放射治疗前后肺癌患者外周循环癌细胞的变化

目的:通过实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应法检测放射治疗前后肺癌患者外周循环癌细胞(Circulating tumour cells,CTCs)的改变,评估其作为新的疗效评定标准的可行性.方法:分别于放疗前后采集肺癌患者(n=30)外周血标本,同时摄胸片或CT扫描,并且计算肿瘤最大直径及垂直径的乘积.所有患者均接受原发灶及纵隔区域的常规分割放疗.运用fqRT-PCR法检测放射治疗前后患者外周血中CK19mRNA拷贝数的改变.结果:与放疗前相比,放疗后患者外周血CK19mRNA水平显著降低(5.093 2±1.062 8与4.249 3±0.832 3,t=3.192,P=0.007).放疗前后CK19mRNA水平变化与肺癌的组织类型(鳞/腺癌与小细胞癌)有密切关系(0.5389±1.062 8与1.682 6±0.9467,t=2.145,P=0.051),同时与癌肿分化等级(高/中分化与低分化)间也存在一定关系(0.502 4与1.527 1,t=2.017,P=0.065).放疗前后CK19mRNA水平变化与瘤负荷改变间存在相关性(r=0.575,P=0.025).放疗前阳性率为80%(24/30),放疗后为53%(16/30),有8例病人经放疗后外周血CK19mRNA表达转为阴性.结论:对于播散性癌细胞,仅行放疗是不够的,还需施以其它一些全身性辅助治疗措施,才可能取得较好疗效.可将治疗前后外周血中CTCs变化来作为实体瘤新的疗效评判标准.对外周血等处的播散癌细胞进行检测对肿瘤分期及预后评估具有参考价值.     

非小细胞肺癌患者术后化疗过程中外周血CK19 mRNA表达水平的变化及其临床意义

目的 探讨定量检测外周血CK19 mRNA表达水平在判定术后辅助治疗疗效及早期预测肿瘤复发中的价值.方法 接受以根治为目的的手术治疗的非小细胞肺癌(NSCLC)患者共26例,分别于术后化疗开始前、第1、2、3周期化疗结束后第3周各采集外周血标本.对照组为健康体检者(n=20).运用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应法(fqRT-PCR)检测各时点外周血中CK19 mRNA水平.结果 化疗前患者外周血CK19 mRNA表达水平显著高于第1、2、3周期化疗后.阳性率从化疗前的84.6%分别下降至46.2%、38.5%及46.2% (P=0.004 6).术后有临床转移/复发患者外周血CK19 mRNA表达水平显著高于无临床转移/复发者(P=0.019).结论 术后定期监测外周血CK19 mRNA表达水平可作为判定术后辅助治疗疗效的重要标准.术后动态监测有助于预测NSCLC复发或转移.化疗难以完全消灭外周循环癌细胞,需寻找新的治疗方法或靶点.     

CEA实时荧光定量RT-PCR法检测非小细胞肺癌患者围手术期外周循环癌细胞的临床意义

目的:评价手术操作促进肺癌细胞入血的可能性,分析围手术期外周循环癌细胞(CTCs)的变化与常见临床病理指标间的关系. 方法:接受根治性手术的原发性非小细胞肺癌(NSCLC)患者23例,按预定的结扎血管顺序术前将病例任意分为先结扎肺静脉组和先结扎肺动脉组. 分别采集其术前1 d、术中及术后第7日外周血标本. 选择10例需手术治疗的肺部良性疾病患者作为对照. 以20例健康人作为阴性对照. 以癌胚抗原(CEA)作为检测标志物,运用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(fqRT-PCR)法定量检测患者CTCs的存在状况. 结果:围手术期外周血CEA mRNA浓度变化呈上升趋势,术后第7日显著高于术前1 d(P=0.000)及手术当天(P=0.000). 肺腺癌术前CEA mRNA明显高于肺鳞癌(P=0.0375). 先结扎肺静脉组与先结扎肺动脉组比较存在明显差异(P=0.045). 术前T-分期与围手术期CEA测值间亦存在密切关系(P=0.025). 术前阳性率为43.5%(10/23),而手术对照组及健康组均为阴性. 结论:可手术切除的NSCLC患者手术前就可能存在全身癌细胞的播散. 肺癌细胞主要在术后逐渐释放入外周循环. 外科手术操作可促使癌细胞术中入血,若先结扎肺静脉可一定程度阻止癌细胞释放.     

