细胞凋亡调控基因bcl-2和bax在肾上腺髓质增生大鼠肾上腺组织中的表达与意义

目的研究肾上腺髓质增生大鼠肾上腺组织细胞凋亡抑制基因bcl-2和促进基因bax在肾上腺髓质增生发病机制中的作用。方法用免疫组化SP法对肾上腺髓质增生大鼠和正常对照组大鼠的肾上腺组织细胞凋亡相关基因bcl-2和bax的表达进行检测。结果bcl-2的表达,肾上腺髓质增生大鼠组阳性细胞数为(89.3±10.86)个,正常对照组为(21.2±7.65)个(P<0.05)。bax的表达,肾上腺髓质增生大鼠组阳性细胞数为(16.1±4.62)个,正常对照组为(54.8±9.31)个(P<0.05)。结论细胞凋亡调控基因参与了肾上腺髓质增生的病理过程。在此调控网络中,bcl-2基因发挥了较为重要的作用,bax基因的表达减少。     

银杏叶提取物联合依达拉奉对气虚血瘀型脑缺血再灌注大鼠细胞凋亡及bcl-2/bax表达的影响

目的:观察银杏叶提取物(EGb)与依达拉奉(ED)联合应用对气虚血瘀型脑缺血再灌注大鼠脑组织细胞凋亡率及bcl-2/bax表达的影响。方法:采用饥饿、疲劳、高脂饮食等复制大鼠气虚血瘀模型,再用线栓法阻断大脑中动脉2 h,再灌注治疗72 h后,观察EGb、ED及EGb+ED组对气虚血瘀型脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织细胞凋亡率及bcl-2/bax表达的影响。结果:与模型组比较,EGb、ED及EGb+ED组均能降低气虚血瘀型脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织凋亡细胞数(P<0.01),下调bax基因表达,上调bcl-2基因表达,减轻神经细胞损伤(P<0.01),两药联用变化趋势更明显。结论:银杏叶提取物和依达拉奉能降低气虚血瘀型脑缺血再灌注损伤模型鼠脑组织细胞凋亡基因bax的表达,增加具有神经元保护作用的bcl-2基因表达,从而抑制神经细胞凋亡,加速神经功能的恢复,共同发挥脑保护作用。     

汉防己甲素对大鼠急性脊髓损伤后 bcl-2 和 bax 表达的影响

目的 观察汉防己甲素(tetrandrine,Tet)对大鼠急性脊髓损伤后bcl-2和bax表达的影响,探讨其对脊髓损伤的作用机制. 方法 成年SD大鼠100只,分为4组:假手术组10只,损伤对照组、甲基强的松龙(methylprednisolone, MP)治疗组、Tet治疗组各30只.胸8、9椎板切除后,损伤对照组,MP、Tet治疗组用加速压迫型Allen's打击法制成脊髓损伤模型,后2组动物于制模前,伤后24、48 h尾静脉分别注射MP 90 mg/kg和1% Tet 22.5 mg/kg.各组大鼠于术后8 h,1、3、7、14 d行运动功能BBB评分,取损伤段脊髓行石蜡切片HE染色,观察脊髓组织的形态结构变化,免疫组织化学染色检测细胞凋亡因子bcl-2、bax表达. 结果 伤后7、14 d MP、Tet治疗组大鼠运动功能评分显著高于损伤对照组(P<0.05),各时间点MP、Tet治疗组评分无统计学意义(P>0.05);MP、Tet治疗组脊髓组织损害较损伤对照组轻,术后8 h至14 d动态观察,3～7 d损伤表现最为严重,达到损伤高峰期;假手术组中bax、bcl-2阳性细胞数较少,MP、Tet治疗组bax阳性细胞数少于损伤对照组(P<0.05),而bcl-2阳性细胞数多于损伤对照组(P<0.05). 结论 Tet可通过增加bcl-2表达和降低bax表达来抑制急性脊髓损伤后神经细胞的凋亡,有益于脊髓组织的保护,促进运动功能的恢复.     

