17β-雌二醇对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白表达的影响

目的研究17β-雌二醇(17β-E2)对子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白表达的影响,探讨Wnt/β-catenin信号通路在介导雌激素促进内异症发生发展的作用。方法体外分离培养内异症患者在位子宫内膜间质细胞。用不同浓度17β-E2处理子宫内膜间质细胞48 h;此后选用10-10mol/L 17β-E2处理子宫内膜间质细胞12、24和48 h,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blotting)检测17β-E2处理前后子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白的表达水平。同法分析雌激素受体拮抗剂ICI182,780(10-6mol/L)对17β-E2促进β-catenin mRNA和蛋白表达的影响。免疫组织化学染色观察17β-E2作用后β-catenin在子宫内膜间质细胞中的定位。结果17β-E2能明显促进内异症患者在位子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白的表达,并呈剂量和时间依赖性,于10-10mol/L作用48 h最明显。雌激素受体拮抗剂ICI182,780能明显抑制17β-E2对子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白的表达。免疫组织化学染色发现17β-E2能促进β-catenin在子宫内膜间质细胞核内的表达。结论雌激素可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进内异症在位子宫内膜的异位种植。     

胰岛素和睾酮对Ishikawa细胞HOXA10基因表达的影响

目的 观察胰岛素(INS)和睾酮(T)对子宫内膜腺癌细胞HOXA10基因表达的影响. 方法 免疫细胞化学检测HOXA10蛋白在Ishikawa细胞定位表达;体外培养Ishikawa细胞,予不同浓度INS(90、60、30、3、0.3 U/L)或T(10-3、10-4、10-5、10-6、10-7mol/L)刺激Ishikawa细胞48h,MTT法检测INS、T对Ishikawa细胞生长的作用;最后分别以30 U/L INS和10-5mol/L T刺激Ishikawa细胞48 h,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法 测定INS和T对Ishikawa细胞HOXA10mRNA表达的影响. 结果 ⑴HOXA10蛋白定位表达于Ishikawa细胞的细胞浆内.⑵不同浓度的INS均可促进Ishikawa细胞的生长,随着浓度的增加作用越强, INS浓度达60、90 U/L时,细胞生长状况与浓度为30 U/L相似.不同浓度的T均可抑制Ishikawa细胞的生长,随浓度增加抑制作用越明显,浓度达10-4、10-3 mol/L时,细胞生长抑制状况与浓度为10-5 mol/L相似.⑶RT-PCR检测结果 显示INS组和T组Ishikawa细胞中HOXA10mRNA表达均较对照组减弱(P<0.01或P<0.05). 结论 不同浓度INS和T均可影响Ishikawa细胞生长,高浓度的INS和T降低细胞上HOXA10mRNA的表达.     

孕激素对子宫内膜腺癌细胞RL95-2中骨桥蛋白表达的影响

目的探讨孕酮对人子宫内膜细胞RL95-2骨桥蛋白(OPN)表达的调节作用及其临床意义。方法利用免疫荧光方法观察OPN在RL95-2细胞的表达定位。将不同浓度的孕酮(1×10-9 mol/L、1×10-7 mol/L、1×10-5 mol/L)处理RL95-2细胞24h,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和免疫印迹检测(Western blot)技术检测各组OPN mRNA和蛋白的表达水平,以不加孕酮的实验组为空白对照组。结果 OPN定位表达于RL95-2细胞膜表面;与对照组相比,高浓度孕酮(1×10-5 mol/L)组的OPN mRNA和蛋白的表达显著增加(P0.05),低浓度孕酮(1×10-9 mol/L)组则显著抑制OPN mRNA和蛋白的表达(P0.05)。结论在一定浓度范围内,孕酮可双向调节子宫内膜表面骨桥蛋白的表达。     