荧光定量RT-PCR法监测肺癌患者化疗前后外周血淋巴细胞mdr1 mRNA的变化

目的检测肺癌患者化疗前后外周血淋巴细胞(PBL)中多药耐药基因(mdr1)表达水平,探讨其与化疗疗效的相互关系。方法分别于化疗开始前及化疗周期结束后第3周收集肺癌患者(n=32)外周血标本。采集标本的同时行胸片或胸部CT扫描,并计算肿瘤最大径及垂直径的乘积。运用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(fqRT-PCR)法检测PBL中mdr1基因的表达。结果与化疗前相比,化疗后PBL中mdr1 mRNA水平上升显著[(3.881 8±0.828 0)与(4.3166±0.923 1),t=-4.207,P=0.000]。化疗前后外周血mdr1 mRNA水平变化与肿瘤大小改变间亦存在负相关关系(r=-0.389,P=0.028)。化疗前小细胞肺癌(SCLC)与非小细胞肺癌(NSCLC)患者PBL中mdr1转录本水平间存在显著性差异,SCLC明显低于NSCLC[(2.831 4±0.398 4)与(4.231 9±0.603 4),t=6.101,P=0.000]。结论NSCLC及SCLC在化疗耐药机制上可能存在差异性。检测患者化疗前后PBL中mdr1 mRNA水平对判定化疗疗效有一定的指导意义,可在一定程度上指导化疗方案的修订。     

胃癌患者外周血细胞角蛋白20mRNA的检测及临床意义

目的　采用逆转录聚合酶链反应检测进展期胃癌患者外周血中细胞角蛋白 2 0 (cytokeratin 2 0 ,CK2 0 )mRNA的表达 ,以检测胃癌外周血循环中微转移的情况 ,并比较CK2 0mRNA的阳性检出率与胃癌患者的性别、年龄、肿瘤部位和胃癌组织的分化程度的关系。方法　 6 0例胃癌患者和 2 0例慢性胃炎患者分别作为试验组和对照组。采用密度梯度离心法分离获取全部病例外周静脉血中的单个核细胞 ,随后应用逆转录聚合酶链反应的方法检测其中的CK2 0mRNA表达情况。结果　试验组中有 32例患者外周血循环中有阳性表达 ,阳性率为 5 3.3% ;而在对照组患者外周血中无 1例标本检出细胞角蛋白 2 0mRNA ;两组间的阳性率差异具有显著性 (P <0 .0 0 5 ) ;癌细胞的检出率与胃癌组织的分化程度呈正相关 (P <0 .0 5 ) ,而与胃癌患者的性别、年龄和肿瘤部位等因素无明显相关 (P >0 .0 5 )。结论　CK2 0mRNA可作为标志物用于检测胃癌的血行转移 ;CK2 0mRNA的阳性检出率与胃癌组织的分化程度具有相关性。     

肺癌患者外周血CK19 mRNA和CEA mRNA表达的检测及临床意义

目的探讨CK19 mRNA、CEA mRNA能否作为判断肺癌血源性微转移的参考指标.方法取67例肺癌患者及37例健康体检者外周血,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测上述两个指标的表达.结果肺癌组外周血中CK19 mRNA阳性率(57.6%)及CEA mRNA阳性率(52.2%)均显著高于健康对照组的2.7%和5.4%(均P＜0.01),两个指标联合检测能将对肺癌微转移诊断的灵敏度提高至76.1%;CK19 mRNA的表达与临床分期相关(P＜0.01),CEA mRNA的表达与组织类型相关(P＜0.05).结论 CK19 mRNA和CEAmRNA可作为判断肺癌血源性微转移的参考指标,两者联检可提高诊断价值.     