兔脑出血灶周围脑组织细胞凋亡及bcl—2和bax的检测

目的：探讨兔脑出血灶周围脑组织中bcl-2、bax蛋白表达和细胞凋亡的关系。方法：家兔40只,分为A、B、C、D4组。B、C、D3组采用兔自体血二次注射法制作脑出血模型,分别于模型制作完成后12h,24h,72h断头处死,运用TUNEL法、免疫组化SP技术,检测出血灶周围脑组织中细胞凋亡及bcl-2、bax蛋白表达。结果：出血灶周围脑组织中细胞凋亡、bcl-2和bax蛋白表达在各组间差异有显著性（P＜0．05）。bcl-2蛋白表达与凋亡阳性细胞数呈负相关(r=－0．781,P＜0．05）,bax蛋白表达与其呈正相关（r＝0．723,P＜0．05）。结论：出血灶周围脑组织中存在细胞凋亡,细胞凋亡的变化在一定程度上反映了周围脑组织的损伤程度。bcl-2和bax蛋白对凋亡具有调控作用。     

沙榆油对急性放射性皮肤损伤模型大鼠皮损组织中bcl-2和bax基因表达的影响

目的:观察沙榆油对急性放射性皮肤损伤模型皮肤损伤的防治效果及对凋亡相关基因bcl-2和bax表达的影响。方法:雌性SD大鼠40只,均行臀部照射野皮肤脱毛,随机选取10只为空白组,不做特殊处理,其余30只进行急性放射性皮肤损伤造模后随机分为模型组、治疗组和对照组,每组10只。从造模次日起均以生理盐水清洁放射野皮肤,治疗组清洁后外施沙榆油,对照组清洁后外施湿润烧伤膏,模型组不做处理,每天1次。比较各组大鼠照射野皮肤变化,免疫组织化学检测bcl-2和bax的表达情况。结果:造模3组大鼠均发生急性放射性皮肤损伤,治疗组较轻,模型组最重,对照组较重。第14天,与空白组比较,其余3组大鼠皮损组织中bcl-2蛋白均呈低表达或阴性,差异均有统计学意义(P0.05)。第30天,与空白组比较,治疗组bcl-2蛋白表达明显升高,差异无统计学意义(P0.05);治疗组bcl-2蛋白表达显著高于模型组、对照组(P0.05);模型组、对照组bcl-2蛋白表达上升缓慢,均显著低于空白组(P0.05)。第14天,与空白组比较,其余3组bax蛋白均呈阳性(++)至强阳性,差异均有统计学意义(P0.05);治疗组与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)。第30天,治疗组bax蛋白表达进一步减弱,与模型组、对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05);模型组、对照组bax蛋白的表达仍然较强,与空白组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:沙榆油可以减轻放射性皮肤损伤的程度,促进放射性皮肤损伤的恢复;其机制可能与其增强皮损细胞中bcl-2蛋白的表达、降低bax基因的表达、抑制细胞凋亡的作用有关。     

褪黑素对大鼠液压脑损伤后NGF、bcl-2、bax mRNA表达的影响

目的:观察褪黑素对颅脑损伤后受损脑组织神经生长因子(NGF)、bcl-2、bax mRNA表达的影响,探讨褪黑素对创伤性脑损伤的保护作用机制.方法:采用侧方液压打击法制备大鼠颅脑损伤模型,应用原位杂交方法和计算机显微图像分析技术,观察褪黑素(5、10 mg/kg,皮下注射)对大鼠受损脑组织NGF、bcl-2、bax mRNA表达的调节作用.结果:脑损伤后立即给予褪黑素能够增强伤后12 h大鼠受损脑组织NGF和bcl-2 mRNA表达,增强效应与剂量呈正相关;褪黑素对bax mRNA表达无明显影响.结论:褪黑素能够增加液压脑损伤后NGF和bcl-2 mRNA表达而不改变bax mRNA表达,提示褪黑素可能通过提高受损神经细胞修复和抗凋亡能力发挥脑保护作用.     

大鼠液压脑损伤后bcl-2和bax基因的表达分布

目的;观察SD大鼠单侧液压脑损伤后凋亡相关基因（bcl-2,bax）在脑组织中的表达特点。方法：采用侧方液压打击颅脑损伤模型,应用免疫组化和原位杂交方法,以及计算机显微图像分析技术,观察SD大鼠脑损伤后12 b脑内bcl-2、bax蛋白和mRNA的阳性细胞分布。结果：液压打击伤后bcl-2、bax基因在损伤侧大脑皮质、海马表达明显增强,挫裂伤组织内的血肿周边bcl-2、bax基因表达亦明显增强,阳性细胞受打击能量传递的影响呈梯度分布。结论：大鼠液压脑损伤后bcl-2和bax基因的表达分布受打击能量和脑内血肿的影响,并与脑损伤后迟发性神经元死亡（delayed neuron death,DND）密切相关。     

