),TSCI组采用Allen’s打击器械制备TSCI模型,假手术组(Sham组)仅切开椎板不损伤脊髓。术后3 d,两组取材行HE染色,观察脊髓组织结构;提取组织总RNA建库,高通量测序鉴定circRNA和miRNA差异表达谱,基因本体分析(gene ontology,GO)注释差异表达的circRNA宿主基因功能,筛选显著差异表达的miRNA,通过TargetScan和miRanda预测circRNAmiRNA靶向结合,筛选关键circRNA,构建潜在调控网络。结果HE染色示Sham组小鼠脊髓结构完整无破裂,TSCI组脊髓结构有明显损伤破裂。测序共鉴定出17440个circRNA、1228个miRNA。差异表达的circRNA宿主基因主要富集在细胞质,生物过程中差异基因主要富集在转录的正调控和蛋白磷酸化过程。差异表达最显著的miRNA为mmu-miR-21-5p,筛选出可与其靶向结合的circRNA6730,以circRNA6730为核心构建潜在circRNAmiRNA调控网络。结论通过表达谱分析和功能注释分析,显著差异表达的circRNA和miRNA有潜在的临床标志物价值,以circRNA6730为核心包含mmu-miR-21-5p的靶向互作网络可能在TSCI的发生发展过程中起重要调控作用,有助于阐明TSCI的病理生理进程机制,为临床诊疗提供新思路。     

205例丙型肝炎患者血脂水平的检测与分析

目的：探讨分析维吾尔族和汉族丙型肝炎患者血脂水平的变化及临床意义。方法对205例丙型肝炎患者外周血采用酶联免疫吸附法检测抗-HCV、荧光定量聚合酶链反应法检测HCV RNA,均相酶比色法检测高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、总胆固醇（Tch）和甘油三酯（TG）。采用免疫比浊法检测脂蛋白（a）[LP（a）]、载脂蛋白A1（apoA1）、载脂蛋白B（apoB）的水平,并进行统计分析。结果维吾尔族丙型肝炎患者HCV RNA的阳性率为79.46%,显著高于汉族患者（65.59%）,维吾尔族丙型肝炎患者HDL-C、Tch和apoA1的含量分别为（1.78±0.96）mmol/L、（3.38±1.79）mmol/L和（1.59±0.83）g/L,显著低于汉族患者[HDL-C、Tch和apoA1的含量分别为（2.25±1.29）mmol/L、（4.37±1.34）mmol/L和（1.95±0.88） g/L],差异均具有统计学意义（P均＜0.05）,但两民族患者间的抗-HCV阳性率、LDL-C、TG、LP （a）和apoB比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论与汉族丙型肝炎患者相比,维吾尔族丙型肝炎患者HCV RNA的阳性率高,而Tch、HDL-C和apoA1的含量降低,提示维吾尔族丙型肝炎患者肝细胞受损可能更为严重。     

徐州地区丙型肝炎病毒基因分型研究

目的：了解徐州地区丙型肝炎病毒（HCV）的基因型构成状况,分析HCV不同基因型感染患者之间肝功能以及病毒载量是否存在差异。方法对116例抗-HCV及HCV RNA阳性的患者,采用实时荧光PCR产物测序法检测HCV基因分型;同时检测血清肝功能的丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）和总胆红素（TBil）,采用荧光定量PCR方法检测血清HCV RNA水平。结果116例患者共检测出8种基因型,主要为1型63例（54.31%）,其中1a型1例,1b型61例,1c型1例;2型48例（41.38%）,其中2a型40例,2i型8例;3型（3a）1例（0.86%）;6型4例（3.45%）,6a型1例,6h型3例。1型、2型和6型患者之间的肝功能以及病毒载量,显示各型之间差异无统计学意义（P均＞0.05）。结论徐州地区HCV感染以基因1、2型为主,也存在一定数量的6型和3型;不同基因型HCV感染者肝功能及病毒载量差异无统计学意义。     

应用RNA干扰下调多药耐药蛋白4表达对结直肠癌细胞照射敏感性的影响

目的探讨多药耐药蛋白4（MRP4）表达对结直肠癌细胞照射敏感性的影响。方法应用慢病毒感染RNA干扰技术（RNAi）稳定下调人结直肠癌细胞株HCT116中MRP4的表达。将HCT116细胞分为未感染任何病毒的细胞株（CON）、加阴性对照病毒感染的细胞株（NC）和加RNAi靶点病毒感染的细胞株（KD）3组,应用实时定量RT-PCR和Western blot分别从RNA和蛋白水平检测MRP4表达变化,以验证RNAi的有效性。4Gy剂量照射后24h,流式细胞术检测细胞凋亡,MTT检测细胞增殖,比较RNAi后HCT116细胞株照射敏感性的差异。结果成功构建并转染慢病毒质粒,获得稳定沉默MRP4表达的HCT116-KD细胞株,HCT116-KD细胞株MRP4mRNA和蛋白表达水平较对照均明显下调（P〈0．05）。照射后24h,KD细胞株凋亡率为（71．7±0．8）％,明显高于CON组[（56．1±0．9）％]和NC组[（59．8±0．8）％]（P〈0．05）。照射后48h和72h,KD细胞增殖能力较对照组明显下降（火0．05）。结论MRP4在结直肠癌细胞中的表达水平与照射耐受显著相关,应用慢病毒感染RNA干扰下调MRP4表达可以增强结直肠癌细胞照射敏感性。MRP4有可能成为预测放疗敏感性的分子标志物。     

