高浓度葡萄糖对胰岛细胞的IRS2表达及细胞凋亡的影响

目的 探讨高浓度葡萄糖条件下胰岛细胞胰岛素受体底物2(IRS2)和Bax基因表达和激活情况以及对诱导胰岛细胞凋亡的影响.方法 将小鼠胰腺进行分离纯化所得的胰岛细胞进行体外培养,按培养液里葡萄糖浓度不同分为G1组(5.6 mmol/L)、G2组(7.8 mmol/L)、G3组(11.1 mmol/L)、G4组(16.7 mmol/L)、G5组(22.2 mmol/L)及G6组(27.6mmol/L).细胞培养至72h后,采用放射免疫法检测各组胰岛细胞胰岛素分泌水平、免疫细胞组织化学法检测IRS2表达、免疫荧光法检测细胞Bax激活和细胞核Hoechst33342染色检测细胞凋亡情况.结果 当葡萄糖浓度在5.6～11.1 mmol/L时,胰岛素分泌水平升高,IRS2表达和Bax激活分别呈进行性增加,但此时细胞凋亡率无明显改变.随着葡萄糖浓度升高至超过16.7mmol/L时,IRS2表达逐渐减少,胰岛素分泌量明显降低,而Bax激活则逐渐增强,胰岛细胞凋亡率呈明显增加趋势.结论 高浓度葡萄糖可以导致胰岛细胞IRS2表达下降,胰岛素分泌量下降;同时Bax激活增强,胰岛细胞凋亡率也明显增加.说明IRS2表达下降与凋亡相关蛋白Bax激活及其胰岛细胞凋亡可能存在必然的联系,而且IRS2表达下降可能是胰岛素分泌减少的原因之一.增强胰岛素信号传导通路中IRS2蛋白的表达可能对于保护胰岛细胞有重要作用.

Abstract：

Objective To investigate the role of insulin receptor substrate 2(IRS2) and Bax on mouse islet cell apoptosis in the presence of high glucose in vitro.Methods The pancreatic islet cells were isolated from Kunming mice and divided into 6 groups(G1-G6 groups)for a 72-h culture in the media containing different concentrations of glucose(5.6,7.8,11.1,16.7,22.2,and 27.6 mmol/L,respectively).Insulin secretion by the cells was evaluated by radioimmunoassay,and the expressions of IRS2 and Bax were detected using immunocytochemistry and immunofluorescence assay,respectively.Hoechst33342 staining was employed to observe the cell apoptosis. Results Exposure to 5.6-11.1 mmol/L glucose resulted in increased insulin secretion and progressive elevation of IRS2 and Bax expression,whereas the cell apoptosis underwent no obvious changes.In the presence of glucose above 16.7 mmol/L,the percentages of apoptotic islet cells increased with glucose concentration,but insulin secretion and IRS2 expression decreased;Bax expression significantly increased in the presence of high-concentration glucose.Conclusion Prolonged exposure of mouse islet cells to high glucose induces apoptosis and impairs insulin secretion of the cells.Decreased IRS2 expression and increased Bax expression may play an important role in the glucotoxicity in mouse islet cells.     