大剂量甲泼尼龙对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞bcl-2、bax及凋亡的影响

目的 观察大剂量甲泼尼龙治疗对大鼠受损脊髓神经细胞凋亡及凋亡基因表迭的影响.方法 选取48只雌性SD大鼠随机等分为二组,对照组与治疗组.按N ystrom和Berglund法造大鼠急性脊髓损伤(ASCI)模型制模,分别于伤后4h,8h,1d,3d,7d和14d时从二组中各随机选取4只动物灌注固定后取材.免疫组织化学检测损伤段脊髓内bcl-2和bax蛋白表达,TUNEL检测细胞凋亡,染色结果应用图像分析仪进行半定量分析.结果 大鼠急性脊髓损伤(AScl)后4h即可见脊髓内TUNEL阳性细胞,8h表达达高峰,此后表达量逐渐下降,14d时仍可见少量阳性细胞.凋亡相关蛋白bcl-2和bax,伤后1d时达高峰,14d时仍有表达.与对照组相比,治疗组中8h,ld和3d时间点凋亡细胞敷减少有统计学意艾,8h和ld时bcl-2蛋白表达增高及bax蛋白表达减少有统计学意义.结论 大鼠ASCI后,大剂量甲泼尼龙治疗可通过改变损伤段脊髓内凋亡相关蛋白bel-2和bax的表达,从而减少神经细胞凋亡的发生.     

退变腰椎间盘组织中细胞凋亡及相关基因bcl-2和bax表达的研究

目的:探讨腰椎间盘退变的发病机制。方法:采用原位DNA片段末端标记和免疫组织化学方法,检测40例退变腰椎间盘组织及10例正常腰椎间盘组织细胞凋亡状态及凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白的表达。结果:40例退变腰椎间盘组织凋亡指数(AI)均值为70.51,bcl-2蛋白阳性细胞百分比为10.12％,bax蛋白阳性细胞百分比为54.56％。10例正常腰椎间盘组织AI均值为20.02,bcl-2蛋白阳性细胞百分比为53.46％,bax蛋白细胞百分比为10.54％。两组间AI均值、bcl-2蛋白表达、bax蛋白表达差异均有显著性意义(P均<0.05)。bcl-2蛋白表达越弱,bax蛋白表达越强,凋亡细胞数越多。结论:bcl-2和bax蛋白均参与了腰椎间盘组织中细胞凋亡的调节,并在腰椎间盘退行性变发生和发展中发挥着重要作用。     

来曲唑对大鼠子宫内膜异位症的作用及对异位内膜细胞凋亡的影响

目的:初步探讨第3 代芳香化酶抑制剂来曲唑治疗大鼠子宫内膜异位症(endometriosis, EM) 模型异位病灶的作用机制, 及对异位内膜细胞凋亡的影响。方法:用自体子宫内膜移植方法建立大鼠EM 模型, 选择建模成功的大鼠随机分为来曲唑组(n=15) 和对照组(n=15), 比较治疗前后两组大鼠异位病灶的体积、外观变化、病理组织学差异, 并采用免疫组织化学法和RT-PCR 法检测异位病灶中P450 芳香化酶(P450arom)、环氧合酶-2(COX-2)、bcl-2及bax 的表达。结果:与对照组比较, 来曲唑组异位病灶体积明显缩小(P<0.05), 异位病灶中P450arom 和COX-2的蛋白及mRNA 表达均明显减低(P<0.05)。P450arom 与COX-2 在异位病灶中的表达呈正相关(r=0.943, P<0.001;r=0.913, P<0.001)。异位病灶中bcl-2 的蛋白及mRNA 表达较对照组均明显减低(P<0.05), bax 的蛋白及mRNA 表达较对照组明显增高(P<0.05), 来曲唑组bax/bcl-2 的比值较对照组显著增加(P<0.05)。结论:来曲唑可明显缩小异位病灶体积, 可能通过降低异位病灶局部P450arom, COX-2 的表达, 抑制雌激素生成及异位病灶的增殖, 从而促进异位病灶细胞凋亡, 达到治疗目的。     