4-羟基他莫昔芬对前列腺基质细胞增殖与凋亡的作用

目的:研究4-羟基他莫昔芬(OHT)对原代培养的前列腺基质细胞增殖与凋亡的影响。方法:以10-8~10-5mol/L的雌二醇(E2)、己烯雌酚(DES)、OHT以及10-8~10-6mol/L的E2与10-7mol/L的OHT混合物分别作用于原代培养的前列腺基质细胞,采用MTT法和TUNEL法分别检测细胞增殖和凋亡。结果:OHT对前列腺基质细胞增殖和凋亡的作用与E2和DES比较均有显著差异(P均<0.05),在10-7~10-5mol/L浓度下表现出与浓度相关(r=-0.383,P=0.005)的抑制增殖作用(P<0.05),10-7mol/L的OHT可以抑制相同甚至更高浓度(10-6mol/L)E2的促增殖作用(P<0.05);OHT在10-8~10-5mol/L浓度下显示与浓度相关(r=0.349,P=0.012)的促凋亡作用(P<0.05),且10-7mol/L OHT的促凋亡作用不能被相同甚至更高浓度(10-6mol/L)E2所逆转(P>0.05)。结论:OHT在一定浓度范围内对原代培养的前列腺基质细胞具有明显的抑制增殖和促凋亡作用,该作用可能不完全是通过竞争性抑制雌激素受体而实现的。     

胰岛素和睾酮对Ishikawa细胞葡萄糖转运蛋白4表达的影响

目的探讨胰岛素(INS)和睾酮(T)对多囊卵巢综合征(PCOS)子宫内膜腺上皮细胞生长的影响和葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)表达的调节机制。方法体外培养Ishikawa细胞,予不同浓度INS(90、60、30、3、0.3 U/L)或T(10-3、10-4、10-5、10-6、10-7mmol/ml)刺激Ishikawa细胞48 h,MTT法检测INS、T对Ishikawa细胞生长的作用;免疫细胞化学检测GLUT4蛋白在Ishikawa细胞定位表达;分别以30 U/L INS和10-5mmol/ml T刺激Ishikawa细胞24和48 h,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定INS和T对Ishikawa细胞GLUT4 mRNA表达的影响。结果(1)不同浓度的INS均可促进Ishikawa细胞的生长,随着INS浓度的增加,INS促进Ishikawa细胞生长作用越强,INS浓度自0.3~30 U/L时,Ishikawa细胞生长依次加强,与对照组相比均有显著性差异(P<0.01)。INS浓度达60、90 U/L时,细胞生长状况与INS浓度为30 U/L相似。不同浓度的T均可抑制Ishikawa细胞的生长,随着T浓度的增加,T抑制Ishikawa细胞生长作用越明显。T浓度自10-7、10-6、10-5mmol/ml,Ishikawa细胞生长依次减弱,与对照组相比均有显著性差异(P<0.01,P<0.05),T浓度达10-4、10-3mmol/ml时,细胞生长抑制状况与T浓度10-5mg/ml相似。(2)GLUT4蛋白,定位表达于Ishikawa细胞的细胞浆内。(3)Ishikawa细胞中GLUT4 mRNA表达,在INS组和T组均较对照组减弱(P<0.01,P<0.05),INS组比T组减弱更明显(P<0.05),且INS和T作用24和48 h GLUT4 mRNA表达无显著性差异(P>0.05)。结论不同浓度INS和T均可影响Ishikawa细胞生长,并降低GLUT4 mRNA的表达,推测PCOS高胰岛素、高雄激素血症的病理生理特性有可能影响子宫内膜的代谢过程,与子宫内膜的病变相关。     

