川芎嗪与氨基胍联合治疗对n0-STZ大鼠肾功能的影响

目的: 研究川芎嗪与氨基胍的联合治疗对新生链脲佐菌素糖尿病大鼠(n0-STZ)肾功能的影响。方法: 出生当日Wistar大鼠,一次性腹腔内注射STZ诱导n0-STZ大鼠模型。实验大鼠分4组:(1)正常对照组;(2)胰岛素抵抗组;(3)二甲双胍组;(4)川芎嗪与氨基胍联合治疗组。第32周检测空腹血糖(FPG)、空腹血浆胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(IRI)、血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、尿蛋白和肾小球滤过率(GFR),外周血白细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA表达,肾组织中NO浓度和iNOS活性以及iNOS和3-硝基酪氨酸(3-NT)的蛋白表达。结果: (1)造模第8周,82.5%的Wistar大鼠空腹血糖≥7.0 mmol/L,肾功能受损。(2)两种治疗均能降低FPG、FINS、IRI,以联合治疗组提高胰岛素敏感性更显著;两种治疗方案都能改善大鼠肾功能,联合治疗组降低血BUN、Cr,提高肾小球滤过功能作用更强。(3)两种治疗都能下调iNOS活性和NO浓度,抑制肾组织中3-NT和iNOS表达,联合治疗组效果更显著。结论: 二甲双胍和川芎嗪与氨基胍联合治疗都能通过抑制硝基化应激改善肾功能,但川芎嗪与氨基胍保护肾功能的作用优于二甲双胍。     

一氧化氮合酶抑制剂氨基胍对脑缺血大鼠脑组织氨基酸含量的影响

目的：研究选择性一氧化氮合酶抑制剂氨基胍对脑缺血大鼠脑组织中氨基酸含量的影响，探讨氨基胍对脑缺血组织的保护作用及其作用机制。方法： 采用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型，模型建成后腹腔注射氨基胍。相应时间断头取脑，然后测定脑梗死体积、纹状体、海马、皮层中天门冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸(GABA)含量。结果： 氨基胍组脑梗死体积明显小于缺血组；缺血组纹状体、海马、皮层中天门冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、GABA含量显著高于假手术组，氨基胍组天门冬氨酸、谷氨酸的含量明显低于缺血组，甘氨酸、GABA含量明显高于缺血组。结论： 氨基胍降低脑组织中兴奋性氨基酸的含量，升高抑制性氨基酸的含量可能是保护缺血脑组织的重要机制之一。     

链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠外周血白细胞iNOS-mRNA表达的变化

目的：研究链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病大鼠胰岛β细胞的功能与外周血白细胞iNOS-mRNA表达的关系。方法：Wistar大鼠随机分为对照10只,实验15只。测定血糖、血浆胰岛素;用原位杂交方法检测外周血白细胞、肝、肺等组织中iNOS-mRNA表达,观察白细胞iNOS-mRNA阳性细胞率。结果：用STZ腹腔注射损伤胰岛β细胞并导致胰岛功能衰竭,3 d后血糖由(8.95±1.80) mmol·L^-1升高至(22.84±4.90) mmol·L^-1,血浆胰岛素由(81.76±2.12) mU·L^-1降至(58.92±18.20)mU·L^-1。正常大鼠外周血白细胞未见iNOS-mRNA表达,而STZ诱导的糖尿病大鼠外周血白细胞iNOS-mRNA表达高度增强。结论：STZ诱导的胰岛β细胞损伤与白细胞的iNOS-mRNA表达存在正相关关系。本实验为检测外周血白细胞某些信号通路提供了简便易行的原位杂交试验方法。     

氨基胍对I型糖尿病胰岛β细胞损伤的修复作用

目的本研究旨在探讨诱生性一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂氨基胍(Aminoguanidine,AG)对I型糖尿病(IDDM)大鼠胰岛β细胞损伤修复的作用。方法以链脲佐菌素腹腔注射大鼠建立IDDM模型,并用AG进行干预,采用免疫组织化学方法,分别检测正常组、糖尿病组和AG治疗组大鼠胰岛中iNOS含量和胰岛b细胞面密度。结果AG组胰岛β细胞面密度为70.58±3.26,与IDDM组(21.65±1.45)比较,具有显著差异(P<0.05),且IDDM组大鼠胰岛中β细胞面密度随iNOS增多而减少,两者呈负相关(r=-0.8175,P<0.01),iNOS阳性反应产物呈弥漫性分布,其色深于正常对照组;AG组胰岛中的iNOS反应物较IDDM组明显减弱(P<0.05),但与正常组比较无显著差异(P>0.05)。结论iNOS增多可能是造成IDDM胰岛β细胞损伤的因素之一,AG对IDDM胰岛β细胞的损伤具有修复作用。     

