枸杞对T,B淋巴细胞增殖和T细胞亚群变化的调节作用

本文报告了中药枸杞子（Ｌｙｃｉｕｍｂａｒｂａｒｕｍ，ＬＢ）对Ｔ、Ｂ淋巴细胞增殖和Ｔ细胞亚群的调节作用。实验结果指出，枸杞对未经活化的淋巴细胞没有诱导增殖作用，对于分别经ＰＨＡ和ＰＭＡ活化的淋巴细胞增殖有显著的促进作用（Ｐ〈０．０５），这表明枸杞对活化的Ｔ、Ｂ淋巴细胞增殖有促进作用。选择最大促进效应浓度的ＬＢ对ＰＨＡ活化的Ｔ淋巴细胞亚群的变化进行双标记检测。结果指出，和ＰＨＡ活化后的情况相比，ＬＢ的     

氧化苦参碱对淋巴细胞第二信使的影响

本文研究了氧化苦参碱对淋巴细胞胞浆游离钙、钙摄取功能、ｃＡＭＰ及ｃＧＭＰ水平的影响。结果表明：氧化苦参碱可使淋巴细胞浆游离钙水平上升，其钙离子来源于细胞内储存钙的释放。另外，氧化苦参碱可使ＰＨＡ活化的人扁桃体淋巴细胞的ｃＡＭＰ水平降低。我们推测它可能通过某种方式和细胞膜发生作用，从而影响细胞内钙和ｃＡＭＰ的水平，进而影响细胞功能。     

瘦素对人类外周血T淋巴细胞增殖作用的影响

目的：探讨瘦素（Leptin）对人外周血T淋巴细胞增殖作用的影响.方法：分离并培养人外周血T淋巴细胞,采用[^3H]TdR掺入试验方法,观察不同浓度Leptin的单独作用及其与PHA的协同作用对人外周血T淋巴细胞增殖作用的影响.结果：不同浓度Leptin的单独作用对人类外周血T淋巴细胞均无刺激增殖作用,但可协同PHA的刺激增殖作用,并在一定浓度范围内呈现剂量依赖性.结论：瘦素可协同PHA刺激人类外周血T淋巴细胞增殖.     

蛋白酶体抑制剂对T淋巴细胞增殖活化的影响

目的：探讨蛋白酶体（proteasome）抑制剂LAC（lactacystin）和β-LAC（β-lactacystin）对外周血T淋巴细胞增殖、活化的影响。方法： 以植物血凝素（phytohemagglutinin，PHA）作为刺激剂，经流式细胞仪检测T淋巴细胞增殖（BrdU掺入率），检测CD3+CD25+/CD3+及CD3+CD69+/CD3+细胞比例, 同时用RT-PCR检测蛋白酶体11S调节蛋白PA28及细胞因子IL-2 mRNA的表达。结果： （1）对预先活化的T淋巴细胞，LAC和β-LAC降低 T淋巴细胞BrdU掺入率（P＜0.05）；（2）LAC和β-LAC不影响T淋巴细胞CD69的表达（各时点，P＞0.05），而显著抑制T细胞表面抗原CD25表达（48 h、72 h，P＜0.05）；（3）与对照组相比，LAC和β-LAC明显下调T淋巴细胞PA28、IL-2 mRNA的表达(48 h、72 h，P＜0.05)。结论： LAC和β-LAC能够显著抑制T淋巴细胞增殖，这一效应与其抑制T淋巴细胞表面早期活化抗原CD25表达,下调PA28、IL-2 mRNA的表达有关。     

BTLA对调节性T细胞发育及功能的影响

目的 研究B和T淋巴细胞弱化因子(B and T lymphocyte attenuator,BTLA)对调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)发育和功能的影响.方法 构建在Treg中特异性敲除BTLA基因的小鼠模型,使用流式细胞术检测该模型小鼠中枢及外周各淋巴器官中T细胞外周环境稳态、T细胞的活...     