高雄激素促进人胚胎干细胞向男性原始生殖细胞分化的研究

目的:多囊卵巢综合征(PCOS)母亲孕早期的高雄激素可能影响其男性子代成年后的生育力。本研究利用人胚胎干细胞(hESCs)体外分化的实验模型,观察不同浓度睾酮对hESCs向早期雄性生殖细胞分化的影响,探讨孕早期高雄激素暴露对男性子代原始生殖细胞储备及成年后生育力的潜在影响。方法:2μmol/L视黄酸(RA)体外诱导hESCs(46,XY)向雄性生殖细胞分化,同时添加0 mol/L、3×10~(-7) mol/L、5×10~(-7) mol/L、15×10~(-7) mol/L、45×10~(-7) mol/L、135×10~(-7) mol/L睾酮,在分化的第0、4、7、14天收集细胞样品,分析不同分化阶段雄性生殖细胞特异基因的表达,比较分化进程、分化效率。结果:不同浓度睾酮处理的hESCs,同一分化阶段细胞形态无差异。原始生殖细胞的标志基因DAZL的表达峰值出现在分化的第4天,15×10~(-7) mol/L、45×10~(-7) mol/L、135×10~(-7) mol/L睾酮处理组的DAZL的表达量与3×10~(-7) mol/L睾酮处理组对比明显增加(P﹤0.01)。减数分裂期早期生殖细胞特异基因SCP3的表达在分化的第4天开始上调,45×10~(-7) mol/L睾酮处理组与3×10~(-7) mol/L、5×10~(-7) mol/L睾酮处理组比较,SCP3的表达均明显上调(P﹤0.01);SCP3的表达在分化的第7天达到峰值,15×10~(-7) mol/L、45×10~(-7) mol/L、135×10~(-7) mol/L睾酮处理组与3×10~(-7) mol/L睾酮处理组相比,SCP3明显高表达(P﹤0.01)。免疫荧光、流式细胞分析结果显示,各组间分化第4天DAZL、分化第7天SCP3及VASA的表达量随着睾酮浓度升高而有升高趋势。分化第4天,雄激素受体(AR)的表达开始升高,并且可维持至分化第14天;在相同分化阶段,睾酮较高浓度组hESCs的AR表达量高于睾酮较低浓度组(但P>0.05)。结论:hESCs向早期雄性生殖细胞分化过程中高雄激素处理,诱导雄激素受体的提前表达,使hESCs向早期雄性生殖细胞分化提前,可能导致PCOS患者男性子代雄性原始生殖细胞储备不足,进而影响其成年后的生育力。hESCs可作为体外模型研究PCOS患者宫内高雄激素暴露对其男性子代生育力影响研究的新工具,并有益于男性不育症病因机制的研究。     

感觉神经肽P物质激活Wnt/β-catenin信号通路促进间充质干细胞增殖的实验研究

目的探讨感觉神经肽P物质(substance P,SP)对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖的影响并初步揭示其中可能的机制。方法体外培养SD(Sprague-Dawley)大鼠BMSCs。细胞增殖-毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测不同浓度SP刺激下的BMSCs增殖活性;在10-8 mol/L的SP刺激下,采用实时荧光定量PCR(real-time qPCR,RT-qPCR)检测第1、3、5和7天时Wnt/β-catenin信号通路相关基因(β-catenin、c-myc、cyclin D)的表达情况。SP组单纯添加10-8 mol/L的SP,SP+LiCl(糖原合成激酶-3的抑制剂LiCl)组在SP组基础上添加6×10-3 mol/L的LiCl,SP+Dkk-1(Dickkopf-1)组在SP组基础上添加10-9 mol/L的Dkk-1,以添加等量聚丁烯琥珀酸酯(poly butylenes succinate,PBS)为空白对照组。结果 CCK-8法显示SP明显促进BMSCs增殖,以10-8 mol/L的SP作用最为显著。RT-qPCR结果显示SP刺激下,β-catenin、c-myc、cyclin D的mRNA表达有显著差异,10-8 mol/L的浓度差异最为显著,并且呈明显的时间依赖,第5天mRNA表达出现顶峰。并且SP+LiCl组β-catenin、c-myc、cyclin D的mRNA和蛋白水平显著增强,而SP+Dkk-1组明显抑制。结论 SP通过激活Wnt/β-catenin通路而显著促进BMSCs增殖。     