链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠外周血白细胞iNOS—mRNA表达的变化

目的 :研究链脲佐菌素 (STZ)诱导的糖尿病大鼠胰岛 β细胞的功能与外周血白细胞iNOS -mRNA表达的关系。方法 :Wistar大鼠随机分为对照组 10只 ;实验组 15只。测定血糖、血浆胰岛素 ;用原位杂交方法检测外周血白细胞、肝、肺等组织中iNOS -mRNA表达 ,观察白细胞iNOS -mRNA阳性细胞率。结果 :用STZ腹腔注射损伤胰岛β细胞并导致胰岛功能衰竭 ,3d后血糖由 ( 8 95± 1 80 )mmol·L-1升高至 ( 2 2 84± 4 90 )mmol·L-1,血浆胰岛素由 ( 81 76± 2 0 12 )mU·L-1降至 ( 5 8 92± 18 2 0 )mU·/L-1。正常大鼠外周血白细胞未见iNOS -mRNA表达 ,而STZ诱导的糖尿病大鼠外周血白细胞iNOS -mRNA表达高度增强。结论 :STZ诱导的胰岛 β细胞损伤与白细胞的iNOS -mRNA表达存在正相关关系。本实验为检测外周血白细胞某些信号通路提供了简便易行的原位杂交试验方法。     

氨基胍缓解糖尿病大鼠主动脉内皮损伤

糖尿病大血管病变是糖尿病严重慢性并发症之一,其病理基础是动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)。血管内皮损伤被认为是AS的始动和关键环节。氨基胍(aminoguani-dine,AG)对糖尿病主动脉内皮的保护作用,是否通过抑制诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS),进     

氨基胍等对严重烧伤大鼠一氧化氮表达及烧伤休克的影响

目的:研究一氧化氮合酶(NOS)抑制剂与严重烧伤大鼠体内NO产量、NOS表达以及平均动脉压(MAP)变化的关系。方法:复制大鼠重症烧伤模型,检测应用非选择性NOS抑制剂L-NAME和选择性诱生型NOS(iNOS)抑制剂氨基胍(AG)后大鼠血液中NO代谢产物(NO₂^-／NO₃^-)以及肺和十二指肠组织中神经型NOS(nNOS)mRNA的表达水平,同时测定各组大鼠的MAP。结果:烧伤后大鼠血液中NO₂^-／NO₃^-含量显著增高,L-NAME和AG都能抑制NO₂^-／NO₃^-的升高,P<0.01;烧伤后nNOS的mRNA表达在肺和十二指肠中均有不同程度升高,AG和L-NAME使nNOS表达增加,L-NAME作用更为显著,P<0.01;烧伤后大鼠MAP略有上升,然后进行性下降,L-NAME组大鼠MAP显著升高,但于3h后急剧下降,AG组大鼠MAP下降速度明显低于对照组。结论:结构型NOS(cNOS)与iNOS在烧伤休克病理生理过程中的作用明显不同,iNOS活性过度增高与烧伤休克发病关系密切。     

