血管内皮生长因子反义寡核苷酸抑制Lewis肺癌的血管形成

目的 探讨反义寡核苷酸(ASODN)抑制Lewis肺癌细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因表达的效应.方法 将人工合成的VEGF反义寡核苷酸(ASODN)、正义寡核苷酸(SODN)加入培养的Lewis肺癌细胞中,检测Lewis肺癌细胞中VEGF蛋白的表达,同时测定各上清液刺激血管内皮细胞生长的受抑情况.结果 VEGF-ASODN能明显抑制Lewis肺癌细胞VEGF蛋白的表达,而且可以通过抑制VEGF的表达抑制内皮细胞的生长.结论 VEGF反义寡核苷酸抑制肺癌细胞表达VEGF,有望成为肺癌基因治疗的一种新的治疗手段.     

具有血管新生作用的中药与血管新生

动脉闭塞性疾病如冠心病、下肢动脉闭塞等是严重危害人类健康的疾病,药物治疗、传统的介入以及手术等是目前治疗的主要方法。但对于多次手术或缺乏动静脉移植物等的病人仍无法进行再血管化治疗,因此近年出现了促血管新生治疗或称治疗性血管新生(therapeutic angiogenesis)^[1]。血管新生贯穿整个生命过程,涉及胚胎发育成熟、个体生长发育、伤口愈合及肿瘤等生理病理过程。     

血管抑素抑制鼠视网膜新生血管形成的研究

目的研究血管抑素体内抑制视网膜新生血管形成疗效及对血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响。方法高浓度氧诱导C57BL/6J小鼠建立视网膜缺血性病变动物模型。将30只小鼠分为5组:正常组;高氧对照组;实验I组(高氧+血管抑素,浓度150μg/μL);实验II组(高氧+血管抑素,浓度200μg/μL);实验III组(高氧+血管抑素,浓度300μg/μL),前两组玻璃体内注射生理盐水2μL,后三组玻璃体内分别注射不同浓度的血管抑素2μL。视网膜切片HE染色,计数各组小鼠视网膜新生血管内皮细胞核数,并加以比较。免疫组织化学法检测各组小鼠视网膜切片VEGF的表达。于鼠龄17d取各组小鼠视网膜及前增生的血管膜,RT-PCR检测VEGFmRNA的表达。结果吸入高氧鼠不论是对照组还是血管抑素治疗组每只眼均可见突出内界膜的新生血管内皮细胞,发生率为100%。高氧+血管抑素(浓度150μg/μL)组、高氧+血管抑素(浓度200μg/μL)组、高氧+血管抑素(浓度300μg/μL)组与高氧对照组相比新生血管细胞核数分别减少了41.96%(P<0.01)、57.40%(P<0.01)、81.73%(P<0.01),在血管抑素治疗的三组中,随着剂量的加大,抑制新生血管形成作用逐渐加强。与正常组相比,高氧对照组、高氧+血管抑素(浓度150μg/μL)组、高氧+血管抑素组(浓度200μg/μl)、高氧+血管抑素(浓度3     

眼部新生血管性疾病与内源性血管形成抑制剂

眼部新生血管性疾病是损害人类视力的主要疾病,其发病机制非常复杂,目前认为眼内新生血管形成依赖于血管生长促进因子及抑制因子之间的消长平衡。近年来,内源性血管形成抑制剂在眼部新生血管性疾病中的作用越来越受到关注,本文就与眼内新生血管形成有关的内源性血管形成抑制剂作简要综述。     

Lewis肺癌细胞小鼠KAI1基因表达受清金得生片影响的研究

目的:研究清金得生片对Lewis肺癌细胞小鼠KAI1基因表达的影响。方法:按8.1 g·kg-1·d-1剂量的清金得生片灌胃接种了Lewis肺癌细胞的小鼠,并设立模型对照组及正常对照组;采用荧光定量PCR技术检测小鼠KAI1基因的表达,观察KAI1基因表达受清金得生片的影响。结果:KAI1基因在肿瘤组织中的表达显著低于正常肺组织及癌旁组织。结论:清金得生片抗肿瘤作用可能与其上调KAI1基因的表达有关。     

