幽门螺杆菌感染与胃癌及癌前病变中c-myc、P53基因表达的关系

目的:研究幽门螺杆菌感染在胃癌和胃癌前病变中的作用机制及其与c-myc、P53表达之间的相关性。方法:选取胃镜活检标本130例(胃癌32例,癌前病变80例,慢性浅表性胃炎18例),快速尿素酶试验和Warthin-Starry染色检测Hp,免疫组化SABC法检测c-myc、p53基因蛋白的表达。结果:胃癌和胃癌前病变组Hp感染(+)率均高于慢性浅表性胃炎组,P<0.05有显著性差异;p53和c-myc的阳性表达率在胃癌和胃癌前病变组明显高于慢性浅表性胃炎组,P<0.05有显著性差异;Hp感染(+)组p53、c-myc基因蛋白率高于Hp感染(-)组,P<0.05有显著性差异。结论:Hp感染促进了胃黏膜癌基因c-myc的异常表达和抑癌基因p53的突变,从而诱导胃粘膜癌变。     

盐酸小檗碱抑制胃癌前病变细胞p53表达的实验研究

目的 :研究盐酸小檗碱对实验性大鼠胃癌前病变细胞凋亡调控基因 p5 3表达水平的影响。方法 :采用N 甲基 N 亚硝基胍 (MNNG)饮水法建立大鼠胃癌前病变模型 ,用盐酸小檗碱小、中、大三种剂量干预治疗 ,运用TUNEL(末端DNA标记法 )检测凋亡率 (AI) ,免疫组化技术检测细胞中mtp5 3(突变型 p5 3)蛋白表达 ,逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)检测wtp5 3mRNA(野生型 p5 3)水平。结果 :盐酸小檗碱能明显提高癌前病变细胞的凋亡率 ,三种剂量组与模型组比均P <0 .0 5 ,并使mtp5 3蛋白水平下调 ,wtp5 3mRNA表达水平上调 ,其中以大剂量组效果尤为显著 ,与模型组比P <0 .0 1。结论 :盐酸小檗碱能明显提高胃癌前病变细胞凋亡率 ,其机制可能为通过调控p5 3基因的表达而实现的。     

亚砷酸钠对胰岛细胞中p53、mdm2和Kras基因及蛋白表达的影响

目的：探讨砷对大鼠胰岛β细胞（INS-1）p53、mdm2和Kras基因和蛋白表达的影响。方法荧光实时定量PCR法检测亚砷酸钠对大鼠胰岛β细胞中野生型p53（Tp53）、mdm2和Kras基因表达的影响,Western blot检测亚砷酸钠对大鼠胰岛β细胞突变型p53和mdm2蛋白表达的影响。结果亚砷酸钠作用于INS-1细胞后,Tp53基因水平降低,mdm2、Kras基因水平升高;突变型p53和mdm2蛋白表达增加。结论亚砷酸钠可使INS-1细胞中抑癌基因Tp53向突变型p53转变,癌基因mdm2和Kras的水平升高。     

和胃反流康对胆汁反流性胃炎大鼠胃黏膜p38MAPK蛋白及COX-2mRNA表达的影响

目的 利用分子生物学技术,通过体内实验,观察和胃反流康对实验性胆汁反流性胃炎模型大鼠胃黏膜p38MAPK蛋白及胃黏膜细胞COX-2mRNA表达的影响.方法 将60只SPF级大鼠随机分为6组,即空白组、模型组、和胃反流康高、中、低剂量组(54.6 g·kg-1,27.3 g·kg-1,13.7 g·kg-1)、阳性药物(吗丁啉)组,每组10只.配制反流液,除空白组外,其余各组均采用灌胃方式建立胆汁反流性胃炎大鼠模型.分别通过Western blot法及实时荧光定量PCR法,检测大鼠胃窦部胃黏膜组织中p38MAPK蛋白及胃黏膜细胞COX-2mRNA的表达,观察和胃反流康对胆汁反流性胃炎大鼠胃黏膜p38MAPK蛋白及胃黏膜细胞COX-2mRNA表达水平的影响.结果 和胃反流康可显著抑制大鼠胃黏膜p38MAPK蛋白及胃黏膜细胞COX-2mRNA的表达水平(P<0.01).结论 和胃反流康可显著抑制胆汁反流性胃炎大鼠胃黏膜p38MAPK蛋白及胃黏膜细胞COX-2mRNA的表达,减轻反流液对胃黏膜的炎性损害,具有防止BRG模型大鼠胃黏膜肠上皮化生及不典型增生等癌前病变发生的作用.     

