选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398抑制多药耐药细胞株P-糖蛋白

目的：探讨选择性环氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）抑制剂NS-398对多药耐药细胞株K562／ADM细胞P-糖蛋白（P—glycoprotein，P—gP）表达的影响。方法：K562／ADM细胞经浓度分别为10μmol／L、20μmol／L、40μmol／L、80μmol／L、160μmol／L的NS-398处理，24h、48h、72h后用RT—PCR法检测MDRlmRNA的表达、用流式细胞仪检测mdr1蛋白表达。结果：随着Ns-398浓度的升高以及作用时间延长，MDR1 mRNA、P—gp表达降低，不同浓度的药物与测量时间之间存在着交互作用（P〈0．05）。结论：选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398可抑制K562／ADM细胞的MDR1／P—gP表达。     

他莫昔芬联合化疗对胆管癌耐药细胞株QBC939／ADM的影响

目的探讨他莫昔芬（TAM）联合化疗对胆管癌耐药细胞株QBC939／ADM的影响及其机制。方法应用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测TAM、多柔比星（ADM）、丝裂霉素（MMC）、长春地辛（VDS）及TAM分别联合其他三种化疗药对胆管癌细胞株QBC939及其耐药细胞株QBC939／ADM存活率的影响。流式细胞术（FCM）观察细胞生长周期及凋亡情况，观察细胞内ADM浓度的变化。免疫组织化学法（IHC）检测细胞P糖蛋白（P—gP）的表达。结果加用TAM后化疗药的作用得到增强，细胞凋亡率也明显提高。IHC结果显示QBC939／ADM呈过度表达，与QBC939相比，QBC939／ADM细胞内ADM的含量明显减少。用高浓度的TAM（10umol／L）作用QBC939／ADM后，细胞表面P—gP含量降低，细胞内ADM的含量相应提高。TAM对两种细胞的化疗都有增敏作用，其中耐药细胞的增敏作用更为显著。结论TAM可增强化疗药对胆管癌细胞株QBC939以及耐药细胞株QBC939／ADM的抑制作用，并可提高QBC939／ADM细胞内的药物浓度，其机制可能与其竞争结合过度表达的P—gp有关。     

Bcl-2反义核酸对人胆管癌QBC939细胞增殖的影响

目的研究Bcl-2反义核酸（ASODN）对人胆管癌QBC939细胞增殖的影响。方法将Bcl-2ASODN与QBC939细胞共同孵育，采用台盼蓝拒染实验检测细胞存活率，采用克隆形成实验俭测克隆形成率。结果台盼蓝拒染实验和克隆形成实验检均显示Bcl-2ASODN可以部分抑制QBC939细胞增殖，经ASODN作用细胞的存活率和克隆形成率均显著低于对照组（P〈0．05）。结论Bcl-2反义核酸对人胆管癌QBC939细胞增殖有抑制作用。     

尼美舒利对胆管癌细胞增殖及PCNA、Survivin蛋白表达的影响

目的：观察选择性环氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）抑制剂尼美舒利对人胆管癌细胞系QBC939生长的抑制作用及Survivin基因表达的变化。方法：应用MTT比色法、细胞群体倍增时间观察尼美舒利对人胆管癌细胞QBC939增殖的影响，流式细胞仪检测细胞凋亡，免疫组织化学法观察尼美舒利对QBC939细胞PCNA，Survivin蛋白表达的影响。结果：尼美舒利呈时间、剂量依赖性抑制胆管癌增殖，高浓度（200μmol／L）尼美舒利不仅抑制胆管癌细胞增殖，而且诱导其凋亡。流式细胞仪研究显示，随药物浓度增加，细胞凋亡率显著增加。免疫组化结果显示尼美舒利处理后的QBC939细胞PCNA，Survivin蛋白的表达明显减弱。结论：尼美舒利能抑制QBC939细胞增殖，诱导其凋亡，其机制可能与PCNA，Survivin蛋白的表达下调有关。     

