鸦胆子与补骨脂对大鼠卡氏肺孢子虫肺炎疗效的电镜观察

用鸦胆子和补骨脂合剂2 ml （鸦胆子0.12 mg+补骨脂1.0 mg） 分别治疗经地塞米松皮下注射诱导的卡氏肺孢子虫肺炎（Pneumocystis carinii pneumonia， PCP）的SD大鼠7天和14天，同时设阳性对照组和正常对照组。分别于治疗后剖杀各组大鼠，取肺组织制成切片。透射电镜下观察到治疗组大鼠受损肺组织病变减轻，肺间质、Ⅰ型和Ⅱ型肺泡上皮细胞形态结构修复。说明鸦胆子和补骨脂合剂对卡氏肺孢子虫肺炎病鼠有一定的疗效。     

肺孢子虫肺炎大鼠支气管肺泡灌洗液酶含量变化及大蒜素治疗对其影响

目的 研究卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)酶含量变化以及大蒜素治疗对其影响。 方法 用地塞米松连续肌肉注射Wistar大鼠， 诱导建立PCP大鼠模型。诱导第3、6、9周分别于后腿肌肉深部注射大蒜素治疗（10 mg/kg， 1次/d， 连续5 d）。同时设甲氧苄氨嘧啶(TMP)?鄄磺胺甲基异噁唑(SMZ)治疗对照组(SMZ/TMP组)、 PCP模型对照组和空白对照组。 于最后1次治疗3 d后处死大鼠， 无菌收集BALF， 测定谷草转氨酶(AST)、 谷丙转氨酶(ALT)、 胆碱脂酶(CHE)、 碱性磷酸酶(ALP)、 乳酸脱氢酶(LDH)、 肌酸激酶(CK)及其同工酶(CKMB)、 a?鄄羟丁酸脱氢酶(HBDH)、 a?鄄L?鄄岩藻糖甘酶(AFU)、 5′-核苷酸酶(5′NT)及腺苷脱氨酶(ADA)含量。 结果 PCP模型组ALP含量［（573.41 ± 350.63） U/L］显著高于空白对照组［（210.56 ± 114.41） U/L］（q=4.682， P<0.01）、 大蒜素治疗组［（392.07 ± 217.57） U/L］（q=3.851， P<0.05）以及SMZ/TMP组［（325.21 ± 180.65） U/L］（q=4.380， P<0.01）。 CK、 CKMB及5′NT含量， PCP模型对照组［依次为948.94 ± 403.43、 489.47 ± 254.46及（6.76 ± 3.11） U/L］显著高于空白对照组［426.22 ± 319.00、 213.33 ± 144.54及（3.22 ± 1.20） U/L］（q=4.696， 3.784， 3.812， P<0.05）。AST、 ALT、 CHE、 LDH、 HBDH、 AFU及ADA含量， 4组之间差异均无统计学意义(F=1.852， 0.958， 2.470， 1.423， 1.178， 1.342， 0.611， P>0.05)。 结论 PCP大鼠BALF中ALP、 CK、 CKMB及5′NT含量显著升高, 大蒜素治疗可使ALP含量显著降低。     

感染卡氏肺孢子虫大鼠血清中可溶性细胞黏附分子-1（sICAM-1）变化的研究

目的 检测卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)大鼠血清中可溶性细胞黏附分子-1（sICAM-1）水平, 以及经复方磺胺甲噁唑（TMP-SMZ）治疗后对sICAM-1含量的影响。 方法 纯系Wistar大鼠50只, 随机分为 PCP模型组（P组18只）、TMP?鄄SMZ治疗组（S组18只）及正常对照组（N组14只）。P组及S组于大鼠后腿肌肉注射地塞米松（1 mg/只，每周2次、间隔3 d），诱导建立PCP大鼠模型。N组同法注射生理盐水。镜检确认PCP诱导成功后，S组从第3周起灌胃TMP-SMZ[每天1次, 250 mg/（kg·d）］，5 d为1 疗程，间隔2周，共3个疗程。分别于第0、3、6、9及12周取血, 检测血清中sICAM-1水平，观察肺脏、肝脏病理及病原学变化。 结果 血清sICAM-1水平，P组第3周的(1.847±0.50)ng/ml显著低于第0周的（2.407±0.81) ng/ml(P<0.05)； S组第3周的(1.787±0.59) ng/ml显著低于第0周的（2.478±0.59) ng/ml(P<0.01), 以后逐渐上升。P组第9周的（3.233±0.83) ng/ml、 12周（3.984±0.87) ng/ml显著高于第0周的（2.407±0.81) ng/ml(分别为P<0.05, P<0.01)； S组第12周的（3.621±1.62) ng/ml显著高于第0周的（2.478±0.59) ng/ml(P<0.05)。P组与S组第9、12周[分别为(2.697±0.78) ng/ml及(3.621±1.62) ng/ml] 均显著高于N组(分别为P<0.05、P<0.01)。S组与P组间差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 大鼠血清中sICAM-1含量较低，但在诱导PCP后其含量显著增高。     