健脾活血方胃安散对PLGC模型大鼠p53和p16基因表达的影响

目的：研究健脾活血方胃安散对胃癌前病变模型大鼠p53和p16基因表达的影响,以进-步探求其发病机制方法：采用改进以N-甲基-N’硝基-N-亚硝基胍（MNNG）为基础的联合造模方案造成胃癌前期病变大鼠模型,免疫组化方法观察胃黏膜p53、p16基因的表达。结果：p53免疫组化染色结果提示各组均为阴性表达;p16染色在表达率及表达强度方面,均有-定程度提高。其调节p16基因表达的作用与胃复春组比较具有显著性差异。结论：健脾活血方胃安散可提高抑癌基因p16表达,具有-定的预防胃癌前病变发展成胃癌的作用。     

消痞颗粒对胃癌前病变大鼠p16基因甲基化的干预研究

目的探讨消痞颗粒对胃癌前病变大鼠p16甲基化的干预机制。方法 60只大鼠随机分为空白组10只,模型组50只,模型组以N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基(MNNG)溶液灌胃为主要负荷因素建立胃癌前病变大鼠模型。造模后,将造模组大鼠按照体质量随机分为盐水组、维酶素组、消痞颗粒组。盐水组给予生理盐水灌胃;维酶素组予维酶素混悬液灌胃;消痞颗粒组予消痞颗粒混悬液灌胃,干预持续12周。选用甲基化特异性PCR法(MSP)、免疫组化检测大鼠p16启动子Cp G岛甲基化表达水平及其蛋白转录表达水平。结果消痞颗粒可能通过降低p16CpG岛甲基化水平进而上调其蛋白表达水平,从而达到阻断胃癌发生发展。结论消痞颗粒通过干预抑癌基因p16甲基化及蛋白表达水平有效逆转胃癌前病变。     

化瘀解毒益气法对胃癌前病变模型大鼠p16基因甲基化的影响

目的:观察化瘀解毒益气法对胃癌前病变大鼠胃黏膜组织病理学及p16基因甲基化状态的影响。方法:采用低浓度MNNG加服雷尼替丁的方法造模,20周造模成功之后将大鼠随机分为模型组、维甲酸组、益气通络解毒散组,各组治疗干预后,观察各组大鼠胃黏膜变化情况并采用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)方法检测各治疗组中p16基因甲基化状态。结果:造模20周后,模型组大鼠胃黏膜出现肠化生、不典型增生等病理改变,而益气通络解毒散组胃黏膜病变程度较轻;益气通络解毒散组p16抑癌基因Cp G岛甲基化阳性率为33.33%,与模型组76.92%比较,差异有统计学意义(P0.05)。24例胃黏膜病理为肠上皮化生或异型增生大鼠中,有16例p16抑癌基因启动子区域Cp G岛高甲基化状态;而32例非胃癌前病变大鼠中,有23例p16抑癌基因启动子区域Cp G岛非甲基化。经两变量相关分析检验,Spearman系数为0.383 67,P=0.003 50.01。结论:化瘀解毒益气法对胃癌前病变胃黏膜细胞p16基因有一定的去甲基化作用,可能通过降低p16抑癌基因启动子区域Cp G岛甲基化水平,改善大鼠胃黏膜腺体的破坏,从而发挥其治疗胃癌前病变的作用。     

抑癌PTEN基因联合p53基因转染对前列腺癌PC-3m细胞凋亡的影响

目的研究抑癌PTEN基因联合p53基因转染对前列腺癌PC-3m细胞凋亡的影响。方法构建表达载体：空质粒pEGFP—N1、pEGFP—N1-PTEN质粒、pEGFP—N1-p53质粒及pEGFP—N1-PTEN—p53质粒,体外分别转染到前列腺癌Pc-3m细胞中,观察它们转染后的荧光表达情况;采用RT—PCR法检测目的基因表达;Westernblotting法检测目的PTEN蛋白和P53蛋白的表达;用MTT法观察细胞增殖抑制情况并绘制生长抑制曲线;AnnexinV—FITC／PI双染流式细胞术检测PTEN基因和p53基因对前列腺癌PC-3m细胞凋亡的影响。结果荧光显微镜下观察到PTEN、p53及两个基因同时在PC-3m细胞系中成功表达;RT—PCR检测结果显示,与PTEN基因单转染组、p53基因单转染组和空载体转染组相比联合转染组mRNA在PC-3m细胞系中表达明显增加俨〈0．05）;Westernblotting法检测同样发现,联合转染组PTEN蛋白及P53蛋白表达明显高于PTEN基因单转染组、p53基因单转染组和空载体转染组俨〈0．05）;联合转染组细胞凋亡率明显高于空载体转染组、PTEN基因单转染组和p53基因单转染组（P〈0．05）。结论PTEN基因与p53基因联合转染能诱导前列腺癌PC-3m细胞凋亡．这种联合转染可能对前列腺癌的基因治疗具有潜在的应用价值。     