回药爱康方协同化疗对小鼠Lewis肺癌细胞超微结构的影响

目的观察回药爱康方协同化疗对小鼠Lewis肺癌细胞超微结构的影响。方法把55只C57小鼠接种Lewis肺癌细胞24h后随机分为模型组、化疗组、爱康方组、爱康方低剂量加化疗组、爱康方高剂量加化疗组。治疗14d后,观察小鼠一般情况,完整剥离肿瘤组织称瘤重,电镜取材、制作,观察各组肿瘤细胞结构的改变。结果与模型组比较,其余各组小鼠一般情况较好,高剂量加化疗组最佳,小鼠瘤重较模型组轻,差异均有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,其余各组的肺癌细胞形态都有不同程度的损伤,高剂量加化疗组细胞破坏最明显,出现大量细胞器坏死,染色质高度聚集。结论回药爱康方高剂量协同化疗可有效损伤肿瘤细胞。     

肺癌新生血管生成机制研究进展

肺癌的生长和转移都需要新生血管的支持,新生血管生成在肺癌的发生、发展中扮演关键角色。新生血管生成由肿瘤微环境所决定,多种信号分子共同参与其调控。肺癌新生血管生成的主要过程可归纳为:(1)肿瘤不断生长促使其微环境内部发生"血管生成转换"而启动促血管程序;(2)基质金属蛋白酶诱导细胞外基质(ECM)降解与重构;(3)内皮细胞在血小板源性生长因子和趋化因子的诱导下通过重构的ECM发生定向迁移;(4)在血管内皮细胞生长因子和成纤维细胞生长因子的作用下,内皮细胞大量增殖;(5)在Dll4-Notch通路的诱导下,最终形成血管管腔结构并具有完善的供血功能。目前,抑制血管生成已成为肺癌治疗的重要方向,新生血管生成全过程中的每个阶段均可能成为抑制肺癌的靶点。深入了解肺癌新生血管生成机制,对寻找有效的抗血管、抗肺癌治疗方法具有重要临床意义。     

白细胞介素在角膜新生血管形成中的作用

透明、无血管是角膜的重要特征 ,在病理状态下 ,局部因素或全身疾病均可致角膜新生血管形成(ＣＮＶ) ,使角膜的透明性下降、“相对免疫赦免”(ｒｅｌ ａｔｉｖｅｉｍｍｕｎｅｐｒｉｖｉｌｅｇｅ)破坏、产生免疫性角膜病、角膜移植排斥反应等。长期来 ,国内外学者对ＣＮＶ进行了大量研究。由于近年来分子生物学、免疫学等基础学科的长足发展 ,以及免疫组化、生物分析等技术的运用 ,人们逐渐认识到细胞因子不仅在维持正常角膜的完整性中起着重要作用 ,而且在各种角膜疾病的发病机制和角膜移植中扮演重要角色[1] 。其中作为细胞因子一大家族的…     

HA14-1诱导小鼠Lewis肺癌细胞凋亡的实验研究

目的 观察HA14-1是否有诱导体外小鼠Lewis肺癌(LLC)细胞凋亡作用.方法 将LLC细胞培养传代,细胞分为空白组和实验组,空白组只加培养液,实验组分别加入5种不同浓度的HA14-1(12.5,25,50,75,100 μmol/L),分别作用24,48,72 h,MTT法测定LLC细胞存活分数,流式细胞学方法测定LLC细胞凋亡情况、免疫组织化学方法测定LLC细胞Bcl-2蛋白的表达情况及HA14-1作用前后Bcl-2蛋白的表达情况.结果 两组细胞中,与空白组比较,不同浓度的HA14-1实验组作用LLC细胞后,细胞存活率随浓度增加和时间延长越来越低,细胞的凋亡率随着浓度的增加有增加趋势,其差异在统计学上有显著性意义(P<0.01);免疫组织化学结果显示LLC细胞高表达Bcl-2,且HA14-1作用后Bcl-2蛋白的表达减少.结论 HA14-1有促小鼠Lewis肺癌细胞凋亡的作用.     