沙眼衣原体ompA基因克隆及其在真核细胞中的表达

目的克隆D型沙眼衣原体(Ct)ompA基因,构建真核表达重组质粒,转染真核细胞,为核酸疫苗的研制作准备.方法用PCR技术从D型Ct基因组DNA中扩增ompA基因片段,重组入pUCm-T克隆载体.将pUCm-T/ompA中的ompA外源基因片段经酶切、连接等反应,亚克隆入pcDNA3.1真核表达载体,进行序列分析和酶切鉴定后,运用脂质体将重组体pcDNA3.1/ompA转染HeLa细胞,免疫组化法观察目的的基因的表达.结果从D型Ct基因组DNA中扩增出特异的ompA基因片段;序列测定证实与GenBank登陆的D型Ct一致;重组质粒pcDNA3.1/ompA在HeLa中获得表达.结论Ct ompA基因能够在体外真核细胞表达,为进一步研究Ct致病机制及DNA疫苗的研究提供理论依据.     

PTEN 、FHIT基因在胃腺癌中的表达及其意义

目的:探讨PTEN和FHIT基因在胃腺癌中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学(Envi-sion二步法)检测56例胃腺癌组织及10例正常胃黏膜组织中PTEN和FHIT基因蛋白的表达。结果:56例胃腺癌组织中PTEN和FHIT蛋白阳性表达率分别为41.1%和46.4%,正常胃黏膜组织均为100%,差异均有统计学意义(P<0.05)。PTEN蛋白的表达与胃腺癌的分化程度、浆膜浸润、淋巴结转移均有关(P<0.05)。FHIT蛋白的表达与胃腺癌淋巴结转移、浆膜浸润无关(P>0.05),与胃腺癌的分化程度有关(P<0.05)。结论:PTEN和FHIT基因蛋白缺失在胃腺癌发生、发展中起重要作用,二者可作为判断胃腺癌生物学行为和临床预后的参考指标。     

LRP16基因的SAGE谱及其在正常血细胞、白血病细胞中的表达状况

目的：通过信息学和实验学的方法检测LRP16基因在肿瘤细胞以及在造血发育不同阶段的表达状况，探讨其在肿瘤发生、发展以及在血细胞成熟过程中可能的作用。方法：以NCBI提供的高通量CGAP／SAGEmap数据库为实验对象，“Virtual Northern”程序为实验工具，分析比较了LRP16基因在多种肿瘤组织、细胞系和相应正常组织中的表达谱；采用半定量RT－PCR方法检测了该基因在多种正常血细胞及白血病细胞中的表达量。结果：SAGE结果显示LRP16在人类多种肿瘤细胞中的表达量明显高于其正常对应组织。脐血中未检测到LRP16表达，正常骨髓及经G－CSF动员的PBSC（peripheral blood stem cells)中的表达量明显低于正常人外周血、原代白血病细胞及白血病细胞系（P＜0．001）。结论：LRP16在不同的血细胞中表达量不同。同时表明LRP16与急性白血病等多种肿瘤的发生、发展存在相关性；在初诊与复发白血病中，LRP16的表达差异值得进一步研究。     

嗜铬细胞瘤和副神经节瘤的遗传筛查

嗜铬细胞瘤/副神经节瘤的致病基因主要包括与多发性内分泌腺瘤综合征2型相关的RET基因、与von Hippel-Lindau病相关的VHL基因、与副神经节瘤/嗜铬细胞瘤综合征相关的SDHx基因、与纤维神经瘤病1型相关的NF1基因.在嗜铬细胞瘤/副神经节瘤中,约有27.4%属于遗传性肿瘤;在无家族史的散发性嗜铬细胞瘤患者中,上述基因突变的携带者占7.5% ～27%.因此,基因筛查已经成为嗜铬细胞瘤/副神经节瘤诊断的一个重要部分.文章对嗜铬细胞瘤/副神经节瘤的基因筛查现状及选择作一综述.     

Cx基因组在大肠癌中的表达及突变

目的 :研究大肠癌基因组中Cx基因的表达 ,探讨诱导剂作用后Cx基因的表达及Cx4 3基因编码序列突变。方法 :Northern杂交、RT PCR和PCR 单链构象多肽分析。结果 :正常大肠粘膜有Cx32、Cx37、Cx4 3mRNA的高表达 ,大肠癌癌旁组织有较弱的Cx32、Cx37、Cx4 3基因表达 ,大肠癌组织中仅有Cx4 3基因微弱表达。维甲酸 (RA)、二甲基亚砜 (DMSO)对大肠癌基因组中Cx4 3基因有诱导作用 ,而其本身表达的Cx4 6基因在RA及佛波酯 (TPA)作用后明显减弱或消失。Cx4 3基因编码区未发现突变。结论 :Cx32可能是人大肠粘膜上皮细胞基因组中维持细胞间隙连接通讯功能的特异表达的Cx基因 ,Cx4 6可能是大肠癌Cx基因表达的一种变异。Cx4 3基因在人大肠癌中表达下调的原因不是其编码区的点突变     

