VEGF-C反义多肽对人乳腺癌细胞体内外抑制效应的研究

目的 检测VEGF-C反义多肽在体内外抑制乳腺癌细胞的生物学活性,探讨以VEGF-C反义多肽用于乳腺癌基因治疗的应用前景。方法 制备靶向VEGF-C的反义多肽,通过与乳腺癌细胞株MCF-7共培养,MTT法检测细胞增殖抑制率,人工基底膜侵袭实验检测细胞侵袭能力;构建乳腺癌细胞MCF-7裸鼠皮下移植瘤模型,瘤体内注射VEGF-C反义多肽,观察其对乳腺癌细胞的抑制作用;Western Blot检测VEGF-C在瘤组织的表达情况;免疫组织化学分析肿瘤组织VEGFR-3阳性脉管密度。结果 VEGF-C反义多肽具有较强的生物学活性,对乳腺癌细胞具有明显的增殖抑制作用,其抑增殖效应呈时间和浓度依赖性;25、50、100μg/ml VEGF-C反义多肽对侵袭重组基底膜的抑制率分别为41.2%、56.7%和60.8%（P〈0.05）;瘤组织内给予VEGF-C反义多肽后,Western blot分析VEGF-C在瘤组织中的表达降低,肿瘤生长受制,抑瘤率为52%（P〈0.05）;免疫组化分析VEGF-C反义多肽可抑制肿瘤组织VEGFR-3阳性脉管形成。结论 制备出的VEGF-C具有良好的生物学活性,通过抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭转移能力及肿瘤组织VEGFR-3阳性脉管形成而发挥抗乳腺癌作用。     

VEGF—C基因高表达促进胃癌细胞增殖及克隆和小管形成的实验研究

目的：构建人血管内皮生长因子（VEGF）-C基因慢病毒表达载体,并研究其在胃癌细胞中的功能。方法：采用SYBRGreen相对定量逆转录聚合酶链反应（qRT—PCR）及蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测6种不同类型的胃癌细胞系MKN-45、MKN-28、NCI—N87、BGC-823、AGS和SGC-7901中VEGF—CmRNA及其蛋白表达水平;通过构建VEGF—C基因慢病毒表达载体进行细胞增殖、克隆形成和内皮细胞管形成实验,按实验组（MKN-45-GV／C）、对照组（MKN-45-GV）和空白细胞组（MKN-45）加以比较。结果：qRT—PCR和Westernblot实验表明,在6种胃癌细胞中均可检测到VEGF～CmRNA及其蛋白的表达,其中在胃癌细胞MKN-45中表达最低（0．45±1．44）,SGC-7901中表达最高（31.13±0.75）;增殖实验结果显示,与对照组比较,实验组细胞增殖数量明显增加（P〈0．001）;克隆形成结果显示,实验组和对照组细胞在每平均视野形成克隆数分别为6．234±0．32和1．40±1．67,克隆形成率分别为85％和31％（P〈0．05）;内皮细胞管形成实验结果显示,实验组、对照组和空白细胞组小管数目分别为8．14土1．25、12．76±0．79和18．46±0．72（P〈0．01）,小管长度分别为98．56±3．71、105．17±134和151．62±2．51（P〈0．05）。结论：VEGF—C基因真核表达载体构建成功,VEGF—C基因促进胃癌细胞增殖、克隆形成和小管形成。     

舒芬太尼对胃癌SGC-7901细胞活力的影响

目的通过不同浓度的舒芬太尼作用于胃癌SGC-7901细胞,研究舒芬太尼对胃癌细胞活力的影响。方法将对数生长期的胃癌细胞随机均分为对照组(C组)、舒芬太尼0.5nmol/L组(0.5nM组)、5nmol/L(5nM组)、50nmol/L(50nM组)和500nmol/L(500nM组)。分别以0、0.5、5、50、500nmol/L浓度的舒芬太尼作用于胃癌细胞,FDA/PI荧光双染观察染毒后的胃癌SGC-7901细胞存活情况;CCK-8试剂盒检测细胞活力;AnnexinV-FITC流式细胞术检测胃癌细胞的凋亡情况;最后运用细胞周期检测试剂盒分析胃癌细胞的细胞周期。结果 FDA/PI双染观察显示,随着舒芬太尼染毒浓度的增高,死亡的胃癌SGC-7901细胞比例不断增加,存活的正常细胞比例下降;CCK-8分析表明药物作用后的胃癌细胞的活力呈下降趋势,与C组比较,12h时500nM组和24、48h时50、500nM组细胞活力明显下降(P0.05或P0.01)。与C组比较,5nM组、50nM组和500nM组细胞凋亡率明显升高(P0.05或P0.01)。运用AnnexinV-FITC/PI凋亡实验发现胃癌细胞凋亡和死亡的数量也随药物浓度的增加而不断增多;最后通过检测染毒后的胃癌细胞,发现与C组比较,5nM、50nM和500nM组G2/M期细胞比例明显升高,S期细胞比例明显降低(P0.01)。结论舒芬太尼可以使胃癌SGC-7901细胞的活力下降,促进胃癌细胞凋亡。     