肺积汤对Lewis肺癌裸鼠移植瘤中新生血管的影响

目的 观察肺积汤对Lewis肺癌移植瘤中新生血管的影响,并探讨其机制,为中医中药在抑制肺癌生长及转移的临床应用提供实验基础和理论依据。方法 BALB/c雄性裸鼠30只,制作Lewis肺癌模型,随机数字表法随机分为3组,对照组（NS组：0.9%NS 0.4ml/只,灌胃,qd）;中药组（生药含量1g/ml： 22.2mg/kg,调整至0.4ml/只,灌胃,qd）;贝伐单抗组（贝伐单抗15mg/kg,调整至0.2ml/只,腹腔注射,biw）,给药21天后处死,收集血清、皮下瘤。HE染色观察皮下瘤血管情况,免疫组化法检测皮下瘤微血管密度（MVD）、血管内皮生长因子-A（VEGF-A）的水平;ELISA法测定血清中VEGF-A水平。结果（1）一般情况：相对于对照组,中药组及贝伐单抗组瘤重小[(6.15±1.49)g,(4.32±0.77)g比（7.92±1.09）g,P均<0.05],瘤体积小[(3.73±1.06) cm3,(2.36±1.99）cm3比(6.15±1.49) cm3, P均<0.05];且中药组裸鼠较贝伐单抗组未出现明显恶病质表现。（2）HE染色：中药组及贝伐单抗组皮下瘤细胞变性坏死较少,散在红细胞少。（3）免疫组化：中药组及贝伐单抗组MVD小[(18.39±1.21), (17.40±0.8)比( 27.40±10.12) , P<0.05];VEGF-A表达低[(3.35±1.151), (3.22±1.10)比(6.98±1.74), P<0.05],但中药组与贝伐单抗组组间差异小,无统计学意义（P>0.05）。（4）ELISA：中药及贝伐单抗可下调血清VEGF-A表达[(115.38±9.15),(106.21±3.15)比(130.63±4.51), P均<0.01]。结论 （1）肺积汤能抑制皮下瘤生长,延缓恶病质发生;（2）肺积汤能下调组织及血清VEGF-A的阳性表达,降低微血管密度,维持血管稳态。（3）肺积汤抑制肿瘤生长及转移,可能与下调促血管生长因子表达,抑制肿瘤血管新生有关。     

miR-223在CXCR4~+Lewis肺癌细胞中的显著低表达及其靶基因预测

目的 分析miR-146a、miR-206、miR-223、let-7c-1等细胞分化相关miRNAs,在小鼠Lewis肺癌细胞株(theLewis lung cancer cell lines,LLC)CXCR4~+与CXCR4~-亚群间的差异表达.方法 免疫磁珠分选CXCR4~+和CXCR4~-LLC细胞,Trizol法抽提细胞总RNA,实时荧光定量PCR(TaqMan探针)检测miRNAs表达,对表达差异最为显著的miRNAs进行潜在靶基因预测,应用免疫组化方法 初步分析具有研究价值的关键分子在两个不同亚群小鼠种植瘤组织中的表达情况,并通过BLAST对其3'非翻译端(untranslated region,UTR)进行直向同源基因序列比对分析.结果 CXCR4~+与CXCR4~-LLC比较,各检测mirna表达均较低,其中以miR-223差异最为显著(Fold Change=8.26),通过软件分析预测,miR-223与IGFIR、IGFBP5、Pik3cb、ELK-1和E2F1等基因均具有可能靶位点,免疫组化检测发现CXCR4~+亚群种植瘤组织IGFIR表达显著高于CXCR4~-亚群,IGF1R 3'UTR的238～244 nt和688～695 nt两个结合位点具有高度的进化保守性.结论 miR-223在CXCR4~+LLC中显著低表达,可能与肺腺癌细胞IGFIR信号通路调控有关.     

CXCR4阳性Lewis肺癌细胞的高致瘤性和高转移潜能

目的从小鼠肺腺癌细胞株(lewis lung carcinoma,LLC)中分离并鉴定具有高转移潜能的肿瘤干细胞样细胞亚群。方法流式分析Sca1、CXCR4双阳性细胞比例,激光共聚焦检测小鼠肺癌组织中双阳性细胞表达情况;以CXCR4作为磁珠分选细胞的表面标志,检测分选前后细胞活性,观察分析CXCR4阳性亚群的恶性生物学行为。结果LLC细胞中Sca-1、CXCR4双阳性细胞比例为0.1%,CXCR4阳性细胞为0.18%,小鼠肺癌组织存在荧光双染色细胞;分选前细胞活性为(95.58±0.87)%,分选后活力为(94.96±0.76)%(P>0.05);CXCR4阳性亚群在无血清中呈球状生长,CXCR阴性亚群1×105即不可成瘤,CXCR4阳性亚群在7×103仍可成瘤;CXCR4阴性和阳性亚群分别以5×105、2×104密度各接种3只小鼠,前者无转移,而后者2只发生肺转移,1只发生耳转移。结论Lewis肺癌细胞中的CXCR4阳性亚群具有一定的自我更新和转移能力,具备癌转移性干细胞某些特性。     