瑞舒伐他汀对体外培养人成骨细胞增殖及LRPS、Runx2基因表达的影响

目的 观察不同浓度的瑞舒伐他汀对体外培养的人成骨细胞增殖及LRPS,Runx2基因表达的影响,探讨瑞舒伐他汀影响骨代谢可能的分子机制。方法 (1)成骨细胞的培养与鉴定;(2)给予不同浓度(0,10-6 , 10-7 ,10-8,10-9 mol/L)的瑞舒伐他汀刺激体外培养的人成骨细胞,24 h后采用CCK-8比色法检测细胞的增殖能力,用荧光定量PCR法检测LRPS , Runx2的相对表达水平。结果 瑞舒伐他汀可明显促进细胞增殖(P<0.05),并促进成骨细胞LRPS , Runx2基因的表达(P<0.05),10-7mol/L增殖最明显、基因的表达量最高。结论 瑞舒伐他汀可促进成骨细胞的增殖,可能与LRPS , Runx2基因表达增加有关。     

甲状旁腺素对大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的观察甲状旁腺素(PTH)对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖及凋亡的影响,并探讨其作用的可能机制。方法体外培养的大鼠系膜细胞经不同浓度的PTH作用后,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期及凋亡,吖啶橙荧光活体染色观察细胞凋亡形态,免疫细胞化学结合计算机图文分析系统检测c-jun、c-fos表达。结果PTH持续刺激GMC6h、12h时,10-11～10-9mol/L浓度范围内,促进细胞增殖(P<0.05);10-9mol/L在12h达高峰,并可使G0～G1期细胞减少,S G2M期细胞增多,并能明显促进c-jun、c-fos的表达(P<0.01),而10-8mol/L无明显作用;刺激24h时各浓度均无作用;刺激48h各浓度明显抑制大鼠系膜细胞增殖(P<0.01),且使细胞阻滞在G0～G1期,不能进入S期,并能明显抑制c-jun、c-fos的表达(P<0.01)。PTH不诱导GMC凋亡。结论PTH体外刺激GMC增殖与作用时间及剂量相关,低浓度短时间作用刺激GMC增殖,持续作用抑制GMC增殖,其作用与c-jun、c-fos的表达有关,并影响细胞周期。PTH对体外培养的大鼠GMC凋亡无诱导作用。甲状旁腺机能亢进可能参与了慢性肾病残余肾功能进一步恶化的病理过程。     

跨膜蛋白16A对胚胎着床和子宫内膜容受性的影响

目的研究跨膜蛋白16A(TMEM16A)对子宫内膜容受性和胚胎着床的影响。方法体外培养子宫内膜Ishikawa细胞系,分为空白对照组、E_2+P_4组、抑制剂组和E_2+P_4+抑制剂组。分别加药处理后,采用实时荧光定量(qRT-PCR)和免疫印记试验(Western blot)技术检测各组TMEM16A、白血病抑制因子(LIF)和整合素αvβ3mRNA和蛋白的表达水平。采用体外细胞粘附实验检测E_2+P_4组和E_2+P_4+T16Ainh-A01组Ishikawa细胞与人绒毛膜滋养细胞HTR8-SVneo之间的粘附作用。结果 qRT-PCR和Western blot结果显示,E_2+P_4组的TMEM16A、LIF和整合素αvβ3mRNA和蛋白的表达水平最高,在加入T16Ainh-A01后3个基因的表达水平均显著降低(P0.01),但均显著高于空白对照组(P0.01);各组TMEM16A、LIF和整合素αvβ3表达水平均与空白对照组存在显著差异(P0.01)。细胞粘附实验结果显示,E_2+P_4+抑制剂组中Ishikawa细胞与HTR8-SVneo细胞的粘附作用显著小于E_2+P_4组(P0.05)。结论抑制TMEM16A的表达降低着床期LIF和整合素αvβ3的表达,可能影响子宫内膜容受性;抑制TMEM16A可降低子宫内膜细胞与滋养层细胞之间的粘附作用,可能导致胚胎着床失败。     

