肌源神经营养因子（MDNE）对体外培养大鼠脊髓神经元划伤后Bcl—2表达的影响

为检测大鼠肌源神经营养因子对体外培养大鼠脊髓运动神经元划痕损伤后Bcl-2表达的影响，本实验从成鼠和乳鼠骨骼肌中提取出肌源神经营养因子。在胎鼠脊髓运动神经元培养第7d时将其随机分成对照组和实验组（成鼠组和乳鼠组），取100μl肌源神经营养因子（0.1μg/ml)加入实验组，对照组加入等量的PBS，同时进行划痕损伤。损伤后第3d计数各组存活的运动神经元，行Nissl染色和免疫组化反应，计数Bcl-2免疫反应（Bcl-2－IR）阳性神经元数量，并在图像分析仪上对Bcl-2－IR阳性神经元作光密度分析。结果发现，损伤后第3d，实验组运动神经元存活数，Bcl-2-IR阳性神经元数和平均光密度均明显高于同期对照组，而乳鼠肌源神经营养因子组功效优于成鼠肌源神经营养因子组。结果提示，大鼠肌源神经营养因子对体外培养的受损运动神经元具有增强Bcl-2表达，减少凋亡和损伤修复等作用，且乳鼠的此因子效能尤佳。     

肌源性神经营养因子(MDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧时Bcl-2表达的影响

为证明大鼠肌源性神经营养因子对损伤神经的保护作用 ,本文观察了此因子对缺氧时体外培养的大鼠脊髓运动神经元Bcl-2表达的影响。本实验从成鼠和乳鼠骨骼肌中提取肌源性神经营养因子 ,取 10 0μl (0 .1μg/ml)加入培养的胚胎大鼠脊髓运动神经元的培养液中 ,对照组加入等量的 PBS。然后用液体石蜡封闭液面造成神经元缺氧损伤 ,3 d后行 Nissl染色和免疫组化反应 ,观察和计数大鼠脊髓运动神经元存活数以及 Bcl-2免疫反应阳性神经元数 ,并对 Bcl-2阳性神经元作平均光密度分析。结果发现 :经成鼠和乳鼠肌源性神经营养因子孵育的脊髓运动神经元缺氧后的神经元存活数、Bcl-2阳性神经元数以及平均光密度均明显高于对照组 ,但乳鼠肌源性神经营养因子的效果更好。提示 :大鼠肌源性神经营养因子能增强缺氧时脊髓运动神经元 Bcl-2的表达 ,抑制缺氧后运动神经元的死亡 ,以乳鼠肌源性神经营养因子的效果为最好     

肌源神经营养因子(MDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧时p53表达的影响

本研究目的是观察缺氧时肌源神经营养因子(MDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元p53蛋白表达的影响。从成鼠和胎鼠骨骼肌中提取MDNF。在胎鼠脊髓运动神经元培养第7 d时将其分成对照组和实验组(包括成鼠MDNF组和胎鼠MDNF组),取100μl MDNF(0.1μg/ml)加入培养大鼠脊髓运动神经元的培养液中,对照组加入等量的PBS。然后用液体石蜡封闭液面造成神经元缺氧损伤,缺氧3 d后,应用Nissl染色、原位末端标记、免疫组化方法,对损伤的大鼠脊髓运动神经元进行检测。结果表明:培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧3 d后,经MDNF孵育可使脊髓运动神经元TUNEL、p53表达均较对照组明显减弱,神经元损伤程度减轻,神经元存活数明显高于对照组,且胎鼠MDNF的效果更好。提示:大鼠脊髓运动神经元缺氧后可出现神经细胞凋亡,但胎鼠MDNF较成鼠MDNF更能减弱缺氧时脊髓运动神经元p53的表达,抑制缺氧后神经元的死亡。     