中药鸦胆子与补骨脂素对卡氏肺孢子虫病大鼠免疫调节的影响

目的 探讨中药鸦胆子和补骨脂素合剂对卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)大鼠的免疫调节及杀虫作用。方法 地塞米松皮下注射SD大鼠(2.5mg/只,每周2次,连续6周),建立PCP大鼠模型。药物治疗剂量,每鼠每天口饲中药鸦胆子0.12mg与补骨脂素1mg,连续7d或14d。同时设PCP阳性不治疗对照组及正常大鼠对照组。制作肺组织病理切片观察肺组织病变,制作肺组织印片计数肺孢子虫包囊数观察中药合剂杀虫效果。检测血液中CD4⁺T细胞、CD8+T细胞和α肿瘤坏死因子(TNF-α)的变化,观察中药合剂对PCP大鼠的免疫调节作用。结果 治疗组大鼠,受损的肺组织病变减轻或修复,体重明显回升,肺组织包囊数明显低于阳性对照组(P<0.05)。血液中CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞和TNF-α均较阳性对照组升高(P<0.05)。结论 中药鸦胆子和补骨脂素合剂治疗PCP大鼠,可增强免疫调节作用,并可抑制及杀灭卡氏肺孢子虫。     

黄芩苷对卡氏肺孢子虫肺炎大鼠TNF-α和sICAM-1的调节作用

目的 研究黄芩苷对卡氏肺孢子虫肺炎（PCP）大鼠血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）和可溶性细胞黏附分子1（sICAM-1）的调节作用。 方法 49只SD大鼠随机均分7组,分别为正常对照组（A组）、免疫抑制对照组（B组）、有效药物对照组（C组)、黄芩苷预防组（D组）、黄芩苷低（E组）、中（F组）和高剂量治疗组（G组）。A组不做任何处理,其他各组均于腹股沟皮下注射地塞米松磷酸钠（每次3.5 mg/只,每周2次,连续注射6周),诱导其免疫抑制建立大鼠卡氏肺孢子虫感染动物模型。D组注射地塞米松磷酸钠3周后,灌胃黄芩苷100 mg/(kg?d)连续5周。C、E、F和G组于连续注射地塞米松磷酸钠6周后给药,其中C组灌胃磺胺甲基异恶唑（SMZ）250 mg/(kg?d)和甲氧苄胺嘧啶（TMP） 50 mg/(kg?d),连续2周; E、F和G组分别灌胃黄芩苷100、200和400 mg/(kg?d),均连续2周。B组不给药。各组大鼠均于第8周末摘眼球取血、分离血清,用放射免疫分析法检测TNF-α含量,ELISA法检测sICAM-1含量。同时剖杀大鼠取肺组织制作印片（六胺银染色）和病理切片（HE染色）,观察其病理学变化。 结果 大鼠血清TNF-α含量,黄芩苷预防组［（2．14±0.14） ng/ml］及低［（2.57±0.15） ng/ml］、 中［（1.46±0.14） ng/ml］和高［（1.12±0.13） ng/ml］剂量治疗组均高于正常对照组［（0.70±0.21） ng/ml］（P<0.05）, 低于免疫抑制对照组［（3.65±0.73） ng/ml］（P<0.01）。有效药物对照组［（1.59±0.14） ng/ml］明显高于正常对照组（P<0.01）, 低于免疫抑制对照组（P<0.01）。血清sICAM-1含量, 黄芩苷预防组［（618.68±52.42） pg/ml］及低［（814.29±61.11） pg/ml］、 中［（498.08±32.56） pg/ml］、 高［（377.06±56.56） pg/ml］剂量治疗组均低于免疫抑制对照组［（1 247.39±288.57） pg/ml］（P<0.05）,有效药物对照组［（386.95±44.98） pg/ml］低于免疫抑制对照组（P<0.01）。黄芩苷各治疗组肺组织炎症较免疫抑制对照组明显减轻,肺间质炎性细胞浸润及肺泡腔泡沫样渗出物均明显减少。 结论 黄芩苷能降低PCP大鼠血清TNF-α和sICAM-1含量,减轻肺部炎性反应。     