外源性FasL基因诱导Caspase-3的表达及胃癌细胞凋亡的研究

目的　研究FasL基因转染胃癌细胞中Caspase 3的表达并观察其与胃癌细胞凋亡的关系。方法　逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)、流式细胞术和免疫组织化学检测Caspase 3在FasL基因转染的SGC 790 1胃癌细胞中的表达 ,流式细胞术、原位末端标记 (TUNEL)检测胃癌细胞凋亡。结果　Caspase 3在SGC 790 1母系细胞中低水平表达 ,转移FasL基因后的SGC 790 1/FasL细胞的Caspase 3的表达显著升高 (P <0 .0 1) ,同时胃癌细胞凋亡率升高 (2 5 .4%vs 7.2 % ,P <0 .0 0 1) ,凋亡率与Caspase 3的表达呈明显正相关关系 (r =0 .64 7,P <0 .0 1)。结论　Caspase 3在胃癌发生中起重要作用 ;FasL基因转染的胃癌细胞的凋亡与其Caspase 3的表达增加有密切关系。     

曲古菌素A在胃腺癌细胞系SGC-7901中的作用

目的研究曲古菌素A（TSA）在胃腺癌细胞系SGC-7901中的作用。方法四甲基偶氮唑蓝法测定TSA对SGC-7901的细胞毒性，荧光显微镜观察细胞核DNA的变化，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率，Western印迹检测组蛋白H3的乙酰化状态。结果SGC-7901细胞生长曲线表明，TSA浓度增高，细胞生长率下降。细胞凋亡率在75ng／mlTSA作用72h时与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。凋亡细胞DNA变化主要表现为核染色质固缩及断裂，荧光染色增强。流式细胞仪分析出现明显的亚G1期峰，G1期细胞减少，细胞凋亡率达29．54％。TSA作用后，乙酰化的组蛋白如明显增多。结论TSA可以诱导SGC-7901细胞发生凋亡，组蛋白H3的乙酰化状态可能与细胞凋亡有关。     

ets-1反义寡核苷酸对胃癌细胞株SGC-7901侵袭力的影响

目的　研究ets 1反义寡核苷酸对胃癌细胞株SGC 790 1侵袭力的影响。方法　应用ets 1反义、正义寡核苷酸转染SGC 790 1细胞 ,并设磷酸盐缓冲液 (PBS)对照组。转染后应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测ets 1mRNA的变化 ,应用Transwell小室检测体外侵袭力的变化 ,并应用裸鼠胃癌皮下转移模型检测对体内侵袭力的影响。结果　转染ets 1反义寡核苷酸后 ,ets 1mRNA表达降低 (0 .42 3± 0 .0 86vs 0 .815± 0 .176、0 .80 7± 0 .169,P <0 .0 1) ,侵过小室滤膜细胞数目减少 (97.1± 11.1vs 198.7± 18.3、2 0 5 .8± 2 2 .2 ,P <0 .0 1) ,裸鼠胃癌生长明显受到抑制 (1.2 8±0 .13vs 1.18± 0 .11、0 .60± 0 .11,P <0 .0 1)。结论　ets 1反义寡核苷酸能够抑制胃癌细胞株SGC 790 1的侵袭力     

PTEN基因对人胃癌细胞SGC-7901的生物学效应

目的　研究PTEN基因对人胃癌细胞SGC 790 1增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法　将携带有PTEN基因的真核表达载体pBabe Puro PTEN以及pBabe Puro ,以脂质体介导的基因转染方法转入SGC 790 1细胞系中 ,嘌呤霉素筛选获得稳定表达PTEN基因的转染细胞 ,通过细胞活力实验、流式细胞仪和DNA凝胶电泳 ,观察PTEN基因对SGC 790 1细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果稳定转染PTEN基因的SGC 790 1细胞中PTEN蛋白稳定表达 ,转染PTEN基因的SGC 790 1细胞生长速度较对照组明显减慢。流式细胞仪显示 ,细胞周期发生G1期阻滞。转染PTEN的细胞在透射电镜下可出现典型的凋亡形态学的改变 ;细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞特有的“梯状”条带 ,而对照组没有出现。结论　外源性PTEN基因导入SGC 790 1细胞后 ,可引起SGC 790 1细胞G1期阻滞 ,抑制肿瘤细胞增殖 ,并促进凋亡的发生     