去甲斑蝥素对人类胆管癌细胞系QBC939增殖和凋亡作用的实验研究

 【摘要】　目的　研究去甲斑蝥素（NCTD）对人类胆管癌细胞系QBC939的生长抑制作用,初步探讨其作用机制。方法　将NCTD作用于经体外培养的QBC939细胞系,分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）,流式细胞术及免疫组织化学SP法进行检测。结果　0.125、0.75、2.5、10、120 μg／ml NCTD作用48 h,对QBC939细胞系均有抑制作用（P＜0.05）,且具有浓度依赖性,绘制浓度效应曲线,得出半数抑制浓度（IC50）为（3.66±1.14）μg／ml;在分别作用12、24、36、48、72 h后,生存率有随时间增加而下降的趋势（P＜0.05）。流式细胞术结果表明,随着NCTD浓度的增加,凋亡率逐渐增高,各浓度组分别为（8.6±0.4）%、（17.6±0.3）%、（22.9±0.4）%、（25.5±0.9）%、（31.1±1.5）%（P＜0.001）;质量浓度为2.5 μg／ml的NCTD作用QBC939细胞48 h后,出现G2／M期阻滞现象,NCTD与对照组分别为（14.1±1.0）%和（5.7±0.3）%（P＜0.05）。不同浓度的NCTD作用于QBC939细胞后,与对照组相比Caspase-3蛋白表达均增加。结论　NCTD具有抑制人类胆管癌细胞系QBC939增殖的作用,这种作用可能与诱导细胞凋亡,干扰细胞生长周期有关。     

大黄素诱导胆管癌QBC939细胞凋亡的实验研究

 目的 探讨大黄素在体外诱导人胆管癌QBC939细胞凋亡的作用及机制。方法 采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测大黄素对细胞增殖的抑制作用;在荧光显微镜下观察凋亡细胞的形态学变化;运用流式细胞技术检测细胞凋亡率和细胞内活性氧水平;通过比色法测定细胞内caspase-9及caspase-3的相对活性。结果 大黄素以时间-剂量的方式抑制胆管癌QBC939细胞的增殖;在荧光显微镜下,凋亡的细胞呈现亮色,或核呈分叶、碎片状,细胞皱缩;QBC939细胞在30 µmol/L和50 µmol/L浓度的大黄素作用下,24 h的凋亡率分别为38.9%±9.07%及67.09%±4.08%（P<0.05）,30 min后细胞内活性氧的水平分别为对照组的1.65±0.08及2.28±0.04倍（P<0.05）;大黄素可激活caspase-9及caspase-3,导致其活性升高（P<0.05）。结论 大黄素能通过诱导凋亡来抑制胆管癌QBC939细胞的增殖,其机制与细胞的活性氧水平升高及caspase-9及caspase-3活化有关。     

血卟啉光动力对人胆管癌细胞转移潜能影响实验研究

目的：探讨血卟啉衍生物介导的光动力疗法（hematoporphyrinderivative,HPD-PDT）对人胆管癌细胞增殖和侵袭的影响。方法：体外培养人胆管癌细胞系QBC939,经系列浓度的HPD处理,并应用半导体激光治疗仪给予不同强度的光照,CCK-8试剂盒检测HPI〉PDT对人胆管癌细胞增殖的影响;Transwell小室（Matrigel侵袭实验）检测HPD-PDT对人胆管癌细胞体外侵袭能力的影响;酶联免疫吸附试验（enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA）检测细胞培养上清液中分泌的VEGF-C浓度变化;RT-PCR检测细胞中VEGF_CmRNA的表达变化;SP免疫组化染色观察细胞中VEGF-C蛋白的表达变化。结果：CCK-8检测结果显示,HPD-PDT在体外能够抑制QBC939细胞生长,当HPD质量浓度4μg／mL和光照剂量5J／cm2时,实验组A450值为1．54l7±0．0983,明显低于空白对照组的2．0278±0．1986,P〈0．01;细胞生长抑制率达到23．97％,且随着激光能量密度及光敏剂浓度的增加,其抑制作用也越明显。体外侵袭实验结果显示,实验组穿过Matrigel胶的细胞数为13．33±1．155,明显少于空白对照组的31．67±2．517,P〈O,01;ELlSA结果显示,实验组上清液中分泌的VEGF-c浓度为（1558．24l7±97．）143）ng／L,低于空白对照组的（1716．3750±45．0472）ng／L,P〈0．05;RT—PCR结果显示,实验组VEGF_CmRNA／hGAPDH的比值为0．7009±0．1872,明显低于空白对照组的1．5425±0．1078,P〈0．01;SP免疫组化染色结果显示,实验组VEGF—C蛋白表达阳性的细胞百分率为24．52％±2．22％,明显低于空白对照组的56．94％±3．38％,P〈0．01。结论：HPD-PDT能够抑制人胆管癌细胞QBC939的增殖活性及体外侵袭能力,并有可能通过下调VEGF-C因子的表达进一步抑制胆管癌的生长和转移。     