小鼠派氏集合淋巴结T细胞活化和调节性T细胞的分析

目的： 通过对小鼠派氏集合淋巴结（PPs）、肠系膜淋巴结（MLNs）和腹股沟淋巴结（ILNs）的比较性研究，以分析PPs T细胞活化和调节性T细胞的功能特点。 方法： 无菌分离小鼠PPs、MLNs和ILNs，分别制备单个淋巴细胞悬液，运用流式细胞术结合荧光抗体染色技术来检测CD3+T细胞、CD3+CD4+辅助性T细胞和CD4+CD25＋调节性T细胞的比例；用多克隆刺激剂刀豆蛋白A（Con A）、佛波醇酯（PDB）和离子霉素（Ion） 刺激活化淋巴细胞，随后运用流式细胞术结合双色荧光抗体染色技术来检测T细胞早期活化标志CD69的表达水平。 结果： PPs内CD3+T细胞所占比例明显低于MLNs和ILNs，然而CD4+CD25＋调节性T细胞的比例明显高于MLNs和ILNs；在没有加入刺激剂的培养条件下，PPs来源的T细胞CD69的表达水平明显高于MLNs和ILNs来源的T细胞，MLNs来源的T细胞CD69的表达水平明显高于ILNs来源的T细胞；而在加入Con A或者单纯PDB的培养条件下，PPs来源的T细胞却表现出低反应性；在加入PDB＋Ion的培养条件下，3者来源的T细胞CD69的表达水平没有明显差别。 结论： PPs内CD3+T细胞所占比例较低，CD4+CD25＋调节性T细胞的比例较高，这可能是PPs整体T细胞低反应性的原因之一；PPs来源T细胞的高基础活化率可能与其不断接触小肠来源的食物和共生菌抗原有关；PPs来源T细胞选择性地对某些刺激剂表现出低反应性，提示这群细胞处于某种程度的无能状态。上述特征的生物学意义在于避免因为不断接受小肠来源的食物和共生菌抗原的刺激而发生病理性炎症的同时还保留对病原微生物抗原的应答。     

苦参碱对慢性乙型肝炎患者T细胞亚群的影响

目的探讨苦参碱治射液对慢性乙型肝炎患者外周血T细胞免疫的影响。方法采用SAP法检测30例慢性乙型肝炎患者外周血T细胞亚群。结果有2例感染者达到完全应答,12例部分应答,16例无应答;苦参碱治疗后外周血CD3 T细胞较治疗前明显增高,应答组CD4 T细胞显著高于无应答组。结论用苦参碱治疗慢性乙型肝炎患者可以影响患者T细胞免疫,使患者CD4 T细胞水平明显增高。     

氧化苦参碱对LAK细胞活性的影响

ＬＡＫ细胞具有很强的广谱杀瘤作用，而氧化苦参碱具有较强的免疫抑制作用。本文研究了氧化苦参碱对ＬＡＫ细胞活力的影响，结果表明：氧化苦参碱可抑制ＩＬ－２对小鼠脾细胞的促增殖作用，并且对ＩＬ－２活化ＬＡＫ细胞杀伤Ｐ８１５的能力也有抑制作用。当ＩＬ－２（５００ｕ／ｍｌ）与２００μｇ／ｍｌ的氧化苦参碱共同孵育４ｄ后，可使ＬＡＫ细胞杀瘤能力（在效靶比为１００：１时）的８２．５％被抑制。同时氧化苦参碱本身对Ｐ８     

可溶性DC-SIGN对T淋巴细胞增殖及分泌细胞因子的调节作用

目的:研究可溶性DC-SIGN(sDC-SIGN)对T细胞增殖及分泌细胞因子的影响.方法:无菌分离人外周血单个核细胞,免疫磁珠负选法分离纯化T细胞.以Con A、anti-CD3/anti-CD28单抗与sDC-SIGN共培养T细胞,流式细胞术检测CD4+、CD8+T细胞的增殖,ELISA检测培养上清中细胞因子的含量.结果:培养72 h时,对于Con A诱导的T细胞增殖,sDC-SIGN使CD4+、CD8+T细胞的增殖率分别由(11.42±0.20)%和(12.15:±0.39)%下降到(2.61±0.05)%和(1.62±0.04)%(P＜0.05);sDC-SIGN使Con A诱导T细胞配体上清中IL-2、IL-10、IFN-γ、IL-17A的含量(ng/L)分别由680.27±5.86、29.37±0.44、101.82±0.03、60.46±0.34下降到348.54±0.91、22.45±0.05、63.77±0.01、23.74±0.03(P＜0.05),却使IL-6的含量(ng/L)由85.17±0.62增高到460.57±12.67(P＜0.05).对于anti-CD3/anti-CD28单抗诱导的T细胞增殖和细胞因子产生,sDC-SIGN也具有类似效应.此外,sDC-SIGN还下调Con A所刺激T细胞表达早期活化标志CD69.结论:sDC-SIGN可抑制T细胞增殖和影响细胞因子分泌,提示sDC-SIGN可能在T细胞介导免疫的调节中具有重要意义.     