间断高浓度葡萄糖对胰岛β细胞的损伤机制研究

目的探讨间断高浓度葡萄糖对培养的胰岛β细胞(HIT-T15细胞)的损伤机制。方法实验分为对照组(葡萄糖5.5mmol/L)、持续高浓度葡萄糖组(葡萄糖16.7mmol/L)、间断高浓度葡萄糖组(葡萄糖16.7mmol/L培养2h后更换为5.5mmol/L的葡萄糖3h,每天重复共3次,夜间9h维持在5.5mmol/L的培养基中)、抗氧化剂(NAC1.0mmol/L) 持续高糖组和NAC 间断高糖组。放免法测定胰岛素分泌水平;罗丹明123染色线粒体,激光共聚焦显微镜测量线粒体膜电位(MMP);荧光素酶方法检测细胞内ATP含量;硫代巴比妥酸法测量脂质过氧化物丙二醛(MDA)水平;流式细胞仪测定活性氧簇(ROS)的水平。结果高糖刺激后胰岛素分泌量在间断高糖组〔(3.13±1.11)μIU/mL〕和持续高糖组〔(5.18±0.95)μIU/mL〕分别较对照组〔(9.33±0.62)μIU/mL〕均明显减少(P<0.05);MDA水平、ROS水平明显升高(P均<0.05),并且间断高糖组较持续高糖组产生更多的ROS(P<0.05);间断高糖组和持续高糖组细胞内ATP含量、MMP水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论间断高浓度葡萄糖与持续高糖均使培养的β细胞线粒体氧化应激水平增高,且间断高糖组较持续高糖组产生更严重的氧化应激,从而使β细胞分泌胰岛素功能受损,其机制可能是由于氧化应激使线粒体的膜电位下降,细胞ATP含量减少所致。     

胰岛β细胞转录因子FoxO1的研究进展

转录因子FoxO1是叉头家族O的亚族成员之一,是胰岛素/胰岛素样生长因子信号通路中的关键分子。FoxO1蛋白主要有磷酸化、乙酰化和泛素化3种不同形式的共价修饰,这3种修饰方式在调节FoxO1蛋白分子转录活性和信号转导过程中发挥着重要的作用。FoxO1在胰岛β细胞中表达丰富,与其生长增殖、凋亡、分化、应对氧化应激等密切相关。FoxO1作为胰岛β细胞中特异的转录因子,研究其在β细胞中的表达及作用,将为糖尿病的预防和诊治带来新的契机。     

高浓度葡萄糖条件下罗格列酮对NIT-1细胞FOXO1、TSC2基因表达及细胞分泌功能的影响

目的：研究罗格列酮在不同浓度葡萄糖条件下,对胰岛β细胞增殖凋亡与胰岛素分泌以及叉头转录因子-1(FOXO1)和结节性硬化症-2(TSC2)表达的影响。方法： 将 NIT-1细胞按每孔5×10个放置于24孔细胞培养板,培养48 h后随机分为各处理组：5.6、7.8、11.1、16.7、22.2 和27.6 mmol/L葡萄糖组,继续培养24 h后再分别施加1×10^-5mol/L罗格列酮,分别于干预24和48 h后取细胞培养上清液,采用放射免疫法检测胰岛素水平和免疫荧光法检测细胞增殖情况,RT-PCR半定量法检测FOXO1和TSC2 mRNA表达水平。结果：①1×10^-6～1×10^-5 mol/L罗格列酮可以分别在不同浓度葡萄糖培养条件下使胰岛NIT-1细胞增殖（P<0.05）,且这种变化趋势随剂量的增加而增加（即1×10^-5 mol/L罗格列酮组＞1×10^-6 mol/L罗格列酮组＞1×10^-7 mol/L罗格列酮组）。1×10^-5 mol/L的罗格列酮干预后,可见细胞凋亡百分率增加趋势随着葡萄糖浓度不断升高;②在同一浓度罗格列酮作用下,当葡萄糖浓度为11.1 mmol/L时,胰岛素分泌水平最高,高于其他各组（均P<0.05）,随着葡萄糖浓度增加,胰岛素分泌量逐渐下降（11.1 mmol/L葡萄糖组>16.7 mmol/L葡萄糖组>22.5 mmol/L葡萄糖组>27.6 mmol/L葡萄糖组）,而葡萄糖为5.6 mmol/L时,胰岛素分泌量最低;③ 在1×10^-5 mol/L罗格列酮干预后,FOXO1和TSC-2 mRNA的表达水平均较未干预组明显下降,且呈现出5.6 mmol/L组＜11.1 mmol/L组＜16.7 mmol/L组＜22.5 mmol/L组＜27.6 mmol/L组的变化趋势,而且葡萄糖浓度＞16.7 mmol/L的各组均较前面小剂量葡萄糖组（≤11.1 mmol/L各组）表达明显。结论：罗格列酮可以通过直接影响胰岛β细胞内FOXO1和TSC2表达促进胰岛β细胞的增殖及影响细胞胰岛素分泌功能,提示通过调控FOXO1和TSC2表达,可以直接影响胰岛β细胞的生物学功能,如分泌功能、细胞的增殖与凋亡以及改善胰岛素抵抗状况。     