Sj26基因转染的树突状细胞对日本血吸虫感染的免疫保护机制研究

目的 探讨日本血吸虫Sj26基因转染的树突状细胞（DC）对日本血吸虫感染的保护性免疫作用机制。 方法 BALB/c小鼠48只随机均分4组, 于小鼠耳廓分别注射细胞悬液(浓度1×10⁶/ml)0.2 ml, A组注射Sj26基因转染的DC、B组注射质粒pcDNA3转染的DC、 C组注射未处理的DC, D组注射RPMI-1640。共免疫3次，间隔2周。末次免疫后2周，每鼠经皮肤感染40±2条尾蚴。分别于免疫前、末次免疫后第 2 周以及攻击感染后第 6 周采血, ELISA法检测血清IgG抗体、γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素-4（IL-4）水平，免疫印迹法（Western blot）检测血清特异性抗Sj26 IgG抗体，双夹心ELISA法检测脾淋巴细胞经伴刀豆球蛋白A(ConA)和可溶性虫卵抗原(SEA)刺激后培养上清中IFN-γ和IL-4含量。噻唑蓝法（MTT）检测脾淋巴细胞增殖情况。 结果 A组血清IgG抗体水平(吸光度A₄₉₁值)，免疫后（A₄₉₁=0.117）显著高于免疫前（A₄₉₁=0.049）（t=2.73，P<0.05），也显著高于B组（A₄₉₁=0.061）和C组（A₄₉₁=0.058）（t值为2.48和2.56，P<0.05）。A组血清能特异识别血吸虫成虫抗原Mr 26 000蛋白。血清IL-4水平，各组免疫前、后均无明显变化。 IFN-γ水平，A组血清免疫后为（101.4±4.9)pg/ml, 明显高于免疫前的(15.0±1.9) pg/ml（t=5.80，P<0.01），亦高于免疫后的B组（40.1±3.1) pg/ml和C组（35.6±1.2) pg/ml (t值为3.98和4.13，P<0.01)。脾淋巴细胞经ConA刺激诱生的IFN-γ， A组（171.2 pg/ml）显著高于 D组（91.0 pg/ml）（t=4.25，P<0.01）。 经SEA刺激诱生的IFN-γ， A组（70.8 pg/ml）显著高于D组（49.7 pg/ml）（t=2.83，P<0.01）。经ConA刺激诱生的IL-4水平，A组（79.7 pg/ml）明显低于D组（125.2 pg/ml）（t=4.40, P<0.01）。经SEA刺激诱生的IL-4，A组（50.7 pg/ml）明显低于D组（70.5 pg/ml）（t=2.62，P<0.05）。A组脾淋巴细胞经ConA和SEA刺激后的刺激指数分别为4.1和2.82，均高于其他各组（与D组比较，t=3.20, P<0.01和t=2.15，P<0.05）。 结论 Sj26基因转染的树突状细胞免疫小鼠主要诱导Th1型免疫应答。     