侧脑室注射链脲佐菌素致大鼠脑内胰岛素通路障碍和认知水平降低

 目的：本文旨在研究胰岛素信号通路在阿尔茨海默病（Alzheimer disease,AD）发病中的作用,并探讨其可能的作用机制。方法：于实验第1 d和第3 d侧脑室（intracerebroventricular,ICV）注射链脲佐菌素（streptozotocin,STZ;3 mg/kg）建立大鼠模型。第1次注射后21 d采用Morris水迷宫检测大鼠的学习和记忆水平;采用Western blotting检测胰岛素降解酶（insulin-degrading enzyme,IDE）、糖原合成酶激酶 3β（glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β）、磷酸化糖原合成酶激酶 3β（p-GSK-3β）、tau和磷酸化tau（p-tau）的表达;采用免疫组化检测淀粉样β蛋白（Aβ1-40和Aβ1-42)在大脑皮质的沉积;用real-time RT-PCR法检测胰岛素、胰岛素受体、tau、IDE mRNA的表达。结果：Morris水迷宫结果显示ICV-STZ明显降低大鼠的认知能力(P<0.05);Western blotting结果显示ICV-STZ能降低IDE的表达,增加GSK-3β的活性和tau的磷酸化水平(P<0.05);免疫组化结果显示ICV-STZ处理的大鼠大脑皮质 Aβ1-40和Aβ1-42均明显增加;PCR结果显示ICV-STZ处理的大鼠大脑胰岛素和胰岛素受体的mRNA水平均降低,IDE mRNA的水平亦下降。结论：ICV-STZ通过影响脑内胰岛素通路导致大鼠出现AD样行为学及病理改变,表明胰岛素信号通路在AD发病中可能起到了一定的重要作用。     

诱导型一氧化氮合酶对大鼠胰岛细胞凋亡的影响

目的:探讨细胞因子和诱导型一氧化氮合酶(iN-OS)对体外培养的大鼠胰岛细胞凋亡和功能的影响及其机制。方法:大鼠胰岛细胞体外培养,随机分组,培养液中分别加入细胞因子IL-1β、TNF-α和/或iNOS抑制剂氨基胍,分为空白对照组、细胞因子组、氨基胍组、氨基胍+细胞因子组。检测指标包括:培养液NO水平和组织iNOS、结构型NOS活性,RT-PCR检测胰岛组织中iNOS基因和凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达情况,AO/EB染色检测胰岛存活,胰岛素释放实验检测胰岛功能。结果:与细胞因子IL-1β和TNF-α共同培养后,大鼠胰岛组织中iNOS的表达增强,活性显著提高(38.93±4.72)U/mL,NO水平上升(313.0±35.4)mol/L,而结构型NOS没有变化;同时胰岛促凋亡基因表达上调,抗凋亡基因表达下降,细胞的存活率下降,胰岛素分泌大大减少。加入氨基胍后,随着胰岛组织中iNOS的活性明显受到抑制,胰岛的凋亡程度减轻,存活和胰岛素分泌情况都明显改善。结论:iNOS在细胞因子诱导的胰岛细胞凋亡中起到十分关键的作用,而氨基胍通过抑制iNOS活性,减轻了细胞因子的损害,降低了胰岛凋亡水平,改善胰岛的存活与功能。     

氨基胍对牙周炎抑制作用的研究

目的: 观察氨基胍(AG)对牙周炎的作用。方法: 采用丝线结扎法建立大鼠牙周炎模型; 利用分光光度仪测定大鼠牙龈组织中亚硝酸盐(NO₂^-)含量, 以间接确定一氧化氮(NO)含量; 应用Tiger细胞图象仪分析牙周附着丧失; 采用组织切片法观察牙周组织的病理学改变。结果: AG能明显降低大鼠牙周炎牙龈NO含量, 抑制牙周组织附着丧失和减轻炎症程度。结论: AG通过选择性抑制诱导型一氧化氮合酶(iNOS), 降低牙周组织NO含量, 达到减轻牙周组织炎症程度的作用, 提示AG对临床牙周炎可能有疗效.     

L-精氨酸、氨基胍和胍丁胺在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用

目的: 观察L-精氨酸 (L-Arg)、氨基胍 (AG) 和胍丁胺 (AGM) 对大鼠局灶性脑缺血组织中一氧化氮 (NO) 含量的影响,探讨3种药对脑缺血再灌注损伤大鼠是否具有保护作用和NO在脑缺血再灌注损伤的作用及机制。方法: 线栓法建立大鼠局灶性脑缺血 (MCAO) 模型,大鼠行为学改变用Longa评分标准来评价,血清NO浓度用酶标仪检测,脑内诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)用免疫组织化学方法测定。结果: 与假手术组相比,模型组、L-Arg组、AG组和AGM组在缺血再灌注12、24、72 h的NO含量均显著增加(P<0.05);与模型组相比,在缺血再灌注12 h,L-Arg组行为学评分显著降低(P<0.05),NO含量显著升高(P<0.05);在缺血再灌注24 h,AG组和AGM组行为学评分显著降低(P<0.05),NO含量也显著降低(P<0.05)。在缺血再灌注12、24、72 h,L-Arg组的iNOS阳性细胞数与模型组相比无显著差异(P>0.05);而AG组和AGM组则均显著低于模型组(P<0.05)和L-Arg组(P<0.05)。结论: 脑缺血再灌注损伤后血清NO和海马内iNOS的表达随时间有动态变化。L-Arg在术后12 h、AG和AGM在术后24h对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠有保护作用。     