Mibefradil通过下调FoxO1表达改善HepG2细胞的胰岛素抵抗

目的 探索Mibefradil在体外对胰岛素抵抗HepG2细胞的作用.方法 将HepG2细胞分为对照组、棕榈酸盐(Palmitate,PA)诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗模型组、药物溶剂(DMSO)组、低剂量(0.025 μmol/L) Mibefradil组、高剂量(0.05 μmol/L)Mibefradil组,通过检测各组糖原合成及葡萄糖消耗,观察Mibefradil对胰岛素抵抗HepG2细胞的改善作用.用qRT-PCR、Western blot检测各组FoxO1,糖异生、糖原分解限速酶,即:磷酸烯醇式丙酮酸羧基激酶(PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸激酶(G6Pase)的mRNA、蛋白相对表达量,明确转录因子FoxO1及其靶基因的表达水平.结果 相比于对照组,HepG2细胞胰岛素抵抗模型组的糖原合成量[(3.28 ±0.74) μg/μL vs(9.14 ±0.33) μg/μL,P＜0.01]及葡萄糖消耗量[(1.31±0.49)nmol/μg vs(5.87±2.26)nmol/μg,P＜0.01]明显下降;经Mibefradil干预后,胰岛素抵抗HepG2细胞的糖原合成及葡萄糖消耗得到明显改善,且高剂量组的糖原合成[(7.09 ±0.60) μg/μL vs(5.73 ±0.16) μg/μL,P＜0.01)]及葡萄糖消耗[(6.45 ±0.02) nmol/μgvs(5.61 ±0.29) nmol/μg,P＜0.01]显著高于低剂量组,表明Mibefradil可改善HepG2细胞的胰岛素抵抗.qRT-PCR及Western blot检测结果表明,胰岛素抵抗HepG2细胞的FoxO1、PEPCK、G6Pase的表达量均显著增加(P＜0.01);经Mibefradil干预后,其表达量呈剂量依赖性下降(P＜0.05).结论 Mibefradil对胰岛素抵抗HepG2细胞具有改善作用,此作用可能与下调FoxO1的表达有关.     

高浓度葡萄糖对体外培养小鼠胰岛细胞NF-κB的表达及细胞凋亡的影响

目的:探讨核因子κB（NF-κB）在高浓度葡萄糖诱导胰岛细胞凋亡中的作用。方法：对分离纯化的小鼠胰腺胰岛细胞进行体外培养,按DMEM培养液里葡萄糖浓度不同,分为6组：G1组（5.6 mmol•L^-1葡萄糖）、G2组（7.8 mmol•L^-1）、G3组（11.1 mmol•L^-1）、G4组（16.7 mmol•L^-1）、 G5组(22.2 mmol•L^-1)及G6组（27.6 mmol•L^-1）。采用放射免疫法检测各组胰岛细胞胰岛素分泌水平;免疫组织化学染色法检测NF-κB活性;免疫荧光法检测细胞色素C释放和细胞核染色检测细胞凋亡。结果：当葡萄糖浓度5.6～11.1 mmol•L^-1时,随着葡萄糖浓度升高,胰岛细胞胰岛素分泌逐渐增加（P<0.05),NF-κB的活性逐渐增加（P<0.05),但此时细胞凋亡未见显著的变化（P>0.05),细胞色素C释放的组间比较差异无显著性（P>0.05)。当葡萄糖浓度≥16.7 mmol•L^-1时,与葡萄糖浓度≤11.1mmol•L^-1各组比较, NF-κB表达明显增加,细胞色素C的释放也逐渐增强（P<0.05),胰岛细胞凋亡百分率同时也呈明显增加趋势（P<0.05）。结论：高浓度葡萄糖可以诱导胰岛细胞NF-κB表达增加,细胞色素C释放增强,同时诱导胰岛细胞凋亡,提示NF-κB的激活与胰岛细胞凋亡可能存在必然的联系,抑制NF-κB活性可能对于保护胰岛细胞有重要作用。     