重组屋尘螨2类变应原疫苗免疫治疗小鼠过敏性气道炎症的研究

目的 观察以聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）材料为佐剂制备的重组屋尘螨2类变应原（rDer p 2）纳米微粒疫苗（DEPN）对小鼠过敏性气道炎症的影响，并探讨其免疫治疗机 制。 方法 制备PLGA-rDer p 2纳米粒子并鉴定其特性。40只BALB/c小鼠随机分为5组，A组（对照组）均给予生理盐水（100 μl）。B、C、D和E组腹部皮下注射屋尘螨粗浸液（10 μg）免疫小鼠致敏，然后分别用PBS（100 μl）、2 mg 空白PLGA粒子（empty PLGA，EP）、100 μg rDer p 2、2 mg的DEPN纳米疫苗（载有100 μg rDer p 2）皮下注射进行免疫治疗，连续免疫治疗3 d，1次/d，各组用rDer p 2（50 μg）滴鼻激发，激发后第2天剖杀，收集支气管肺泡灌洗液（BALF）并对细胞进行总计数和分类计数；HE染色和PAS染色（Periodic Acid?鄄Schiff Stain）观察小鼠肺部组织炎症和支气管黏液分泌；用ELISA检测BALF和脾细胞培养上清的细胞因子（IL-4、 IFN-γ）和血清中变应原特异性IgG2a和IgE抗体浓度。 结果 B、C 组肺部呈明显的变态反应性炎症，D、E组变应原诱导的肺部嗜酸粒细胞浸润和黏液分泌比B、C 组显著减轻。BALF中的细胞总数B组比A组明显增多，分类细胞以中性和嗜酸粒细胞为主，超过50%。rDer p 2特异性IgE抗体水平，D组（0.93±0.04）和E组（0.77±0.10）均低于B组（1.14±0.10）（P＜0.01）；特异性IgG2a抗体水平，D组（1.02±0.01）和E组（1.17±0.46）均高于B组（0.14±0.01）（P＜0.01）。在BALF中，D组[（55.60±3.79） pg/ml]和E组[（48.60±4.50） pg/ml]IL-4水平均低于B组[（78.90±6.07） pg/ml]（P＜0.01）；IFN-γ水平E组[（68.50±2.87） pg/ml]显著高于B组[（27.30±3.51） pg/ml] （P＜0.01）。脾细胞上清的IL-4水平，D组[（56.3±4.85） pg/ml]和E组[（40.2±4.36） pg/ml]显著低于B组[（81.20±6.84） pg/ml] （P＜0.01）；IFN-γ水平，E组[（70.20±3.85） pg/ml]显著高于B组[（34.60±2.25） pg/ml] 。 结论 DEPN免疫治疗可抑制小鼠肺部过敏炎症，其机制可能与调节Th1/Th2平衡有关。     

感染弓形虫小鼠脾脏CD4+CD25+T细胞的变化

目的 观察小鼠感染刚地弓形虫后脾脏CD4⁺CD25⁺调节性T细胞的动态变化。 方法 将28只雌性C57BL/6小鼠随机分为4组，其中3组每鼠腹腔接种弓形虫速殖子悬液200 μl（含弓形虫速殖子5×10⁴个/ml），对照组腹腔接种灭菌PBS 200 μl。分别于弓形虫感染后第2、4和6天取脾，制成单个核细胞，用实时荧光定量PCR检测脾CD4⁺ T细胞Foxp3基因表达水平，流式细胞仪检测脾CD4⁺CD25⁺调节性T细胞占CD4⁺ T细胞的比例，并对CD4⁺CD25⁺调节性T细胞和CD4⁺ T细胞进行绝对计数。 结果 感染后第4和6天，小鼠脾脏CD4⁺ T细胞Foxp3 mRNA相对表达水平分别为 1.89±0.23和1.79±0.24， 均显著高于正常水平（1.00±0.12）（P＜0.01）；CD4⁺CD25⁺调节性T细胞占CD4⁺ T细胞的比例从感染后第2天（15.07%±2.73%）开始上调（P＜0.05），至感染后第4 和6天分别为24.29%±3.19%和19.80%±2.66%，均明显高于正常水平（11.58%±2.04%） （P＜0.01）；脾脏CD4⁺ T细胞占脾细胞的比例及其绝对数量均从感染后第2 天开始降低，至感染后第6 天分别降至5.49%±1.71%和（1.71±0.44）×10⁶ （P＜0.01）。 结论 弓形虫感染导致小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺调节性T细胞占CD4⁺ T细胞的比例上调，而脾脏CD4⁺ T细胞的显著减少是促成比例上调的主要原因。     