GDNF及HSV—GDNF对坐骨神经损伤大鼠脊髓运动神经元Bcl—2表达的影响

目的：观察胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）及单纯疱疹病毒（HSV）载体介导的GDNF（HSV－GDNF）对坐骨神经损伤大鼠脊髓运动神经元了Bcl-2表达的影响。方法：分别取坐骨神经损伤后4d、7d和14d大鼠（）分成对照组、GDNF组和HSV－GDNF组）的腰段脊髓）L4－6）,行石蜡包埋,切片、;用抗Bcl-2抗血清进行免疫组织化学染色,观察Bcl-2免疫反应（Bcl-2－IR）神经元数目,并在图像分析仪Bcl-2－IR阳性神经元作光密度的色谱分析。结果：1．坐骨神经损伤后4d、7d,GDNF组和HSV－GDNF组损伤侧脊髓运动神经Bcl-2－IR阳性神经元的数量和平均光密度均明显高于对照组损伤测,2．坐骨神经损伤后14d时,对照组、GDNF组和HSV－GDNF组损伤侧脊髓运动神经元对Bcl-2的表达已无明显差别。结论GDNF与HSV－GDNF能够增强坐骨神经扣内务 大鼠脊髓运动神经元Bcl-2的表达,减少神经元的退化死亡。     

GDNF及HSV-GDNF对体外培养大鼠脊髓运动神经元受损后凋亡的影响

目的　观察胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)及单纯疱疹病毒载体介导的 GDNF(HSV- GDNF)对体外培养的胎鼠脊髓运动神经元在划痕损伤后凋亡的影响。　方法　对培养 12 d神经元行划痕损伤 ,并将其分成 4组 (无血清对照组、血清组、HSV- GDNF组和 GDNF组 ) ,给予不同培养液 ,定期观察各组的运动神经元存活数。分别于划痕损伤第 4d和第 7d时对神经元作 TU NEL 染色 ,检测运动神经元凋亡数 ,并在图像分析仪上对凋亡神经元作平均光密度的色谱分析。　结果　各组内运动神经元存活数与培养时间成反比。从对照组、HSV- GDNF组到 GDNF组 ,运动神经元凋亡数和凋亡神经元的平均光密度均依次减少 ,但对照组和血清组、GDNF组和 HSV-GDNF组间的运动神经元凋亡数以及凋亡神经元平均光密度均无显著差异。　结论　 GDNF和 HSV- GDNF能挽救生长发育过程中受损的脊髓运动神经元的凋亡 ,对体外培养的受损脊髓运动神经元具有一定的保护作用。     

GDNF和HSV-GDNF对培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧后的Bcl-2表达的影响

目的:观察细胞胶质源性神经营养因子(Glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)和单纯疱疹病毒介导的GDNF(GDNF transformed by herpes simplex virus vector,HSV-GDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧-复氧时的作用和Bcl-2表达的影响。方法:观察缺氧2h、4h和缺氧4h后恢复供氧24、72h时,脊髓运动神经元存活数,并用抗Bcl-2抗血清行免疫组织化学染色,对Bcl-2免疫反应阳性神经元作平均光密度分析。结果:经GDNf、HSV-GDNF孵育的脊髓运动神经元缺氧-复氧后Bcl-2表达较对照组明显增强,神经元损伤程度减轻,神经元存活数明显高于对照组,且HSV-GDNF组的效果更好。结论:GDNF、HSV-GDNF对缺氧-复氧的大鼠脊髓运动神经元有保护作用,HSV-GDNF比GDNF更能增强缺氧-复氧后脊髓运动神经元Bcl-2的表达,提高神经元存活数,抑制缺氧后神经元的死亡。     

GDNF及HSV—GDNF对体培养大鼠脊髓运动神经元受损后凋亡的影响

目的：观察胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）及单纯疱疹病毒载体介导的GDNF（HSV－GDNF）对体外培养的胎鼠脊髓运动神经元在划痕损伤后凋亡的影响。方法：对培养12d神经元行划痕损伤，并将其分成4组（无血清对粗、血清组、HSV－GDNF组和GDNF组），给予不同培养液，定期观察各组的运动神经元存活数。分别于于奶损伤第4d和第7d时对神经元作TUNEL染色，检测运动神经元凋亡数，并在图像分析仪上对凋神经元作平均光密度的色谱分析。结果：各组内运动神经元存活数与培养时间成反比，从对照组、HSV－GDNF组到GDNF组，运动神经元凋亡数和凋亡神经元的平均光密度均依次减少，但对照组和血清组，GDNF组和HSV－GDNF组间的运动神经元凋亡以及凋亡神经元平均光密度均无显著差异。结论GDNF和HSV－GDNF能换救生长发育过程中受损的脊髓运动神经元的凋亡,对体拳受损脊髓运动神经元具有一定的保护作用。     