趋化因子受体CXCR4在涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞株中的表达

目的:观察趋化因子受体CXCR4在涎腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)肺高、低转移细胞株中的表达,探讨趋化因子受体CXCR4表达在ACC肺侵袭转移中的作用.方法:选取ACC肺高转移细胞株(ACC-M)和低转移细胞株(ACC-2)以及舌癌-8113细胞株(Tca-8113),分别应用单克隆抗体免疫荧光标记流式细胞术和Western印迹检测CXCR4在上述3种细胞中的表达.结果:3种细胞表面均有CXCR4受体的表达,其中ACC肺高转移细胞株ACC-M表达阳性率为(77.32±6.96)%,显著高于肺低转移细胞株ACC-2的(35.32±6.71)%和舌癌Tca-8113细胞株的(33.82±5.56)%,(P<0.05).Western印迹结果证实3种细胞株均有特征性的蛋白质表达条带,其中ACC-M的蛋白质表达条带最为显著.结论:趋化因子受体CXCR4在ACC肺高转移细胞株中高表达,提示CXCR4可能与ACC嗜肺转移的生物学特性有关.     

CXCR4抑制性多肽对不同乳腺癌细胞株中CXCR4表达的影响

目的:探讨CXCR4抑制性多肽(NT21MP)对HER-2受体表达不同的乳腺癌MCF-7细胞和SKBR3细胞CXCR4受体表达的影响。方法:免疫组化法和RT-PCR法检测MCF-7、SKBR3细胞中HER-2与CXCR4的表达;分别用1μg/ml和10μg/mlNT21MP处理乳腺癌SKBR3、MCF-7细胞48h后,用RT-PCR法和Western blot法检测CXCR4 mRNA及其蛋白的表达。结果:CXCR4在乳腺癌细胞SKBR3和MCF-7表达水平相似(P>0.05),HER-2表达水平差异有统计学意义(P<0.01);NT21MP显著下调人乳腺癌细胞SKBR3、MCF-7细胞中CXCR4受体的表达,但存在细胞差异性(P<0.01)。结论:NT21MP能不同程度地下调乳腺癌细胞MCF-7和SKBR3 CXCR4受体表达。     

CXCR4 和CXCR7 在肾透明细胞癌 组织中的表达及其临床意义

目的 探讨趋化因子受体4（CXCR4）蛋白和趋化因子受体7（CXCR7）蛋白在肾透明细胞癌 （ccRCC）组织中的表达及其相关性。方法 采用免疫组织化SABC 法检测50 例ccRCC 及20 例癌旁正常 组织中CXCR4 和CXCR7 蛋白的表达。结果 ccRCC 组织中CXCR4 和CXCR7 表达高于癌旁正常组织 （P <0.05）;两者表达与ccRCC 组织的临床分期、病理分级及淋巴结转移关系密切（P <0.05）,与性别、年 龄及肿瘤体积无关（P >0.05）;在ccRCC 组织中,CXCR4 与CXCR7 表达呈正相关（r s=0.467,P =0.001）。 结论 CXCR4 和CXCR7 在ccRCC 组织中呈高表达,两者对ccRCC 的发生、发展及转移有协同作用。     

稳定沉默CXCR4表达的肾癌A498细胞株的构建

目的应用RNA干扰技术降低肾癌A498细胞株的CXCR4基因表达水平,并建立稳定转染细胞株。方法针对CXCR4基因设计合成siRNA,转染肾癌A498细胞株,采用RT-PCR法检测CXCR4基因表达变化,根据有效干扰片段结果合成重组shRNA质粒,稳定转染至A498细胞系并进行G418抗性筛选细胞株。采用RT-PCR和Westen印迹法检测CXCR4mRNA及蛋白表达水平,应用流式细胞技术检测CXCR4shRNA诱导A498细胞凋亡的效应,Transwell试验检测细胞侵袭能力的改变。结果将CXCR4重组shRNA质粒成功转染A498细胞后,肾癌细胞内可见绿色荧光,通过G418筛选,获得了CXCR4基因沉默的A498细胞系,RT-PCR及Western印迹检测证实该细胞系的CXCR4水平明显低于对照组的表达水平(P<0.05)。CXCR4shRNA组细胞的早期凋亡率、晚期凋亡率及总凋亡率均显著高于对照组(P<0.05),Tran-swell体外侵袭实验显示CXCR4shRNA能明显抑制A498细胞的体外侵袭力(P<0.05)。结论成功构建稳定沉默CXCR4表达的肾癌A498细胞株,转染后的细胞凋亡率升高,体外侵袭能力降低,为后续研究奠定了基础。     