慢病毒介导的NOB1基因沉默对人结肠癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨RNA干扰技术沉默人NOB1基因对人结肠癌RKO细胞增殖和凋亡的影响。方法设计靶向NOB1基因的小干扰RNA（siRNA）,构建NOB1基因特异性的RNA干扰慢病毒载体,感染RKO细胞,并设置阴性对照组。实时定量PCR和Westemblot分别检测两组细胞NOB1mRNA及蛋白的表达情况;CellomicsArrayScanVTIHCS高内涵分析仪检测感染细胞的增殖和克隆形成能力;流式细胞术检测细胞周期及凋亡的变化：裸鼠成瘤实验检测0NOB1-siRNA对肿瘤的抑制作用。结果NOB1-shRNA慢病毒感染RKO细胞3d后．与阴性对照组比较．NOB1mRNA和蛋白的表达明显降低,克隆形成数减少,而细胞凋亡数增加（均P〈0．05）。裸鼠成瘤实验结果显示,NOB1．shRNA感染组裸鼠移植瘤体积为（405±102）mm3,小于阴性对照组的（870±165）mm3（P〈0．05）。结论通过RNA干扰方式沉默NOB1基因的表达．有望作为抑制结肠癌发展的有效手段。     

RNA干扰沉默酸性鞘磷脂酶1基因对人成纤维细胞凋亡的影响

目的为研发保护女性生殖细胞的小分子干扰RNA（siRNA）类药物,以人包皮成纤维细胞（HFF）为模型,检测靶向凋亡关键基因酸性鞘磷脂酶1（SMPD1）基因的siRNA对HFF凋亡的抑制作用。方法设计合成三对靶向SMPDI基因的siRNA并体外转染HFF细胞,转染后48h用丝裂霉素（MMC）诱导细胞凋亡。荧光定量逆转录-聚合酶链反应（O-RT-PCR）法及免疫印迹（Western blot）检测siRNA转染后SMPD1在mRNA水平和蛋白水平的变化,Annexin V—PI双染检测细胞凋亡率。用脂质体（lipofectamine 2000）和无干扰siRNA（NT siRNA）作为对照。结果siRNA1、2、3对SMPD1基因mRNA的抑制效率分别为（67．0±9．0）％、0％、（45．0±2．1）％,以siRNA1最高,蛋白水平的抑制也呈现相同变化。siR-NA1组细胞凋亡率为15．2％,明显低于MMC组（26．3％）。结论靶向SMPD1的siRNA可以抑制人包皮成纤维细胞凋亡。     

环状RNA-circ-VCAN在胶质瘤细胞中功能及作用机制研究

目的探索环状RNA-circ-VCAN在胶质瘤中功能及作用机制。方法荧光定量PCR验证环状RNA-circ-VCAN在正常胶质细胞以及胶质瘤细胞中的表达情况;核质分离实验验证circ-VCAN在细胞核质分布情况;RNase R消化线性RNA实验验证circ-VCAN对RNase R消化的抵抗能力;构建敲低环状RNA-circ-VCAN的U373和T98G瞬时转染细胞株;CCK8实验检测敲低环状RNA-circ-VCAN后细胞的增殖能力;Western blot检测NF-κB通路蛋白P-P65表达水平。结果与正常胶质细胞(HA1800)相比,环状RNA-circ-VCAN在胶质瘤细胞(尤其是在U373和T98G)中高表达,差异均有统计学意义(P0.05);细胞核质分离实验证明circ-VCAN主要存在细胞质中;circ-VCAN能抵抗RNase R的消化;CCK8实验证明敲低circ-VCAN能抑制U373和T98G的细胞增殖(P0.05);Westernblot检测敲低circ-VCAN后的U373和T98G细胞显示NF-κB通路蛋白P-P65表达水平减少。结论在胶质瘤细胞中敲低circ-VCAN能减慢胶质瘤细胞的生长,提示circ-VCAN可能成为一个新的治疗靶点。     