高浓度葡萄糖上调人血管内皮细胞水孔蛋白-1的表达

目的观察高浓度葡萄糖对人血管内皮细胞水孔蛋白-1(AQP1)表达的影响.方法用高浓度葡萄糖和高渗透压分别刺激体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)6、24、48、72 h,观察其对AQP1蛋白和mRNA表达的影响,以未添加葡萄糖或甘露醇培养组为对照组.结果培养6 h后,各组AQP1蛋白和mRNA的表达量无明显差别(P＞0.05);培养24 h后,4.25%葡萄糖组与对照组相比,AQP1表达量明显增加(P＜0.05);继续培养AQP1表达量的增加更为明显.与甘露醇培养基组比较,AQP1表达量在蛋白质水平和mRNA水平均无明显差别(P＞0.05).结论提示体外高浓度葡萄糖可上调人血管内皮细胞AQP1的表达,其上调作用可能主要通过高渗透压作用介导.     

高浓度葡萄糖诱导HepG-2细胞的凋亡及其调控的相关机制

目的 探讨高浓度葡萄糖诱导HepG-2细胞的凋亡及其调控的可能机制.方法 用含不同浓度葡萄糖的DMEM处理HepG-2细胞,分为正常组(糖浓度为5.5 mmol/L)和高浓度葡萄糖组(糖浓度分别为25、40、100、150、200 mmol/L ),采用MTT、Hoechst染色法观察细胞的增殖和凋亡状况; Weste...     

葡萄糖对胰岛β细胞CD36表达的影响

目的：观察不同浓度的葡萄糖对胰岛β细胞脂质含量以及脂肪酸转位酶（CD36）表达的影响。方法：分别以5、10、15、20、253、0 mmol/L葡萄糖孵育胰岛β细胞24 h后,测定细胞内甘油三脂（TG）含量及CD36基因表达。结果：（1）在高糖环境下,细胞内TG含量呈浓度依赖性增加。（2）高糖对CD36的基因表达亦有明显的浓度依赖性。结论：高糖对胰岛β细胞CD36表达的影响可能在脂质异位沉积和脂毒性中有着重要的意义。     

葡萄糖毒性对2型糖尿病胰岛β细胞功能的影响

目的探讨血糖控制对2型糖尿病胰岛β细胞功能的影响.方法50例2型糖尿病患者坚持胰岛素治疗6个月后,停用胰岛素72小时,测定治疗前后血糖、胰岛素、C肽水平及糖基化血红蛋白(HbA1c),血浆葡萄糖测定用氧化酶法,胰岛素、C肽测定用放免法,HbA1c测定采用金标法.结果胰岛素治疗血糖控制后,HbA1c下降,胰岛素、C肽释放水平提高(P＜0.01).结论2型糖尿病血糖控制后胰岛β细胞功能可得到改善,初发2型糖尿病高血糖时用胰岛素治疗对胰岛β细胞功能具有保护作用.     

高浓度葡萄糖上调人血管内皮细胞水孔蛋白-1的表达

目的 观察高浓度葡萄糖对人血管内皮细胞水孔蛋白-1(AQP1)表达的影响。方法 用高浓度葡萄糖和高渗透压分别刺激体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)6、24、48、72 h,观察其对AQP1蛋白和mRNA表达的影响,以未添加葡萄糖或甘露醇培养组为对照组。结果 培养6 h后,各组AQP1蛋白和mRNA的表达量无明显差别(P>0.05);培养24 h后,4.25％葡萄糖组与对照组相比,AQP1表达量明显增加(P<0.05);继续培养AQP1表达量的增加更为明显。与甘露醇培养基组比较,AQP1表达量在蛋白质水平和mRNA水平均无明显差别(P>0.05)。结论 提示体外高浓度葡萄糖可上凋人血管内皮细胞AQP1的表达,其上凋作用可能主要通过高渗透压作用介导。     