GDNF及dvHSV-GDNF对坐骨神经损伤大鼠脊髓前角运动神经元的影响

为了探讨胶质细胞源性神经营养因子及单纯疱疹病毒载体介导的胶质细胞源性神经营养因子 (dv HSV-GDNF)对坐骨神经损伤大鼠脊髓前角运动神经元的作用 ,本实验对成年大鼠造成双侧坐骨神经损伤后 ,于右侧损伤处分别施加胶质细胞源性神经营养因子和 dv HSV-GDNF;左侧损伤处施加生理盐水作为对照。分别取损伤后 4、7、14和 2 8d大鼠的脊髓 L4 ～ L6 节段 ,经石蜡包埋切片后行 Nissl染色 ,计数前角运动神经元数量并进行统计学分析。结果发现 :坐骨神经损伤后 4、7、14和 2 8d,右侧脊髓前角运动神经元的数量明显高于左侧。提示 :胶质细胞源性神经营养因子和 dv HSV-GDNF可减少坐骨神经损伤大鼠脊髓前角运动神经元的死亡     

GDNFR-α在成年大鼠脊髓和背根节的分布的免疫组织化学研究

为了探讨胶质细胞源性神经营养因子对脊髓运动神经元和感觉神经元的作用 ,本实验采用抗胶质细胞源性神经营养因子受体 -α多克隆抗体免疫组织化学方法 ,观察了胶质细胞源性神经营养因子受体 -α在成年大鼠腰段脊髓和背根节的分布。结果发现 :胶质细胞源性神经营养因子受体 -α免疫反应出现于成年大鼠腰段脊髓神经元和背根节神经元中。提示 :胶质细胞源性神经营养因子受体 -α可能对脊髓运动神经元、背根节神经元具有一定的调节作用     

神经营养素-3能够促进体外受损伤大鼠脊髓神经元的存活及其神经突起生长

目的探讨神经营养素-3(NT-3)对体外机械性损伤的大鼠脊髓神经元存活及其神经突起生长影响。方法将体外培养的大鼠脊髓神经元分为4组:正常组、对照组、20 ng/ml NT-3组和40 ng/ml NT-3组。培养4 d后,除正常组外,其余3组建立划痕损伤模型。在划痕损伤后,对照组不做处理,另外2组分别在培养液中加入20 ng/mlNT-3和40 ng/ml NT-3继续培养。直至培养第6 d,应用4%多聚甲醛固定4组细胞。固定后的细胞分别做转移酶介导的三磷酸脱氧鸟苷-生物素刻痕末端标记(TUNEL)、微管相关蛋白2(MAP2)和生长相关蛋白-43(GAP43)免疫荧光染色,检测划痕损伤的神经元凋亡及其神经突起生长情况。结果免疫荧光化学染色显示,与对照组相比,应用NT-3处理的2组可以显著降低划痕损伤后的脊髓神经元凋亡率,并促进其神经突起生长。尤其是40 ng/mlNT-3组的神经元凋亡率最低,其神经突起可穿过划痕损伤边界。结论 NT-3能够促进体外机械性损伤的大鼠脊髓神经元存活及其神经突起生长。     