Sca-1+Lewis肺癌细胞耐药实验研究

目的 探讨小鼠Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma,LLC)细胞株中Sca-1 LLC细胞的耐药特性及机制.方法 将LLC细胞培养于含有不同浓度丝裂霉素、顺铂、健择、紫杉醇的培养液中,培养72h后分别检测各组Sca-1阳性细胞的比例.以Sca-1作为磁珠分选的表面标志,从LLC细胞中分选Sca-1 LLC细胞和Sca-1-LLC细胞,RT-PCR检测各组ABCG2 mRNA表达水平.免疫荧光检测Sca-1 LLC细胞与SP细胞(Hoechst 33342拒染)的关系.结果 随着抗肿瘤药物浓度的升高,Sca-1阳性细胞的比例随之升高.RT-PCR检测表明Sca-1 LLC细胞表达更高水平的ABCG2 mRNA,免疫荧光发现SP细胞只存在于Sca-1 LLC细胞.结论 Sca-1 LLC细胞的耐药性较Sca-1-LLC细胞强,与Sca-1 LLC细胞高表达ABCG2有关.     

CXCR4和MMP-13在非小细胞肺癌中的表达

目的 检测趋化生长因子受体4（CXCR4）和基质金属蛋白酶-13（MMP-13）在非小细胞肺癌中的表达,探讨二者与非小细胞肺癌临床病理特征的关系,以期为临床工作提供理论支持。方法 应用免疫组织化学技术检测75例非小细胞肺癌及50例正常肺组织中CXCR4和MMP-13的表达,探讨二者与肿瘤分化程度及淋巴结转移的关系。结果 非小细胞肺癌中CXCR4和MMP-13表达的阳性率明显高于正常肺组织。CXCR4和MMP-13的表达与非小细胞肺癌的胸膜侵犯、分化程度及有无淋巴结转移密切相关,非小细胞肺癌中CXCR4和MMP-13的表达呈正相关。生存分析显示,CXCR4和MMP一13高表达患者的预后差。结论 非小细胞肺癌中CXCR4和MMP-13高表达,二者共同促进肿瘤的发生发展,联合检测CXCR4和MMP-13可能与患者的预后有关。     

趋化性细胞因子受体CXCR4在肾透明细胞癌中的分布探讨

目的 研究肾透明细胞癌中趋化性细胞因子受体CXCR4的分布。方法 用免疫组织化学的方法对患者癌组织CXCR4的分布进行探讨，结合手术、病理及临床资料，统计学分析CXCR4表达与淋巴结浸润的关系。结果 所有患者CXCR4呈阳性分布，按照免疫组织化学染色模式将肿瘤分为局灶型及弥散型，其中弥散型又分为强阳性和弱阳性。结合临床资料，发现弥散型和局灶型之间以及强阳性和弱阳性之间在局部淋巴转移方面有显著性差异。结论 CXCR4的表达可能与肾透明细胞癌的转移及预后密切相关。     

VEGF通过影响CXCR4的表达调节卵巢癌细胞侵袭性的研究

目的 初步探讨卵巢癌细胞中血管内皮生长因子（VEGF）是否通过影响趋化因子受体CXCR4的表达,从而调节癌细胞的侵袭性.方法 以卵巢癌Caov-3细胞系为研究对象,运用RT-PCR和流式细胞术检测VEGF因子对卵巢癌Caov-3细胞系中CXCR4 mRNA及其蛋白质表达水平的影响,同时采用Boyden侵袭小室检测VEGF因子刺激后Caov-3细胞侵袭性的变化;并应用免疫组化技术检测VEGF与CXCR4在卵巢癌组织中的表达情况.结果 PCR产物凝胶电泳结果 显示,VEGF因子可显著增加Caov-3细胞中CXCR4 mRNA的表达：流式细胞仪检测发现,VEGF因子刺激细胞24h后,细胞平均荧光强度为26.20±1.45,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）;VEGF刺激细胞后癌细胞的侵袭性显著增强,加入中和抗体后,癌细胞的侵袭性呈剂量依赖式下降.免疫组化检测结果 提示：卵巢癌中VEGF表达水平在不同转移状况和腹水量间的差异均有统计学意义（均P〈0.01）;CXCR4的表达水平在不同临床分期和转移状况间的差异均有统计学意义（均P〈0.05或0.01）;卵巢癌组织中VEGF蛋白与CXCR4蛋白的表达呈正相关（Spearman相关系数为0.575,P〈0.01）.结论 VEGF因子可通过影响卵巢癌细胞中CXCR4分子的表达,从而增强肿瘤细胞的侵袭性,CXCR4中和抗体则可抑制这一效应;卵巢癌组织中,VEGF与CXCR4的表达均与转移有关,且两者的表达呈正相关.