胃转流术降低2型糖尿病大鼠肝脏FoxO1因子的表达

目的研究胃转流术对2型糖尿病大鼠肝脏FoxO1表达的影响。方法 40只SD大鼠随机分为糖尿病手术组(A组)、假手术组(B组)、正常对照组(C组)、糖尿病对照组(D组),每组10只。C、D组按A、B组术前和术后4、8、16、24周检测空腹血糖、空腹和餐后血清胰岛素、胰高血糖素样肽(GLP-1)。24周后处死各组大鼠,免疫组化和Western blot检测各组肝脏中FoxO1的表达。结果 A组术后4周空腹血糖由术前的(20.2±2.1)mmol/L降至(10.5±2.5)mmol/L,术后24周空腹血糖为(7.7±1.1)mmol/L,术后4周空腹胰岛素由术前(2.87±0.08)mU/L增至(2.91±0.08)mU/L,术后24周空腹胰岛素为(3.00±0.06)mU/L;术后4周空腹血清GLP-1由术前(8.7±0.9)pmol/L升至(13.2±1.0)pmol/L,术后24周为(23.5±0.2)pmol/L。A组术后24周肝脏FoxO1表达量为18.4±1.2,B组为37.6±0.5,C、D两组分别为9.2±1.0、35.8±0.4,A组术后FoxO1的表达量明显低于B、D组,差异有统计学意义(P<0.05)。A组血清GLP-1浓度与肝脏FoxO1的表达量成负相关(r=-0.864,P<0.05)。结论胃转流术可显著降低2型糖尿病大鼠肝脏FoxO1的表达,降低血糖。     

高浓度氧对肠上皮细胞Caco-2生长的影响

目的 研究高浓度氧对肠上皮细胞生长的影响.方法 采用细胞计数、MTT和Giemsa染色方法检测不同高浓度氧对细胞生长、对细胞杀伤和对细胞分裂能力的影响;采用免疫组织化学方法检测高浓度氧对Caco-2表达E2F-1的影响.结果 细胞计数和MTT结果显示40%氧浓度有利于细胞生长;60%、90%氧浓度导致细胞迅速死亡.不同氧浓度干预细胞3d后细胞分裂指数有明显不同,分裂细胞百分数分别为正常氧浓度时的2.5%,40%浓度氧时为3.3%,60%浓度氧时为1.3%,90%浓度氧时大部分细胞死亡.与正常氧浓度时相比,氧浓度为40%、60%时E2F-1表达增强,90%氧浓度时E2F-1表达明显减弱.但60%氧浓度E2F-1表达较40%氧浓度减弱.结论 适度的氧浓度促进细胞生长,高浓度氧则抑制细胞生长,甚至对细胞有杀伤作用.     

Apelin对葡萄糖的毒性作用及对胰岛细胞PDX-1表达的影响

目的 探讨Apelin对葡萄糖毒性作用及对胰岛细胞胰十二指肠同源盒蛋白-1(PDX-1)表达的影响.方法 在不同葡萄糖浓度下(正糖组5.6 mmol/L,高糖组16.7 mmol/L,极高糖组33.3 mmol/L),+/-Apelin-36培养胰岛β细胞株NIT-1细胞3d,然后测定基础和葡萄糖刺激后胰岛细胞胰岛素分泌量,测定细胞内胰岛素含量和PDX-1蛋白及mRNA表达.结果 与正糖组比较,高糖组和极高糖组的基础和葡萄糖刺激后胰岛素分泌、细胞内胰岛素均明显减少,PDX-1蛋白表达下降(P＜0.05);与未加Apelin组比较,加Apelin高糖组和极高糖组的基础和葡萄糖刺激后胰岛素分泌、细胞内胰岛素明显减少,PDX-1蛋白表达下降(P＜0.05);6组胰岛细胞的胰岛素水平与PDX-1蛋白表达呈正相关,与PDX-1 mRNA表达无关.结论 Apelin可能通过降低PDX-1蛋白表达参与葡萄糖毒性作用,引起胰岛素分泌减少,从而在糖尿病的发病机制中发挥作用.     