LDL-ACM复合物对胃癌细胞株SGC-7901的抑制作用

目的：比较低密度脂蛋白-阿克拉霉素（LDL-ACM）复合物和游离ACM对胃癌细胞株SGC-7901的抑制作用,从而为以LDL为载体介导的癌瘤靶向治疗提供理论支持。方法：37℃、CO25%及饱和湿度培养箱培养人上皮样胃癌细胞株SGC-7901及取自胃壁经原代培养获得的胃成纤维细胞。以LDL作为脂溶性抗肿瘤药物ACM的载体,温育交换法制备LDL-ACM复合物。观察LDL-ACM复合物及游离ACM对胃癌细胞株SGC-7901及胃成纤维细胞的增殖、细胞DNA合成及蛋白质合成的抑制作用,并进行统计学分析。结果：LDL-ACM复合物对胃癌细胞株SGC-7901的生长、DNA及蛋白质合成的抑制作用均显著强于游离ACM,且差异有统计学意义（P分别〈0.01、0.05、0.005）,且在药物浓度为1.2500～5.0000μg/mL范围内对于细胞DNA合成的抑制作用更显著（P〈0.05）。而LDL-ACM复合物和游离ACM对正常胃成纤维细胞的生长、DNA的合成及蛋白质合成的抑制作用差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：以LDL为载体介导的肿瘤药物的细胞抑制作用强于游离抗肿瘤药物。     

血管内皮生长因子-C在胃癌中表达的意义

为探讨血管内皮生长因子 C (VEGF C)与胃癌临床病理因素的关系。笔者应用免疫组织化学 (SP)方法测定胃癌及胃良性病变中VEGF C的表达。结果示胃癌组VEGF C阳性率为 60 .0 % ,胃良性病变组为 15 .0 % (P =0 .0 0 0 ) ;胃癌组中有淋巴结转移者为 68.97% ,无淋巴结转移者为 3 6.4% (P =0 .0 0 8) ;低分化者为 72 .7% ,高 中分化者为 44 .4% (P =0 .0 10 ) ;伴有远处转移者为10 0 .0 % ,不伴有远处转移者为 5 3 .6% (P =0 .0 2 ) ;pTNMI II期为 43 .8% ,III IV期为 70 .8%(P =0 .0 15 )。提示VEGF C表达与胃癌转移情况、分化程度及分期有密切关系。     

胃癌组织中血管内皮生长因子C的表达与淋巴结微转移的关系

目的：检测胃癌患者血管内皮因子C（VEGF-C）蛋白及mRNA在胃癌组织中的表达情况,探讨其与胃癌淋巴结微转移的关系。方法应用免疫组织化学法及RT-PCR法检测80例胃癌组织、癌旁组织及正常组织中的VEGF-C蛋白及mRNA表达情况;免疫组化法检测淋巴结微转移情况,比较有无淋巴结微转移的VEGF-C蛋白和mRNA的表达差异,明确存在的关联性。结果VEGF-C蛋白及mRNA两者在胃癌组织中明显高于癌旁组织和正常组织（P＜0.05）。结论胃癌组织中的VEGF-C蛋白及mRNA与胃癌淋巴结微转移相关,基因检测优于蛋白,可作为评价胃癌患者是否存在淋巴结微转移的优选指标。     

抗Fas单克隆抗体诱导人胃癌细胞系SGC-7901细胞凋亡的研究

目的 探讨抗Fas单克隆抗体诱导胃癌细胞凋亡的规律及在胃癌治疗中的意义。方法 应用细胞形态观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞光度术检测抗Fas单克隆抗体对胃癌细胞SGC-7901增殖周期的影响以及对细胞杀伤作用的方式，并检测了SGC-7901细胞表面bcb2的表达情况。结果 抗Fas单克隆抗体有阻滞细胞周期、通过诱发凋亡而抑制肿瘤细胞生长的作用。经抗Fas单克隆抗体处理后，SGC-7901细胞表面bcl-2蛋白表达无明显变化。结论 抗Fas单克隆抗体可以诱导胃癌细胞系SGC-7901细胞凋亡，抗Fas单克隆抗体诱导胃癌细胞凋亡与bcl-2表达无关。     