肺癌患者细胞角蛋白19 mRNA的表达及其临床意义

目的 探讨细胞角蛋白19（CK19） mRNA在肺癌患者外周血中的表达及其临床价值。方法 采用半定量逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）法测定4JD例肺癌、10例肺良性病变、10例健康对照者外周血CKl9mRNA的表达。结果 肺癌患者CKl9mRNA阳性率为47．5％（19／40），明显高于肺良性病变组（P〈0．05）和健康对照组（P〈0．01），且与临床分期有关，与肿瘤病理类型无关。结论 肺癌患者外周血CK19 mRNA检测对肺癌的早期诊断、预后评估有意义。     

大肠癌患者外周血细胞角蛋白-20信使核糖核酸与白细胞介素-10联合检测的临床意义

目的 联合检测大肠癌患者外周血细胞角蛋白－20信使核糖核酸（CK－20 mRNA)与血浆中白细胞介素－10（IL－10）,并评价其临床意义。方法 应用RT－PCR检测大肠癌患者外周血CK－20mRNA；应用ELISA检测其血浆IL－10浓度。结果 对照组25例健康查体者，其外周血中未见CK－20mRNA的表达；观察组46例大肠癌患者，25例外周血中CK－20mRNA表达阳性。大肠癌患者外周血CK－20mRNA的表达与Dukes分期关系为：A组20．0％（1／5），B期27．3％（3／11），C期61．1％（11／18），D期83．3（10／12）；其中C，D期与A，B期比较差异有高度显著性（P＜0．01）。大肠癌患者血浆IL－10浓度明显高于健康查体者，且与Dukes分期显示相关。外周血CK－20mRNA阳性表达的大肠癌患者血浆IL－10水平高于阴性者。结论 联合检测大肠癌患者外周血CK－20mRNA与IL－10，掌握检测大肠癌转移的相关指标，可以及时全面地了解大肠癌患者病情进展情况。     

外周血差异显示编码3mRNA定量检测在前列腺癌患者诊断与治疗监测中的初步应用

目的探讨外周血差异显示编码3（DD3）mRNA定量检测在前列腺癌诊断和治疗监测中意义。方法用荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ—RT—PCR）方法对35例未治疗前列腺癌、58例内分泌治疗后前列腺癌、59例良性前列腺增生患者和10例健康男性志愿者外周血DD3mRNA含量进行定量检测,并对DD3mRNA诊断及疗效监测价值进行评价。结果未治疗前列腺癌组外周血DD3mRNA含量明显高于治疗后前列腺癌组、前列腺增生组和健康男性志愿者组,差异具有统计学意义（P〈0．01）。未治疗前列腺癌患者随着临床分期增加,外周血DD3mRNA含量也增高,差异具有统计学意义（P〈0．01）。当临界值为846拷贝／ml时,DD3mRNA曲线下面积为0．822（95％CI：0．725～0．919）,灵敏度、特异度分别为74．3％、89．8％。结论外周血DD3mRNA定量检测是前列腺癌诊断的良好指标,可作为内分泌治疗过程疗效监测的指标。     

大肠癌患者外周血中癌细胞角蛋白20的检测

目的 :以逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测外周血大肠癌细胞 ,探讨大肠癌患者外周血中癌细胞存在的临床意义。方法 :应用RT PCR方法检测 47例不同Dukes分期结肠癌患者及其肝转移患者外周血中大肠癌细胞角蛋白 2 0 (CK2 0 ) ,并以大肠癌组织 (2 0例 )和正常健康人外周血 (2 0例 )为对照。结果 :正常健康人外周血中未见CK2 0mRNA表达 ,大肠癌患者外周血中CK2 0mRNA检出率达 40 4% (19/ 47) ,DukesB ,C ,D期患者外周血CK2 0mR NA检出率分别为 2 5 0 % (5 / 2 0 ) ,41 2 % (7/ 17)和 87 5 % (7/ 8) ,(P <0 0 5 )。肝转移患者CK2 0mRNA检出率为87 5 % (7/ 8) ,无肝转移患者检出率为 30 8% (12 / 39) (P <0 0 1)。结论 :CK2 0可作为肿瘤标志物 ,用于检测外周血中的大肠癌细胞 ,预测肿瘤复发及转移 ,识别高危患者     

肿瘤复发患者化疗前后血清中CRP的变化

目的:初步探讨肿瘤复发患者化疗前后血清中CRP变化的临床意义.方法:利用散射免疫比浊法定量测定患者血清中的CRP值.34例肿瘤复发患者为试验组,22例术后辅助化疗患者设为对照组.结果:83.25%的肿瘤复发患者CRP升高.辅助化疗患者化疗前后的CRP改变不明显;肿瘤复发组化疗有效者的CRP较化疗前明显下降,而化疗无效者较化疗前CRP升高.肿瘤复发组化疗无效者,中位生存时间为8个月.结论:化疗疗效与患者血清CRP变化呈负相关,化疗后CRP升高提示预后不良,CRP可作为肿瘤复发患者的诊断、化疗疗效及预后判断的参考指标.     