风湿病患者肺功能降低与BTLA阳性细胞及调节性T细胞的数量减少有关

目的探讨B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)、调节性T细胞(Treg)与风湿病患者肺功能降低的关系。方法选取482例风湿病患者,包括类风湿性关节炎(RA)198例,强直性脊柱炎(AS)114例、干燥综合征(SS)102例、骨关节炎(OA)68例,应用肺功能仪检测患者肺功能水平,采用流式细胞术检测患者外周血B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)和调节性T细胞(Treg)表达。结果与正常组比较,风湿病患者肺功能降低,外周血BTLA、Treg表达降低;与风湿病BTLA、Treg正常组比较,BTLA、Treg异常组肺功能参数第1秒用力呼气容积(FEV1)、最大呼气流量(PEF)、50%肺活量位的最大呼气流量(FEF50)、FEF75降低(P0.05或P0.01);相关分析显示,肺功能参数用力肺活量(FVC)、最大通气量(MVV)、FEV1、FEF25、FEF50分别与BTLA、Treg呈正相关,FVC、FEV1、FEF50、FEF75分别与IgA、IgM呈负相关(P0.05或P0.01)。结论风湿病患者肺功能降低可能与BTLA、Treg表达降低,促使T细胞、B细胞过度异常活化有关。     

霉酚酸影响T细胞增殖及细胞因子表达的体外实验

目的： 探讨霉酚酸（MPA）或与抗B7-1单克隆抗体联用对T细胞增殖的影响及其机制。 方法： 体外建立T细胞反应系统，BrdU掺入法检测T细胞增殖，RT-PCR及ELISA法检测细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-10的mRNA及蛋白表达水平。 结果： （1）50 μmol/L MPA能明显抑制T细胞增殖，与对照组相比，差异显著（P＜0.01)。（2）MPA可抑制IL-2、IFN-γ表达，增强IL-10表达。IL-2蛋白表达水平在MPA 组明显低于对照组(42.73 ng/L±14.64 ng/L vs 99.70 ng/L±9.15 ng/L，P＜0.01)；IFN-γ蛋白表达水平在MPA组明显低于对照组（7.87 ng/L±4.22 ng/L vs 82.42 ng/L±25.55 ng/L，P＜0.05)；与对照组比较，MPA明显增强IL-10表达水平（770.95 ng/L±126.85 ng/L vs 545.71 ng/L±22.45 ng/L，P＜0.05）；联用抗B7-1单抗能加强此效应（941.90 ng/L±56.61 ng/L vs 770.95 ng/L±126.85 ng/L，P＜0.05)。（3）IL-2、IFN-γ mRNA表达量在MPA组均明显低于对照组（0.74±0.10 vs 1.17±0.15，0.52±0.05 vs 0.75±0.12，P＜0.01）；IL-10 mRNA表达水平在MPA处理组与对照组间差异不明显，但与抗B7-1单抗联用后，其表达水平高于单用MPA组（1.28±0.06 vs 0.84±0.09，P＜0.01）。 结论： MPA可改变细胞因子表达谱，促使Th1亚群向Th2亚群偏移可能是其发挥免疫负调节作用的机制之一；联用抗B7-1单抗可能有一定协同效应。     

间充质干细胞在T细胞免疫反应中的调节作用

间充质干细胞(MSCs)独特的免疫调节作用以T细胞为主,在混合淋巴细胞反应中,通过周期阻滞抑制T细胞增殖,但不引起T细胞凋亡增加、活化受抑。同时MSCs还能降低反应体系中的CD8+T细胞和Th1细胞,升高Th2细胞以抑制炎症反应,从而在T细胞介导的自身免疫性疾病中发挥治疗作用。     

Effects of gastric cancer cells on lymphocyte proliferation

Lack of lymphocyte infiltration into gastric cancer tissue appears to be an ominous prognostic indicator. The effects of gastric cancer cells on PHA-induced lymphocyte proliferation were studied. Peripheral lymphocytes were co-cultured for 72 hours with either gastric cancer cells or normal mucosal cells. Pairs of cancerous and normal mucosal cells from stomachs of eight patients, were separately co-cultured with peripheral lymphocytes either from patients or from normal volunteers. The degree of PHA-induced lymphocyte proliferation was measured by 3H-thymidine incorporation. The lymphocyte proliferation was inhibited by the presence of either gastric cancerous or normal mucosal cells in a dose-related manner. The lymphocytes from the normals proliferated twice as much as did the lymphocytes from the patients. The isotope incorporation occurred in lymphocytes rather than in gastric cells since the later incorporated insignificant amounts of isotope. There was no difference between gastric cancerous or normal mucosal cells inhibiting the proliferation of either normal or patients' lymphocytes (p greater than 0.05). In conclusion, gastric cancerous cells (up to 10(6)/ml) have no enhanced inhibition on lymphocyte proliferation when compared with normal gastric mucosal cells.     