抑癌基因WTX对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的:探讨WTX基因对人胃癌SGC-7901细胞生物学行为的影响。方法:将WTX重组质粒或空载体质粒用Attractene法转染SGC-7901细胞,以无处理SGC-7901细胞为空白对照,检测不同时间e GFP标记的转染效率;RT-PCR法检测WTX m RNA水平;CCK-8法测定细胞增殖情况;流式细胞技术检测转染效率、凋亡及细胞周期的变化。结果:转染WTX基因48 h后,e GFP表达最强,转染效率达(33.10±4.16)%;与空白对照组和空载体组比较,WTX转染组WTX m RNA表达明显升高;细胞增殖能力明显降低,S期细胞明显增多,而G1期和G2/M期细胞减少(均P<0.05)。各组细胞均未见明显的细胞凋亡。结论:WTX可通过诱导S期阻滞抑制胃癌细胞SGC-7901生长,但不影响细胞凋亡。     

TNP-470对胃癌细胞株SGC-7901体外血管生成拟态的抑制作用

目的：研究TNP-470对胃癌细胞株SGC-7901体外血管生成拟态的影响。方法：将培养的SGC-7901细胞分为TNP-470组及对照组，应用克隆形成试验检测细胞增殖活性的变化。Transwell小室检测癌细胞体外侵袭力的变化，体外管状形成试验检测管道形成能力的变化。结果：TNP-470对SGC-7901细胞增殖没有明显抑制作用，可以显著降低SGC-7901细胞的体外侵袭能力，抑制体外管道形成。结论：TNP-470能够抑制SGC-7901细胞的体外血管生成拟态形成。     

中药癌痛克对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡作用及机制研究

目的通过观察不同浓度癌痛克对胃癌细胞株SGC-7901增殖及凋亡的作用，以及在相应状态下细胞内视网膜母细胞瘤（Rb）基因相对表达量的改变，探讨中药癌痛克的抗胃癌作用机制。方法以不同浓度癌痛克作用SGC-7901细胞，CCK-8检测细胞增殖抑制率，流式细胞术检测细胞凋亡率细胞周期，RT—PCR方法检测细胞内Bcl-2基因表达变化。结果2～50μg／ml癌痛克可抑制SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡，其抑制及诱导凋亡效应呈浓度依赖性；细胞周期分析处于G1期细胞百分比明显增多，处于G2／M期的细胞减少，Rb基因mRNA表达上调。结论中药癌痛克可通过抑制SGC-7901细胞增殖或诱导其凋亡，且其机制可能通过上调Rb基因表达途径使细胞阻滞在G1期，进而诱导细胞凋亡。     

VEGF-C在胃癌组织及胃癌细胞株SGC-7901中的表达及其意义

目的:检测血管内皮生长因子C(VEGF-C)在胃癌组织及胃癌细胞株SGC-7901中的表达,分析其与肿瘤淋巴结转移的关系.方法:56例胃癌标本和一株恶性程度较高的胃癌细胞株SGC-7901,用免疫组化方法检测VEGF-C在胃癌细胞中的表达及定位情况.结果:56例胃癌标本中有18例VEGF-C呈阳性表达,阳性率32%,SGC-7901胃癌细胞株中VEGF-C强阳性表达;阳性物质主要位于肿瘤细胞胞浆内,在有淋巴结转移的胃癌组织中明显高于无淋巴结转移组织,低分化胃癌中的表达明显高于高、中分化胃癌.结论:VEGF-C的表达与胃癌的分化程度及肿瘤细胞的淋巴结转移密切相关.     

IRX1真核表达载体的构建及在胃癌细胞SGC-7901中的定位

目的 构建pEGFP-IRX1真核表达载体,体外转导至SGC-7901胃癌细胞株,观察IRX1基因转染后蛋白表达与细胞内定位.方法 PCR扩增IRX1全长1443 bp编码序列,将PCR扩增产物连接人pGEM-Teasy载体,经测序确认序列无误后,亚克隆入pEGFP-N1载体,构建pEG-FP-IRX1真核表达载体.采用Lipofectamine 2000转染SGC-7901胃癌细胞株,在荧光显微镜下观察外源性IRX1基因导入后在胃癌细胞内的表达与亚细胞定位.结果 成功构建有绿色荧光蛋白融合的IRX1真核表达载体,外源性IRX1基因在胃癌SGC-7901细胞中表达成功,在荧光显微镜下IRX1表达蛋白定位于细胞核内.结论 pEGFP-IRX1真核表达载体构建成功,并可在细胞内表达,这将为IRX1在胃癌内的功能研究奠定基础.     