低强度脉冲超声对大鼠糖尿病周围神经病坐骨神经p53表达的影响

目的：探讨低强度脉冲超声（LIPUS）对大鼠糖尿病周围神经病（DPN）模型中坐骨神经中转录因子p53表达的影响。方法：大鼠随机分为正常组、模型组和LIPUS组。链脲佐菌素腹腔注射制备实验DPN大鼠模型,LIPUS组以低强度脉冲超声进行体外治疗,造模后4周检测各组血糖及坐骨神经传导速度,实时荧光定量PCR检测坐骨神经P53 mRNA表达。结果：与正常组比较,模型组和LIPUS组血糖显著增高,神经传导速度显著降低,坐骨神经p53 mRNA表达增加（ P＜0．05）。与模型组比较,LIPUS组神经传导速度显著增高,坐骨神经P53 mRNA表达显著下降（ P＜0．05）。结论：低强度脉冲超声可通过抑制受损神经中轴突抑制因子P53表达,促进糖尿病周围神经病坐骨神经功能恢复。     

曲古抑菌素A诱导胃癌细胞细胞周期阻滞及其机制

目的研究去乙酰化酶抑制剂TSA对胃癌细胞SGC-7901细胞周期的作用及机制。方法利用细胞计数及流式细胞仪检测细胞生长及细胞周期；利用Western blot、基因芯片及实时定量PCR检测TSA对胃癌细胞周期相关基因的表达。结果TSA可诱导胃癌细胞SGC-7901细胞周期阻滞。TSA可增加胃癌细胞SGC-7901之p53，p21，p27等基因的表达，降低CDK2，CCNDl等基因的表达。TSA可通过调控多个细胞周期相关基因的表达阻滞胃癌细胞细胞周期，从而抑制胃癌细胞的生长。结论TSA可通过调控多个细胞周期相关基因诱导胃癌细胞细胞周期阻滞，从而达到其抑制胃癌细胞生长的作用。     

染色质免疫沉淀技术分析红藻氨酸处理后的大鼠大脑皮质神经元中p53与p21基因启动子的结合

目的 检测红藻氨酸(KA)处理后的大鼠大脑皮质神经元中p53蛋白与p21基因启动子的结合情况.方法 原代培养大鼠大脑皮质神经元经KA或对照溶剂(双蒸水)处理后,采用染色质免疫沉淀(ChIP)及聚合酶链反应(PCR)技术检测神经元中p53蛋白与p21基因启动子区p53反应元件1(RE1)及反应元件2(RE2)的结合情况,Western印迹检测免疫沉淀中的p53蛋白以验证ChIP抗体特异性.结果 KA处理组,p53抗体沉淀的染色质中包含p21基因启动子区含有p53 RE1的DNA序列,免疫沉淀样品中含有p53蛋白.结论 KA处理后神经元内p53蛋白与p21基因启动子区p53 RE1结合增加.     

人野生型p53肿瘤抑制基因在烟草中的遗传转化

目的:构建人野生型p53肿瘤抑制基因的植物表达载体,并建立p53转基因烟草植株.方法:将人野生型p53肿瘤抑制基因编码区克隆于pUC19,pBI426和pCAMBIA2301载体,构建含人野生型p53基因的植物表达载体pCAM-BIA2301/p53,p53基因由2×CaMV 35S启动子控制表达.利用叶盘共培养法经根瘤农杆菌EHA105介导转化烟草,获得转基因烟草植株;用组织化学法,PCR、Southern杂交检测转基因烟草植株.结果:经组织化学法,PCR,Southern杂交检测表明人野生型p53基因已整合到转基因烟草植株的基因组中,并获得了的转p53基因烟草植株.结论:成功建立了含人野生型p53基因的转基因烟草植株,为进一步检测p53基因的生物活性和开辟生产药用蛋白的新途径奠定了基础.     