索拉非尼及PI3K、mTOR抑制剂对肝胆肿瘤细胞增殖及Ghrelin基因表达的影响

目的 探讨索拉非尼及磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）抑制剂对肝胆肿瘤细胞增殖及Ghrelin（GHRL）基因表达的影响。方法 收集体外常规培养的肝癌SMMC7721细胞和胆管癌QBC939细胞,经不同浓度（0、50、100、200 μmol/L）索拉非尼、LY294002（PI3K抑制剂）及Rapamycin（mTOR抑制剂）处理48 h后,采用MTS细胞活性检测试剂盒检测SMMC7721、QBC939细胞的增殖率,实时定量PCR（qPCR）检测SMMC7721、QBC939细胞中GHRL 基因的mRNA水平。结果与对照组相比,LY294002、索拉非尼和Rapamycin处理后的SMMC7721、QBC939细胞的增殖率均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,且随着药物浓度的增加,两种细胞的增殖率均降低（P＜0.05）。qPCR结果显示,经LY294002和索拉非尼处理48 h后的SMMC7721细胞中GHRL mRNA水平与对照组的差异无统计学意义（P＞0.05）;与对照组相比,随着Rapamycin作用浓度的升高,实验组SMMC7721细胞的GHRL mRNA水平升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;经LY294002、索拉非尼和Rapamycin处理的QBC939细胞中GHRL mRNA水平高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 三种药物均可以抑制肝癌和胆管癌细胞的增殖并促进QBC939细胞的GHRL表达,但仅Rapamycin能上调SMMC7721肝癌细胞的GHRL基因表达。GHRL基因表达与肝癌和胆管癌的发生可能有密切关系。     

低氧模拟剂氯化钴诱导人类胆管癌细胞株QBC939 HIF-1α、VEGF表达的研究

目的在细胞水平探讨氯化钴（COCl2）诱导的缺氧状态下人类胆管癌细胞株QBC939 HIF-1α、VEGF蛋白的表达情况及其相关性。方法ELISA技术和免疫组织化学技术检测不同浓度CoCl2组（200、150、100、50μmol／L,不加药组为对照组）、缺氧不同时间段（6、12、24、48h）对QBC939细胞HIF-1α和VEGF蛋白表达的影响。结果CoCl2可上调胆管癌细胞株QBC939 HIF-1α、VEGF蛋白的表达,并且体现出一定剂量和时间范围内的依赖性关系。ELISA检测：不同浓度组（200、150、100、50μmol／L、对照组）VEGF蛋白的浓度分别为（1215．8±8．1）、（1030．8±11．1）、（710．9±3．2）、（414-3±2．5）、（102．1±5．6）pg／ml,不同浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）;缺氧不同时间段（6、12、24、48h）VEGF蛋白的浓度分别为（397．8±3．5）、（701．9±7．2）、（1038．8±8．2）、（1229．8±19．8）pg／ml,任意两组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。免疫组织化学检测：不同浓度组（200、150、100、50μmol／L、对照组）VEGF蛋白的平均灰度分别为（123．1±5．9）、（146．9±4.3）、（154．6±4．9）、（162．7±4．5）、（172．7±1．8）,与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）,HIF-1α蛋白的平均灰度分别为（109．5±5．3）、（137．5±4．4）、（151．7±2．9）、（161．3±4．9）、（172．0±5．4）,不同浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）;缺氧不同时间段（6、12、24、48h）VEGF蛋白的平均灰度分别为（154．8±3．8）、（142．9±2．7）、（136．6±4．7）、（110．3±4．9）任意两组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）,HIF-1α蛋白的平均灰度分别为（155．3±6．4）、（142．9±2．7）、（137．4±4．4）、（105．4±6．2）,任意两组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。分析不同浓度?     

槲寄生碱抑制肺癌细胞增殖作用初步观察

目的：研究槲寄生碱对人肺腺癌细胞株SPC-A1及肺鳞癌细胞株SK—MES-1的抑制作用。方法：采用四甲基噻唑氮蓝（methy lthiazolyl tetrazolium,MTT）比色法检测不同浓度槲寄生碱作用24和48h对细胞增殖的影响,以含不同浓度的5-氟尿嘧啶（5-FU）细胞组为阳性对照,不舍药物的细胞组为阴性对照,计算半数抑制浓度（IC50）。流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测高、中和低3组浓度的槲寄生碱作用24h后的细胞的凋亡率。结果：不同浓度槲寄生碱作用24h,对SPC-A1细胞的IC50为（14．43±0．53）／μg／mL,对SK—MES-1细胞的IC50为（8．09±0．40）μg／mL。其作用48h,对SPC—A1细胞的IC50为（12．11±0．25）μg／mL,对SK—MES-1细胞的ICs0为（6．43±0．33）μg／mL。并且抑制作用随碱浓度的升高和作用时间的延长而增加,P〈0．05。阳性对照组5-FU作用24h,对SPC-A1细胞的IC50为（4．79±0．45）〉g／mL,对SK—MES-1细胞的IC50为（5．15士0．23）μg／mL。作用48h,对SPC—A1细胞的IC50为（4．35±0．41）μg／mL,对SK—MES-1细胞的IC50为（4．11±0．38）／lg／mL。FCM检测SPc_A1细胞未加入药物的对照组凋亡率为（0．43±0．01）％,高剂量组药物浓度28．86μg／mL,凋亡率为（31．09±0．05）%,中剂量组药物浓度14．43〉g／mL,凋亡率为（18．19士0．02）％,低剂量组药物浓度7．22μg／mL,凋亡率为（7．99±0．01）％。SK—MES-1细胞未加入药物的对照组凋亡率为（O．57士0．02）％,高剂量组药物浓度16．18ug／mL,凋亡率为（38．24±0．03）％,中剂量组药物浓度为8．09μg／mL,凋亡率为（21．81±0．01）%,低剂量组药物浓度4．05μg／mL,凋亡率为（9．11±0．01）％,与没有加入槲寄生碱的细胞相比,加入槲寄生碱后SPC—A1细胞与SK—MES-1细胞凋亡率均明显增加,P〈0．05,并且凋亡率随槲寄生碱剂量的增加而升高,P〈0．05。结论：槲寄生碱能够抑制人肺腺癌细胞株SPC-A1及肺鳞癌细胞株SK-MES-1的增殖,并能促进细胞的凋亡,为槲寄生碱应用于肺癌的临床治疗提供了实验依据。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Management of intracranial metastases of differentiated carcinoma of thyroid