从鼠粪中分离纯化微小隐孢子虫卵囊方法的研究

目的 探索一种实用、纯度和回收率高且卵囊活力强的分离纯化微小隐孢子虫卵囊的方法。 方法 分别采用经典的不连续蔗糖密度梯度离心法、改良饱和盐水漂浮法、氯化铯（CsCl）密度梯度离心法和Percoll密度梯度离心法分离纯化C57BL/6小鼠粪中隐孢子虫卵囊。并将4种方法分离纯化获得的卵囊各10⁵体外感染牛输卵管上皮细胞（BFTE）， 48 h和72 h后油镜下观察各分离法卵囊的发育情况，以比较卵囊的纯度和活性。 结果 经典的不连续蔗糖密度梯度离心法分离获得的卵囊数[（2.86±0.08）×10⁷］与改良饱和盐水漂浮法[（2.88±0.15）×10⁷］无明显差异（P>0.05）， 但高于Percoll密度梯度离心法[（1.52±0.08）×10⁷］（P<0.01）和CsCl密度梯度离心法[（2.46±0.13）×10⁷］（P<0.05）。4种方法分离纯化的卵囊体外感染BFTE 48 h和72 h后隐孢子虫数无明显差异（P>0.05）。但CsCl密度梯度离心法纯化的隐孢子虫卵囊纯度明显高于不连续蔗糖密度梯度离心法。 结论 改良饱和盐水漂浮法较经典的不连续蔗糖密度梯度离心法操作简单、快速；CsCl密度梯度离心法分离的隐孢子虫卵囊纯度较高。     

N-乙酰半胱氨酸对早期日本血吸虫病小鼠肝脏虫卵肉芽肿的影响

目的 研究N-乙酰半胱氨酸（NAC）对早期日本血吸虫病小鼠肝脏虫卵肉芽肿的影响。 方法　 将36只健康小鼠随机分为NAC组、正常对照组、感染对照组。NAC组和感染对照组小鼠每只经腹部皮肤感染25±2条日本血吸虫尾蚴,于感染当天起给NAC组小鼠200 mg/kg NAC灌胃,2次/d,共42 d;正常对照组和感染对照组每只小鼠2 ml蒸馏水灌胃,2次/d,共42 d。感染第42天,各组小鼠全部处死后取血清和肝脏。对肝脏进行病理学观察,测定血清及肝组织的生化指标。 结果 NAC组小鼠的肝组织“+、++、+++”3级单个虫卵肉芽肿个数分别为1.80±0.25、1.37±0.23、0.53±0.15, 均显著低于感染对照组（P＜0.05）。NAC组小鼠血清中NO水平、GSH水平分别为0.53±0.17、229.66±9.47,相对感染对照组均有所下降（P＜0.05）,谷胱甘肽过氧化物酶GSH-PX活性为1101.99±140.81, 相对感染对照组有所升高（P＜0.05）;肝组织诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性、NO水平、还原型谷胱甘肽（GSH）水平及GSH-PX活性分别为6.85±0.30、13.44±0.40、358.40±19.15、110.84±10.93,均显著低于感染对照组（P＜0.05）。 结论 N-乙酰半胱氨酸可以减缓日本血吸虫病小鼠肝组织病理变化。     