胃癌前病变组织中人端粒酶逆转录酶、p53蛋白的表达与幽门螺杆菌的关系

目的：探讨胃癌前病变组织中人端粒酶逆转录酶（hTERT）和p53蛋白的表达状况及其与幽门螺杆菌（Hp）根除前后的关系。方法：采用实时定量荧光RT-PCR方法检测胃粘膜中hTERT,将hTERT与GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）拷贝数之比的100倍作为标准化hTERT（NhTERT）,用快速尿素酶法和Warthin-Starry银染色法检测Hp,同时用免疫组化检测p53蛋白的表达。结果：Hp阳性组hTERTmRNA和p53蛋白的表达率均显著高于Hp阴性亚组的表达率（均P〈0.05）。Hp根除组hTERTmRNA的表达率显著低于未根除组（P〈0.05）,未根除组与阴性对照组之间无显著性差异。结论：在胃癌前病变阶段,Hp感染与端粒酶表达水平及p53蛋白之间有直接关系,提示端粒酶、Hp感染、p53蛋白在胃癌的发生、发展中起重要作用及Hp根除的必要性。     

胃痞消对脾虚型慢性萎缩性胃炎癌前病变大鼠胃黏膜上皮细胞增殖周期分布及凋亡基因表达的影响

【目的】观察健脾化瘀解毒中药胃痞消(由黄芪、太子参、白术、丹参、白花蛇舌草等组成)对脾虚型慢性萎缩性胃炎(CAG)癌前病变大鼠胃黏膜上皮细胞的增殖周期分布及凋亡基因表达的影响。【方法】选用SD大鼠,随机分为6组,即正常对照组,模型组,胃痞消高、中、低剂量组(剂量分别为15、7.5、3.75g·kg-1·d-1),维酶素组(剂量为0.27g·kg-1·d-1)。除正常对照组外,其他组均采用N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)液自由饮用结合饥饱失常加耗气泻下法复制脾虚型CAG胃癌前病变模型,观察胃痞消各剂量组连续治疗4周后对大鼠胃黏膜上皮细胞增殖周期分布、凋亡率、凋亡基因p53、Bcl-2和Bax表达的影响。【结果】胃痞消各剂量组可显著增加胃黏膜上皮细胞凋亡率,增加G0/G1期、减少S期细胞分布,促进p53表达,抑制Bcl-2表达(均P0.01),胃痞消高剂量组可显著促进Bax表达(P0.05)。【结论】胃痞消可抑制CAG癌前病变大鼠胃黏膜上皮细胞的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与其能促进p53和Bax表达,抑制Bcl-2表达有关。     

miR-214-3p通过靶向调节p53增强胃癌细胞的转移能力

目的 观察miR-214-3p在胃癌组织中的表达情况,探讨其对胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响及其分子机制.方法 通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测41对胃癌及癌旁正常组织中miR-214-3p的表达及其与肿瘤临床病理特征的关系;将胃癌细胞MGC-803接种于培养皿,每组设3个复孔,分3组:miR-214-3p上调组(转染miR-214-3p模拟物)、miR-214-3p下调组(转染miR-214-3p抑制剂),以及阴性对照(NC)组;qPCR法分别检测各组p53表达水平,Transwell实验检测转染miR-214-3p抑制剂对MGC-803细胞的迁移和侵袭能力的影响;生物信息学分析和荧光素酶活性测定以确定p53是否为miR-214-3p的靶基因.结果 相比于癌旁组织,miR-214-3p在胃癌组织中上调,并且与肿瘤淋巴结转移相关;qPCR检测分析显示,相比于NC组,miR-214-3p上调组p53的表达下降,miR-214-3p下调组p53的表达上升;Tr-answell实验结果显示,与NC组相比,miR-214-3p下调组胃癌细胞的迁移和侵袭能力降低;生物信息学分析和荧光素酶活性测定结果显示miR-214-3p通过靶向结合p533′UTR从而抑制其表达.结论 miR-214-3p在胃癌发生发展过程中可能发挥了重要作用,miR-214-3p可作为胃癌的潜在靶向标志物.     