雌、孕激素及肝素结合生长因子对Ishikawa细胞HOXA10基因表达的调节

目的通过体外实验研究雌激素、孕激素、肝素结合表皮生长因子(HB-EGF)对Ishikawa细胞中HOXA10基因表达的调节,探讨HOXA10基因在胚胎种植中的意义。方法体外培养高分化子宫内膜癌细胞Ishikawa,按实验目的分别加入雌激素、孕激素、雌孕激素联合、雌孕激素RU486联合、HB-EGF刺激48 h后,采用免疫荧光、逆转录聚合酶链反应、免疫印迹三种方法测定各个条件下Ishikawa细胞中HOXA10基因的表达。结果雌、孕激素单独或联合作用48 h后都可以显著提高Ishikawa细胞中HOXA10基因的表达(P<0.05),同时加RU486后HOXA10基因表达的上调趋势减弱。加HB-EGF刺激48 h后HOXA10基因的表达量增高(P<0.05)。结论雌、孕激素、HB-EGF对HOXA10基因的表达具有上调作用,RU486能够抑制孕激素的上调作用。     

雄激素对前列腺癌细胞的双向作用及其机制

目的探讨雄激素对前列腺癌细胞及其双向作用分子机制。方法在LNCaP细胞培养液中加入10~(-9)、10~(-10)、10~(-11)、10~(-12) mol/L的人工合成雄激素R1881,使用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术证明其双相作用。分别提取受R1881刺激和抑制的LNCaP细胞中的mRNA,反转录后行基因芯片分析,并使用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术验证其结果。结果细胞被10~(-9) mol/L及以上浓度的R1881抑制,被10~(-10)mol/L及以下浓度的R1881刺激生长。与对照组比较,10~(-9)mol/L R1881作用组,320基因表达差异有意义,170基因表达下调,150基因表达上调。10~(-10) mol/LR1881作用组中,4608条基因表达差异有意义,2562基因表达下调,2046基因上调。结论R1881可在10~(-9)mol/L及以上浓度抑制LNCaP细胞生长,在10~(-10)mol/L及以下浓度刺激细胞生长。雄激素受体共调节物在R1881的双向作用中可能起一定作用。     

瘦素对人成骨样细胞MG63 Ⅰ型胶原A1基因表达的影响

目的 探讨瘦素对人成骨样细胞MG63 Ⅰ型胶原A1基因表达的影响.方法 MG63细胞以3个不同浓度的瘦素(10~(-8)～10~(-6) mol/L)分别干预24、48、72 h,用实时荧光定量PCR法检测MG63细胞Ⅰ型胶原A1基因 mRNA的表达量,分析量效关系和时效关系,以17β-雌二醇作为阳性对照.结果 瘦素可上调MG63细胞Ⅰ型胶原A1基因 mRNA的表达,并存在浓度依赖和时间依赖效应,其最佳浓度为10~(-7) mol/L,最佳作用时间点为72 h.17β-雌二醇则以10~(-7) mol/L浓度组在24 h表达为最强.结论 瘦素可上调MG63细胞Ⅰ型胶原A1基因mRNA的表达,其作用较17β-雌二醇持久和滞后.     

c-myc对大鼠黄体细胞人绒毛膜促性腺激素诱导的孕酮和雌二醇生成的影响

应用离体细胞体外孵育法研究了反义ｃ ｍｙｃ寡脱氧核苷酸（反义ｃ ｍｙｃＯＤＮ）对大鼠黄体细胞人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）诱导的孕酮（Ｐ）和雌二醇（Ｅ２）生成的影响及其与外源性ｃＡＭＰ和Ｃａ２＋的关系。结果发现，反义ｃ ｍｙｃＯＤＮ能呈剂量相关方式抑制黄体细胞ｈＣＧ诱导的Ｐ和Ｅ２的生成。在浓度分别为１０和５μｍｏｌ／Ｌ时的抑制作用即具有显著意义（Ｐ＜０．０５）；而无义ｔａｔ寡脱氧核苷酸则无此作用。反义ｃ ｍｙｃＯＤＮ对黄体细胞ｈＣＧ诱导的Ｐ和Ｅ２产生的抑制作用能被加入１０－４ｍｏｌ／Ｌ二丁酰ｃＡＭＰ逆转，钙离子通道阻断剂维拉帕米对此种抑制作用具有协同效应。结果提示，ｃ ｍｙｃ癌基因参与黄体细胞ｈＣＧ诱导的Ｐ和Ｅ２生成的调控。     