高浓度葡萄糖对小鼠表皮干细胞增殖的影响

目的 探讨高浓度葡萄糖对小鼠表皮干细胞增殖的影响.方法 利用Ⅳ型胶原的快速黏附法分离培养小鼠表皮干细胞,观察其形态学;通过免疫荧光法检测表皮干细胞标志物β1整合素和K19来鉴定表皮干细胞;将小鼠表皮干细胞分别放在葡萄糖浓度为5.6、15和30mmol/L的培养基里培养;MTT法检测细胞增殖情况,免疫印迹法检测细胞凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达水平.结果 体外培养的小鼠表皮干细胞呈克隆样生长,增殖速度较快,细胞形态呈铺路石样,边缘细胞呈梭形,细胞核质比较大;免疫荧光法检测到培养的小鼠表皮干细胞β1整合素和K19呈阳性表达且阳性表达率均为100％;MTT法检测到与对照组（5.6mmol/L浓度葡萄糖）相比,15mmol/L浓度葡萄糖刺激72h后检测到细胞增殖速度无明显改变,而30mmol/L浓度葡萄糖刺激24、48和72h后检测到细胞增殖速度降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.Western blot法检测到与对照组相比,30mmol/L浓度葡萄糖刺激48h后凋亡蛋白Bax的蛋白表达量明显增加而抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）.结论 本研究结果表明较高浓度（30mmol/L）葡萄糖可以明显抑制小鼠表皮干细胞的增殖,从干细胞角度进一步为糖尿病创面难愈的原因提供了实验室依据.     

核转录因子-κB在高浓度葡萄糖诱导INS-1细胞凋亡中的作用

目的 研究核转录因子(NF-κB)在高浓度葡萄糖诱导INS-1细胞凋亡中的作用.方法 大鼠胰岛素瘤细胞系(INS-1)细胞以RPMI 1640培养基常规培养.实验分对照组(11.1 mmol/l葡萄糖组)、高糖组(33.3 mmol/l葡萄糖组)、高糖+NF-κB抑制剂组(33.3 mmol/l葡萄糖+NF-κB抑制剂(5 μmol/l)干预组)3组.以荧光定量RT-PCR检测IKKβmRNA水平,Western blot法检测细胞核内NF-κB亚基P65蛋白表达量,Annexin V-PI双染法检测细胞凋亡率.结果 与对照组相比较,高糖组IKKβ mRNA水平显著升高(P＜0.01),INS-1细胞胞核内P65蛋白表达显著增多(P＜0.01),细胞凋亡率显著升高(P＜0.05).与高糖相比较,高糖+NF-κB抑制剂组IKKβ mRNA水平显著下降(P＜0.01),胞核内P65蛋白表达显著减少(P＜0.01),INS-1细胞凋亡率显著下降(P＜0.05).结论 高浓度葡萄糖诱导INS-1细胞NF-κB活化,抑制NF-κB活化可有效抑制高糖诱导的INS-1细胞凋亡.     