小细胞肺癌患者化疗前后NSE、ProGRP含量与化疗所致癌细胞凋亡的相关性

目的:研究小细胞肺癌(SCLC)患者化疗前后NSE、ProGRP含量与化疗所致癌细胞凋亡的相关性。方法:选择在我院接受EP方案化疗的SCLC患者,化疗前和化疗后3个周期时,分别采集血清并测定NSE、ProGRP含量,按照化疗后血清中NSE、ProGRP含量的四分位数由低到高将患者分为NSE和ProGRP-1组、-2组、-3组、-4组;采集肿瘤病灶并测定凋亡分子的mRNA表达量。结果:化疗后,SCLC患者血清中NSE、ProGRP的含量显著低于化疗前,肿瘤病灶中Fas、FasL、Caspase-8、Caspase-3、pULK、PI3KC3的mRNA表达量显著高于化疗前;NSE和ProGRP-1组、-2组、-3组病灶中Fas、FasL、Caspase-8、Caspase-3、pULK、PI3KC3的mRNA表达量显著高于NSE和ProGRP-4组,NSE和ProGRP-1组、-2组病灶中Fas、FasL、Caspase-8、Caspase-3、pULK、PI3KC3的mRNA表达量显著高于NSE和ProGRP-3组,NSE和ProGRP-1组病灶中Fas、FasL、Caspase-8、Caspase-3、pULK、PI3KC3的mRNA表达量显著高于NSE和ProGRP-2组。结论:小细胞肺癌患者化疗后血清中NSE、ProGRP的含量显著降低且与化疗所致癌细胞凋亡密切相关。     

55例大肠癌患者化疗前后淋巴细胞亚群变化

目的分析55例大肠癌患者化疗前后21项淋巴细胞亚群变化情况。方法用三标荧光抗体对55例大肠癌患者化疗前后外周血进行标记,流式细胞仪检测并分析。结果CD3^＋、CD3^＋CD8^＋、NKT（CD3^＋CD16^＋或56^＋）、CD29^＋、CD25^＋、CD3^＋HLADR^＋细胞化疗前后差异有统计学意义（P〈0．05）;而CD3^＋CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋比值、NK（CD3^＋CD16^＋或56^＋）、CD19^＋、CD4^＋CD29^＋、CD4^＋CD25^＋、HLADR^＋、CD3^＋HLADR^-、45RA^＋、45RO^＋、CD4^＋CD45RO^＋、CD4^＋CD45RA^＋、CD28^＋、CD8^＋CD28^-和CD8^＋CD28^＋细胞化疗前后变化无统计学意义（P〉0．05）。结论FOLFOX4方案化疗4周期后第12天大肠癌患者外周血淋巴细胞较化疗前未显示明显细胞免疫抑制状态。     

血浆EBV-DNA在中晚期鼻咽癌诱导化疗前后水平变化

目的比较鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)患者诱导化疗前后血浆EB病毒DNA(Epstein Barr Virus DNA,EBV-DNA)水平的变化,评价EBV-DNA水平与诱导化疗的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应测定38例鼻咽癌患者诱导化疗前和(2程TP方案:紫杉醇135～175mg/m2d1+DDP 80mg/m2d2,4周一程)诱导化疗后2周外周血浆中的EBV-DNA水平。结果 NPC诱导化疗前EBV-DNA阳性率为100%,中位拷贝数为9.35x103copy/mL;治疗后阳性率为38.4%,中位拷贝数为2.08x103copies/mL;NPC患者治疗前及治疗后组血浆游离EBV-DNA水平及阳性率有明显的差异(P均<0.05)。结论 NPC患者血浆EBV-DNA水平在诱导化疗后有明显的下降。     