己酮可可碱抑制大鼠非酒精性脂肪性肝炎肝细胞的凋亡

目的 探讨凋亡相关基因在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)发生发展中的作用机制,以及己酮可可碱(PTX)对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠的抗凋亡作用. 方法 SD大鼠68只,标准饲料喂养1周后,随机分为8组:8周对照组(6只),8周模型组(10只),12周对照组(6只),12周模型组(10只),12周治疗组(10只),16周对照组(6只),16周模型组(10只),16周治疗组(10只).用高脂饮食法建立大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型,腹主动脉取血检测血浆谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氮酶(AST)水平,采用免疫组织化学的方法检测肝Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达情况,应用RT-PCR检测Caspase-3 mRNA的转录情况. 结果 各模型组ALT、AST均高于对照组,且模型组的ALT、AST逐渐增高.免疫组织化学实验结果表明,与同周数的对照组相比,各周模型组Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达均有显著性增加(P<0.05),与同周数的模型组相比,12周、16周PTX治疗组Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白表达有显著的降低(P<0.05). 结论 细胞凋亡是NASH的一个重要发病机制,己酮可可碱对NASH大鼠肝脏细胞凋亡有一定的抑制作用.     

高果糖诱导的胰岛素抵抗大鼠外周血白细胞iNOS mRNA与ecNOS mRNA表达的变化

目的:探讨高果糖饮食对Wistar大鼠外周血白细胞iNOSmRNA与ecNOSmRNA表达的影响。方法:普通饲料喂养,实验组饮用12 %的果糖水造型。于实验前、实验过程中1-6个月每月断尾取血,测定外周血白细胞诱导型一氧化氮合酶mRNA(iNOSmRNA)与内皮源型一氧化氮合酶mRNA (ecNOSmRNA)表达;观察实验前、造型1、2、3及 6个月时的空腹血糖、血浆胰岛素水平变化。结果:1个月后,血糖与实验前无显著差异;血浆胰岛素明显高于对照组 (P <0.01),并持续维持在高水平上;外周血白细胞ecNOSmRNA表达增强。 2个月后血糖高于对照组 (P <0.05);外周血白细胞出现iNOSmRNA表达。 3及 6个月,血糖明显高于对照组 (P <0.01);iNOSmRNA与ecNOSmR NA持续保持高表达状态。结论:高果糖饮食两个月,可引起Wistar大鼠产生明显的高胰岛素血症和胰岛素抵抗;首先ecNOSmRNA表达增强,可能延缓胰岛素抵抗的形成。继之,iNOSmRNA表达增强,可能促进胰岛素抵抗形成.     

川芎嗪联合骨髓间充质干细胞移植抑制脑缺血大鼠神经细胞凋亡

目的:研究川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)联合骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对脑缺血大鼠神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响。方法:采用全骨髓贴壁法体外培养BMSCs,传代至第3代用于尾静脉移植。采用线栓法诱导大鼠右侧大脑中动脉阻塞模型,除假手术组外,大鼠随机分为模型组、BMSCs(1×10~9/L)组、川芎嗪(40 mg/kg)组和联合(川芎嗪+BMSCs)组,每组12只。缺血后第1、7和14天采用改良的神经损伤严重程度评分(modified neurological severity scoring,m NSS)进行神经功能评价。缺血后第14天,甲苯胺蓝染色检测脑梗死体积,HE染色观察脑组织病理学变化,采用原位末端标记(TUNEL)法观察神经细胞凋亡数,采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测Bax和Bcl-2的mRNA及蛋白表达。结果:与BMSCs组和川芎嗪组比较,联合组m NSS评分显著减少(P0.01),梗死体积显著减少(P0.01),缺血引起的脑缺血周边区病理性损伤明显减轻,TUNEL阳性细胞数显著减少(P0.01),Bcl-2的mRNA及蛋白表达显著增加,Bax的mRNA及蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:川芎嗪联合BMSCs移植能显著促进脑缺血后大鼠的功能恢复,减少梗死体积,减轻脑组织缺血性损伤,抑制神经细胞凋亡,机制可能与调控Bcl-2和Bax的表达有关。     