基于细胞因子分泌对人混合淋巴细胞反应中的T淋巴细胞进行测定和纯化

目的:对同种异体外周血单个核细胞(PBMNCs)刺激后分泌细胞因子的T 淋巴细胞进行测定和纯化,为研究介导同种异体反应的T淋巴细胞提供新的途径。方法: 利用新颖的细胞因子分泌检测方法(CKSA)从单细胞水平定量测定人混合淋巴细胞反应中分泌IFN-γ,IL-4 和IL-10的T 淋巴细胞; 对分泌IFN-γ 的T细胞进行磁性纯化。结果: 同种异体PBMNCs刺激后检测到分泌IFN-γ 的T淋巴细胞水平明显升高(1.12%±0.13%),而分泌IL-4 和IL-10的T淋巴细胞则无升高(分别为0.12%±0.03%和0.10%±0.03%);分泌IFN-γ 的T淋巴细胞可以被进一步纯化(93.8±22.1)倍。结论: 利用CKSA从单细胞水平定量测定同种异体PBMNCs刺激后分泌IFN-γ 的T淋巴细胞水平显著升高,这些细胞可以被有效地纯化。     

胎盘蛋白14增强调节性T细胞诱导滤泡调节性T细胞比例增加的作用及机制研究

目的：研究胎盘蛋白14（PP14）增强调节性T细胞（Treg细胞）诱导滤泡调节性T细胞（Tfr细胞）增殖的作用及机制。方法：分离健康志愿者外周血中的淋巴细胞;磁珠分选淋巴细胞中的Treg细胞;流式检测CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞比例及其表面CTLA-4和HLA-G的表达;ELISA检测上清中IL-10和TGF-β的浓度;采用Transwell小室进行Treg细胞和淋巴细胞的共培养实验;流式检测淋巴细胞中CD4⁺CXCR5⁺Foxp3⁺Tfr细胞的比例。结果：相对于对照组,PP14组Treg细胞的比例增加了1.26倍（t=4.748,P=0.009 0）,而其表面CTLA-4和HLA-G的表达与对照组没有显著的统计学差异（t=0.108,P=0.918 6;t=0.439,P=0.682 8）;ELISA的结果显示相对于对照组,PP14组Treg细胞培养上清中IL-10和TGF-β的浓度分别上升了3.66倍和3.86倍（t=6.817,P=0.002 4;t=7.537,P=0.001 7）;共培养实验显示PP14能够增强Treg细胞诱导Tfr细胞比例的增加,相对于共培养组,PP14组Tfr细胞比例增加了2.71倍（t=4.815,P=0.008 6）,IL-10和TGF-β的阻断均能部分阻断这种增强作用（t=4.868,P=0.008 2;t=3.670,P=0.021 4）。结论：PP14能够通过分泌IL-10和TGF-β,显著增强Treg细胞诱导Tfr细胞比例的增加,这为不明原因复发性流产的治疗提供了一个新的靶点。     

Dual effect of ciliary body cells on T lymphocyte proliferation

The interaction between organ-resident cells from the anterior uvea of the eye and T helper (Th) cells was investigated. Cells from Lewis rat ciliary body processes (CB cells), grown in tissue culture using an explant technique, could be induced to express major histocompatibility complex class II (Ia) antigens by incubation with rat interferon-gamma. Ia+ CB cells only poorly functioned as antigen-presenting cells (APC) for a syngeneic, uveitogenic Th cell line specific for the retinal soluble antigen (SAg). Moreover, if added to an Ag-driven lymphocyte proliferation assay in the presence of conventional APC, the rat CB cells had an inhibiting effect on Th proliferation. This inhibitory activity was not species specific, since similar effects were observed with bovine and human ciliary epithelial cells. The suppressive activity of CB cells was composed of a soluble factor, as well as a membrane-associated inhibitor. The soluble activity did not appear to be related to transforming growth factor-beta (TGF-beta), since no reversal of inhibition by a neutralizing antibody to TGF-beta was found. Part of the soluble inhibitory activity could be reversed by indomethacin treatment. The membrane-associated component was trypsin sensitive, suggesting a protein molecule. After abrogation of the inhibitory capacity by trypsin treatment and fixation by glutaraldehyde, CB cells effectively presented SAg to Th cells. These data suggest that CB cells are capable of mediating both Ag presentation and inhibition of Th cell proliferation.     