Gastrin、CCK对胆管癌细胞bcl-2、baX基因表达的调控

目的探讨Gastrin、CCK对胆管癌细胞bcl-2和bax基因表达的调控作用.方法用免疫组织化学、原位杂交、流式细胞术、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)等技术,研究了Gastrin17肽(G-17)和CCK-8S肽(CCK-8 Sulfated)及CCK-A受体拮抗剂L364,718(L18)和Gastrin/CCK-B受体拮抗剂L365,260(L60)对QBC939胆管癌细胞bcl-2和bax mRNA、蛋白含量的影响.结果在正常情况下胆管癌细胞bcl-2和bax mRNA表达均为阳性,bax mRNA强于bcl-2 mRNA;G-17(1×10-10 mol/L、48 h)、CCK-8S(1×10-10mol/L)明显增强bcl-2 mRNA表达,而对bax mRNA表达无影响;同时加入L18和/或L60(1×10-10 mol/L)可明显抑制G-17和CCK-8S对bcl-2mRNA的促表达作用.经G-17或CCK-8S(1×10-8 mol/L)作用48 h,胆管癌细胞bcl-2蛋白表达明显增加,而bax蛋白表达无显著变化;L60或L18(1×10-8 mol/L)能明显抑制G-17和CCK-8S对bcl-2蛋白表达的促进作用.结论 Gastrin和CCK对bcl-2基因表达有上调作用,提示Gastrin和CCK对胆管癌细胞凋亡过程有抑制作用.     

雄激素对MCF-7乳腺癌细胞株增殖凋亡的影响

目的 观察睾丸酮对MCF-7乳腺癌细胞株增殖、凋亡的影响,并探讨其机制.方法 将1×10~(-5)、1×10~(-7)、1×10~(-9)、1×10~(-11) mol/L的睾丸酮分别作用于乳腺癌MCF-7细胞24、48、72 h,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长,流式细胞术检测不同浓度睾丸酮作用48 h时MCF-7细胞的周期分布和凋亡以及该细胞株中细胞周期素D1蛋白和雄激素受体的表达.结果 高浓度睾丸酮抑制MCF-7乳腺癌细胞株的增殖,1×10~(-5) mol/L睾丸酮作用48 h时,细胞生长抑制率为22.21%,细胞凋亡率为(58.60±5.41)%,但可使细胞周期由G_1 期进入S期,并可使细胞周期素D1蛋白表达量增加,雄激素受体蛋白表达量下降.低浓度睾丸酮(1×10~(-9) mol/L)作用后细胞周期素D1蛋白表达量无明显变化,雄激素受体蛋白表达量升高,在短时间内(24 h)可促进MCF-7细胞增殖.结论 高浓度睾丸酮在体外可使MCF-7乳腺癌细胞株细胞周期素D1蛋白表达增加,使细胞周期由G_1进入S期,而同时促使细胞凋亡,表现出抗肿瘤作用.低浓度睾丸酮有短暂的促进MCF-7乳腺癌细胞增殖的作用.     