嗜铬细胞瘤和副神经节瘤的遗传筛查

嗜铬细胞瘤/副神经节瘤的致病基因主要包括与多发性内分泌腺瘤综合征2型相关的RET基因、与von Hippel-Lindau病相关的VHL基因、与副神经节瘤/嗜铬细胞瘤综合征相关的SDHx基因、与纤维神经瘤病1型相关的NF1基因。在嗜铬细胞瘤/副神经节瘤中,约有27.4%属于遗传性肿瘤;在无家族史的散发性嗜铬细胞瘤患者中,上述基因突变的携带者占7.5%～27%。因此,基因筛查已经成为嗜铬细胞瘤/副神经节瘤诊断的一个重要部分。文章对嗜铬细胞瘤/副神经节瘤的基因筛查现状及选择作一综述。     

人bcl-xL基因在转基因小鼠中的整合和表达

目的研究人bcl—xL基因在显微注射所产生的子代小鼠中的整合、转录和表达情况。方法采用PCR和Southern blot方法检测人bcl—xL基因在小鼠体内的整合；RT—PCR方法检测它们的bcl—xL mRNA水平；用Western blot及免疫组化法检测目的蛋白的表达情况。结果在显微注射所产生的转基因小鼠中，有4只为Southern blot检测阳性，并且在这4只小鼠及其子代中均检测到人bcl—xL的mRNA和过表达的目的蛋白。结论由于在这些小鼠中既有外源基因的整合，又有其mRNA和蛋白质的表达，所以，它们是真正的转基因动物。     

肝细胞Foxa2基因剔除小鼠的制备及鉴定

目的制备肝细胞Foxa2基因特异性剔除的小鼠模型,并进行鉴定.方法采用CreloxP重组系统,在Cre重组酶的作用下,将小鼠肝细胞DNA上的Foxa2基因进行条件性的靶向剔除;并通过PCR和免疫荧光染色法进行鉴定.结果PCR在剔除型小鼠中未扩增出Foxa2基因的条带;同时定量分析也未测出其mRNA的表达;免疫荧光显示剔除型小鼠的Foxa2蛋白也为阴性.结论条件性基因剔除技术能成功地制备肝细胞Foxa2基因特异性剔除的小鼠模型.     

绿色荧光蛋白GFP在转化细胞和肿瘤细胞中的表达

目的：在肿瘤基因治疗研究中建立一个用绿色荧光蛋白（ｇｒｅｅｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＧＦＰ）为标记基因的合适条件。方法用带有ＧＦＰ突变体的质粒转染到表达细胞,观察ＧＦＰ瞬时表达的情况：１．直接测定ＧＦＰ在ＣＯＳ－７细胞中的表达并观察表达的稳定性;２比较不同启动子驱动的ｐｃＤＮＡ３－ＥＧＦＰ和ｐＳＶＫ３－Ｓ６５Ｔ两种质粒在不同肿瘤细胞中的转染效率;３用ＬａｃＺ基因与ＧＦＰ基因共转染     

绿色荧光蛋白GFP在转化细胞和肿瘤细胞中的表达

目的　在肿瘤基因治疗研究中建立一个用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)为标记基因的合适条件。方法　用带有GFP突变体的质粒转染到表达细胞,观察GFP瞬时表达的情况：1．直接测定GFP在COS-7细胞中的表达并观察表达的稳定性;2．比较不同启动子驱动的pcDNAa-EGFP和pSVKa-S65T两种质粒在不同肿瘤细胞中的转染效率;3．用LacZ基因与GFP基因共转染48h后,通过FACS分选测定两种基因在同一细胞中的表达情况。结果　在不同条件下的活细胞中有GFP基因表达,且表达具有稳定性,表达持续约2周左右;CMV启动子和SV40启动子调控的GFP对不同肿瘤细胞株的转染效率有差异。当两种基因共转染后用FACS分选,选出GFP细胞带有LacZ基因细胞在1：4时可达85％以上。结论　通过GFP表达可连续而直接地观察活细胞中的基因表达,利用GFP可快速地挑选带有靶基因的细胞。