Summary Brain metastases in differentiated carinoma of the thyroid is a rare occurrence. We treated five documented cases of carcinoma of thyroid with brain metastases out of 400 cases of thyroid cancer treated between 1972 to 1993. 4 were females out of which one was pregnant during the appearance of brain metastases. All cases were treated with thyroidectomy, and radioiodine as primary therapy. Brain metastases developed 6 months to 11 years following treatment of the primary and were treated with radiotherapy and suppressive levothyroxine. We observed the beneficial effect of suppressive thyroxine and the poor prognosis associated with pregnancy and withdrawl of thyroid replacement therapy. 3 of the 5 patients are alive 12–23 months after treatment for brain metastases, while 2 patients died at 4 months and 7 years post brain metastases due to pulmonary and hepatic failure, respectively.     

Clinico-Pathological Study of 50 Cases of Tumours of Larynx

Otoacoustic emissions have been advocated in the management of otitis media with effusion. However, otoacoustic emissions cannot differentiate different types of hearing loss. This study was conducted to find factor that can differentiate otitis media with effusion from other common causes of hearing loss in children. Children were enrolled in the study and divided in four groups consisting of 25 ears each after pure tone and impedance audiometry: (1) Otitis media with effusion group, (2) Normal ear group, (3) Sensory-neural hearing loss group, (4) Chronic suppurative otitis media group. Otoacoustic emissions were recorded and results were analyzed statistically. The normal hearing group had significant difference from other groups but total band reproducibility of transient evoked otoacoustic emissions did not show any statistical difference in the cases groups. In distortion product otoacoustic emissions, group 1 showed significant difference from group 3 and group 1 had significant difference from all other groups at 4 kHz. The study did not find any factor that differentiates otitis media with effusion from other diseases. Although, distortion product otoacoustic emissions can indicate otitis media with effusion but impedance audiometry should be the main tool in the management of otitis media with effusion.     

乳腺叶状囊肉瘤320例诊治分析

目的探讨乳腺叶状囊肉瘤临床诊断和治疗方法。方法回顾分析经手术病理确诊为乳腺叶状囊肉瘤的320例患者的诊断和治疗情况。结果行乳腺X片检查121例,B超检查25例,近红外检查21例,针吸细胞学检查42例;15例(12.4%)乳腺X片检查及3例(14.3%)近红外检查诊断为乳腺叶状囊肉瘤。临床诊断正确率为17.5%(56/320),误诊率为82.5%(264/320)。随访253例患者,其中局部复发45例(17.8%),远处转移死亡13例(5.1%)。结论乳腺叶状囊肉瘤诊断需常规病理检查,治疗宜行局部广泛切除或全乳切除。     

胆囊腺瘤癌变的相关因素分析

目的:探讨胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性。方法:应用ROC曲线,计算胆囊腺瘤癌变的肿瘤大小临界值。应用χ2独立性检验,计算胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性、临床表现与肿瘤位置的相关性。结果:肿瘤良恶性临界值为2.27 cm。胆囊腺瘤癌变与患者的性别、年龄、是否合并结石无明显相关性（P＞0.05）,而与肿瘤大小、肿瘤数目、形态、超声下是否有血流(P＜0.05)等临床病理特征有明显相关性。临床症状与肿瘤是否位于胆囊颈部有明显相关性(P＜0.05)。结论:胆囊腺瘤在超声扫描下表现为单发、无蒂、有血流、直径大于2.27 cm,应高度怀疑已有恶变。肿瘤位于胆囊颈部可引起右上腹胀痛、疼痛向右背部放射、恶心呕吐等临床表现。