内毒素血症时肝窦内皮细胞脂多糖受体CD14蛋白表达的观察

目的观察内毒素血症时肝窦内皮细胞(LSECs)中CD14蛋白合成和CD14 基因的表达,以及CD14蛋白在内毒素介导LSECs激活中的作用. 方法经尾静脉注入脂多糖(LPS,E coli O111B4)5mg/kg,建立大鼠内毒素血症动物模型,分别于术后0(对照组)、3、6、12、24h活杀取材.用兔抗鼠CD14抗体和异硫氢酸荧光素(FITC)标记的羊抗兔IgG对LSECs进行孵育后,流式细胞仪测定LSECs的平均荧光强度(MFI)及FITC阳性细胞数;用原位杂交法测定LSEC中CD14 mRNA的表达.用原位胶原酶灌注法分离大鼠LSECs,用不同浓度LPS(0、0.01、1、10、100μg/ml)刺激LSECs.并用CD14抗体阻断LSECs的 CD14蛋白后,再用不同浓度LPS(0、0.01、1、10、100μg/ml)刺激LSECs.测定LPS介导LSECs肿瘤坏死因子(TNF)-α及白细胞介素-6(IL-6)分泌及CD14抗体对LSECs细胞因子分泌的影响. 结果内毒素血症大鼠3、6、12和24h 时LSECs的MFI明显增加;FITC阳性细胞数也明显增多,分别为54.32%、65.83%、85.61%和45.65%,与对照组的4.45%比较差异有非常显著意义(P＜0.01).原位杂交显示,内毒素血症大鼠LSECs中CD14 mRNA的表达明显增强,而对照组CD14 mRMA无阳性表达.LPS组TNF-α的含量(pg/ml)分别为54.49±6.02、84.65±10.16、206.54±23.55、349.87±39.47和365.76±40.31;CD14阻断组TNF-α的含量(pg/ml)分别为55.93±6.95、63.32±7.81、85.34±9.72、112.75±13.54、198.66±21.54;两组间比较差异有非常显著意义(P＜0.01).LPS组IL-6的含量(pg/ml)分别为103.34±12.52、187.39±20.31、243.87±27.83、289.51±30.15、298.53±31.94;CD14阻断组IL-6的含量(pg/ml)分别为104.37±11.49、125.02±13.58、164.59±19.47、183.47±20.17、221.76±26.43;两组间比较差异有非常显著意义(P＜0.01). 结论内毒素血症时LSECs能合成CD14蛋白及表达CD14基因;抗CD14抗体对LPS诱导LSECs TNF-α和IL-6的分泌有抑制作用;CD14蛋白的表达在内毒素介导LSECs激活中可能起重要作用.     

Evaluation of natural killer cells as diagnostic markers of early onset neonatal sepsis: comparison with C-reactive protein and interleukin-8

This study was conducted on thirty-seven neonates and healthy neonates (sixteen full term and fourteen preterm). The study aimed at revealing the role played by the NK cells in neonatal sepsis and evaluating the sensitivity of NK cell number and cytotoxicity as diagnostic markers in infants with suspected early neonatal sepsis compared with the circulating cytokine IL-8 and CRP levels. All samples of peripheral blood lymphocytes were subjected to determination of CD16 and CD56 positive cells using flow cytometry and NK cytotoxicity using the standard 4h 51Cr release assay. Sera were separated to measure IL-8 using ELISA. Determination of CRP, using turbdimetric assay, as well as blood cultures were done for patient's group only. Out of the 37 cases of suspected early neonatal sepsis, 16 were given final diagnosis of sepsis. Seven infants (43.8%) in the sepsis group had culture-proven diagnosis, one of which had meningitis. The median CRP value was significantly higher in sepsis group (88 mg/L; range: 17-159 mg/L) compared with that in non-septic group (15.4 mg/L; range: 7.6-23.2 mg/L, p < 0.001) only 12-60 h after admission. On the other hand, newborns in the sepsis group had significantly higher serum levels of IL-8 (median 310 pg/mL; range: 37-583 pg/ml) at study entry than that in the non septic group (median 63 pg/mL; range: 32-94 pg/ml, P < 0.001). On admission, the NK activity, rather than the number of CD16 and CD56 positive cells was much affected where NK cytotoxicity was significantly lower in sepsis group (3.4 +/- 2.1%, range 0.9-7%) than that of the nonseptic group (18.3 +/- 6.7%: range 10.7- 25.3%, p < 0.01) and healthy neonates (23.8 +/- 4.7%: range 12.2-32.3%, p < 0.001). We may conclude that defective NK cell activity rather than NK cell number plays an important role in susceptibility to early onset neonatal sepsis. Evaluation of NK cytotoxicity as a marker in early diagnosis of neonatal sepsis reveals that the sensitivity, specificity and predictive values of reduced NK cytotoxicity (10% killing) was higher than both of CRP and IL-8, either individually or in combination. Additionally, reduced NK cytotoxicity showed high correlation with the severity and outcome of neonatal sepsis. Our data raise the possibility that the addition of NK cell activity to the standard work-up of critically ill patients with suspected sepsis could increase diagnostic certainty and generate an improved patient management.     