罗格列酮对不同浓度葡萄糖条件下小鼠胰岛B细胞株NIT-1增殖、凋亡及功能的影响

目的 研究罗格列酮在不同浓度葡萄糖条件下对B细胞株NIT-1细胞增殖、凋亡及胰岛素分泌的影响.方法 将NIT-1细胞按5×104个细胞/孔至24孔培养板中培养,根据培养基RPM1640葡萄糖浓度不同分为以下5组:G1组(5.6 mmol/L)、G2组(11.1 mmol/L)、G3组(16.7 mmol/L)、G4组(22.2 mmol/L)及G5组(27.6 mmol/L),继续培养72 h后,分别给予10-5 mmol/L罗格列酮干预48 h后,取上清液采用放免法检测各组胰岛素水平;采用免疫荧光法检测凋亡细胞,MTT法检测细胞增殖情况.结果 (1)罗格列酮能够明显抑制高浓度葡萄糖诱导的NIT-1细胞凋亡.施加罗格列酮浓度10-5 mmol/L 48 h时后,能够明显抑制16.7 mmol/L、22.5 mmol/L和27.6 mmol/L浓度的葡萄糖所诱导的细胞凋亡.(2)罗格列酮能显著增加各浓度葡萄糖组NIT-1细胞的增殖活性.(3)罗格列酮能显著增加各葡萄糖浓度组的NIT-1细胞胰岛素分泌.结论 罗格列酮可以通过直接作用于胰岛B细胞调节改善的胰岛B细胞的增殖及功能、抑制凋亡.     

不同浓度葡萄糖对大鼠胰岛β细胞胰岛素基因表达的影响

目的：研究不同浓度葡萄糖对大鼠胰岛β细胞胰岛素基因表达的影响，探讨非生理浓度葡萄糖在糖尿病发病过程中的作用。方法：用不同浓度葡萄糖分别刺激培养的胰岛β细胞1、7、14天，提取细胞总RNA，运用逆转录(RT)-PCR技术检测胰岛素基因表达的变化。结果：与对照组相比(葡萄糖浓度为5．5mmol/L)，刺激胰岛β细胞1天后，葡萄糖浓度为2．2 mmol/L时，胰岛素基因表达显著降低，当葡萄糖浓度高于对照组时，胰岛素基因的表达量呈浓度依赖性升高；当刺激时间为7天时，除葡萄糖浓度11．1mmol／L外，其余胰岛素基因表达均降低；如果刺激时间延长到14天，非生理浓度葡萄糖均表现为胰岛素基因的抑制作用。结论：短期的血糖升高可以一定程度地刺激胰岛素基因的表达，但长期的高血糖则表现为葡萄糖毒性作用，低血糖也可以抑制胰岛素基因的表达。     

苯丙酸诺龙对胰岛NIT-1细胞Nampt表达和胰岛素分泌的影响

目的：观察雄性激素苯丙酸诺龙(BPN)干预下胰岛NIT-1细胞中烟酰胺磷酸核糖转移酶（Nampt）、胰岛素受体底物-2（IRS-2）和胰岛十二指肠同源盒-1（PDX-1）蛋白表达、细胞周期和胰岛素分泌的变化,探讨高浓度葡萄糖氧化应激状态下BPN对NIT-1细胞Nampt表达和胰岛素信号分子的影响。方法：应用4种不同浓度（5.6、11.1、16.7和27.6mmol•L^-1）葡萄糖培养NIT-1细胞,以10 mg•L^-1 BPN干预NIT-1细胞48 h,以未加BPN处理的相应浓度葡萄糖为对照组。应用Western blotting法检测各组细胞中Nampt、IRS-2 和 PDX-1蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞周期;放射免疫法测定细胞胰岛素分泌水平。结果：与相应浓度葡萄糖对照组比较,各BPN处理组NIT-1细胞中Nampt、ISR-2和PDX-1蛋白表达水平增加（P<0.05或P<0.01）;与相应对照组比较,在低糖（5.6 mmol•L^-1）时,BPN能够明显解除细胞G0/G1期阻滞（P<0.01）,在高糖（27.6 mmol•L^-1）时,能够解除细胞的G2/M阻滞（P<0.01）;除正常葡萄糖浓度11.1mmol•L^-1组之外,各处理组细胞的胰岛素分泌水平均明显增加（P<0.01）。结论：BPN能够增加胰岛NIT-1细胞中Nampt、ISR-2和PDX-1蛋白表达水平,NIT-1细胞中Nampt表达与胰岛素信号传导途径的相关分子间可能存在密切关联,雄性激素在一定条件下能够改善胰岛细胞的胰岛素抵抗状态。