BDNF对体外培养的大鼠脊髓前角神经元内突触素Ⅰ与突触囊泡素表达的影响

探讨BDNF对体外培养的大鼠脊髓前角神经元内突触素I与突触囊泡素(SYN)表达的影响。取孕14d大鼠子宫内胎鼠的脊髓腹侧部分神经元,体外有血清培养。在培养7d后,随机分成对照组、BDNF组和抗BDNF组。BDNF组培养液中加入BDNF(20ng/ml),抗BDNF组培养液中加入BDNF抗体(20μg/ml),对照组加入等量Hanks液。3d后在倒置显微镜下计数三组神经元存活数,并用NF200、MAP2、NSE的免疫组化反应对神经细胞进行鉴定。行突触素I与SYN免疫组化反应,对部分细胞行突触素ImRNA原位杂交反应,运用图像分析系统对突触素I与SYN免疫组织反应阳性产物以及突触素I原位杂交反应阳性产物作光密度分析。结果发现有血清培养时各组脊髓前角神经元的存活数无显著差异(P>0.05);BDNF组突触素I与SYN免疫反应阳性产物的平均光密度值高于其它两组,抗BDNF组最低(P<0.01)。BDNF组突触素ImRNA阳性产物的平均光密度值明显高于其它两组,抗BDNF组突触素ImRNA阳性产物的平均光密度值最低(P<0.01)。本研究结果提示BDNF对有血清培养时脊髓前角神经元的存活没有明显影响,但BDNF可明显上调培养的脊髓前角神经元内突触素I与SYN的表达。     

腺病毒载体介导bcl-2基因转染在离体和在体状态下对损伤运动神经元的保护作用

本文目的在于观察携带 bcl-2基因的重组腺病毒 (Ad/ s-bcl-2 )在离体和在体条件下对损伤运动神经元的保护作用。采用培养脊髓运动神经元的谷氨酸损伤模型和大鼠坐骨神经切断损伤模型 ,评价重组 bcl-2腺病毒对损伤运动神经元的影响。指标是bcl-2原位杂交和免疫组化反应、台盼蓝拒染法检测培养神经元存活、TU NEL 阳性神经元计数以及脊髓运动神经元 ACh E反应。结果 :(1) Ad/ s-bcl-2可转染离体和在体脊髓运动神经元并使其过表达 bcl-2。 (2 )过表达 bcl-2可延长培养神经元的生存时间。(3 )过表达 bcl-2可显著地减少谷氨酸诱导的原代培养脊髓运动神经元的凋亡以及坐骨神经切断损伤诱导的脊髓运动神经元的凋亡。 (4 )过表达 bcl-2可显著地缓解坐骨神经损伤诱导的神经元内 ACh E的活性降低 ,并加速其恢复。本研究结果提示 :腺病毒载体中介 bcl-2基因转染对离体和在体损伤的运动神经元均具有保护作用     

脑源性神经营养因子在部分去传入猫脊髓背角的表达

为探讨脑源性神经营养因子在部分去传入猫脊髓背角的表达状况 ,对成年雄性家猫切除 L1 ～ L5 ,L7～ S2 背根节、保留L6 节及背根 ,术后分别存活 3、6、12 d,对 L6 节段脊髓进行脑源性神经营养因子免疫组织化学反应。结果表明 :正常时 ,阳性反应物主要分布在脊髓 I、II板层的神经终末、膨体与少量神经元胞体内。术后 3 d,术侧 II板层阳性神经终末和膨体密度开始减少 ,6d减少至高峰 ,到第 12 d时两者又均恢复到正常水平 ,而阳性神经元胞体的数量却无明显变化。作者认为 3 d、6d的减少主要与邻近背根节切除后 ,其神经纤维和膨体溃变有关 ;12 d时 ,保留的 L6 背根逐渐侧支出芽 ,且与靶细胞再建功能联系 ,故脑源性神经营养因子阳性神经纤维和膨体数均趋于恢复。说明脑源性神经营养因子既参与脊髓的正常生理功能 ,也与其损伤后的可塑性有关。     

Expression of neuronal isoform of nitric oxide synthase in spinal neurons of neonatal rats after sciatic nerve transection.

Motoneuron death induced by sciatic nerve transection in neonatal rats has been related to induction of the neuronal isoform of nitric oxide synthase (nNOS), a diaphorase of which one of the cofactors is nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH). We transected the sciatic nerve of neonatal rats (P2) and examined nNOS expression by immunostaining in neurons of the sciatic pool and of other spinal levels on the 5th day after surgery. No correspondence was observed between the surviving motoneurons and nNOS positive cells. The appearance and distribution of nNOS positive neurons at all spinal levels and laminae were similar to those of adult animals. These results are at variance with previous studies which showed correlation between motoneuron loss after axotomy and number of NADPH-diaphorase positive motoneurons after sciatic transection.