一氧化碳吸入对急性肺损伤大鼠肺组织细胞凋亡的影响及其机制

目的观察吸入低浓度一氧化碳(CO)对脂多糖(LPS)致急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织细胞凋亡的影响,探讨可能机制。方法18只雄性SD大鼠随机均分为3组。ALI组静脉滴注LPS5mg/kg,正常对照组注入生理盐水,CO吸入组在LPS诱导肺损伤后持续吸入体积分数为2.5×10-4CO。观察3h后放血处死,取肺组织,半定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)测定血红素氧化酶1(HO1)表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素6(IL6)和IL10的含量;化学比色法测定丙二醛(MDA)含量、髓过氧化物酶(MPO)和超氧化物歧化酶(SOD)活性;光镜观察并盲法评分比较肺组织学;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果ALI组HO1mRNA、TNFα、IL6、IL10、MDA、MPO、SOD、细胞凋亡与正常对照组[1.002±0.004、(0.47±0.06)pg/mg蛋白、(0.49±0.12)pg/mg蛋白、(0.42±0.08)pg/mg蛋白、(0.79±0.14)nmol/mg蛋白、(6.0±1.0)U/mg蛋白、(74±7)U/mg蛋白、(0.12±0.03)%]比较差异均有统计学意义(P<0.05或<0.01),肺损伤严重。CO吸入组TNFα、IL6、MDA、MPO和细胞凋亡[(0.91±0.25)pg/mg蛋白、(0.64±0.05)pg/mg蛋白、(1.02±0.23)nmol/mg蛋白、(7.2±1.6)U/mg蛋白、(1.60±0.34)%]显著低于ALI组[(1.48±0.23)pg/mg蛋白、(1.16±0.26)pg/mg蛋白、(1.27±0.33)nmol/mg蛋白、(8.2±1.5)U/mg蛋白、(3.18±0.51)%,P均<0.05];HO1mRNA、IL10和SOD表达[5.433±0.921、(0.26±0.07)pg/mg蛋白、(60±10)U/mg蛋白]显著高于ALI组[3.081±0.823、(0.15±0.03)pg/mg蛋白、(51±7)U/mg蛋白,P均<0.05],肺损伤减轻。结论吸入CO通过调控氧化/抗氧化、促炎/抗炎反应、抑制过度细胞凋亡和上调HO1表达,可能对LPS诱导ALI起保护作用。     

肺孢子菌肺炎大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能及TNF-αIL-6的变化

目的观察肺孢子菌肺炎（PCP）大鼠肺泡巨噬细胞（AM）吞噬功能及支气管肺泡灌洗液（BALF）、AM培养上清TNF-α、IL-6的变化。方法 Wistar大鼠连续肌肉注射地塞米松建立免疫抑制PCP模型,检测大鼠AM吞噬功能及BALF、AM培养上清TNF-α、IL？6水平,同时设正常对照组。结果 PCP模型组大鼠AM吞噬鸡红细胞百分率为（20.61±2.04）%,吞噬指数为0.25±0.21,均明显低于对照组的（25.45±3.1）%和0.31±0.16（P均〈0.05）。BALF中TNF？α为（16.84±0.86）pg/ml,IL？6为（1.05±0.19）pg/ml,均明显高于对照组的（12.48±0.84）pg/ml和（0.86±0.11）pg/ml（P均〈0.05）;AM培养上清中TNF？α、IL？6差异均无统计学意义（P均〉0.05）。结论使用糖皮质激素造成大鼠免疫抑制诱发PCP后,大鼠AM吞噬功能降低,BALF中TNF-α、IL-6水平升高。     

Effects of hyaluronate on CD44 expression of infiltrating cells in exudate of rat air pouch, induced by sensitization with lipopolysaccharide.