与放疗抵抗相关的长链非编码RNA在不同放疗敏感性结直肠癌细胞株中的表达

目的 筛选与结直肠癌细胞放疗敏感性相关的长链非编码RNA（lncRNA）.方法 将HT29、SW480、RKO、Lovo和HCT116等5株结直肠癌细胞梯度照光后行克隆形成实验,通过细胞存活率（SF2值）来检测5株细胞的放疗敏感性差异;利用高通量lncRNA芯片筛选在SW480、RKO和Lovo细胞株中两两比较表达差异均大于2倍的lncRNA,并通过实时定量PCR进一步检测所选lncRNA在5株结直肠癌细胞中的表达差异.结果 5株结直肠癌细胞放疗敏感性由低至高（即SF2值由高至低）依次为HT29 （0.83±0.03）、SW480 （0.69±0.02）、RKO （0.53±0.02）、Lovo （0.47±0.05）和HCT116（0.32±0.03）（P＜0.01）.lncRNA芯片筛选得到5种与结直肠癌细胞放疗敏感性相关的lncRNA基因,其中R05532、NR_015441和NR_033374基因表达水平与细胞放疗抵抗呈正相关（均P＜0.01）,而NR_073156和AA745020基因表达水平与细胞放疗抵抗无明显相关性（均P＞0.05）.结论 R05532、NR_015441和NR_033374三种lncRNA可能成为结直肠癌细胞放疗敏感性的预测分子,其高表达提示放疗抵抗。     

维吾尔族和汉族丙型肝炎患者T淋巴细胞亚群对比分析

目的：探讨分析维吾尔族和汉族丙型肝炎患者外周血中T淋巴细胞亚群的表达及意义。方法对247例丙型肝炎患者外周血采用酶联免疫吸附法检测抗-HCV、荧光定量聚合酶链反应法检测丙型肝炎RNA和流式细胞仪法对T淋巴细胞亚群进行分析。结果维吾尔族丙型肝炎患者CD4＋T（31.23±17.16）%和CD4＋/CD8＋（0.65±0.37）%均低于汉族患者（41.25±16.13）%和（0.92±0.38）%,维吾尔族丙型肝炎患者CD8＋ T（60.25±26.36）%高于汉族患者（52.91±22.59）%,差异均有统计学意义（t =4.65、5.52、2.30,P =0.00、0.00、0.02）,但两民族患者间抗-HCV阳性率差异无统计学意义（χ2=2.57,P =0.11）。结论维吾尔族丙型肝炎患者与汉族患者免疫功能不同,CD4＋T淋巴细胞免疫功能降低,可能是HCV持续感染和免疫耐受的重要原因之一。HCV持续感染患者的T淋巴细胞亚群的变化,加重了丙型肝炎的慢性化,临床应加以重视。     

HIV／HCV合并感染者联合抗反转录病毒治疗后死亡原因及危险因素分析

目的了解开展联合抗反转录病毒治疗（combined antiretroviral therapy,cART）后湖北省HIV／HCV合并感染者死亡情况及相关的危险因素。方法回顾性研究2003年1月—2010年12月在武汉大学中南医院就诊或在当地疾病预防控制中心会诊的427例HIV／HCV合并感染者的人口学和临床资料。采用Cox逐步回归模型分析死亡发生的相关因素;Kaplan—Meier方法分析晚期肝病对HIV／HCV合并感染者死亡的影响。结果427例HIV／HCV合并感染者随访期间53例患者死亡,病死率为12．4％,其中28例（52．8％）死于肝病相关的疾病。男性患者（RR=2．63,P=0．05）,受血感染（RR=2．15,P=0．04）,基线CD4^＋T细胞计数〈50个／μL（RR=2．83,P=0．02）,随访结束时HIVRNA载量≥10^4拷贝／mL（RR=2．79,P=0．00）及并发终末期肝病（RR=7．79,P=0．00）与死亡显著相关,而cART持续时间〉5年是死亡的保护因素（RR=0．03,P=0．00）。合并晚期肝病者的病死率高达52．7％（29／55）。结论肝病已成为HIV／HCV合并感染者死亡的主要原因,出现晚期肝病者死亡的风险高。     

RNA干扰抑制大鼠T淋巴细胞CD28基因表达的实验研究

目的：探讨RNA干扰（RNAi）后对大鼠T淋巴细胞共刺激分子CD28基因的表达及其对细胞功能的影响。方法：设计针对目标基因的小干扰RNA（siRNA）,转染大鼠T淋巴细胞。以FCAS检测CD28水平,MTT检测转染后T淋巴细胞对异体淋巴细胞增殖能力的影响。Reahime-PCR及ELISA法检测细胞因子水平。结果：siRNA转染大鼠T淋巴细胞后可抑制CD28的表达,T细胞增殖能力、IL-2、IFN-γ平明显低于空白对照组（P〈O．05）。结论：siRNA可特异性抑制大鼠T淋巴细胞共刺激分子CD28的表达,降低大鼠T细胞的增殖能力,抑制IL-2、IFN-γ细胞因子的基因水平表达和分泌水平．从而产生免疫耐受效应,为器官移植免疫研究提供实验依据。