IRX1真核表达载体的构建及在胃癌细胞SGC-7901中的定位

目的 构建pEGFP-IRX1真核表达载体,体外转导至SGC-7901胃癌细胞株,观察IRX1基因转染后蛋白表达与细胞内定位.方法 PCR扩增IRX1全长1443 bp编码序列,将PCR扩增产物连接人pGEM-Teasy载体,经测序确认序列无误后,亚克隆入pEGFP-N1载体,构建pEG-FP-IRX1真核表达载体.采用Lipofectamine 2000转染SGC-7901胃癌细胞株,在荧光显微镜下观察外源性IRX1基因导入后在胃癌细胞内的表达与亚细胞定位.结果 成功构建有绿色荧光蛋白融合的IRX1真核表达载体,外源性IRX1基因在胃癌SGC-7901细胞中表达成功,在荧光显微镜下IRX1表达蛋白定位于细胞核内.结论 pEGFP-IRX1真核表达载体构建成功,并可在细胞内表达,这将为IRX1在胃癌内的功能研究奠定基础.     

IRX1真核表达载体的构建及在胃癌细胞SGC-7901中的定位

目的 构建pEGFP-IRX1真核表达载体,体外转导至SGC-7901胃癌细胞株,观察IRX1基因转染后蛋白表达与细胞内定位.方法 PCR扩增IRX1全长1443 bp编码序列,将PCR扩增产物连接人pGEM-Teasy载体,经测序确认序列无误后,亚克隆入pEGFP-N1载体,构建pEG-FP-IRX1真核表达载体.采用Lipofectamine 2000转染SGC-7901胃癌细胞株,在荧光显微镜下观察外源性IRX1基因导入后在胃癌细胞内的表达与亚细胞定位.结果 成功构建有绿色荧光蛋白融合的IRX1真核表达载体,外源性IRX1基因在胃癌SGC-7901细胞中表达成功,在荧光显微镜下IRX1表达蛋白定位于细胞核内.结论 pEGFP-IRX1真核表达载体构建成功,并可在细胞内表达,这将为IRX1在胃癌内的功能研究奠定基础.     

IRX1真核表达载体的构建及在胃癌细胞SGC-7901中的定位

目的 构建pEGFP-IRX1真核表达载体,体外转导至SGC-7901胃癌细胞株,观察IRX1基因转染后蛋白表达与细胞内定位.方法 PCR扩增IRX1全长1443 bp编码序列,将PCR扩增产物连接人pGEM-Teasy载体,经测序确认序列无误后,亚克隆入pEGFP-N1载体,构建pEG-FP-IRX1真核表达载体.采用Lipofectamine 2000转染SGC-7901胃癌细胞株,在荧光显微镜下观察外源性IRX1基因导入后在胃癌细胞内的表达与亚细胞定位.结果 成功构建有绿色荧光蛋白融合的IRX1真核表达载体,外源性IRX1基因在胃癌SGC-7901细胞中表达成功,在荧光显微镜下IRX1表达蛋白定位于细胞核内.结论 pEGFP-IRX1真核表达载体构建成功,并可在细胞内表达,这将为IRX1在胃癌内的功能研究奠定基础.     

IRX1真核表达载体的构建及在胃癌细胞SGC-7901中的定位

目的 构建pEGFP-IRX1真核表达载体,体外转导至SGC-7901胃癌细胞株,观察IRX1基因转染后蛋白表达与细胞内定位.方法 PCR扩增IRX1全长1443 bp编码序列,将PCR扩增产物连接人pGEM-Teasy载体,经测序确认序列无误后,亚克隆入pEGFP-N1载体,构建pEG-FP-IRX1真核表达载体.采用Lipofectamine 2000转染SGC-7901胃癌细胞株,在荧光显微镜下观察外源性IRX1基因导入后在胃癌细胞内的表达与亚细胞定位.结果 成功构建有绿色荧光蛋白融合的IRX1真核表达载体,外源性IRX1基因在胃癌SGC-7901细胞中表达成功,在荧光显微镜下IRX1表达蛋白定位于细胞核内.结论 pEGFP-IRX1真核表达载体构建成功,并可在细胞内表达,这将为IRX1在胃癌内的功能研究奠定基础.