OBJECTIVE: To investigate the effects of hyaluronate (HA) on CD44 expression of infiltrating cells in vivo. METHODS: Intra-air pouch injection of 10 microg lipopolysaccharide (LPS) with 0.4, 4.0, or 40 mg HA, 40 mg carboxymethylcellulose (CMC), or saline was performed on rats immunized with LPS. The percentage of CD44+ cells in the exudate of the air pouch was measured by flow cytometry, and the concentrations of interleukin 1beta (IL-1beta) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) in the air pouch exudate were measured by ELISA. IL-1beta and TNF-alpha in the air pouch lining layer were stained by immunohistochemistry. RESULTS: The percentage of CD44+ cells in air pouch exudate was greater in the presence of HA, with a dose dependent increase (0.4 mg, 9.4+/-2.6%, n = 4; 4.0 mg, 13.8+/-2.9%, n = 4; 40 mg, 24.9+/-6.3%, n = 3; p < 0.05), while it was 4.9+/-1.2% (n = 4) in the presence of 40 mg CMC. The concentration of IL-1beta was lower in the presence of 40 mg HA (251.0+/-61.4 pg/ml, n = 4) or 40 mg CMC (168.2+/-43.5 pg/ml, n = 4; p < 0.05) than in saline (403.0+/-60.5 pg/ml, n = 4). The concentration of TNF-alpha was lower in the presence of 40 mg HA (14.0+/-6.7 pg/ml, n = 4) or 40 mg CMC (7.04+/-7.0 pg/ml, n = 4) than in saline (38.2+/-12.2 pg/ml, n = 4). Extensively stained lining cells in superficial layer of the air pouch with IL-1beta and TNF-alpha were observed in rats inoculated with 0.4 mg HA. CONCLUSION: These findings suggest that HA might affect the inflammatory process through modifying CD44 expression on infiltrating cells in air pouch exudate.     

Effect of resveratrol on activation of nuclear factor kappa-B and inflammatory factors in rat model of acute pancreatitis

AIM: To observe the effect of resveratrol on nuclear factor Kappa-B (NF-κB) activation and the inflammatory response in sodium taurocholate-induced pancreatitis in rats. METHODS: Seventy-two male SD rats were randomly divided into three groups: sham operation group (control), severe acute pancreatitis (SAP) group, and severe acute pancreatitis group treated with resveratrol (RES). A SAP model was established by injecting 4% sodium taurocholate 1 mL/kg through puncturing the pancreatic duct. In Res group, Res was given at 30 mg/kg b.m. intraperitoneally after the SAP model was successfully established. Eight animals from each group were sacrificed at 3, 6 and 12 h after modeling. The expression of NF-κB activation of pancreas was detected by irnmunohistochemical staining, whereas the levels of TNF-α and IL-8 in pancreatic tissues were estimated by radioimrnunoassay. The pathological changes of pancreas and lungs were examined microscopically. RESULTS: Much less hyperemia, edema, dust-colored necrotic focus and soaps were noticed in pancreas in RES group than in SAP group. In RES group, hemorrhage, exudates and infiltration of inflammatory cells in pancreas and interstitial edema, destruction of alveolar wall in lung were significantly less than in SAP group. In the SAP group, the activation of NF-κB in pancreatic tissues was enhanced significantly at any measure point compared with control group (64.23±10.72% vs 2.56±0.65%, 55.86±11.34% vs 2.32±0.42%, 36.23±2.30% vs 2.40±0.36%,P<0.01), TNF-α, IL-8 were also increased and reached their peak at 6 h and then declined. The activation of NF-κB and the levels of TNF-α and IL-8 in RES group were significantly lower than those in SAP group (P<0.01): activation (52.63±9.45% vs 64.23±10.72%, 40.52±8.40% vs 55.86±11.34%, 29.83±5.37% vs 36.23±2.30%), TNF-α (132.76±15.68 pg/mL vs 158.36±12.58 pg/mL, 220.32±23.57 pg/mL vs 247.67± 11.62 pg/mL, 175.68±18.43 pg/mL vs 197.35±12.57 pg/mL) and IL-8 (0.62±0.21 μg/L vs 0.83±0.10 μg/L, 1.10±0.124 μg/L vs1.32±0.18 μg/L, 0.98±0.16 μg/L vs 1.27±0.23μg/L). CONCLUSION: The activation of NF-KB is involved in the inflammatory response of rats with SAP. Resveratrol could effectively inhibit the expression of NF-κB activation, alleviate the severity of SAP through its anti-inflammatory effects and regulate the inflammatory mediators.