黄连素对T淋巴细胞活化和增殖的抑制作用

目的:研究黄连素(Ber)对T细胞体外活化和增殖的影响及作用机制。方法:正常人外周血全血培养,以植物血凝素(PHA)或佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激活化淋巴细胞,双荧光染色及溶血获取有核细胞后,以流式细胞仪分析T细胞表达活化抗原CD69和CD25的水平,并以碘化丙锭染色分析细胞周期分布,7-AAD活染分析细胞死亡率。结果:浓度为100μmol/L和50μmol/L的Ber对PDB+Ion或PHA激活T细胞表达CD69有明显抑制,而25μmol/L的Ber抑制效应无显著性;随时间延长,对CD69表达的抑制程度下降;对于CD25表达,上述3个浓度的Ber抑制作用均有显著性,且呈剂量依赖性。同时,这3个浓度的Ber均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G₂/M,对细胞周期的抑制作用没有时相特异性。活染分析显示Ber对淋巴细胞无明显细胞毒性。结论:Ber通过干扰早期活化信号转导通路而抑制T细胞活化和增殖,发挥其免疫抑制作用。     

染料木黄酮对小鼠T细胞体外活化及增殖的影响

目的:研究染料木黄酮(Gen)对T细胞体外活化及增殖的影响,并探讨其机制。方法:利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测多克隆刺激剂佛波醇酯(PDB)或刀豆蛋白(ConA)刺激下小鼠T细胞表达活化抗原CD69、CD25的百分率;以羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)标记技术结合流式细胞术,分析PDB＋Ion(Ionomycin)或ConA刺激下T细胞增殖相关指数。结果:Gen对ConA刺激组T细胞CD69、CD25表达有明显抑制作用(P＜0.05),且呈剂量依赖关系,而对PDB刺激组T细胞CD69及CD25表达的抑制需要较高浓度(＞50μmol/L);Gen无论对ConA或PDB＋Ion刺激组T细胞增殖均有显著抑制作用(P＜0.01),且均呈剂量依赖关系。结论:Gen可明显抑制多克隆刺激剂诱导的T细胞体外活化及增殖,其作用机制可能是抑制早期活化相关蛋白酪氨酸激酶活性。     

逆转录病毒载体介导的IL-4基因修饰对HL-60细胞增殖及T细胞功能的影响

目的观察ＩＬ－４基因转染对ＨＬ－６０增殖及Ｔ细胞功能的影响及其可能机制。方法采用逆转录病毒载体介导基因转染法将人ＩＬ－４基因导入髓系白血病细胞ＨＬ－６０,观察高表达外源性ＩＬ－４基因ＨＬ－６０株的增殖反应及其诱导的正常人ＰＢＭＣ增殖,ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ基因表达及肿瘤特异性ＣＴＬ杀伤活性。结果ｒＩＬ－４或瘤细胞产生的ＩＬ－４早期促进ＨＬ－６０细胞增殖,培养５天后则明显抑制其增殖;与ｒＩＬ－４处理的ＨＬ－６０细胞比较,ＩＬ－４基因修饰的ＨＬ－６０细胞明显促进正常人ＰＢＭＣ增殖并合成ＩＬ－２、ＩＬ－６及ＩＦＮ－γｍＲＮＡ,其诱导的特异性ＣＴＬ杀伤活性明显高于野生型ＨＬ－６０、仅导入载体的ＨＬ－６０和加入ｒＩＬ－４共育的ＨＬ－６０细胞诱导者。结论ＩＬ－４基因转染在影响ＨＬ－６０细胞增殖和分化过程的同时,可能促进某些抗原（如ＭＨＣⅠ类抗原）的抗原性,从而有利于机体建立有效的抗肿瘤免疫反应。     

红霉素衍生物抑制体外培养的人T淋巴细胞株增殖

目的：观察红霉素（EM）及其衍生物对人T淋巴细胞增殖及细胞凋亡的影响，探讨红霉素衍生物抗炎作用的部分机制。方法：用MTT法检测4种无抗菌活性的红霉素衍生物对人T淋巴细胞增殖的作用，从中选出活性突出的化合物，利用流式细胞仪和TUNEL方法观察其对细胞凋亡的影响。结果：红霉素衍生物-Ⅰ抑制T淋巴细胞增殖活性优于红霉素，其IC50值分别为（425.6±32.1）μmol/L和（606.3±35.4）μmol/L（P<0.01）；红霉素衍生物-Ⅰ（3-30 mg/L）和红霉素 （30-100 mg/L）可诱导T淋巴细胞凋亡，与剂量呈正相关。红霉素衍生物-Ⅰ在100 mg/L时引起细胞死亡。结论：无抗菌活性的红霉素衍生物的抗炎活性与其抑制T淋巴细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用可能有一定关联。