环孢菌素A对HL-60细胞Bcl-2和Fas蛋白表达影响的研究

目的:观察环孢菌素A(CsA)诱导白血病HL-60细胞凋亡时Bcl-2和Fas蛋白表达。方法:CsA15mｇ/L作用HL-60细胞,在0-10ｈ之间不同的时点应用细胞免疫组化及流式细胞术方法观察HL-60细胞Bcl-2和Fas蛋白表达。结果:HL-60细胞有Bcl-2强表达,当CsA15mｇ/L作用HL-60细胞8-10h,见Bcl-2表达明显下调。HL-60细胞有较弱的Fas蛋白表达,CsA15mｇ/L作用HL-60细胞10ｈ,未见Fas蛋白表达有明显改变。结论:CsA在体外诱导HL-60细胞凋亡与Bcl-2有关,使Bcl-2表达量减少。CsA在体外诱导HL-60细胞凋亡过程中,未见Fas蛋白表达的明显改变。     

高饱和脂肪酸、高不饱和脂肪酸、高糖不同饮食诱导高血压伴胰岛素抵抗大鼠的研究

目的:对高饱和脂肪酸、高不饱和脂肪酸和高糖不同饮食诱导高血压伴胰岛素抵抗大鼠及相关因素的研究。方法:用高饱和脂肪酸、高不饱和脂肪酸和高糖饮食喂养成年Wistar大鼠24周,连续监测体重（BW）、血糖（FBG）、胰岛素（FBI）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）和血清游离脂肪酸（FFA）及血清一氧化氮代谢产物NO-2/NO-3 的水平 ；用光电鼠尾血压测定仪测定鼠尾平均收缩压（SBP）；用正常葡萄糖高胰岛素钳夹技术的葡萄糖输注率（GIR）评价胰岛素抵抗（IR）；用Myography微血管测定技术观察肾动脉对乙酰胆碱（Ach）舒张反应（EDV）。结果:各实验组经喂养24周TG、TC、FFA、FBG、INS升高，NO-2/NO-3、 GIR减低；各实验组SBP明显高于对照组；各实验组大鼠离体肾动脉环对Ach内皮依赖性舒张反应（EDV）显著弱于对照组；采用相关和多元线性回归方法（逐步回归法）分析BW、TG、TC、FFA、FBG、FBI、NO-2/NO-3、GIR、对SBP的影响，结果SBP与TG、TC、FFA、FBG、FBI呈明显正相关，与NO-2/NO-3、 GIR、EDV呈明显负相关，经多元回归分析剔除TC、TG、FBI、NO-2/NO-3，SBP只与FBG、FFA呈明显正相关、与GIR、EDV呈明显负相关。结论:高饱和脂肪酸饮食、高不饱和脂肪酸饮食和高糖饮食均可诱导伴胰岛素抵抗的高血压大鼠模型。     

葛根素对缺血再灌注脑保护作用的可能分子机制

目的：探讨葛根素对缺血再灌注的大 鼠脑保护作用的可能分子机制。方法：SD大鼠随机分成3组(对照组、模型 组和葛根素治疗组)，通过免疫组织化学方法及半定量RT-PCR法来检测脑组织Bcl-2蛋白、ca spase-3蛋白和caspase-3 mRNA的表达情况。结果：葛根素干预组大鼠脑 内Bcl-2蛋白表达显著高于缺血再灌注组、而caspase-3蛋白及caspase-3 mRNA的表达明显减 少。结论：葛根素对缺血再灌注的大鼠脑有保护作用，其可能机制是其在 增强Bcl-2蛋白表达水平的同时降低了caspase-3蛋白的表达水平。