凋亡蛋白酶活化因子-1基因甲基化在骨肉瘤细胞株中的作用

目的 检测骨肉瘤细胞株中凋亡蛋白酶活化因子(APAF)-1基因启动子区域甲基化状态及该基因mRNA表达,观察APAF-1基因对骨肉瘤形成的影响.方法 以骨肉瘤细胞株MG63和Hs888T为研究对象,提取DNA,经重亚硫酸钠处理后,采用限制性酶切图谱分析(COBRA)检测APAF-1基因CpG岛的甲基化情况,使用不同浓度(0、1×10~(-7)、3×10~(-7)mol/L)的DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理骨肉瘤细胞株4、10、20d,采用实时定量聚合酶链反应(QT-PCR)检测Apaf-1 mRNA表达水平的变化.结果 在Hs888T细胞株中APAF-1基因存在CpG岛甲基化并且随着5-Aza-CdR浓度的增加Apaf-1 mRNA表达水平也在增加.3×10~(-7)mol/L的5-Aza-CdR处理Hs888T细胞株20 d与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 Hs888T细胞株中APAF-1基因异常表达与APAF-1基因启动子区域CpG岛甲基化有关,提示APAF-1基因甲基化可能参与某些骨肉瘤的发生.     

免疫抑制剂对培养大鼠巨噬细胞和雪旺细胞影响的研究

目的 初步探讨多种免疫抑制剂对培养的大鼠巨噬细胞和雪旺细胞数量的影响。方法 取新生大鼠腹腔巨噬细胞和坐骨神经雪旺细胞进行培养，细胞生长稳定、定量计数后，分别加入不同浓度的环孢素A（ciclosporin A，CsA）、FK506和甲基强地松龙（CsA浓度为10^-5、10^-6、10^-7和10^-8mol／L；FK506浓度为10^-4、10^-7、10^-8和10^-9mol／L；甲基强地松龙浓度为10^-3、10^-4、10^-6和10^-8mol／L），设立不加药物的空白对照组。于培养24、48和72h后，分别取各浓度药物作用的细胞，用MTT法检测细胞数量。结果 对于巨噬细胞，甲基强地松龙仅在10^-4mol／L对其有明显保护作用，而CsA和FK506则分别在10^-6、10^-7、10^-8mol／L和10^-7、10^-8、10^-9mol／L能够较好地保护巨噬细胞。对于雪旺细胞，10^-3mol／L甲基强地松龙对其生长有显著抑制作用，而10^-8mol／L作用72h，则表现为对雪旺细胞明显的保护作用。除了10^-5mol／L CsA作用72h会显著减少培养的雪旺细胞数量外，其他浓度的CsA和FK506对雪旺细胞的数量无显著影响。结论 高浓度的甲基强地松龙以及一定浓度的CsA和FK506能够保护培养的巨噬细胞，但高浓度的甲基强地松龙和CsA可抑制雪旺细胞的生长，长时间、低剂量的甲基强地松龙对雪旺细胞有明显的保护作用。     

阿黑皮素原相关肽对大鼠离体黄体细胞孕酮生成的影响

采用体外孵育大鼠黄体细胞的方法,观察了β-EP,β-LPH,α-MSH 和 ACTH 等阿黑皮素原(POMC)相关肽对孕酮分泌的影响,结果表明:β-EP(10~(-6),10~7,10~(-6)mol/L)可明显促进黄体细胞基础孕酮分泌,呈剂量-效应依赖关系,孕酮含量分别由对照组36.56±8.63pmol/10~6细胞上升为52.90±18.31(P<0.01),73.86±18.21和80.37±9.86pmol/10~6细胞(P<0.01);β-EP(10~(-7)mol/L)还能加强hCG 致孕酮生成作用,孕酮含量由47.30±11.57上升为63.34±9.32pmol/10~6细胞(P<0.01);纳络酮(10~(-6)mol/L)可完全阻断β-EP 的作用。与β-EP 不同,β-LPH(10~(-6)mol/L)抑制基础和 hCG 诱导的孕酮分泌;α-MSH(10~(-6)mol/L)对基础孕酮分泌无明显影响,但能加强 hCG 致孕酮生成作用;ACTH 对大鼠黄体细胞孕酮分泌无明显影响。实验显示:某些 POMC 相关肽,尤其是β-EP 可能以旁分泌的方式参与黄体细胞孕酮分泌的调节。