鱼油对大鼠小肠慢排移植物血管早期保护性基因bcl-χL及HO-1表达调控

目的 鱼油对大鼠小肠慢排移植物血管基因bcl-xL、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和p53基因表达的调控和移植物血管病变的影响.方法 采用大鼠异位全小肠移植模型(Lewis-F344);分为①(Lewis-Lewis)(LL)移植组(n=7);②(F344-Lewis)鱼油调控组(FO)(n=13);③(F344-Lewis)玉米油(CO)(n=13)对照组;④(F344-Lewis)PBS对照组(L-F PBS)(n=12),4个实验组.使用荧光定量PCR的方法检测bcl-xL、HO-1和p53基因,以及HE染色组织病理检查.结果 bcl-xL的基因表达:在FO组bcl-xL基因表达238.75±99.21显著高于L-L组、CO组和L-F PBS组的(P＜0.01);HO-1的基因表达:在FO组为306.82±49.37,显著高于L-L组、CO组和L-F PBS组的(P＜0.01);p53的基因表达:在FO组p53基因表达17.94±7.78,显著高于L-L组的(P＜0.01),但显著低于CO组和L-F PBS组的(P＜0.01).血管病变:FO组评分最低.结论 鱼油能显著提高小肠慢性移植物的早期保护性基因表达并改善小肠慢性移植物的血管病变.     

miR-221在胃腺癌中的表达及作用

目的研究miR-221在胃腺癌中的表达情况,分析其在胃腺癌中调控的靶基因及其可能的作用机制。方法应用荧光定量聚合酶链反应技术研究miR-221在51例胃腺癌组织及其癌旁正常组织中的表达情况,采用生物信息学技术预测miR-221调控的靶基因。结果 miR-221在胃腺癌组织中表达高于其癌旁正常组织;生物信息学预测miR-221抑制抑癌基因p53、p27的表达。结论 miR-221在胃腺癌组织中表达上调,可能通过调控p53、p27等肿瘤抑制基因的表达而发挥作用。     

分子信标实时PCR检测瘢痕相关p53基因SNP方法的建立

目的建立分子信标实时PCR检测病理性瘢痕相关p53基因第72密码子单核苷酸多态性的新方法。方法采集瘢痕疙瘩患者外周血28例,提取DNA并用分子信标PCR检测p53基因多态性。设计一对p53基因第72密码子单核苷酸多态性荧光分子信标探针,荧光定量PCR检测该位点单核苷酸(SNP),并与反向斑点杂交法,DNA直接测序等方法比较。结果定量荧光PCR荧光分子信标检测的结果与测序结果吻合率达到100%,高于反向斑点杂交法且简便快捷。结论分子信标实时PCR检测技术适合临床p53基因第72密码子单核苷酸多态性快速诊断。     

实时荧光定量PCR法检测结肠癌患者P53基因表达水平的研究

目的探讨P53基因在结肠癌组织中的表达水平,研究其与结肠癌发生、发展的关系。方法建立实时荧光定量PCR方法,检测各组织中P53基因的表达情况。结果扩增曲线呈典型的＂S＂型曲线;熔解曲线分析扩增产物显示单一的峰,熔解温度（Tm）为60℃。对照组中P53基因的表达明显高于癌组和癌旁组（P〈0.05）;癌组中P53基因的表达明显低于癌旁组（P〈0.05）。结论实时荧光定量PCR方法具有高敏感性和高特异性等优点,可作为进一步研究P53基因的方法;p53基因的表达量可以作为判断结肠癌患者预后的重要指标。     

甘肃武威地区胃肠道疾病患者幽门螺杆菌感染状况及与p53突变的关系

目的 探讨甘肃武威地区上胃肠道疾病患者幽门螺杆菌(HP)的感染状况及与病理组织中p53突变的关系.方法 Warthin-Starry银染色和革兰染色判断标本中HP的感染状况;免疫组化S-P法检测标本中p53蛋白的表达状况.结果 胃癌组、胃癌前病变组和慢性浅表性胃炎组HP感染率分别为83.33%、92.11%和73.08%,其中胃癌前病变组HP感染率显著高于慢性浅表性胃炎组(P<0.05).胃癌组、胃癌前病变组和慢性浅表性胃炎组p53蛋白阳性率分别为59.52%、36.84%和15.38%.胃癌组p53蛋白阳性率显著高于胃癌前病变组及慢性浅表性胃炎组(P<0.05,P<0.01).HP阳性组p53蛋白阳性率(44.94%)显著高于HP阴性组(17.65%,P<0.05).结论 HP感染和武威地区胃癌和胃癌前病变的发生有关;HP感染与p53突变型蛋白的表达存在相关性,提示HP在该地区的致癌机制与诱导p53突变有关.