不同类型消化道肿瘤患者化疗前后 T 淋巴细胞亚群变化及其意义

目的：探讨不同类型消化道肿瘤患者在化疗前后T细胞亚群总T细胞（CD3＋）、T辅助淋巴细胞（CD4＋）、T抑制淋巴细胞（CD8＋）、CD4＋/CD8＋比值的变化情况及临床意义。方法应用流式细胞术分析不同类型消化道肿瘤患者在化疗前后及对照组CD3＋、CD4＋、CD8＋细胞百分率和CD4＋/CD8＋比值。结果消化道肿瘤患者化疗前CD3＋、CD4＋、CD4＋/CD8＋比例均低于对照组,CD8＋高于对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05）;结肠癌和胃癌患者化疗后CD3＋、CD4＋百分比较化疗前均增高,CD8＋百分比降低,差异均有统计学意义（P〈0.05）。直肠癌患者化疗后CD3＋百分比较化疗前增高,CD8＋百分比降低,差异有统计学意义（P〈0.05）,CD4＋、CD4＋/CD8＋比值差异无统计学意义（P〉0.05）。结论通过检测消化道肿瘤患者T淋巴细胞亚群化疗前后的变化,对了解机体的免疫动态有着重要的临床意义。     

肺癌患者化疗前后外周血淋巴细胞MRP1的表达

目的:探讨肺癌患者化疗前后外周血淋巴细胞(PBL)多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达,寻找检测肺癌多药耐药的新途径。方法:应用流式细胞免疫学方法,检测10 例健康人和30 例肺癌患者化疗前后PBL的MRP1表达,并比较了肺癌患者化疗前后PBL的MRP1表达;根据化疗疗效评价标准将肺癌患者分为有效组和无效组,比较了两组患者化疗前后PBL的MRP1表达。结果:健康人PBL的MRP1表达为(2.01±0.68)%;肺癌患者化疗前与化疗后PBL的MRP1表达相比差异有统计学意义( t=-4.051, P<0.05);有效组化疗前后PBL的MRP1表达差值与无效组的比较差异无统计学意义( t=-1.145, P>0.05)。结论:(1)流式细胞免疫法检测PBL的MRP1表达具有简便、可操作性;(2)化疗后肺癌患者PBL的MRP1表达与化疗前相比有增高趋势,提示存在化疗后的继发耐药;(3)PBL的MRP1表达与化疗疗效无关,尚不能预测化疗疗效。     

应用纳米免疫磁珠检测早期肺癌循环血中肿瘤细胞

免疫纳米磁珠的诞生为肿瘤细胞生物诊断提供了先进的分离手段。本研究旨在探讨建立一种应用纳米免疫磁性分离技术(IMS),通过外周血液能快速、灵敏、简便地检测早期肺癌患者循环肿瘤细胞(CTC)的方法,以利于发现早期肺癌患者隐性微转移、监测术后患者肿瘤复发与转移、评估患者预后     

上皮性卵巢癌患者化疗前后血清uPA含量变化及其对预后的影响

目的 探讨上皮性卵巢癌患者化疗前及化疗后血清中纤溶酶原激活剂(uPA)含量的变化与预后的相关性。方法 107例卵巢恶性肿瘤患者行手术初治后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测化疗前及化疗后血清中uPA的含量。102例相同年龄段的正常健康妇女作为对照。结果 卵巢癌患者化疗前及化疗后血清中uPA的含量均明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。卵巢癌患者化疗前血清中uPA的水平高于化疗后,两者的差异有统计学意义(P＜0.05)。单因素生存分析中,化疗前uPA水平、化疗后uPA水平、FIGO分期、残余瘤灶直径大小和有无淋巴结转移是影响卵巢癌患者无进展生存期(progression-free survival, PFS)和总生存期(overall survival, OS)的相关因素(P＜0.05)。Cox比例风险模型分析显示,化疗前uPA水平和有无淋巴结转移与预后明显相关(P＜0.05)。结论 卵巢癌患者化疗前后血清中uPA水平高于正常人群,且其水平高低与FIGO分期、淋巴结转移及残存瘤灶大小高度相关。化疗前血清中uPA含量可作为评价患者PFS和OS的独立预后因子。